Alrgn вк: Ваш браузер устарел — Москва

Содержание

Аллерген (Allergen) | GALATHEA | Metalism Records

Country: Russia
Style: melodic metal
Cat#: MR 113-14
vk.com/galathea
«Пробуждение» video: youtu.be/DnNZFPcBjSA

Дебютный альбом Galathea «Из глубины», вышедший четыре года назад, несколько затерялся в потоке отечественных пауэрных релизов. Будем надеяться, что «Аллерген» ждет лучшая судьба, тем более что от среднестатистического русскоязычного пауэра он отличается весьма и весьма радикально. В то время как большинство групп данной стилистики хотят быть похожими на Эпидемию, а те, кому вокальные данные фронтмена позволяют – на Арию, Galathea выбрали для себя совсем другие ориентиры, угадать которые не сложно, если знать, что реампингом гитар на этом альбоме занимался лидер Masterplan Роланд Грапов. К счастью, до откровенного копирования отдельных песен дело не доходит, но общая стилистика воспроизведена достаточно «близко к тексту»: имеют место и характерные «рубленные» гитарные риффы, и редкие, но уместные вкрапления клавишных, и легкий крен в прогрессив, и пронзительный вокал. Все сделано очень качественно и звучит – особенно в российском контексте – весьма свежо, так что уважать музыкантов стоит как минимум за желание выделиться из толпы. Но и не только за это – за четыре года паузы в студийной работе участники Galathea сочинили весьма внушительное количество мощного и запоминающегося материала: стремительные боевики «Люди солнца» и «Лабиринт», эффектный среднетемповый номер «Зачем проснулся Спящий?» и прямо-таки программный манифест в виде яростного заглавного трека. Несколько меньше впечатлили медленный материал: «Одиночество» и « Дождь под вечер» — красивые, но достаточно стандартные баллады (справедливости надо сказать, что на этом поприще и у Masterplan никогда не было особо выдающихся достижений). А вот первый трек «В кривом эфире» делает отступление от генеральной линии и напоминает скорее творчество Сергея Маврина времен альбома «Химический сон». Впрочем, получилось очень здорово.

Определенные аналогии с работами Маврина вызывает и еще одна составляющая альбома – его тексты. Здесь вы не найдете привычных для отечественного пауэра магических эльфов, бесстрашных рыцарей, битв добра со злом и прочих давно навязших в зубах штампов. Вместо этого основной автор стихов для Galathea (некий А. Петров) излагает в песнях весьма мрачный взгляд на современный мир, не оставляя без внимания ни промывание мозгов СМИ («В кривом эфире»), ни овладевшее массами равнодушие («Аллерген»), ни набирающий популярность эскапизм («Зачем проснулся Спящий?»), а в треке «Герой, которого нет» забираясь аж на территорию конспирологов. Несколько менее апокалиптичны тексты авторства вокалиста Тимофея Дворецкова, но сильнее всего из общей массы выпадает финальный трек «Молчание», который гитарист Василий Кошелев написал на стихи… Ф.И. Тютчева! И опять, когда Galathea выходят за свои же «флажки», им хочется аплодировать стоя.
Это, впрочем, не значит, что на «Алергене» нет недостатков. Определенных критических замечаний заслуживает Тимофей, который порой – видимо, стремясь больше походить на Йорна Ланде – начинает истошно голосить, что не всегда выходит благозвучно. Не все гладко и с текстами – местами употреблены очень странные лексические конструкции, а местами слов просто-напросто слишком много для трех-пяти-минутного песенного формата. Наконец, свой отпечаток на восприятие накладывает уже упоминавшаяся близость к «первоисточнику». Впрочем, все это не фатально: налицо и музыкальное развитие группы, и грамотно реализованный композиторский потенциал, да и «месседж», который Galathea несет слушателю в текстах, не оставляет меня равнодушным. Пусть «Аллерген» и не самый оригинальный альбом в мировом масштабе, но достойное место в отечественных итогах года он должен занять.

8/10 Роман Патрашов
headbanger.ru/reviews/album-3011

_____________________________________________________________

Желание сочинять песни, ориентируясь на творчество своих кумиров, объяснимо и понятно. Желание быть в своей музыке и своем звучании оригинальным, равно как и записываться с известными музыкантами, понятно не менее. Нужно только, чтобы все три вышеописанных компонента желаний молодой группы не приходили в противоречие друг с другом – а в случае с второй работой состава Galathea именно это и произошло.

На входе мы имеем явную и неприкрытую симпатию музыкантов к немецкому пауэр-металу. Точнее, к тем составам, что культивируют в своем творчестве мрачный и тяжелый звук, а также не в последнюю очередь к альбому Helloween «The Dark Ride» (2000). Плюс к этому – работа на записи одного из лучших барабанщиков России в нелегких стилях Андрея Ищенко и удаленное сотрудничество с лидером Masterplan Роландом Граповым, занимавшимся здесь реампингом гитар. На выходе получился не очень аккуратно сведенный альбом, где глобальное желание «дать мрачности» нивелируется именно заглушающими другие партии и откровенно выпирающими из звуковой панорамы сильно перегруженными (будем думать, герром Граповым) гитарами. То есть материал «Аллергена» может быть описан именно как «грубый пауэр-метал», напоминающий то о вышеупомянутом альбоме Helloween («В кривом эфире» и «Люди Солнца»), то о нарочито брутальном Stratovarius («Герой, которого нет»). При этом самым коммерческим моментом альбома оказалась неплохая, но вполне предсказуемая хэви-баллада «Дождь под вечер», а моментом, указывающим направление дальнейшего развития коллектива – титульный номер не без реверансов в сторону симфо-пауэра. Усердие гитарного дуэта Василия Кошелева и Павла Ждановича объяснимо и понятно, однако так и хочется указать этим несомненным мастерам своего дела, что вокальный альбом – прежде всего сборник песен, а для самовыражения инструменталистов существуют именно инструментальные альбомы. Парни, не уподобляйтесь современному Ингви Мальмстину – и всё у вас будет хорошо!

Всеволод Баронин
vs-baronin.livejournal.com/822829.html

_____________________________________________________________

«Аллерген» – вторая полноформатная работа московской группы Galathea. Если на дебютной пластинке «Из глубины» (2010) мы слышали перспективную команду, то здесь перед нами предстает коллектив с оформленными чертами творческого лица. Galathea не потеряли романтизма, но прибавили мелодизма и агрессии и полностью стряхнули налет готичной меланхолии, ранее имевший место благодаря участию приглашенных вокалисток.
Параллели с Dream Theater напрашиваются сами – два года назад группа записала русскоязычный кавер на песню «Another Day» (в транскрипции москвичей она называется «Не в этот день»). Получилось прекрасно. И трудно спорить, что лидер группы, гитарист Василий Кошелев, находится под влиянием Джона Петруччи. Об этом говорит сложность и «заковыристость» его пассажей. И в то же время прогрессив Galathea – «песенного» типа, тяготеющий к альтернативным течениям, без эпичности и монументальности заокеанских коллег. Но когда певец Тимофей Дворецков не форсирует на бесчеловечно надрывных верхах свой голос, а спокойно поет внизу, сразу понятно, кто на него повлиял. Это никоим образом не говорит о вторичности, скорее о прекрасном владении техникой. А вот почему гитарный звук так навязчиво напоминает Helloween времен «Dark Ride» или Masterplan? Неспроста. Гитарный реампинг для «Аллергена» на совести (ни много ни мало) Роланда Грапова.

Новый альбом был записан практически суперсоставом. Помимо вышеперечисленных музыкантов, его сотворили басист Сергей Шопен, гитарист Павел Жданович (Arida Vortex), клавишник Александр Николаев («Омела») и барабанщик-«стахановец» Андрей Ищенко. Напоследок позволю себе предупредить тех, кто решится послушать «Аллерген» или начать с него знакомство с Galathea. Вам придется столкнуться с интересным произведением, которое с первого раза может не раскрыться во всей своей красоте. Но за тех, кто не побоится погрузиться в музыку группы, стоит порадоваться.

8/10 Дмитрий Кошелев

www.inrock.ru/reviews/galathea_2014

The clinical efficacy of allergen-specific immunotherapy with water-salt extracts and adjuvant allergens for atopic asthma with household sensitization

45

ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ АРХИВ 12, 2017

Аллергенспецифическая иммунотерапия при атопической БА с бытовой сенсибилизацией

Продолжительность АСИТ в 1-й и 2-й группах наблюдения

составляла 3 года от начала лечения. Общая продолжительность

наблюдения составила 6 лет.

Методы исследования. В работе использовались следующие

методы: общеклиническое обследование, аллергологическое об-

следование, функциональные методы, анкетирование, метод

экономического анализа затраты—эффективность (минимиза-

ция затрат), общепринятые методы вариационной статистики с

использованием пакета анализа программного продукта Microsoft

Excel 2013.

Для оценки общего контроля над заболеванием и возможного

пересмотра базисной терапии, согласно рекомендациям GINA

(2011—2016), исходно и затем ежемесячно регистрировали данные

спирометрии и результаты АСТ-теста. Спирометрию проводили

на портативном спирометре Спиролаб II (Италия). В качестве ос-

новного показателя для оценки изменений функции легких и кри-

терия эффективности при проведении динамического исследова-

ния выбран один из самых высокочувствительных и информатив-

ных при БА показатель — ОФВ1 (процент от должного).

Клиническую эффективность оценивали, учитывая прямые

клинические эффекты (уменьшение числа обострений, измене-

ние симптомов заболевания, восстановление функций), а также

опосредованные клинические эффекты (сокращение числа го-

спитализаций, больничных листов, дней нетрудоспособности,

снижение потребности в МТ).

Сравнительную оценку клинической эффективности раз-

личных методов АСИТ проводили: по 4-балльной шкале [19],

учитывая мнение врача и пациента: 0 — неудовлетворительный

эффект: состояние пациента не изменилось или ухудшилось; 1 —

удовлетворительный эффект, симптомы заболевания уменьши-

лись незначительно; 2 — хороший эффект, симптомы заболева-

ния уменьшились значительно; 3 — отличный эффект, симптомы

заболевания полностью отсутствуют или незначительны;

Качество жизни (КЖ) оценивали с помощью неспецифиче-

ского опросника The Short Form-36 (SF-36), разработанного в

Центре изучения медицинских результатов США [20]. Русскоя-

зычный аналог опросника предложен Санкт-Петербургским ин-

ститутом клинико-фармакологических исследований [21].

Для оценки экономической эффективности применяли

один из методов экономического анализа затраты—эффектив-

ность (cost-effectiveness analysis — CEA). В качестве показателя,

отражающего затраты, выбрана стоимость лечения. В случае оди-

наковой эффективности и безопасности методов для экономиче-

ского анализа использовали частный случай СЕА — анализ ми-

нимизации затрат (costminimization analysis — CMA) [18].

При определении прямых затрат использовали средние це-

ны на ЛП в аптеках Москвы. При расчетах учитывали препараты

базисной терапии (глюкокортикостероиды, комбинированные

препараты ГКС/ДДБА, антилейкотриеновые препараты (АЛТ) и

симптоматические средства (бронхолитики). Стоимость АСИТ

рассчитывали из совокупности стоимости консультации врача и

инъекции аллергена. При расчете стоимости АСИТ брали рас-

ценки коммерческого отдела поликлиники №1 УДП РФ. Общую

стоимость лечения определяли путем суммирования стоимости

МТ и стоимости АСИТ.

Статистическую обработку данных проводили с использова-

нием общепринятых методов вариационной статистики. Резуль-

таты представляли в виде М±m, где M — среднее арифметическое

значение, m — стандартная ошибка среднего. Характер взаимос-

вязи признаков выявляли с помощью корреляционного анализа.

В случае, если распределение признака принималось прибли-

женно к нормальному, для анализа использовали параметриче-

ский критерий (критерий t Стьюдента). Статистически значимы-

ми считали различия при р<0,05. Качественные переменные опи-

сывали абсолютными и относительными (в процентах) числами.

Результаты и обсуждение

По степени тяжести во всех группах наблюдения пре-

обладает легкая, которая суммарно составляет 68,6%; в

1-й группе — 63,2% (у 36), во 2-й — 72,1% (у 31 пациента),

в 3-й — 60,7% (у 34). У остальных 49 (31,4%) пациентов

диагностировалась БА средней тяжести (21, 12 и 22 паци-

ента в 1, 2 и 3-й группах соответственно).

Во всех группах 108 (65,5%) пациентов страдали БА от

3 до 7 лет. Средняя продолжительность заболевания

5,4±3,2 года.

При аллергологическом обследовании клещевая сен-

сибилизация выявлялась у всех пациентов (один из крите-

риев включения). Моновалентная сенсибилизация выяв-

лена у 41 (26,28%) пациента, поливалентная — у 115

(73,72%), из них сочетание сенсибилизации к клещевым и

эпидермальным аллергенам — у 21 (13,46%).

Оценка параметров внешнего дыхания не выявила

достоверных различий по ОФВ1 за время наблюдения как

внутри групп, так и между группами. Отсутствие в процес-

се исследования достоверной динамики ОФВ1 свидетель-

ствует о хорошем контроле и низком риске обострений в

будущем у данных пациентов. Стабильно высокий ОФВ1

>80% позволял проводить АСИТ у пациентов 1-й и 2-й

групп.

В 1-й группе АСИТ проводилась круглогодично по

классической схеме методом подкожного введения аллер-

генов. Для лечения применяли отечественные ВСЭ аллер-

гена клеща домашней пыли. Начальную дозу определяли

индивидуально с учетом всех показателей клинического,

аллергологического обследования, индивидуальной пере-

носимости; доза колебалась от 0,001 до 0,01 PNU. После

начального курса лечения поддерживающую дозу аллер-

гена вводили сначала 1 раз в неделю, а затем 2 раза в ме-

сяц. Поддерживающая доза составляла не более 500 PNU.

Во 2-й группе АСИТ проводили круглогодично мето-

дом подкожного введения аллергена алюсталь «аллерген

клещей» по традиционной схеме. Начальная доза аллерге-

на составляла от 0,01 до 0,1 мл. После начального курса

АСИТ, при котором аллерген вводили 1 раз в неделю, вве-

дение поддерживающей дозы сначала осуществляли 1 раз

в 2 нед на протяжении 1-го месяца, а затем 1 раз в 4—6 нед.

Поддерживающая доза составляла 10 ИР/мл — 0,8 мл.

Продолжительность курса АСИТ в обеих группах со-

ставляла 3 года от начала лечения.

Всем пациентам также проводили МТ в объеме, не-

обходимом для поддержания контроля над течением БА

(см. таблицу). В случае выявления недостаточного контро-

ля заболевания осуществляли переход на следующую сту-

пень терапии в соответствии с рекомендациями по веде-

нию пациентов БА (GINA 2011—2016). Предпочтение при

переходе на следующую ступень отдавали комбинирован-

ным препаратам. Если контроль БА сохранялся в течение

3 мес, то базисную терапию переводили на предыдущую

ступень.

Эффективность АСИТ в лечении больных атопиче-

ской БА в обеих группах выражалась в уменьшении крат-

ности и продолжительности обострений в течение года,

уменьшении выраженности симптомов, потребности в

ЛП как базисной, так и симптоматической терапии.

После курса АСИТ почти у каждого 2-го больного ис-

чезла необходимость в симптоматической терапии

(40,35% в 1-й группе и 44,19% во 2-й группе). Значительно

снизилась потребность в длительном противовоспали-

тельном лечении. Так, в 1-й группе уменьшилось потре-

бление ИГКС на 21,05%, а комбинированных ЛП (ИГКС/

ДДБА) — на 22,81%. Во 2-й группе эти показатели снизи-

очиститель воздуха iqair allergen 100

очиститель воздуха iqair allergen 100

очиститель воздуха iqair allergen 100

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое очиститель воздуха iqair allergen 100?

Воздухоочиститель Viruskiller VK Blue покупался для однокомнатной квартиры, где всегда очень быстро скапливалась пыль. Покупкой воздухоочистителя мы очень довольны. В квартире теперь дышится всегда легко и приятно.

Эффект от применения очиститель воздуха iqair allergen 100

Покупался пять очиститель воздуха для фильтрации воздуха от сигаретного дыма. Основную цель выполняет на 100 %. Покупкой очень довольны.

Мнение специалиста

В семье появился маленький человечек и пришло время подумать о чистоте воздуха в доме. Дома очень тяжелый воздух, даже нам взрослым людям он очень тяжелый, что можно говорить о ребенке. Дома много пыли, даже каждодневные влажные уборки не помогали. Заказали через интернет, доставка в течение недели, оплата при получении. Очиститель воздуха рассчитан на 60 квадратов помещения, а самое главное у него угольный фильтр и ультрафиолетовые лампы. Отличная и не заменимая вещь в доме. Через 3 дня использования в доме воздух чище, пыли практически нет. Ребенок спит спокойно, без заложенности носа, я и муж тоже стали спать лучше.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ очиститель воздуха iqair allergen 100 необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Юля

Внимание! Viruskiller VK Blue имеет фирменную упаковку и отправляется наиболее надежным способом – исключительно в почтовых коробках. Уважаемые клиенты! Мы заботимся о вашей безопасности! Процесс доставки и оплаты проходит Бесконтактно.

Анна

Viruskiller Удивляюсь, как мы раньше без него жили)) Тишайший в ночное время, и дверь в детскую можно закрыть и окно, но воздух с ним свежий, пахнет, как после дождя чистым озоном. Сынок не чихает дома!!))

Задумалась: хочу очиститель воздуха, а надо ли? Читая разные отзывы в интернете нашла интернет магазин, продающий портативные воздухоочиститель Viruskiller VK Blue, отзывов на них не много, но зато была скидка, что меня и подкупило. А еще… а еще… он не просто очищает воздух от пыли, но и уничтожает 99% вирусов ( так заявляют производители). Про вирусы проверить нет у меня возможности, а вот воздух в квартире, действительно стал чище и свежее. Где купить очиститель воздуха iqair allergen 100? В семье появился маленький человечек и пришло время подумать о чистоте воздуха в доме. Дома очень тяжелый воздух, даже нам взрослым людям он очень тяжелый, что можно говорить о ребенке. Дома много пыли, даже каждодневные влажные уборки не помогали. Заказали через интернет, доставка в течение недели, оплата при получении. Очиститель воздуха рассчитан на 60 квадратов помещения, а самое главное у него угольный фильтр и ультрафиолетовые лампы. Отличная и не заменимая вещь в доме. Через 3 дня использования в доме воздух чище, пыли практически нет. Ребенок спит спокойно, без заложенности носа, я и муж тоже стали спать лучше.

IQAir – лучшие очистители воздуха благодаря продвинутым технологиям фильтрации. IQAir Allergen 100 очистка воздуха происходит в два этапа: предварительный фильтр защищает от крупной пыли, фильтр HyperHEPA – задерживает все известные аллергены, вирусы и бактерии. Очиститель воздуха IQAir HealthPro (Allergen) 100, светло-серый/белый. Описание и фото. Характеристики. . Отзывы о товаре Очиститель воздуха IQAir HealthPro (Allergen) 10014. Написать отзыв. Ирина П. IQAir Allergen 100 – действительно эффективное решение для очистки воздуха в квартире. . Очистители воздуха IQAir с технологией фильтрации HyperHEPA прошли такие испытания в России и за рубежом. Очистителем воздуха пользуемся почти год. У нашего ребенка аллергия на пыль, и знакомый мне порекомендовал его. . Рекомендуем: Рекомендации Вам: Я читаю отзывы о IQAir Allergen 100 в DiamondElectric. Противоаллергический Очиститель воздуха IQAir HealthPro (Allergen) 100. 1 отзыв. . 135. Бренд. IQAir. Страна-изготовитель. Перед покупкой IQAir HealthPro (Allergen) 100, обязательно почитайте отзывы покупателей, ознакомьтесь с подробными характеристиками и посмотрите видео обзоры! Так же, здесь Вы можете написать и оставить свой отзыв. Всего найден 11 отзывов про Очистители и увлажнители воздуха IQAir HealthPro (Allergen) 100. Заказные отзывы были отфильтрованы и не отображаются на данной странице. Негативные, положительные и отрицательные отзывы владельцев о IQAir HealthPro (Allergen) 100 – отображены в полном объеме. Вы можете. Через некоторое время в период обострения обратилась к врачу, который и посоветовал iqair allergen 100, я долго думать не стала и заказала его.По прошествии нескольких месяцев хочу подтвердить эффективность очистки воздуха. Если регулярно делать влажную уборку и не открывать окна настежь.
http://batterierlaptop.se/userfiles/retsirkuliatsionnyi_ochistitel_vozdukha_iqair_healthpro_2505501.xml
http://www.istambul.com.br/aprovacao/biblioteca/imagens/arquivos/ochistitel_vozdukha_venta_kupit6068.xml
http://vivo-mebel.ru/upload/ochistitel_vozdukha_marta8261.xml
http://www.kitchensofdiablo.com/upload/ochistitel_vozdukha_lg_otzyvy9252.xml
https://swiatsuma.com/_files/public/userfiles/10_luchshikh_ochistitelei_vozdukha8233.xml
Покупался пять очиститель воздуха для фильтрации воздуха от сигаретного дыма. Основную цель выполняет на 100 %. Покупкой очень довольны.
очиститель воздуха iqair allergen 100
Воздухоочиститель Viruskiller VK Blue покупался для однокомнатной квартиры, где всегда очень быстро скапливалась пыль. Покупкой воздухоочистителя мы очень довольны. В квартире теперь дышится всегда легко и приятно.
Узнайте как. Airfree работает. Очистители и увлажнители воздуха. AirFree. Очиститель воздуха AirFree E60, белый. Описание и фото. Характеристики. Очиститель воздуха Airfree E60 — отзывы. Рекомендуют 66%. Качество. . Аллерголог настоятельно рекомендовала приобрести очиститель воздуха. Выбор в нашем городе был невелик. Очиститель воздуха Airfree E60 использует наиболее современную технологию очистки воздуха TSS (Thermodynamic Sterilizing . Очиститель воздуха Airfree E60 не только не производит озон, но и наиболее эффективно удаляет его из воздуха. Ищете положительные и негативные отзывы о AirFree E60? Из 11 источников мы собрали 9 . Мы покажем все достоинства и недостатки AirFree E60 выявленные при . Это первый мой очиститель воздуха, но сказать честно, я не вижу разницы. Воздухоочиститель Airfree E60 исполнен в белом цвете, благодаря чему вы сможет подобрать для своего интерьера наиболее подходящую гамму. Представленная модель эффективно стерилизует воздух в обслуживаемом помещении, уничтожая все вредные микроорганизмы. Происходит это путем нагрева воздуха. В категории: Очиститель воздуха AirFree E60 — купить по выгодной цене, доставка: Калининград, скидки! . Очиститель воздуха AirFree E60 в Калининграде. 21 товар. Быстрый просмотр. Всего найден 9 отзывов про Очистители и увлажнители воздуха AirFree E60. Заказные отзывы были отфильтрованы и не отображаются на данной странице. Негативные, положительные и отрицательные отзывы владельцев о AirFree E60 – отображены в полном объеме. Вы можете быть уверены в том, что. AirFree E60: отзывы покупателей и специалистов, экспертов, владельцев. . Это первый мой очиститель воздуха, но сказать честно, я не вижу разницы.обычный воздух в квартире, горным или морским его не назовёш. в очистителе воздуха airfree p60 загрязненный воздух проходит через керамическое ядро, где нагревает до высокой температуры 204ос. в результате нагрева пыль, микробы, споры плесени, различные органические соединения, аллергены просто сгорают. таким образом происходит по. Очистители воздуха Airfree используют наиболее современную технологию очистки воздуха TSS (Thermodynamic Sterilizing System), запатентованную в США и многих других странах. Технология TSS наиболее эффективно из всех. Очиститель Airfree E60 купить по цене 17890р с доставкой в интернет магазине mircli.ru. . Очистители воздуха Airfree серии E не имеют HEPA-фильтров. Которые не уничтожают, а накапливают различные аллергены, формируя просто идеальную среду для размножения вредных микроорганизмов, плесени и.

перевод в Англо-русском медицинском словаре онлайн

Смотреть что такое ALLERGEN в других словарях:

ALLERGEN

аллерген adhesive plaster allergen — пластырный аллерген, скоч-аллерген birch pollen allergen — аллерген берёзовой пыльцы cedar pollen allergen… смотреть

ALLERGEN

Allergen: übersetzungAllergiestoff* * * ◆ All|er|gen 〈n. 11; meist Pl.〉 eine allerg. Krankheit bewirkender Stoff [&LT;Allergie + grch. gennan „erzeugen… смотреть

ALLERGEN

nаллерге́н m- bakterielles Allergen- diagnostisches Allergen- endogenes Allergen- exogenes Allergen- infektiöses Allergen- körpereigenes Allergen- medi… смотреть

ALLERGEN

allergen: translationSynonyms and related words:Rh factor, agglutinin, allergic disorder, allergy, anaphylactin, antiantibody, antibody, antigen, antis… смотреть

ALLERGEN

• Bee venom is one • Dust or pollen, e.g. • Dust, for one • It may cause a reaction • Pollen, e.g. • Pollen, perhaps • Reaction causer • Sneeze cause … смотреть

ALLERGEN

аллерген- food-borne allergen- offending allergen- polymer-coupled allergen- primary allergen- solid phase allergen- specific allergen* * *аллерген

ALLERGEN

{ʹælədʒən} n спец. аллерген

ALLERGEN

n аллерген bakterielles Allergendiagnostisches Allergenendogenes Allergenexogenes Allergeninfektiöses Allergenkörpereigenes Allergenmedikamentöses Allergenmykotisches Allergennutritives Allergenvirales Allergen… смотреть

ALLERGEN

[ʹælədʒən] n спец.аллерген

ALLERGEN

allergen: translation(al\’er-jen)A substance capable of inducing allergy or specific susceptibility.

ALLERGEN

n -s, -e мед.аллерген

ALLERGEN

allergen [ʹælədʒən] n спец. аллерген

ALLERGEN

1) аллрген2) аллерген

ALLERGEN

сущ.; мед. аллерген

ALLERGEN CHALLENGE

стимуляция аллергеном, иммунизация аллергеном, аллергизация; провокация* * *аллергизация

ALLERGEN CHALLENGE

стимуляция [иммунизация] аллергеном, аллергизация; провокация

ALLERGEN CHALLENGE

мед.фраз. стимуляция аллергеном Англо-русский медицинский словарь.2012.

ALLERGEN DOSE

доза аллергена Англо-русский медицинский словарь.2012.

ALLERGEN NOMENCLATURE

номенклатура аллергенов (разработанная подкомитетом Международного союза иммунологических обществ)

ᐅ IQAir HealthPro (Allergen) 100 отзывы — 11 честных отзыва покупателей о IQAir HealthPro (Allergen) 100

Самые выгодные предложения по IQAir HealthPro (Allergen) 100

 
 

Отзывы про IQAir HealthPro (Allergen) 100

Информация об отзывах обновлена на 02.04.2022

Написать отзыв

Алиса Романова, 13.10.2018

Достоинства:
хорошо

Недостатки:
нет

Комментарий:
Приобретала его 3 года назад в магазине в ТЦ Город как спасение от аллергенов. Все это время служит верой и правдой и на самом деле помогает. Особенно в летнее время, работает постоянно без остановки. Не скажу, что совсем бесшумный, но уровень шума не зашкаливает. Обслуживается без проблем – раз в 2-3 сезона меняется пред.фильтр. Фильтр тонкой очистки пока не меняла.

amoneros amoneros, 04.08.2018

Достоинства:
Если стоит задача избавиться от аллергии в доме, этот аппарат справляется с этой задачей по настоящему, на все 100.

Недостатки:
Дорогой, большой.

Комментарий:
Это мой третий очиститель воздуха из всех, что я покупал когда либо. Никогда раньше не обращал особого внимания на то, чем дышу, пока вдруг не оказалось, что у меня появилась аллергия на пыльцу от растений. Весной не помогало даже закрывание окон. Страдаю этим уже третий год и поняв после покупки первых простеньких очистителей, что очиститель воздуха в комнате действительно может облегчить ситуацию, так как дома хоть как то удалось защититься от пыльцы, я решил, что нужно взять хороший и производительный очиститель. Задача была выбрать не то, что раскручено, а то, что по настоящему чистит воздух, поэтому читал отзывы и изучал товары на западных сайтах, в основном на американских и в итоге решил остановиться на этом очистителе, потому как этот производитель поставляет очистители в медицинские учреждения и не по наслышке знает, что значит бороться с аллергией, к тому же при очень высокой степени очистке у него очень высокая производительность, что бы можно было очищать воздух во всей квартире, у меня трехкомнатная, и при этом он не очень шумный, да и собирают их не в Китае, а в Швейцарии. В соотношении этих качеств он оказался одним из лучших, есть аналоги подешевле, но здесь сыграл бренд, эта компания занимается очисткой воздуха уже лет 40. Нашёл его в России и купил, несмотря на неадекватный ценник по сравнению с другими, я не жалею, так как в доме я теперь мог дышать спокойно. А сейчас как оказалось этот очиститель полезен и для профилактики заболеваний, так как он улавливает не только пыльцу, но и вирусы и бактерии, пока что в доме никто не болел, что и сподвигло меня написать отзыв.

Anna Pogoreltseva, 17.01.2018

Достоинства:
Большая производительность
Тихая работа
Мощная двойная фильтрация

Недостатки:
Цена

Комментарий:
Брала этот очиститель для квартиры(площадь 85 квадратных метров) которая находится в центре Москвы. Читала про этот очиститель давно, но решилась купить совсем недавно. Цена обусловлена хорошими характеристиками. Большая производительность, сильнейшая очистка в 2 ступени, мелкой пыли и бактерий. Отмечу тихий режим работы, почти не выключаю его. Пользуемся уже больше 7 месяцев, с момента покупки не было ни одной болезни вязанной с аллергической реакцией.

Желтышева Елена, 16.01.2018

Достоинства:
Прекрасная, не побоюсь этого слова — профессиональная установка для аллергиков и астматиков, которая действительно очищает воздух, убедился в этом лично. Работает круглосуточно весь год, фильтры можно не менять длительное время.

Недостатки:
Дорого, но цена себя оправдывает

Комментарий:
Много лет страдала аллергией на амброзию. Прочитала в интернете, что в таких случаях поможет воздухоочистители. Через некоторое время в период обострения обратилась к врачу, который и посоветовал iqair allergen 100, я долго думать не стала и заказала его. По прошествии нескольких месяцев хочу подтвердить эффективность очистки воздуха. Если регулярно делать влажную уборку и не открывать окна настежь, то вместе с этим очистителем воздух в помещении будет абсолютно чистым. К тому же пыли в доме стало значительно меньше.

Антон, 21.11.2017

Достоинства:
Удобен в перемещени, легко катается, малошумный, прогоняет огромный объем воздуха. Мощные фильтры. Продуман. Замена фильтров проста. Много вариантов разных фильтров.

Недостатки:
Дорогой. Фильтры недешевые (но эффективные). Несколько громоздок- в маленькой квартире заметен.

Пешинова Екатерина, 20.11.2017

Достоинства:
Самое главное – у себя дома я не мучаюсь от аллергии на пыльцу и бытовую пыль

Недостатки:
Не обнаружила, возможно цена – но, учитывая эффективность, то стоимость более, чем адекватная

Комментарий:
Об IQAir впервые услышала из зарубежных медицинских обзоров, заинтересовалась, но решения о покупке не возникало. Просто приняла к сведению как возможный вариант приобретения в будущем оборудования себе домой – так как в тот момент в моей комнате стоял небольшой воздухоочиститель, работающий скорее как увлажнитель, чем чистящий пыль. Но я как то не задумывалась о лучшей очистке воздуха. Через два месяца я поехала в путешествие по Европе и останавливалась в одном из 5 звездочных отелей. В период пребывания (неделя) в гостинице заметила, что как-то дышится легче что ли, даже сократила прием лекарств. Когда выселялась, решила у администратора уточнить, что такое распыляют в гостинице, что воздух свежий постоянно и вот тут мне опять рассказали про IQAir и даже показали – большой белый ящик, который работает совершенно бесшумно. Это и сыграло решающую роль – вернулась в Россию, на Маркете нашла много положительных отзывов об этой технике и сразу же оформила заказ на модель Allergen 100. И вот уже прошло почти два года, а Allergen 100 работает до сих пор как швейцарские часы, то есть круглосуточно и бесшумно, так же круто чистит воздух (а старый очиститель просто работает в режиме увлажнителя), когда дома мне не нужно принимать лекарства, ведь в воздухе нет ни пыли, ни пыльцы ни других аллергенов, да и сплю как младенец! Единственное о чем жалею – что не купила его раньше.

Tоnя Швец, 10.10.2017

Комментарий:
Очистителем воздуха пользуемся почти год. У нашего ребенка аллергия на пыль, и знакомый мне порекомендовал его. По сравнению с предыдущим очистителем, чувствуется что IQAir HealthPro очищает воздух эффективнее, и так же не очень шумный. Еще один плюс в том, что не требует обслуживания. А главное, ребенок страдает от аллергии намного меньше, чем раньше.

Гость, 19.10.2016

Достоинства:
Пользуюсь 3 дня. Пока ещё пью таблетки от аллергии, но уже нет таких приступов. Воздух в квартире реально стал чище, ушли запахи после ремонта. Пока не жалеем, что купили.

Недостатки:
Безумная цена.

иванов вася, 26.07.2016

Достоинства:
Очень эффективный, безопасный, гарантия

Недостатки:
Высокая цена

Комментарий:
Чистит воздух отлично. Слава богу, что без ионизатора и нет озона (озон – вещество первого класса опасности, ибо сильный окислитель). Кому нужен эффективный и безопасный очиститель воздуха – не прогадаете. Мои 58,2 кв. метра прогоняет меньше чем за час. Пыли нет. Цена высокая, зато бесплатная доставка и гарантия. Ну очень доволен!

Поздеев Владимир, 05.07.2016

Достоинства:
Работает очень тихо, большие фильтры, которых должно хватить на 2-3 года. Если сильно не открывать окна в квартире, то можно считать, что мой дом, это моя крепость для моего ребенка и у пыльцы нет шансов добраться до него. Пыли в квартире стало значительно меньше.

Недостатки:
Высокая цена самого очистителя и фильтров. Невозможность купить эти фильтры в обычных магазинах.

Комментарий:
Сын страдает респираторной формой аллергии. Бесконечное чихание, непереносимость пыли, почти круглый год закрыты окна. Трудно было определить источник, а еще труднее принять соответственные меры. Приходилось каждый день по несколько раз производить влажную уборку, протирая все полы и мебель. Выкинул все ковры и другие «пылесборники».
Стал переписываться в интернете с людьми, имеющими подобные проблемы. Один из знакомых посоветовал Швейцарскую очистительную технику. Уверял, что она самая эффективная в мире. Тогда я стал искать швейцарские воздухоочистители в магазинах, но не нашел. А вот на нескольких сайтах продажи есть.
Купил в результате IQAirAlergen 100, потому что он специально разработан для аллергиков. Очень мы довольны. Все симптомы у ребенка прошли, правда выйдя на улицу, как только у него снова всё начинается, бежим домой, в свою крепость. Теперь задумался об установке кондиционера, что бы окна и вовсе можно было не открывать, но это уже к следующему лету. Если у вас, или не дай бог у вашего ребенка проблемы с аллергией, смело берите!

 

Вурвин Алекс, 24.11.2014

Достоинства:
качество соответствует цене.

Комментарий:
Хороший воздухо- очиститель, качество отличное ,приобрели в комнату ребенку. удобное управление, мощность хорошая

Учёные нашли способ сделать кошек гипоаллергенными

Согласно новому исследованию, опубликованному в журнале CRISPR, белок, который вызывает большинство аллергий на кошек, можно безопасно удалить из генома питомцев.

Для этого может использоваться технология редактирования генов, с помощью которой исследователям уже удалось помешать клеткам животным воспроизводить молекулу-виновника.

Аллергия на кошек, которая есть у 15% людей, в основном вызывается белком под названием Fel d 1. Он выделяется со слюной и слезами животных и попадает на их шерсть, когда животные ухаживают за собой. По мере того как питомцы линяют, раздражающее соединение может накапливаться в доме, что сразу ощущают аллергики.

Проанализировав ДНК 50 домашних кошек, авторы исследования определили области двух генов, известных как Ch2 и Ch3, которые кодируют белок Fel d 1. Чтобы определить, являются ли эти мишени подходящими кандидатами для редактирования генов, они изучили геномы восьми различных видов диких кошек и обнаружили, что эти кодирующие области могут сильно отличаться.

Это открытие позволило сделать вывод, что гены Fel 1 d не были эволюционно законсервированы. Соответственно, они не является существенными для биологии кошек и теоретически могут быть удалены без вреда для животных. Ранее учёные не были уверены, так ли это, поскольку функция белка до конца не изучена.

По словам авторов исследования, Fel 1 d не обнаружен ни у каких других организмов, кроме семейства кошачьих. При этом аналогичный белок у мышей уже был генетически удалён без каких-либо вредных эффектов, что подтверждает мнение о том, что это соединение, вероятно, не является жизненно необходимым.

Это подтвердил предварительный эксперимент с использованием технологии редактирования генов, в рамках которого области, кодирующие Fel 1 d в кошачьих клетках, были удалены. Это не вызвало нежелательных генетических реакций, где, по прогнозам, могли произойти нецелевые изменения.

Альтернативные подходы в борьбе с аллергией на кошек, вероятно, будут неэффективными, поскольку они не устраняют полностью Fel d 1. Например, было доказано, что корма для кошек, содержащие антитела, разрушающие белок, снижают уровень антигена лишь на 47%, в то время как эффективность вакцин не превышает 50%.

Как правило, у аллергиков симптомы проявляются даже при воздействии небольшого количества Fel 1 d, поэтому полное уничтожение белка с помощью технологии редактирования генов может быть единственным решением.

В настоящее время необходимы дополнительные исследования для усовершенствования этой техники, но исследователи оптимистично заявляют, что будущие исследования будут направлены на разработку средств для удаления генов Fel d 1 уже у взрослых кошек. Это позволит сделать питомцев гипоаллергенными.

Читайте также 🧐

Риск развития у детей непредвиденных побочных реакций на аллерген туберкулезный рекомбинантный | Кривохиж

1. О внесении изменения в приложение № 4 к приказу Минздрава России № 109 от 21.03.03. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития РФ № 855 от 29.10.09. On introduction of changes to the application number 4 to the order of Ministry of Health of Russia № 109 from 21.03.03. Order of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation № 855 of 29.10.09. (In Russ).

2. Киселев В.И., Пальцев М.А., Перельман М.И., Барановский П.М. Научное обоснование и создание аллергена туберкулезного рекомбинантного CFP10-ESAT6 (препарат «Диаскинтест®») / В кн.: Кожная проба с препаратом «Диаскинтест®» — новые возможности идентификации туберкулезной инфекции. Изд 2-е п/ ред. Пальцева М.А. — М.: «Шико», 2011. — С. 88—97. Kiselev V.I., Paltsev M.A., Perelman M.I., Baranovsky P.M. Scientific substantiation and creation of a recombinant allergen tuberculosis CFP10-ESAT6 (drug «Diaskintest®») / In.: [Skin testing with the drug «Diaskintest®» — new opportunities for identifying TB infection]. Univ 2-nd. Ed Paltsev M.A. — M.: Chico, 2011. S. 88—97. (In Russ).

3. Леви Д.Т., Рухамина М.Л. Доклинические исследования препарата «Диаскинтест®» / В кн.: Кожная проба с препаратом «Диаскинтест®» — новые возможности идентификации туберкулезной инфекции. Изд 2-е п/ред. Пальцева М.А. — М.: «Шико», 2011. — С. 98—113. Levy D.T., Ruhamina M.L. Pre-clinical studies of the drug «Diaskintest®» / In.: [Skin testing with the drug «Diaskintest®» — new opportunities for identifying TB infection]. Univ 2-nd. Ed Paltsev M.A. — M.: Chico, 2011. S. 98—113. (In Russ).

4. Бочарова И.В., Демин А.В. Доклинические исследования специфичности препарата «Диаскинтест®» / В кн.: Кожная проба с препаратом «Диаскинтест®» — новые возможности идентификации туберкулезной инфекции. Изд 2-е п/ред. Пальцева М.А. — М.: «Шико», 2011. — С. 114—124. Bocharova I.V., Demin A.V. Preclinical studies specificity «Diaskintest®»/ In.: [Skin testing with the drug «Diaskintest®» — new opportunities for identifying TB infection]. Univ 2-nd. Ed Paltsev M.A. — M.: Chico, 2011. S. 114—124. (In Russ).

5. Литвинов В.И., Сельцовский П.П., Слогоцкая Л.В., Ерохин В.В., Овсянкина Е.С., Яблонский П.К. и др. / В кн.: Кожная проба с препаратом «Диаскинтест®» — новые возможности идентификации туберкулезной инфекции. Изд 2-е п/ред. Пальцева М.А. — М.: «Шико», 2011. — С. 125—133. Litvinov V.I., Seltsovskiy P.P., Slogotskaya L.V., Erokhin V.V., Ovsyankina E.S., Yablonsky P.K. et al. Clinical studies on the use of skin testing with the drug «Diaskintest®» / In.: [Skin testing with the drug «Diaskintest®» — new opportunities for identifying TB infection]. Univ 2-nd. Ed Paltsev M.A. — M.: Chico, 2011. S. 125—133. (In Russ).

6. Кисличкин Н.Н., Ленхеррр-Ильина Т.В., Красильников И.В. Диагностика туберкулеза. Туберкулин и группа препаратов на основе белков ESAT-6/CFP-10 // Инфекционные болезни. 2016. Т. 14, № 1. С. 48—54. Kislichkin N.N., Lenherrr-Ilina T., Krasilnikov I.V. TB-diagnosis. Tuberculin and a group of drugs based on proteins ESAT-6 / CFP-10 // Infectious Diseases. 2016, V. 14, № 1. Р. 48—54. (In Russ).

7. Аксенова В.А., Барышникова Л.А., Клевно Н.И. и др. / В кн.: Кожная проба с препаратом «Диаскинтест®» — новые возможности идентификации туберкулезной инфекции. Изд 2-е п/ред. Пальцева М.А. — М.: «Шико», 2011. — С. 134—151. Aksenova V.A., Baryshnikovа L.A., Klevno N.I. et al. / In.: [Skin testing with the drug «Diaskintest®» — new opportunities for identifying TB infection]. Univ 2-nd. Ed Paltsev M.A. — M.: Chico, 2011. S. 134—151. (In Russ).

8. Слогоцкая Л.В., Кочетков Я.А, Овсянкина Е.С. и др. Возможности применения «Диаскинтеста®» при туберкулезе у детей и взрослых / В кн.: Кожная проба с препаратом «Диаскинтест®» — новые возможности идентификации туберкулезной инфекции. Изд 2-е п/ред. Пальцева М.А. — М.: «Шико», 2011. — С. 152—180. Slogotskaya L.V., Kochetkov YA.A., Ovsyankina E.S. et al. Possible applications «Diaskintesta®» for tuberculosis in children and adults / In.: [Skin testing with the drug «Diaskintest®» — new opportunities for identifying TB infection]. Univ 2-nd. Ed Paltsev M.A. — M.: Chico, 2011. S. 152—180. (In Russ).

9. Aggerbeck H., Madsen S.M. Safety of ESAT-6 // Tuberculosis, 2006; 86: 363–373.

10. Hoff S.T., Peter J.G., Theron G. et al. Sensitivity of C-Tb: a novel RD-1-specific skin test for the diagnosis of tuberculosis infection // European Respiratory Journal (ERJ) Express. Published on December 17, 2015 as doi: 10.1183/13993003.01464—2015.

11. Froeschle J.E., Frederick L.R., Bloh A.M. Immediate hypersensitivity reactions after use of tuberculin skin testing // Clinical Infectious Diseases, Volume 2002, 34, Issue 1, P. e12—e13.

12. Youssef E., Wooltorton E. Serious allergic reactions following tuberculin skin tests // CMAJ (Canadian Medical Association Journal), July 5, 2005, Vol. 173, no. 1 doi: 10.1503/cmaj.050710.

13. Coombs R., Gell P. The classification of allergic reactions underlying diseases. In: P.G.H. Gell, R.R.A. Coombs (Eds.) Clinical Aspects of Immunology. Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1963, р. 217—237.

14. Клинические рекомендации. Аллергология / под ред. Хаитова Р.М., Ильиной Н.И. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 206. — 240 с. [Clinical guidelines. Allergology] / ed. Haitov R.M., Ilyina N.I. — M.: GEOTAR Media, 2006. — 240 р. (In Russ).

15. Manual Allergy and Immunology (3-e edition) / Edited by Lawlor. G. Jr., Fisher T., Adelman D. Little, Brown and Company/ — Boston/New York/Toronto/London/ 1995/ — 806 p.

Лечение аллергии на кошек с помощью моноклональных IgG-антител, которые связывают аллерген и предотвращают взаимодействие IgE 1 (rFel d 1) использовали в анализах in vitro. Рекомбинантный Fel d 1 был получен в соответствии с дизайном Kaiser et al.

65 , которые показали, что одноцепочечные гибриды структурно и функционально эквивалентны природному гетеродимеру Fel d 1. Регенерон-продуцируемые рекомбинантные белки включают аминокислоты 18–109 Fel d 1 Chain 2 (NP_001041619.1) на N-конце, слитом непосредственно с аминокислотами 23–92 цепи 1 Fel d 1 (NP_001041618.1) с мутацией D27G и C-терминальной меткой myc–myc–гексагистидин (mmh). Белки были получены в клетках яичника китайского хомячка (CHO) с мономерной (mmh) или димерной ((мышиный IgG2a Fc (mFc)) С-концевой меткой (rFel d 1.mmh и rFel d 1.mFc соответственно). Кроме того, белок внеклеточного домена FcεR1α (высокоаффинный рецептор для IgE) был получен в виде димерного слияния Fc с С-концевой меткой мышиного Fc (hFcεR1α.mFc) для поддержки разработки конкурентного анализа на основе ELISA.

Поколение REGN1908 и REGN1909

REGN1908 и REGN1909 представляют собой полностью человеческие моноклональные антитела к Fel d 1, продуцируемые с доменами Fc изотипа IgG4 P . Константный домен IgG4 содержит аминокислотную замену серина на пролин (S228P, нумерация ЕС) в шарнирной области, которая реконструирует шарнирную последовательность человеческого IgG1 (CPPC) для обеспечения стабилизации дисульфидных связей между двумя тяжелыми цепями 19 , поэтому обозначен как IgG4. Р .Вкратце, мышей VelocImmune 17,18 иммунизировали рекомбинантным димерным Fel d 1 (rFeld1.mFc). Выделяли гибридомы, продуцирующие REGN1908 и REGN1909, и вариабельные области клонировали на плазмидные векторы, содержащие константные области легкой каппа-цепи и константные области тяжелой цепи hIgG4 P , соответственно. Отобранные антитела были получены в собственной клеточной линии Regeneron, клонированной из клеток CHO. Клетки CHO-K1 были аутентифицированы с помощью изоферментного тестирования в соответствии с рекомендациями ICH и протестированы на заражение микоплазмой.Свинцовые антитела были выбраны на основе аффинности и способности неконкурентно связываться с Fel d 1.

Выделение и концентрация IgG из сыворотки пациентов Контрольные пациенты с аллергией на кошек (без СИТ) были приобретены у доктора Джонатана Коррена. Использование человеческого материала было одобрено Schulman Associates IRB. Аллергия на кошку была диагностирована врачом по результатам кожного теста на аллергию и клиническим симптомам.Все пациенты с аллергией на кошек были полиаллергическими. Иммунотерапию проводили с использованием экстракта кошки, разбавленного сывороточным альбумином человека, в отсутствие адъювантов, успех лечения определял врач. Сыворотку пациента отделяли от донорской крови (приобретенной у доктора Джонатана Коррена) центрифугированием при 3000 об/мин, пропускали через фильтр 0,22 мкм, инкубировали в течение ночи с 50 мл гранул сефарозы с протеином G при 4°C, затем выливали в колонку и проводили SIT IgG и элюируют элюирующим буфером Pierce IgG. После нейтрализации элюата 1М трис, рН 8.5 образцы диализовали против PBS, pH 7,2. Все образцы концентрировали примерно в 10 раз с использованием Amicon Ultracel с отсечкой по молекулярной массе 50 k.

Количественное определение IgG в сыворотке пациентов

Уровни общего и специфичного для Fel d 1 IgG количественно определяли в образцах сыворотки пациентов, прошедших СИТ-терапию, с использованием стандартного ELISA. 96-луночные планшеты для микротитрования (Thermo Scientific) покрывали 2 мкг/мл либо природного Fel d 1 (LoTox Indoor Biotechnologies), либо античеловеческого IgG (Jackson Immunoresearch) в фосфатно-солевом буфере (PBS, Irvine Scientific) в течение ночи. при 4 °С.На следующий день планшеты четыре раза промывали PBS, содержащим 0,05% Tween 20 (PBS-T, Sigma-Aldrich), используя устройство для промывки планшетов (Molecular Devices). Затем планшеты блокировали инкубацией в течение 1 часа при комнатной температуре (КТ) с 250 мкл 0,5% альбумина бычьей сыворотки (BSA, Sigma-Aldrich) в PBS. Сыворотку или очищенный IgG от пациентов-людей, перенесших СИТ, серийно разбавляли втрое в 0,5% BSA-PBS, начиная с 1:1000 (для Fel d 1-специфического IgG) и 1:27000 (для общего IgG), добавляли в заблокированные планшеты в двух экземплярах. и затем инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре.Последние две лунки оставляли пустыми для использования в качестве вторичного контроля с одним антителом (фоновый контроль). Для количественного определения общего IgG строили стандартную кривую с использованием IgG человека (Thermo Scientific, № 31,154), начиная с 1 мкг/мл и разбавленного в 3 раза по всему планшету. Для количественного определения IgG, специфичного к Fel d 1, была построена стандартная кривая с использованием моноклонального антитела против Fel d 1 (h5h2238N), также начиная с 1 мкг/мл и разбавленного в 3 раза по всему планшету. Затем в планшеты добавляли конъюгированное вторичное антитело козы против человеческого IgG-Fc-пероксидазы хрена (HRP) (Jackson Immunoresearch) в разведении 1:5000 и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре.Планшеты промывали PBS-T между каждым этапом протокола. Для развития колориметрической реакции в чашки добавляли субстрат TMB/H 2 O 2 и инкубировали в течение 20 мин. Реакцию останавливали с помощью 2 N серной кислоты (H 2 SO 4 , VWR). Затем измеряли поглощение на спектрофотометре (Victor, Perkin Elmer) при 450 нм. Общий и специфичный для Fel d 1 IgG рассчитывали по соответствующим графикам стандартных кривых с использованием программного обеспечения Graphpad PRISM.

Исследования связывания Cat-SIT IgG

Исследования связывания Cat-SIT-IgG проводили на биосенсоре Octet HTX, и все образцы готовили в буфере, содержащем 10 мМ HEPES, 500 мМ NaCl, 1 мг/мл БСА, 0,02 % натрия. азид и 0,05% ПАВ Твин-20 с рН 7,4 (HBS-BT). Биосенсоры Octet HIS1K сначала погружали в лунки, содержащие 2 мкг/мл rFel d 1 мм ч, на 60 с для захвата 0,05 нм rFel d 1 мм ч, после чего биосенсоры Octet погружали в лунки, содержащие 100 нМ концентрированных Fel d 1-специфических IgG. присутствует в различных образцах IgG Cat-SIT, очищенных с помощью белка G.Сенсограммы специфического связывания были получены с помощью процедуры двойного сравнения путем вычитания любого взаимодействия Cat-SIT IgG с эталонной поверхностью (пустой биосенсор HIS1K Octet) из связывания Cat-SIT IgG с захваченной поверхностью Fel d 1.mmh; тем самым удаляя любой наблюдаемый сигнал неспецифического связывания. Кроме того, захваченные биосенсоры rFel d 1,0 мм погружали в буфер HBS-BT, чтобы можно было вычесть изменения сигнала, возникающие в результате естественной диссоциации захваченного rFel d 1,0 мм от биосенсора HIS1K.Данные связывания октета вычитали из двойного эталона, и кинетические параметры связывания измеряли путем подгонки данных к модели связывания 1:1 с ограничением массопереноса с использованием Scrubber 2.0c.

SPR-связывающие исследования

Исследования связывания кинетики

для Regn1908 и Regn1909 были проведены на Biacore T200, используя 10 мМ HEPES, 150 мм NaCl, 3 мМ MGCL 2 + 3 мм CaCl 2 , 0,05% (V / V) поверхностно-активное вещество P20, pH 7,4 (HBSP+ +) в качестве рабочего буфера при скорости потока 50 мкл/мин. Около 94–163 RU REGN1908 или REGN1909 были впервые захвачены на различных проточных кюветах с использованием сенсорной поверхности козы, связанной с Fcγ человека.Различные концентрации nFel d 1 или rFel d 1.mmh, серийно разбавленные в 2 раза в буфере HBSP+ +, позже инъецировали на поверхности, захваченные антителом, на 2,5 мин с последующей 15  мин фазой диссоциации. Конкретные кинетические сенсограммы Biacore получали с помощью процедуры двойного эталонирования, сначала вычитая любое взаимодействие nFel d 1 или rFel d 1.mmh над эталонной поверхностью (только поверхность, связанная с Fcγ козы) из nFel d 1 или rFel d 1. сигнал привязки mmh к захваченным поверхностям REGN1908 или REGN1909; тем самым устраняя любые изменения показателя преломления.Кроме того, выполняли инъекции буфера HBSP+ +, чтобы позволить вычесть изменения сигнала RU, возникающие в результате естественной диссоциации захваченного REGN1908 или REGN1909 с поверхности, связанной с Fcγ козы против Fcγ человека. Кинетические параметры связывания были получены путем глобальной подгонки данных вычитания двойных эталонов к модели связывания 1:1 с ограничением массопереноса с использованием оценочного программного обеспечения Biacore T200, версия 1.0.

Исследования конкуренции последовательного связывания проводились на Biacore T200 путем иммобилизации 4682–6683 RU REGN1908 и REGN1909 над отдельными проточными кюветами сенсорного чипа CM5 с использованием стандартной химии связывания аминов, о которой сообщалось ранее.Свежеприготовленный и дегазированный буфер HBS-P (10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,05% поверхностно-активного вещества P20), pH 7,4 использовали в качестве рабочего буфера на всех этапах связывания. Связанную поверхность чипа затем промывали и обрабатывали 10 мМ глицин-HCl, pH 1,5, для удаления несвязанных остаточных белков. 200 нМ nFel d 1 сначала вводили на поверхность датчика в сочетании с REGN1908 или REGN1909 в течение 10 минут, после чего следовали отдельные инъекции REGN1908 и REGN1909 (25 мкг/мл). Весь эксперимент проводили с использованием рабочего буфера HBS-P+ + со скоростью потока 10 мкл/мин.

Определение эпитопа путем обмена водорода/дейтерия

Для определения эпитопов Fel d 1, распознаваемых REGN1908 и REGN1909, были проведены исследования HDX для каждого антитела, ко-комплексированного с rFel d 1.mmh. Амидные протоны на рекомбинантном Fel d 1 (rFel d 1.mmh) сначала обменивали в D 2 O, затем дейтерированный rFel d 1.mmh образовывал комплекс либо с REGN1908, либо с REGN1909 перед обратным обменом в H 2 . O. Контрольный опыт заключается в том, что комплексный rFel d 1.mmh с любым антителом дейтерировали в D 2 O и подвергали обратному обмену в H 2 O. Затем раствор гасили холодным (4 °C) кислым (pH 2,5) водным раствором, чтобы свести к минимуму обратный обмен, и подвергали протеолиз и масс-спектрометрический анализ. Пептические пептиды, полученные из Fel d 1, которые демонстрировали повышенную массу (весьма вероятно, из-за оставшихся дейтронов из-за защиты антител), превышающую 0,2 единицы массы по сравнению с контрольным экспериментом, определяли как эпитопы связывания на основе методологии H/DX.

Связывание REGN1909 с Fel d 1 с помощью рентгеновской кристаллографии

Fab-фрагмент REGN1909 был клонирован и экспрессирован в клетках HEK293, затем очищен с помощью аффинной хроматографии с белком А. Рекомбинантный Fel d 1 (цепь 2(N50A)–цепь 1(G31D), с С-концевой аффинной меткой myc–myc–His6) очищали, как описано выше. rFel d 1.mmh и REGN1909 Fab смешивали в молярном соотношении примерно 1:1, инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем комплекс отделяли от небольшого избытка Fab методом эксклюзионной хроматографии.Комплекс rFel d 1-Fab концентрировали до 20 мг/мл в забуференном HEPES солевом растворе, затем кристаллизовали против резервуарного раствора 0,2 М ацетата кальция, 0,1 М какодилата натрия, рН 6,5, 40% (об./об.) полиэтиленгликоля 300. Кристаллы собирали непосредственно из маточного раствора и замораживали в жидком азоте.

Данные дифракции до 2,9 Å были собраны на кристалле rFel d 1-Fab на линии луча 5.0.2 усовершенствованного источника света, Национальная лаборатория Лоуренса в Беркли. Структура была определена путем молекулярной замены с использованием Phaser 66 с кодом PDB 1PUO 65 в качестве модели поиска для компонента Fel d 1 и кодом PDB 2R8S 67 для компонента Fab.Структура была уточнена с помощью refmac5 и перестроена с помощью coot 68 . Координаты окончательной структуры rFel d 1-Fab были депонированы в банк данных белков RCSB с кодом доступа 5VYF. См. дополнительную таблицу 9 для данных и статистики уточнения.

Аллерген-специфический блокирующий ИФА

Способность моноклональных антител против Fel d 1 или очищенных IgG из сыворотки пациентов с СИТ блокировать связывание Fel d 1 с IgE, захваченными на планшете из донорской плазмы/сыворотки человека, страдающего аллергией, определяли с помощью блокирующего ИФА. .Планшеты для микротитрования покрывали в течение ночи при 4°C белком внеклеточного домена FcεR1α человека (высокоаффинный рецептор для IgE) с С-концевой меткой мышиного Fc (hFcεR1a.mFc). Планшеты блокировали 0,5% BSA (масса/объем) на 1 час при комнатной температуре. Плазму от доноров с аллергией разбавляли в 5 раз, и общий IgE захватывали на поверхности, покрытой рецептором. Постоянное количество рекомбинантного Fel d 1.mmh (0,7 нМ) предварительно смешивали с серийными разведениями моноклональных антител против Fel d 1 и специфичных к Fel d 1 SIT IgG, начиная с 10 мкг/мл каждого в 3-кратном серийном разведении и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре, чтобы взаимодействие Fel d 1–антитело достигло равновесия.Затем смесь антитело-Fel d 1 добавляли в планшет, покрытый IgE, на 1 час. Затем планшеты промывали и определяли количество свободного Fel d 1.mmh, связанного с планшетом, с помощью анти-myc-антитела (клон 9E10, производимый собственными силами в виде человеческого изотипа IgG1), конъюгированного с HRP, и инкубировали в разведении 1:10 000. , путем инкубации в течение 1 часа при комнатной температуре. Планшеты промывали PBS-T между каждым этапом протокола. Для проведения колориметрической реакции в планшеты добавляли субстрат TMB/H 2 O 2 и инкубировали в течение 20 мин при комнатной температуре.Реакцию останавливали с помощью 2 N серной кислоты (H 2 SO 4 ; VWR, #BDh4500-1). Затем измеряли поглощение на спектрофотометре (Victor, Perkin Elmer) при 450 нм. Концентрацию антитела, необходимую для ингибирования сигнала постоянной концентрации Fel d 1 на 50% (IC 50 ), определяли с использованием программного обеспечения Prism.

Активация базофилов, оцененная с помощью фосфорилированного Erk

Кровь, взятая у пациентов с аллергией на кошек ( n  = 9 пациентов, 10 проб, основанных на одном повторном посещении), была отправлена ​​в RT для доставки в тот же день (Bioreclamation IVT).РВМС очищали центрифугированием на слое фиколла, трижды промывали в предварительно нагретой среде RPMI (Gibco), ресуспендировали в предварительно нагретой среде X-Vivo 15 без сыворотки (Lonza) и высевали на 96-луночный планшет (в виде отдельных точки). Затем клетки инкубировали при 37°С в течение 30 мин. Параллельно готовили пластину для стимуляции 2×, которая включала реакцию на дозу очищенного nFel d 1, а также реакцию на дозу антител против Fel d 1 (2,56 фМ-200  нМ), смешанных с постоянной дозой (конечная концентрация 200 пМ). очищенного природного Fel d 1 (Indoor Biotechnologies).Планшет для стимуляции также инкубировали в течение 30 мин при 37°С. Затем клетки стимулировали при 37°С с помощью 96-луночной многоканальной пипетки и останавливали стимуляцию ровно через 5 мин добавлением 1 объема предварительно подогретого Cytofix (BD). После 15 минутной фиксации клетки дважды промывали буфером MACS и делали их проницаемыми путем ресуспендирования и хранения в ледяном метаноле в течение ночи при температуре -20 градусов. Затем клетки трижды промывали буфером MACS, ресуспендировали в течение 10 мин в блокаторе Fc человека (ebioscience), а затем окрашивали смесью антител, содержащей pErk-Alexa 488 (Cell Signaling, № по каталогу 13214s, клон 197G2), CD123-BUV395 ( BD, № по каталогу 564195, клон 7G3) и HLA-DR-APC (№ по каталогу BD 559866, клон G46-6) в течение 30 мин.Клетки дважды промывали буфером MACS, инкубировали в течение 15 минут с Cytofix (BD), разбавленным 1:4 в PBS, для фиксации пятна, ресуспендировали в буфере MACS и собирали в приборе LSR-Fortessa. Данные анализировали путем расчета средней интенсивности флуоресценции (MFI) фосфорилированного окрашивания Erk в пределах базофильных ворот. Процент максимального ингибирования был рассчитан как

$$100-(({\mathrm{100}} \times {\mathrm{Максимум}}\,{\mathrm{Антитело}}\,{\mathrm{Отклик}})/{ \mathrm{Isotype}}\,{\mathrm{Response}})$$

Максимальный гуморальный ответ представлял собой средний MFI фосфорилированного Erk в трех верхних дозах антител на кривой доза-реакция (плато кривой) минус базовый MFI (среднее значение повторных нестимулированных образцов), а изотипический ответ представляет собой среднее значение всех значений MFI в ответе на дозу продуцируемого Regeneron изотипического контрольного антитела IgG4 P за вычетом исходного MFI.

Активация базофилов, оцененная по CD203/CD63 у пациентов с аллергией на кошек

Для оценки опосредованного антителами ингибирования активации базофилов конечная постоянная концентрация Fel d 1 (Indoor Biotechnologies) 20 мкм была предварительно инкубирована в течение 30 мин при 37 °C. с комбинацией REGN1908–1909 или контрольным антителом изотипа IgG4 P в конечных концентрациях в диапазоне от 0,8 фМ до 1,0 мкМ. Одновременно с преинкубацией Fel d 1 и антител PBMC (BioreclamationIVT) очищали из свежей цельной крови доноров-аллергиков с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла.Очищенные РВМС промывали, ресуспендировали в среде X-VIVO 15 (Lonza) и высевали в двойных колонках в полипропиленовый 96-луночный планшет с v-образным дном (приблизительно 5 × 10 5 клеток/лунку). Чтобы активировать базофилы, содержащиеся в общей популяции РВМС, к клеточной суспензии добавляли hIL-3 (R&D Systems, 0,3 нМ) и инкубировали планшет при 37 °С в течение 10 мин. Затем предварительно инкубированные антитела и Fel d 1 добавляли к примированным РВМС. Клетки без добавления антител были включены в качестве образцов отрицательного контроля, а реакция на дозу Fel d 1 варьировалась от конечных концентраций 7.От 8 аМ до 10,0 нМ был включен в качестве положительного контроля. Затем клетки инкубировали при 37°С в течение 20 мин для облегчения активации базофилов. Затем активацию останавливали инкубацией при 4°С в течение 5 мин. Затем активацию базофилов оценивали с помощью проточной цитометрии. Клетки окрашивали при 4°С в течение 20 мин либо коктейлем антител, содержащим анти-HLA-DR-FITC (Beckman Coulter, каталог № IM0463U, клон B8.12.2), анти-CD123-APC (BD, клон 7G3, каталог № 560087) и анти-CD203c-PE (Beckman Coulter, каталожный № IM3575, клон 97A6) или коктейль, содержащий анти-HLA-DR-PE-Cy7 (Biolegend, каталожный № 307616, клон L243), анти-CD123-APC (BD, № по каталогу 560087, клон 7G3) и анти-CD63-FITC (клон CLBGran/12 по каталогу Beckman Coulter № IM1165U).После окрашивания клетки промывали маточным раствором MACS BSA Stock Solution (Miltenyi Biotec) в разведении 1:20 в промывочном растворе autoMACS (Miltenyi Biotec), фиксировали в Cytofix (BD), разбавленном 1:4 в фосфатно-солевом буфере Дульбекко (Gibco). и анализировали на проточном цитометре (BD LSRFortessa X-20). Стратегия стробирования (дополнительная рис. 6c) использовалась для идентификации базофилов в большей популяции PBMC и для определения уровней активации базофилов. Образцы анализировали для сбора примерно 1000 объектов, определенных как базофилы.Базофилы были определены как синглетные, лимфоидные, HLA-DR- и CD123+. Активированные базофилы были дополнительно определены как CD203c Hi или CD63 Hi . Чтобы указать исходный уровень активации, ворота были установлены таким образом, чтобы 10% событий базофилов из hIL-3-примированных нестимулированных образцов (без Fel d 1) были положительными для активации (CD203c Hi или CD63 hi ). Эти ворота затем применялись ко всем другим экспериментальным условиям для определения относительного уровня активации базофилов.

Эксперименты на мышах

Самки, 7-8-недельные мыши Balb/c от Jackson Laboratories использовались для всех исследований на мышах.

В течение всего эксперимента животные содержались в виварии «Регенерон» в стандартных условиях, и им давали возможность акклиматизироваться в течение как минимум 7 дней перед помещением в исследование. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с рекомендациями Институционального комитета по уходу и использованию животных в Regeneron. Для доклинических исследований на мышах не использовались никакие статистические методы для предварительного определения размера выборки.Мышей случайным образом распределяли по группам лечения без заранее определенных критериев, и ослепление не могло быть выполнено из-за очевидного изменения цвета уха.

Модель пассивной кожной анафилаксии на мышах

Антисыворотки, используемые для пассивного внутрикожного (интрадермального) введения, ранее получали путем иммунизации мышей Balb/c либо Fel d 1, стандартизированным экстрактом кошачьего волоса, либо сырым экстрактом аллергена арахиса (нерелевантная контрольная антисыворотка) с использованием квасцов адъювант. Сыворотки от 10 до 20 мышей объединяли и использовали для пассивного введения аллерген-специфических IgE.В 1-й день группам мышей Balb/c (точное число «n» указано в подписи к соответствующему рисунку) вводили подкожно REGN1908, REGN1909, REGN1908–1909, концентрированный Cat-SIT IgG или Non-SIT IgG, или Регенерон сгенерировал контрольное антитело изотипа IgG4 P . Три дня спустя антисыворотку, полученную против Fel d 1, или экстракта кошачьей шерсти, или арахиса (отрицательный контроль), инъецировали интрадермально в правое и левое ухо, соответственно, что позволяло аллерген-специфическим IgE связывать FcεR на тучных клетках. Каждая антисыворотка была стандартизирована, чтобы содержать 1–25 нг IgE на инъекцию (точная концентрация отмечена в соответствующем эксперименте).Через 24 часа после местного введения аллерген-специфической антисыворотки мышам вводили внутривенно (в/в) 0,25–1 мкг Fel d 1 (точная концентрация указана в соответствующем эксперименте) или 250 биоэквивалентных единиц аллергии (БАЕ) экстракта кошачьей шерсти, разведенного в PBS, содержащий 0,5% синего красителя Эванса (Sigma, № по каталогу E2129). Через час после заражения аллергеном мышей умерщвляли, краситель Эванса синий экстрагировали из ткани уха и количественно определяли спектрофотометрически с использованием стандартной кривой. Затем уши сушили и взвешивали.

Данные представлены в виде нг/мг, при этом значение, полученное для каждого початка арахиса, вычитается из соответствующего значения для початка с заражением Fel d 1. Уровни циркулирующих человеческих антител измеряли в день умерщвления с помощью ELISA. Планшеты для микротитрования (VWR, № по каталогу 62409-024) покрывали в течение ночи при 4 °С 1 мкг/мл козьего античеловеческого IgG Fc (Jackson ImmunoResearch, № по каталогу 109-005-098), промывали четыре раза устройством для промывки планшетов ( Molecular Devices) и блокировали 0,5% БСА (масса/объем). Двукратные разведения мышиной сыворотки добавляли в дублированные лунки и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре.Планшеты промывали 4 раза и определяли связанные антитела с использованием козьего античеловеческого IgG Fc HRP (Jackson ImmunoResearch, № по каталогу 109-035-098) и субстрата BD Opt EIA TMB (BD Pharmingen, № по каталогу 555214). Реакцию останавливали с помощью 2 н. серной кислоты (Sigma) и измеряли оптическую плотность при 450 нм на спектрофотометре (Molecular Devices).

Доклинический статистический анализ

Статистический анализ оценивали с помощью GraphPad Prism 6. Анализ различий между двумя группами оценивали с помощью парного или непарного двустороннего критерия Стьюдента t .

Для многогрупповых исследований на животных нормальность данных оценивали с помощью критерия Шапиро-Уилка, если n  > 7, или теста Колмогорова-Смирнова, если n <7. Если данные прошли тест на нормальность и стандартные отклонения разных групп статистически не отличались друг от друга по оценке теста Брауна-Форсайта, результаты интерпретировали с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Тьюки для множественных сравнений. . Если данные не прошли критерий нормальности или стандартные отклонения значительно различались, результаты интерпретировали с использованием критерия Крускала-Уоллиса с последующим апостериорным критерием Данна для множественных сравнений.Различия считали статистически значимыми при p  < 0,05.

Дизайн клинического исследования

R1908–1909-ALG-1325.03 (NCT02127801) представляло собой многоцентровое рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование фазы 1b с однократной подкожной дозой, подтверждающее механизм действия, проведенное в шести исследовательских центрах в Европе. и Азиатско-Тихоокеанского региона. Первый визит субъекта состоялся 10 сентября 2014 г., а последний субъект завершил 85-й день 15 декабря 2015 г.

участников исследования, подходящих для рандомизации, были разделены на два блока: лондонский центр (Quintiles фаза I) и все другие исследовательские центры. комбинированная, реализованная через центральную интерактивную систему голосового управления.Участники исследования были рандомизированы 1:1 в первый день для получения однократной подкожной дозы REGN1908-1909 (всего 600 мг, соотношение антител 1:1; n  = 37) или плацебо ( n  = 36). Участники исследования, главные исследователи и персонал исследовательского центра оставались вслепую ко всем назначениям рандомизации на протяжении всего исследования. Руководитель исследования Regeneron, медицинский наблюдатель, наблюдатель за исследованием и любой другой персонал Regeneron и контрактных исследовательских организаций, которые были в постоянном контакте с исследовательским центром, оставались слепыми ко всем назначениям рандомизации субъектов.Учебное пособие было разработано для стандартизации методов на сайтах. Персонал со всех площадок прошел централизованное обучение по Руководству и всем процедурам обучения в подразделении Quintiles в Лондоне. Количество сотрудников на каждой площадке, выполняющих конкретные оценки, было ограничено, чтобы свести к минимуму межоператорскую изменчивость.

Протокол был одобрен соответствующими комитетами по этике/институциональными наблюдательными советами, и каждый пациент дал письменное согласие на скрининговом визите 1. Исследование проводилось в соответствии с правилами институционального наблюдательного совета, Международной конференцией по гармонизации руководящих принципов надлежащей клинической практики, и Хельсинкская декларация.Это исследование и все виды использования человеческого материала были одобрены следующими национальными компетентными органами: Centrale Commissie Mensgebonden Onderzoek (CCMO), Нидерланды; Медсейф, Новая Зеландия; Агентство медицинской продукции Läkemedelsverket, Швеция; и Агентство по регулированию лекарственных средств и изделий медицинского назначения (MHRA), Соединенное Королевство.

Популяция пациентов

Приемлемые участники были в возрасте 18–55 лет с аллергическим ринитом, вызванным кошкой, и сенсибилизацией к кошкам, подтвержденной при скрининге. Чтобы подтвердить сенсибилизацию к кошкам, участники прошли скрининг при двух посещениях, день -28 и день -14 (± 2 дня).Во время скринингового визита 1 участники были проверены на аллерген-специфический IgE, прошли кожный прик-тест с экстрактом кошачьей шерсти (cat-SPT, Aquagen, ALK-Abello) и другими экстрактами аллергенов, а также проверили функцию легких (ОФВ1). Участники имели право на скрининговый визит 2 на основании титров IgE, специфичных для Fel d 1 и экстракта кошачьей шерсти > 0,35 кАЕ/л каждый, среднего диаметра волдырей при кошачьем КПТ > 3 мм по сравнению с КПТ отрицательного контроля и нормальной функции легких. Пациенты были исключены, если у них в анамнезе была СИТ или вакцинация кошачьим аллергеном, или терапия анти-IgE; СИТ на другие аллергены за 3 месяца до скрининга; или жили с кошкой или подвергались хроническому контакту с ней.

При скрининговом посещении 2 был проведен однократный NAC с использованием возрастающих доз экстрактов кошачьей шерсти (100–33 000 SQ-U/мл). Вкратце, экстракт кошачьей шерсти применяли интраназально каждые 10 минут в течение 1 часа или до тех пор, пока не было достигнуто значение TNSS>7. TNSS (измеряется по шкале от 0 до 12) представляет собой комбинированную оценку таких симптомов пациента, как заложенность носа, зуд и ринорея (каждый оценивается по шкале от 0 до 3, где 3 — серьезная) и чихание (3 — более 5 чиханий). Пациенты, сенсибилизированные кошками, подходили для включения на основании того, что они имели TNSS <2 до скрининга NAC (время 0) и пик TNSS>7 в течение одного часа после начала NAC.PNIF (измеряется в носовой проходимости, л/мин) также измерялся во время скринингового посещения 2.

Подходящие участники исследования были рандомизированы для получения исследуемого препарата или плацебо в день исследования 1 (через 14 дней после скринингового визита 2). В дни исследования 8, 29, 57 и 85 участники исследования подвергались NAC с использованием одного и того же титрования аллергена, необходимого для каждого отдельного субъекта для достижения TNSS> 7 во время их 2-го визита скрининга, не превышая максимальную дозу, установленную во время визита скрининга, независимо от того, был ли достигнут TNSS>7.При каждом посещении исследования измеряли TNSS и PNIF и до NAC, затем через 10, 30 и 60 минут в течение первого часа и один раз в час в течение 8 часов для измерения LPR. Образцы сыворотки отбирали при каждом визите в рамках исследования, а повторную КПТ у кошек проводили в дни исследования 29 и 85. провокация (0–1 ч, ранняя фаза аллергического ответа). Вторичными конечными точками были процентное изменение AUC TNSS от предварительной обработки до 8-го дня NAC в течение первого часа; изменение и процентное изменение AUC TNSS от NAC до лечения до дней 29, 57 и 85 в течение первого часа; и изменение и процентное изменение AUC TNSS от 1 до 8 часов после заражения (LPR) от NAC до лечения до дней 8, 29, 57 и 85.Исследовательские конечные точки включали изменение и процентное изменение пика TNSS и пика PNIF от NAC до лечения до дней 8, 29, 57 и 85; а также PNIF AUC от 0 до 1 ч и от 1 до 8 ч. Анализ респондеров проводили ad hoc. Также были измерены фармакокинетические параметры.

Процентное изменение среднего диаметра волдыря AUC по сравнению с исходным уровнем на 29-й или 85-й день для кожного прик-теста с титрованным экстрактом кошачьей шерсти (100–33 000 SQ-U/мл), измеренное через 15  мин после нанесения, было дополнительной исследовательской конечной точкой.Тест проводился с повторными серийными разведениями экстракта кошачьей шерсти Aquagen (ALK-Abello) с использованием шести титрований доз в диапазоне от 100 до 33 000 SQ-U/мл. Одиночные зонды с раствором отрицательного контроля (физиологический раствор) и положительный контроль гистамина вводили в двух повторностях одновременно с зондами экстракта кошачьей шерсти на противоположной руке. Через 15 минут после нанесения регистрировали диаметры волдырей. Средние диаметры волдырей рассчитывали путем прибавления самого длинного диаметра к самому длинному ортогональному диаметру и деления на 2.Для каждого дублированного кожного прик-теста следует регистрировать самый длинный и самый длинный ортогональные диаметры, а средний диаметр каждого волдыря рассчитывают с точностью до двух знаков после запятой. Затем усредняли средний диаметр волдырей из дублированных проколов кожи.

Для титрованного прик-теста кожи кошки формула, используемая для расчета нормализованного среднего диаметра волдыря AUC, была следующей:

$$\begin{array}{l}\left[{{(t1-t0)}}\left( { {{D1}} + {{D0}}} \right)/{{2}} + {{(t2 — t1)}}({{D2}} + {{D1}})/{{2}} + {{(t3 — t2)}}({{D3}} + {{D2}})/{{2}}\право.\\ \left.+ {{(t4 — t3)}}({{D4}} + {{D3}})/{{2}} + {{(t5 — t4)}}({{D5}} + {{D4}})/2\right]/{{(t5}} — {{t0)}}\end{array}$$

, в котором t i — концентрация (в SQU/мл), для которой D i измеряется;

$${{t0}} = 100,\,{{t}}1 = 330,\,{{t}}2 = 1000,\,{{t}}3 = 3300,\,{{t }}4 = 10 000,\,{{\rm and}}\,{{t}}5 = 33 000;$$

D i — средний диаметр волдыря, полученный при концентрации t i .

Отрицательный контроль не вычитался из этого значения.

Безопасность

Оценка безопасности включала частоту TEAE или серьезных AE (SAE) в течение 85-го дня, как сообщалось исследователями, наряду с жизненно важными показателями и лабораторными тестами. Нежелательные явления были описаны в Медицинском словаре регуляторной деятельности (MedDRA; версия 17.0) в терминах самого низкого уровня.

Клинический статистический анализ

Размер выборки примерно из 70 пациентов с аллергией на кошек был необходим, чтобы обеспечить мощность не менее 90% для выявления ожидаемых средних различий в первичной конечной точке между двумя группами лечения, с предположением о среднем значении AUC по TNSS. из 5 для группы плацебо и 3 для группы лечения в течение 0–1 ч после заражения.Предполагаемое стандартное отклонение 2,43 согласуется с эффектом местных назальных кортикостероидов 69,70 . Первичный анализ эффективности был проведен в FAS, который включает всех рандомизированных пациентов, которые получали какой-либо исследуемый препарат в 1-й день и имели результаты оценки TNSS на 8-й день ( n  = 36 и 34 для групп плацебо и REGN1908–1909 соответственно). Конечные точки эффективности анализировали с использованием модели ковариационного анализа (ANCOVA) с группой лечения в качестве фактора и исходным значением в качестве ковариации.Результаты модели ANCOVA включали сводку средних значений метода наименьших квадратов (LS) для каждой группы лечения с соответствующей стандартной ошибкой (SE), разность средних значений LS между группами лечения с соответствующим SE и 95% доверительным интервалом (CI) и p — значение, соответствующее разнице между группами лечения. Анализы чувствительности были выполнены для всех анализов эффективности путем исключения четырех пациентов из исследовательского центра, досрочно прекращенных из-за несоблюдения режима, как определено исследователем/спонсором, и для первичной конечной точки эффективности путем условного определения трех отсутствующих TNSS AUC(0–1 ч). значения на 8-й день с исходными значениями.Вторичные и исследовательские конечные точки эффективности были проанализированы с использованием той же модели ANCOVA, что и для первичного анализа; контроль множественности для вторичных и исследовательских конечных точек не проводился, поэтому значения p считаются номинальными. Набор для анализа безопасности включал всех рандомизированных пациентов, которые получали какой-либо исследуемый препарат в день 1, в зависимости от полученного лечения.

Доступность данных

Авторы заявляют, что данные, подтверждающие результаты этого исследования, доступны в статье и ее дополнительных информационных файлах или доступны по обоснованным запросам авторов.

Исследование аллерген-специфических IgE-антител у индийских пациентов с атопическим дерматитом

Таблица 4: Возрастные специфические антитела (количество положительных совпадений в скобках)

Таблица 4: Возрастные специфические антитела (количество положительных совпадений в скобках)

Таблица 3: Возраст и пол с распределением общего и специфического IgE

Таблица 3: Возраст и пол с распределением общего и специфического IgE

Таблица 2: Классы реакций

Таблица 2: Классы реакций

Таблица 1: Аллергены на каждой тест-полоске

Таблица 1: Аллергены на каждой тест-полоске

Введение

Атопический дерматит (АД) представляет собой хронический, рецидивирующий, сильно зудящий дерматит, при котором наблюдается склонность к повышенной продукции IgE к аллергенам окружающей среды.АтД, наряду с бронхиальной астмой, аллергическим ринитом и аллергическим конъюнктивитом, входит в группу атопических заболеваний. Недавние исследования распространенности показывают, что около 10-20% детей в развитых странах страдают БА. [1],[2],[3],[4],[5],[6],[7] AD имеет сложную этиологию, которая включает иммунологические реакции, гены восприимчивости, триггеры окружающей среды и нарушение кожного барьера. функция.

АтД трудно определить из-за его прерывистого характера, изменения клинической картины с возрастом и разнообразия клинических проявлений.Одной из основных причин медленного понимания эпидемиологии БА является отсутствие стандартизированного специфического диагностического теста для подтверждения БА. Были предприняты различные превосходные попытки установить определенный набор критериев, помогающих в точной диагностике БА. Наиболее примечательными среди них являются критерии Ханифина и Райки, классификация [8] Рабочей группы Великобритании [9] и критерии тысячелетия. [10]

Критерии тысячелетия для диагностики БА включают:

1.Обязательные критерии: наличие аллергенспецифических IgE:

  • исторические, фактические или ожидаемые (у очень маленьких детей)
  • в периферической крови (радиоаллергосорбентный тест (РАСТ), иммуноферментный анализ (ИФА)) или в коже (внутрикожная провокация)

2. Основные критерии (присутствуют два из трех)

  • Типичное распределение и морфология поражений экземы: младенческий, детский или взрослый тип
  • Зуд
  • Хронический или хронически рецидивирующий дерматит

Общий сывороточный IgE повышен более чем у 80% пациентов с АтД.Специфические IgE-антитела, направленные против антигенов окружающей среды, могут быть обнаружены у большинства пациентов с БА. До 100% детей с сопутствующей респираторной атопией имеют положительные тесты RAST на переносимые по воздуху аллергены и 80% — на пищевые продукты. У детей только с атопическим дерматитом повышенный уровень специфического IgE можно обнаружить примерно у 20%. [11] Однако, несмотря на то, что общий уровень IgE может быть нормальным, почти всегда имеются специфические IgE, направленные на аэро- и/или пищевые аллергены окружающей среды. [12] Уровни IgE обычно коррелируют с тяжестью дерматита и значительно повышаются при сопутствующей респираторной атопии.Цель настоящего исследования заключалась в наблюдении за появлением специфических IgE у пациентов с БА в зависимости от возраста и уровня общего IgE в индийском контексте.

Методы

В исследование были включены пятьдесят последовательных пациентов с БА. Всем пациентам было проведено клиническое обследование, и после выполнения критериев Ханифина и Райки был поставлен диагноз БА. В группе было 27 мужчин и 23 женщины в возрасте от 1 года до 24 лет.Пациенты были набраны из амбулаторной клиники в Хайдарабаде в Южной Индии в течение девяти месяцев с марта 2006 г. по декабрь 2006 г. Все пациенты в исследуемой группе были обследованы, чтобы исключить любое другое заболевание. Были исключены другие аллергические заболевания с повышенным уровнем IgE, такие как аллергический ринит, бронхиальная астма, пищевая анафилаксия, синдром Нетертона, синдром гипер-IgE, синдромы иммунодефицита и др. Пациенты с БА, получавшие другие методы лечения, такие как местные или пероральные стероиды или иммунодепрессанты, были исключены.Был взят подробный анамнез, в том числе семейный.

Было собрано

пробы крови для оценки сывороточного IgE и атопического иммунного профиля. В иммунном профиле определяли IgE-антитела к различным ингаляционным и пищевым аллергенам с помощью теста Enzyme Allergo Sorbent Test (EAST), который проводили с использованием наборов Euroimmune ® (Medizinische Labordiagnostica, Германия).

Тест-набор Euroline обеспечивает полуколичественный анализ in vitro на наличие человеческих IgE-антител к ингаляционным и пищевым аллергенам в сыворотке.Набор содержит тест-полоски, покрытые параллельными линиями из 20 различных экстрактов аллергенов [Таблица — 1]. Тест-полоски сначала увлажняют, а затем инкубируют на первом этапе реакции с сывороткой пациента. Если образцы положительны для этого аллергена, специфические антитела класса IgE будут связываться с аллергенами. Для обнаружения связанных антител проводят вторую инкубацию с использованием меченого ферментом моноклонального античеловеческого IgE (ферментный конъюгат), который катализирует цветную реакцию.

С помощью цифровой системы оценки интенсивность полос была рассчитана в классах EAST (энзимно-аллерго-сорбентный тест) 0-6.Классы были разделены на концентрации, как указано в [Таблица — 2].

Уровни

IgE определяли с помощью твердофазного флуоресцентного анализа, референтные уровни составляли ≤120 кМЕ/л.

Система Euroimmune анализа in vitro специфических IgE-антител обеспечивает три полосы индикатора. При правильном проведении инкубации на этих контрольных полосах наблюдаются различные цветовые реакции. Инкубацию необходимо повторить с новыми реагентами, если нет цветной реакции.В случае оценки общего IgE эффективность реагента сначала подтверждается контролем, поставляемым с набором. Результаты не могут быть проверены, если контрольные значения отклоняются от ожидаемых значений. Эти системы обеспечивают надежность выполняемых анализов.

Результаты

Распределение по возрасту и полу 50 пациентов в отношении общего и специфического IgE показано в [Таблица — 3].

IgE был в пределах нормы у 6/50 пациентов.Средние уровни IgE и специфических антител в оставшейся группе показаны в [Таблица 4] (цифры в скобках показывают количество положительных пациентов).

Восемьдесят восемь процентов пациентов показали повышение уровня антител IgE. Максимальный подъем наблюдался в возрастной группе 10-20 лет. IgE-антитела к пищевым веществам были наиболее распространены в возрастной группе 0-10 лет, тогда как антитела к ингалянтам чаще встречались в старшей возрастной группе, т. е. в возрастной группе 10-20 лет.

Обсуждение

Доказательства центральной роли IgE были получены в нескольких исследованиях. [13],[14],[15],[16] Эти исследования показали, что IgE экспрессируется на эпидермальных клетках Лангерганса у пациентов с БА. Экспрессия высокоаффинного рецептора IgE, FcR I , значительно повышена в поврежденной атопической коже по сравнению с нормальной кожей, неповрежденной кожей или при других заболеваниях, таких как контактный дерматит, псориаз или грибовидный микоз. [17] При атопических заболеваниях наблюдается гиперреактивность к ряду общих факторов окружающей среды, как вдыхаемых, так и проглатываемых, которые обычно переносятся человеком без атопии. [18] Средние уровни IgE в этом исследовании были максимально повышены в возрастной группе 10-20 лет.

Беркс и др. . [19] изучали 46 пациентов с БА, из которых у 15 (33%) была обнаружена пищевая аллергия. Ниггеманн и др. . [20] сообщили о результатах 259 тестов у 107 детей с БА, из которых 131 (51%) были положительными. Сообщается, что пищевая гиперчувствительность затрагивает 37% детей с атопическим дерматитом из университетской клиники в Балтиморе. [21] Хотя результаты разных исследований различаются, примерно треть детей реагируют положительно, подтверждая диагноз пищевой аллергии. В этом исследовании было обнаружено, что процент детей (< 10 лет) со специфическими антителами к пищевым аллергенам составляет 65%, что указывает на то, что диетические ограничения у детей могут играть большую роль в лечении АтД в этой популяции.

Среди пищевых аллергенов коровье молоко, куриные яйца, пшеница, соя и арахис чаще всего вызывают экзему или ее обострение. [22] Дети с атопическим дерматитом также имеют повышенную частоту реакций гиперчувствительности на такие продукты, как орехи и рыба. [23] Повышенный уровень специфического IgE к яйцу был предложен в качестве полезного скринингового теста в этой молодой возрастной группе. [24],[25]

Специфические антитела к пищевым аллергенам в настоящей серии (< 10 лет) обнаружены против яблока (10), фундука (8), пшеницы (6), яичного белка (4), молока (4), картофеля (4). ), морковь (2) и треска (2), цифры в скобках обозначают количество положительных совпадений.Яблоко и фундук были двумя наиболее распространенными пищевыми аллергенами. Даже у пожилых людей с атопией (15-25 лет) в шести образцах были обнаружены специфические антитела к яблоку, что свидетельствует о том, что аллергия на яблоко может играть роль как у детей, так и у молодых людей.

У очень маленьких детей либо кожные прик-тесты, либо циркулирующие специфические IgE (измеряемые методами RAST/CAP) могут быть полезны в качестве скрининговых тестов на IgE-опосредованную пищевую гиперчувствительность. Сообщается, что специфические циркулирующие титры (IgE) имеют прогностическое значение, что может снизить потребность в двойных слепых плацебо-контролируемых пищевых пробах (DBPCFC) для подтверждения диагноза. [26] Если ребенка с атопическим дерматитом и пищевой аллергией посадить на «правильную» исключающую диету, зуд уменьшится, а экзема может значительно улучшиться. В лучшем случае у ребенка может быть нормальная мягкая кожа.

Клинические наблюдения показывают, что аэроаллергены являются значимыми триггерными факторами у пациентов с АтД. Описаны обострения экзематозных поражений после контакта с кожей или вдыхания, и улучшение может наблюдаться после исключения аллергена, особенно в отношении клещей домашней пыли.Наиболее важными аэроаллергенами при атопии являются домашняя пыль, клещи домашней пыли, пыльца (деревьев/травы/сорняков), перхоть животных (кошки/собаки) и плесень.

Классические тесты, связанные с IgE, кожный прик и RAST показывают положительную реакцию у большинства пациентов с АтД. [27],[28] Darsow и др. . показали, что аэроаллергены способны вызывать экзематозные поражения кожи дозозависимым образом в различных группах пациентов с АтД при накожном нанесении на необработанную кожу с помощью кожных атопических тестов (АПТ). [29] Сильные корреляции APT, RAST и кожных прик-тестов в этом исследовании предполагают роль аллерген-специфических IgE в развитии экзематозных поражений кожи после контакта с аэроаллергеном. Результаты многоцентрового исследования APT [29] в Германии с участием 280 пациентов с БА показали следующие положительные проценты RAST: пылевой клещ (56%), кошачья перхоть (49%), пыльца трав (75%), пыльца березы (65%). ) и пыльцу полыни (53%).

Процент положительных результатов EAST в этом исследовании (указывающий на наличие специфических антител к различным ингалянтам) был следующим: пыльца трав (44%), пылевой клещ (32%), перхоть животных (24%), пыльца полыни ( 14%) и плесени (8%).Это исследование показывает, что пыльца трав и пылевые клещи являются наиболее распространенными аэроаллергенами у индийских пациентов с атопией. Частота положительных реакций на ингалянты увеличивалась с возрастом, как и ожидалось, а на пероральные препараты снижалась с возрастом. Было обнаружено, что частота антител к ингалянтам ниже по сравнению с более ранним исследованием.

Однако пациенты в большинстве случаев не сообщали об истории аллергии на положительные антигены. Ограничения этого исследования включают небольшое количество пациентов в этом исследовании.Устранение возбудителей, выявляемых с помощью специфических антител, может привести к улучшению течения БА и даже поддержанию ремиссии. Принимая во внимание высокую частоту положительных результатов на антитела у детей в этом исследовании, составляющую 65%, было бы целесообразно включить рекомендации по поводу питания у пациентов с АтД. Анализы IgE также могут частично устранить необходимость в элиминационных диетах и ​​пищевых проблемах. Таким образом, измерение специфических антител может быть важным инструментом не только в диагностике, но и в лечении БА.

Клинический профиль и анализ кожных прик-тестов у детей с аллергическим ринитом в Северной Керале, Индия | К. П.

Bousquet J, Khaltaev N, Cruz AA, Denburg J, Fokkens WJ, Togias A et al. Аллергический ринит и его влияние на астму (ARIA), обновление 2008 г. (в сотрудничестве со Всемирной организацией здравоохранения, GA(2)LEN и AllerGen). Аллергия. 2008 Апрель;63 Приложение 86:8-160.

Johansson SGO, Haahtela T. Рекомендации Всемирной организации по борьбе с аллергией по профилактике аллергии и аллергической астмы.Рекомендации Всемирной организации по аллергии. Доступно на http://www.worldallergy.org/WAD2005/index.html. По состоянию на 25 июня 2008 г.

Синха Б., Вибха Р.С., Чоудхури Р. Аллергический ринит: забытое заболевание: оценка на уровне сообщества среди взрослых в Дели. J Постград Мед. 2015 июль; 61 (3): 169-75.

Деб А., Мукерджи С., Саха Б.К., Саркар Б.С., Пал Дж., Панди и др. профиль пациентов с аллергическим ринитом: перекрестное клиническое исследование из Калькутты, Индия. J Clin Diagn Resp. 2014;8(1):67-70.

Herr M, Clarisse B, Nikasinovic L, Foucault C, Le Marec AM, Giordanella JP, et al. Существует ли аллергический ринит в младенчестве? Результаты когорты рождения PARIS. Аллергия. 2011 фев; 66 (2): 214-21.

Курукулаарачи Р.Дж., Кармаус В., Аршад С.Х. Секс и атопия влияют на естественное течение ринита. Аллергия Клин Имму. 2012;12:7-12.

Pinart M, Keller T, Reich A, Fröhlich M, Cabieses B, Hohmann C et al. Переключение распространенности аллергического ринита, связанного с полом, с детства на взрослую жизнь: систематический обзор и метаанализ.Int Arch Allergy Immunol. 2017;172:224-35.

Беклейк М.Р., Кауфманн Ф. Гендерные различия в поведении дыхательных путей на протяжении жизни человека. грудная клетка. 1999;54:1119-38.

Постма ДС. Половые различия в развитии и прогрессировании бронхиальной астмы. Генд Мед. 2007;4 Дополнение B:S133-S146.

Kim HY, Kwon EB, Baek JH, Shin YH, Yum HY, Jee HM и др. Распространенность и коморбидность аллергических заболеваний у детей дошкольного возраста. Корейский J Педиатр. 2013;56(8):338-42.

Расул Р., Шера И.А., Ниссар С., Шах З.А., Наяк Н., Сиддики М.А. и соавт.Роль кожных прик-тестов при аллергических расстройствах: проспективное исследование кашмирской популяции в свете обзора. Индийский Дж. Дерматол. 2013;58(1):12-17.

Ghaffari J, Khademloo M, Saffar MJ, Rafiei A, Masiha F. Повышенная чувствительность к клещам домашней пыли и тараканам является наиболее распространенной аллергией на севере Ирана. Иран Дж. Иммунол. 2010;7:234-9.

Роль протеаз, полученных из источника аллергена, в сенсибилизации через эпителиальные клетки дыхательных путей

Протеазная активность является характеристикой, общей для многих аллергенов.Протеазы, полученные из источника аллергена, взаимодействуют с эпителиальными клетками легких, которые, как теперь полагают, играют жизненно важную роль как во врожденных, так и в адаптивных иммунных реакциях. Протеазы, полученные из источника аллергена, воздействуют на эпителиальные клетки дыхательных путей, вызывая нарушение плотных контактов между эпителиальными клетками, активацию рецептора-2, активируемого протеазой, и продукцию стромального лимфопоэтина тимуса. Они облегчают доставку аллергена через эпителиальные слои и повышают аллергенность или напрямую активируют иммунную систему посредством неаллергического механизма.Кроме того, они расщепляют регуляторные молекулы клеточной поверхности, участвующие в аллергических реакциях. Таким образом, протеазы, полученные из источника аллергена, являются потенциально критическим фактором в развитии аллергической сенсибилизации и, по-видимому, тесно связаны с повышенной аллергенностью.

1. Введение

Астма считается воспалительным заболеванием дыхательных путей, и, как правило, считается, что оно обусловлено искаженной дифференцировкой Т-хелперов 2-(Th3-) Th-клеток. Цитокины, управляемые Th3, интерлейкин (IL)-4 и IL-13, запускают В-клетки для синтеза IgE, в то время как IL-5 играет роль в созревании и выживании эозинофилов, а IL-13 регулирует гиперреактивность дыхательных путей и гиперплазию слизи.

Очевидно, что эпителиальные клетки играют важную роль в инициации Th3-клеточного ответа на аллергены. Слой эпителиальных клеток также действует как молекулярное сито, которое не пропускает захватчиков и играет важную роль в гомеостазе. Нарушение барьерной функции вследствие мутаций филаггрина (FLG) имеет решающее значение в патогенезе атопического дерматита [1]. Хотя FLG не экспрессируется в эпителии нижних отделов дыхательных путей [2], барьерная функция эпителия дыхательных путей нарушается при астме, демонстрируя общие общие патогенетические механизмы.

Принимая во внимание эти данные, астму можно рассматривать как заболевание как с чрезмерной активацией, так и с нарушением барьерной функции эпителия дыхательных путей [3–5].

Источники аллергенов, такие как пыльца, клещи домашней пыли (HDM), тараканы и грибы, могут продуцировать или содержать протеазы и тем самым активировать и разрушать эпителиальный барьер, вызывая повышенную сенсибилизацию.

В этой статье основное внимание уделяется важности протеаз, полученных из источника аллергена, как фактора, способствующего первичной сенсибилизации к аллергенам и обострению аллергических заболеваний, вторичных по отношению к нарушению барьерной функции эпителия.

2. Протеазы, полученные из источника аллергена

Воздействие аллергенов в окружающей среде является важным фактором, определяющим распространенность астмы. Протеазы, полученные из источника аллергена, действуют не только как аллергены, но и как промоторы аллергенности.

2.1. Пыльца

Аллергены пыльцы обладают протеазной активностью. Пыльца кедра японского ( Cryptomeria japonica ), кипариса японского ( Chamaecyparis obtusa ) и можжевельника скалистой горы ( Juniperus scopulorum ) обладают активностью сериновых протеаз [6].Аспарагиновая протеаза была также недавно идентифицирована в аллергене пыльцы японского кедра [7]. В траве были очищены и охарактеризованы две сериновые протеазы из пыльцы короткой амброзии ( Ambrosia artemisiifolia ) [8, 9]. Также были охарактеризованы пыльца мятлика кентуккийского ( Poa pratensis ), ржаной травы ( Lolium perenne ) и бермудской травы ( Cynodon dactylon ). Эти пыльцы проявляли пептидазную активность, которая, по-видимому, была связана с сериновыми протеазами, но активность цистеиновых протеаз также была обнаружена в пыльце Кентукки и райграса [10].Сообщается, что основными аллергенами 1-й группы пыльцы трав являются цистеиновые протеазы [11, 12]. Пыльца березы белой ( Betula alba ) и амброзии короткой обладает не только сериновой, но и цистеиновой протеазной активностью [6, 13].

2.2. HDM

HDM продуцируют цистеиновые и сериновые протеазы. Dermatophagoides pteronyssinus 1 (Der p 1) и Der p 3 [14] представляют собой цистеиновые протеазы. Der p 6 и Der p 9 – сериновые протеазы [15–17]. Интересно, что Der p 2, у которого отсутствует явная протеазная активность, является структурным аналогом MD2, компонента комплекса Toll-подобного рецептора-4 (TLR-4) и может восстанавливать сигнальный комплекс TLR4 [18], независимо от протеазы. эффекты.

2.3. Экстракты аллергенов тараканов

Американский таракан ( Periplaneta americana ) и немецкий таракан ( Blattella germanica ) обладают сложной протеолитической активностью [19–21]. Трипсиноподобная сериновая протеаза (Per a 10) с молекулярной массой около 28 кДа была очищена и охарактеризована из экстракта всего тела американских тараканов [22, 23]. Bla g 2, мощный аллерген немецких тараканов, идентифицирован как аспарагиновая протеаза [24, 25]. Экстракт немецкого таракана богат протеазами и оказывает прямое провоспалительное действие на эпителиальные клетки дыхательных путей.Эти провоспалительные эффекты устраняются ингибиторами серина [26], что предполагает участие сериновой протеазы. Однако наличие и активность протеаз в экстрактах тараканов, особенно тех, которые нацелены на аспартат, цистеин и серин, остаются спорными [27].

2.4. Грибы

Известно, что большое количество видов плесени содержат протеазы. Сериновые протеазы переносимых по воздуху грибов были идентифицированы у видов Penicillium , Aspergillus , Rhodotorula , Curvularia и Cladosporium [28–31].Сообщалось о перекрестной реактивности среди видов грибов [32–35]. Активная протеаза Epicoccum purpurascens , Epi p 1, который является мощным источником грибкового аллергена, вызывающим респираторные аллергические расстройства во всем мире, также играет важную роль в развитии аллергических реакций в дыхательных путях мышиных моделей [36].

Недавние исследования были сосредоточены на роли экзогенных протеаз аллергенов в аллергических расстройствах. Было предложено, чтобы ферментативная активность облегчала сенсибилизацию к различным аллергенам [37–39].

3. Нарушение эпителиально-клеточного барьера

Имеются данные о том, что в клинических условиях астмы нарушается барьерная функция эпителия дыхательных путей [40–43]. Эпителий дыхательных путей служит барьером за счет образования плотных соединений (TJ), которые изолируют парацеллюлярное пространство. TJs также имеют функции ворот, которые регулируют прохождение ионов и макромолекул через парацеллюлярный путь. TJ состоят из ряда взаимодействующих белков и рецепторов, включая белки ZO-1–3, окклюдин, клаудины 1–5 и белки трансмембранной адгезии ( β -катенин, E-кадгерин и соединительную молекулу адгезии). -1).Эти белки и рецепторы взаимодействуют гомофильно. ZO-1, -2 и -3 связываются с цитоплазматическим хвостом окклюдина и связывают TJ с актиновым цитоскелетом. Окклюдин, по-видимому, сополимеризуется с образованием нитей TJ на основе клаудина. Клаудины прилипают друг к другу как гомотипическим, так и гетеротипическим образом, определяя барьерные свойства межклеточного контакта, существующего между двумя соседними клетками, и регулируют парацеллюлярную проницаемость. Регуляторные молекулы, включая тирозинкиназы, протеазы и GTPases, колокализуются вблизи плотного соединения.Координированные функции между трансмембранными компонентами и цитоплазматическими молекулами, наряду с цитоскелетом и регуляторными молекулами, играют решающую роль не только в барьерной функции, но и в коммуникации между соседними клетками, а также в регуляции межклеточного транспорта [44, 45].

Инициации сенсибилизации к аллергенам в дыхательных путях предшествует их поглощение и процессинг субпопуляцией дендритных клеток (ДК) слизистой оболочки с последующей презентацией специфических пептидных эпитопов наивным Т-клеткам в сочетании с основным классом гистосовместимости (MHC) II.ДК слизистой располагаются внутри эпителия. ДК расширяют свои отростки между эпителиальными клетками непосредственно в просвет дыхательных путей в качестве функции перископа, которая обеспечивает непрерывный иммунный надзор за поверхностью просвета дыхательных путей. DC формируют TJs с эпителиальными клетками за счет их экспрессии молекул адгезии и посредством гомотипических взаимодействий E-кадгерина [46, 47].

ДК действуют как иммунные стражи, предупреждая Т-клетки о присутствии антигенов после доставки и поступления в дренирующие лимфатические узлы.У мышей антиген, введенный в легкие, быстро, всего за 12 часов, транспортируется в грудные лимфатические узлы [48, 49]. Путь вдыхаемых антигенов от дыхательных путей до отбора проб подмножествами ДК еще предстоит подробно охарактеризовать. Функции отбора антигенов также могут различаться между ДК, расположенными в альвеолярной стенке, и ДК слизистой оболочки, которые выстилают проводящие дыхательные пути [47, 50-52].

Хотя функция отбора проб ДК дыхательных путей гарантирует, что любой вдыхаемый белок будет распознан и представлен Т-клеткам, протеазы, полученные из источника аллергена, нарушают функцию эпителиального барьера, разрушая белки TJ, тем самым облегчая доставку аллергена через эпителиальные слои.

Было показано, что протеазы, выделяемые основной аллергенной пыльцой, повреждают эпителиальные клетки дыхательных путей in vitro [53]. Протеолитические ферменты, содержащиеся в пыльце гигантской амброзии ( Ambrosia trifida ), белой березы, мятлика кентуккийского и пасхальной лилии ( Lilium longiflorum ), облегчают доставку аллергена через эпителий путем деградации окклюдина, что приводит к разрушению эпителиальных TJ. Этот эффект был заблокирован ингибиторами сериновых и цистеиновых протеаз в клетках почек собак Madin-Darby (MDCK) и Calu-3 [54].

Der p 1 увеличивал проницаемость эпителия, разрушая TJs [55]. Иммуноблотинг показал, что нарушение морфологии TJ с помощью Der p 1 было связано с расщеплением ZO-1 и окклюдина в линиях MDCK и 16HBE14o-бронхиальных эпителиальных клеток человека [56]. Предполагаемые сайты расщепления Der p 1 были обнаружены в пептидах из внеклеточного домена окклюдина и в белке адгезии TJ клаудине-1. Внеклеточное расщепление TJs инициирует внутриклеточный процессинг компонентов соединения.Предполагается также, что Der p 1 действует косвенно на TJs путем активации зимогена клеточной поверхности, который затем приступает к расщеплению TJs [57]. ZO-1 является внутриклеточным и, следовательно, вряд ли будет непосредственно расщеплен Der p 1, и предполагается, что его разрушение является следствием разборки TJ [57].

Der p 1 и Dermatophagoides farinae 1 (Der f 1) могут инактивировать легочные сурфактантные белки (SP)-A и -D [58], которые преимущественно синтезируются и секретируются в легких альвеолярными клетками II типа и клетками Клара. .Известно, что SP-A и-D играют важную роль не только во врожденной иммунной защите, такой как агрегация бактерий и модуляция функции лейкоцитов, но также участвуют в аллергическом ответе [59, 60].

Сообщается, что аллергены, полученные из экстрактов тараканов, увеличивают проницаемость эпителиальных клеток бронхиальных дыхательных путей опосредованно через индукцию сосудистого эндотелиального фактора роста [61] и тем самым получают доступ к интраэпителиальным ДК.

Протеиназа Aspergillus fumigatus напрямую индуцирует отслойку эпителиальных клеток человека [62].Pen ch 13, основной аллерген Penicillium chrysogenum, представляет собой сериновую протеазу. Его ферментативная активность повреждает эпителиальный барьер, расщепляя окклюдин белка TJ по Gln202 и Gln211, аминокислотам во втором внеклеточном домене белка на 16HBE14o-клетках [63], с последующей индукцией провоспалительных реакций в эпителиальных клетках.

Повреждение эпителия и аберрантная репарация вызывают астму. Интересно, что Pen ch 13 снижает экспрессию CD44 на клеточной поверхности в 16HBE14o-клетках и первичных бронхиальных эпителиальных клетках [64], что, как предполагается, способствует репарации эпителиальных повреждений [65].CD44 представляет собой молекулу трансмембранной адгезии и основной рецептор гиалуронана, основного компонента внеклеточного матрикса. CD44 важен для удаления внеклеточного матрикса из мест повреждения тканей, а нарушение клиренса гиалуроновой кислоты приводит к стойкому воспалению [66, 67].

Таким образом, потеря функции эпителиального барьера вследствие действия протеаз, связанных с аллергенами, облегчает доступ антигена к ДК. В результате адаптивный иммунный ответ смещается в сторону Th3-клеток, а иммунный ответ IgE усиливается.

Большинство результатов основано на исследованиях in vitro. Поскольку процесс переваривания протеаз требует достаточной локальной концентрации и времени, растворение в слизи, а также мукоцилиарный клиренс дыхательных путей могут осложнить процесс переваривания ТЖ in vivo.

4. Протеазы, полученные из источника аллергена, активируют рецепторы распознавания образов (PRR)

В настоящее время считается, что эпителиальные клетки легких играют жизненно важную роль как во врожденных, так и в адаптивных иммунных реакциях. Эпителиальные клетки могут воспринимать вдыхаемые аллергены или протеазы и реагировать на них посредством активации различных рецепторов распознавания образов (PRR), таких как TLR и PAR.Эти активированные сигналы рецепторов запускают активацию ядерного фактора κ B (NF- κ B), что приводит к активации транскрипции нескольких провоспалительных генов, включая те, которые кодируют цитокины и хемокины. Эпителиальная продукция стромального лимфопоэтина тимуса (TSLP), гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и IL-33 и IL-25, а также продукция хемокинов привлекают и активируют ДК, искажая продукцию Т-клеток к подмножеству Th3.

5.PAR-2 ​​

Сообщается, что протеазные аллергены вызывают не-IgE-опосредованные реакции дыхательных путей, вызывая рецепторы врожденного иммунитета, такие как PAR, для активации эпителиальных клеток, тучных клеток и ДК, что, в свою очередь, приводит к дальнейшему высвобождению медиаторов [68]. ]. PAR составляют новое семейство семитрансмембранных рецепторов, связанных с G-белком. На сегодняшний день идентифицированы и клонированы четыре PAR. Они широко экспрессируются на клетках, включающих кровеносные сосуды, соединительную ткань, эпителий и дыхательные пути, а также на лейкоцитах [69].PAR активируются протеолитическим расщеплением на амино-конце, что позволяет взаимодействовать между вновь образованным «привязанным лигандом» и второй внеклеточной петлей рецептора. Это взаимодействие придает клеточному сигнальному свойству. PAR также могут быть активированы небольшими пептидами, которые имитируют связанный лиганд. Активированные PAR, связанные с G-сигнальными каскадами, повышают уровень фосфолипазы С, что, в свою очередь, повышает уровень внутриклеточного кальция (Ca 2+ ) [70–72]. Активация G-белка также вызывает транскрипционный ответ через регулируемые внеклеточными сигналами и митоген-активируемые протеинкиназы, а также NF- κ B [73–75].

У больных бронхиальной астмой повышена экспрессия PAR-2 ​​на поверхности клеток респираторного эпителия [76, 77]. Агонисты PAR2 вызывают сужение бронхов человека [78]. Сообщается, что отсутствие экспрессии PAR-2 ​​снижает инфильтрацию воспалительных клеток и снижает гиперреактивность дыхательных путей в ответ на введение аллергена у мышей [79].

Астма связана с повышенной секрецией воды и хлоридов (Cl ) в просвет дыхательных путей из-за повышенной экспрессии Ca 2+ -активированных каналов Cl [80–82].Стимуляция рецепторов PAR-2 ​​в дыхательных путях мыши и человека ингибировала амилорид-чувствительную натриевую (Na + ) проводимость и стимулировала люминальные каналы Cl и базолатеральные калиевые (K + ) каналы, которые вместе могут вызывать скопление на поверхности дыхательных путей. жидкости [83].

Однако было показано, что активация PAR-2 ​​уменьшает воспаление дыхательных путей в модели экспериментальной астмы у кроликов [84], что подтверждает концепцию о том, что PAR-2 ​​является цитопротекторным рецептором, участвующим в зависимой от простаноидов цитопротекции в дыхательных путях.Простагландин E (PGE), ингибирующий легочную инфильтрацию иммунными клетками и сужение бронхов при аллерген-индуцированной астме, продуцируется культивируемыми гладкомышечными клетками дыхательных путей [85, 86], а также эпителиальными клетками дыхательных путей, фолликулярными ДК, фибробластами, моноцитами, и альвеолярные макрофаги [87]. Было показано, что интраназальное введение PAR-2-AP ингибирует эозинофилию дыхательных путей и гиперреактивность у мышей с аллергией посредством циклооксигеназы-(ЦОГ-)2-зависимой генерации PGE 2 [88].

Таким образом, способствует ли активация PAR-2 ​​прогрессированию воспалительных реакций дыхательных путей или противостоит им, зависит от экспериментальной модели и вида и еще полностью не изучено.Это область, требующая дальнейших исследований.

PAR-2 ​​является основным кандидатом для определения воздействия сериновых протеаз на окружающую среду. PAR-2 ​​участвует в антиген-индуцированных астматических реакциях, включая увеличение продукции IgE, повышенную реакцию на метахолин, повышенную продукцию IL-6, IL-8, GM-CSF и эотаксин, повышение матриксной металлопротеиназы-9 (MMP-9). ) освобождение и расслабление бронхов [89, 90]. Интересно, что MMP-9, который играет важную роль в ремоделировании дыхательных путей при заболеваниях, предположительно оказывает свое влияние на эпителий путем расщепления одного или нескольких компонентов межклеточных соединений и запуска anoikis [91].

Увеличение высвобождения провоспалительных цитокинов, таких как IL-6 и IL-8, из эпителиальных клеток дыхательных путей в ответ на протеазы, содержащие HDM [92, 93]. Der p 3 и Der p 9 могут индуцировать неаллергический воспалительный ответ в дыхательных путях посредством высвобождения провоспалительных цитокинов из бронхиального эпителия, который, по крайней мере, частично опосредован PAR-2 ​​[94]. Хотя высвобождение IL-6 и IL-8 за счет протеазной активности Der p 1 может происходить по механизму, не зависящему от мобилизации Ca 2+ и активации PAR [95, 96], их высвобождение из клеточной линии A549 сообщалось, что он связан с PAR-2 ​​[97].

Грибковые протеазы, из Aspergillus fumigates , Alternaria alter, и Cladosporium herbarum , дифференциально вызывали морфологические изменения, десквамацию клеток и продукцию различных цитокинов [98, 99]. Протеазная активность Pen ch 13, аллергена из Penicillium chrysogenum , необходима для индукции экспрессии PGE2, IL-8, трансформирующего фактора роста (TGF-) beta1 и COX-2 в клетках A549, 16HBE14o- клетки и первичные культуры HBEpC [63].Pen c 13, основной аллерген, продуцируемый Penicillium citrinum , индуцирует экспрессию IL-8 в эпителиальных клетках дыхательных путей человека путем активации либо PAR-1, либо PAR-2 ​​[100].

Остатки фекалий [101] и экстракты [102] немецкого таракана вызывали аллергическую сенсибилизацию и воспаление слизистых оболочек через PAR-2 ​​у мышей. Воспалительные ответы эозинофилов человека на антигены экстракта немецкого и восточного тараканов ( Blatta orientalis ) опосредуются через PAR-2 ​​[27, 103]. Недавние данные свидетельствуют о причастности протеазной активности тараканов к регуляции цитокинов.Аллергены немецких и американских тараканов индуцируют экспрессию IL-8 в клетках h392 [104] и клетках A549 [105], соответственно, и оба блокируются ингибиторами сериновых протеаз, что указывает на то, что PAR-2 ​​может играть роль в ИЛ-8, индуцированном аллергеном тараканов. 8 секрет эпителиальных клеток дыхательных путей человека [105]. Протеазы в экстракте немецкого таракана регулируют PAR-2 ​​и киназу, регулируемую внеклеточными сигналами (ERK), для повышения активности NF для IL-6 (NF-IL6) (недавно известного как C/EBP- β ), а также синергетически регулируют TNF. — α -индуцированная активность промотора IL-8 в эпителии дыхательных путей человека [104, 106–108].Остатки фекалий немецких тараканов содержат активные сериновые протеазы, которые усиливают TNF- α -индуцированную экспрессию MMP-9 посредством механизма, который включает PAR-2, ERK и AP-1 [109].

Интересно, что воздействие вдыхаемых антигенов с пептидом, активирующим PAR-2, приводило к аллергической сенсибилизации, тогда как воздействие только Ag индуцировало толерантность у мышей BALB/c, которым вводили овальбумин (OVA), предполагая активацию PAR-2 ​​в дыхательных путях в то время. воздействия вдыхаемого антигена, способного сместить результирующий иммунный ответ в сторону аллергической сенсибилизации и развития астмы.Кроме того, сообщается, что аллергическая сенсибилизация, опосредованная PAR-2, зависит от TNF [110].

6. Лимфопоэтин стромы тимуса

В настоящее время считается, что эпителиальные клетки дыхательных путей не только служат физическим барьером, но и играют важную роль в аллергических реакциях. TSLP [111] экспрессируется главным образом эпителиальными клетками, входящими в состав барьерных поверхностей легких. Генетический анализ атопических популяций продемонстрировал, что полиморфизмы в TSLP связаны с астмой и гиперреактивностью дыхательных путей, концентрацией IgE и эозинофилией [112–116].Сверхэкспрессия TSLP в легких может запускать Th3-клеточный иммунитет. У мышей, экспрессирующих TSLP в легких, спонтанно развивается воспалительное заболевание дыхательных путей с характеристиками, подобными астме человека [117].

Исследования образцов эндобронхиальной биопсии и БАЛ пациентов с тяжелой астмой показали, что астма связана с повышенной экспрессией в слизистой бронхов TSLP и Th2-аттрактантов (IP-10/CXCL10) и Th3-аттрактантов (TARC/CCL17, MDC/ CCL22) хемокины [118, 119].

IL-25 и TSLP выполняют важные функции в инициации аллергических реакций [120–122]. Экспрессия TSLP индуцируется в эпителиальных клетках дыхательных путей при воздействии протеаз аллергенного происхождения, и в этом процессе участвует PAR-2. Недавнее исследование продемонстрировало активацию мРНК IL-25 и TSLP в клетках легочного эпителия после обработки аллергеном протеазы in vivo и in vitro , и что индукция IL-25 и TSLP происходит через внутриклеточные пути ERK и p38 MAP киназы. [123].TSLP индуцирует врожденные иммунные функции DC, что приводит к рекрутированию Th3-клеток, управляемому хемокинами, в дыхательные пути, и эти клетки затем продуцируют цитокины Th3-типа. TSLP также запускает созревание DCs и их миграцию в медиастинальные лимфатические узлы, снова искажая распределение T-клеток в пользу воспалительных Th3-клеток, продуцирующих IL-4, IL-5, IL-13 и TNF-α. Эти процессы включают взаимодействие между костимулирующими молекулами, такими как OX40 (CD134) в мембранах наивных Т-клеток и OX40L (CD134L) в мембранах ДК [124, 125].Сообщалось, что TSLP индуцируется в эпителиальной клеточной линии дыхательных путей BEAS-2B при воздействии протеаз Alternaria [126] (см. рис. 1).


Базофилы напрямую активируются протеазными аллергенами и продуцируют TSLP. Сообщалось, что цистеиновая протеазная активность папаина, профессионального аллергена, гомологичного Der f 1 и Der p 1, инициирует сенсибилизацию Th3 in vivo у мышей посредством активации базофилов [122].

7. Протеазы, полученные из источника аллергена, усиливают сенсибилизацию к другим аллергенам и компонентам аллергена

Третичная структура аллергена участвует в IgE-связывающей активности.Третичная архитектура молекулы Der p 1 сама по себе недостаточна для индукции основной продукции как IgE, так и IgG, но ее протеолитическая активность имеет решающее значение для индукции положительного иммунного ответа у наивных мышей [127].

Иммунизация мышей протеолитически активным Der p 1 приводит к значительному увеличению синтеза общего IgE и специфичного к Der p 1 IgE по сравнению с животными, иммунизированными Der p 1, необратимо блокируемым Е-64, ингибитором цистеиновой протеазы [128] . Протеолитическая активность Der p 1 усиливает инфильтрацию воспалительных клеток в легкие и системную продукцию IgE при введении непосредственно в дыхательные пути [129].

Аллергены с протеазной активностью также способны опосредовать сенсибилизацию к непротеазным белкам. Воздействие экстракта HDM создает среду слизистой оболочки, способствующую развитию аллергической сенсибилизации к слабым или безвредным антигенам, таким как OVA, предполагая, что вызовет ли переносимый по воздуху аллерген аллергическое заболевание дыхательных путей, может зависеть, по крайней мере частично, не просто от воздействия это скорее обстановка, в которой происходит это воздействие [130, 131].

Активная протеаза, содержащаяся в экстрактах грибов, может влиять на индукцию и тяжесть аллергического заболевания дыхательных путей у мышей.Протеолитически активные молекулы могут облегчать презентацию непротеолитических аллергенов иммунной системе, тем самым усиливая сенсибилизацию к аллергенам. Таким образом, эти протеолитические аллергены способствуют сенсибилизации клеток Th3. Для зрелого ответа главную роль может играть участие таких компонентов, как ферменты, о чем свидетельствует ответ, о котором сообщают с неочищенным антигеном и рекомбинантными аллергенами. Щелочные сериновые протеазы являются основными аллергенами видов Aspergillus . Аллерген щелочной сериновой протеазы А.fumigatus (Asp f 13) индуцирует IgE, а также воспалительную реакцию и оказывает синергетическое действие на иммунный ответ, индуцированный Asp f 2 у мышей [31, 132].

8. Протеазы, полученные из источника аллергена, расщепляют молекулы клеточной поверхности: роль за пределами дыхательных путей

Было признано, что протеазы, полученные из источника аллергена, обладают способностью расщеплять ключевые регуляторные молекулы в аллергических реакциях, затрагивающих клеточные поверхности, и усиливать ответы IgE.

Предполагаемая ранее патогенная роль экзогенных протеаз, особенно Der p 1, включает расщепление различных эндогенных белков, включая удаление низкоаффинного IgER (CD23) с поверхности В-лимфоцитов человека.Эта потеря CD23 на клеточной поверхности IgE-секретирующих В-клеток может стимулировать и усиливать IgE-иммунные ответы за счет устранения важного ингибирующего механизма обратной связи, который обычно ограничивал бы синтез IgE. Кроме того, фрагменты CD23, высвобождаемые Der p 1, могут непосредственно способствовать синтезу IgE [133].

Der p 1 расщепляет субъединицу α рецептора IL-2 (IL-2R или CD25), которая является ключевой для размножения клеток Th2, удаляя ее с поверхности Т-клеток периферической крови человека. В результате эти клетки демонстрируют заметно сниженную пролиферацию и секрецию интерферона γ в ответ на мощный стимул, такой как антитело против CD3.Расщепление IL-2R с помощью Der p 1, вероятно, вызывает нарушение роста клеток субпопуляции Th2 и, как следствие, может смещать иммунный ответ в сторону Th3-клеток [134, 135].

Der p 1 также расщепляет DC-SIGN и DC-SIGNR клеточной поверхности, которые представляют собой близкородственные трансмембранные рецепторы лектина C-типа, экспрессируемые в компартментах иммунной системы. Затем эти молекулы связываются с молекулой внутриклеточной адгезии-2 (ICAM-2), экспрессируемой на эндотелиальных и Т-клетках, и ICAM-3, экспрессируемой на Т-клетках. Оба участвуют в переносе DC, взаимодействиях DC-T-клеток и перекосе иммунного ответа в пользу Th 1 [136].

Протеолитическая активность Der p 1 приводит к отщеплению CD40 от поверхности DC. Это лишает ДК способности получать опосредованные CD40L сигналы от Т-клеток, что является важным путем, стимулирующим продукцию IL-12. Это подавление IL-12 может позволить ДК напрямую способствовать дифференцировке наивных Т-клеток в сторону цитокинового профиля Th3 [137].

9. Заключение

Хотя генетические аспекты дефицита эпителиального барьера дыхательных путей еще предстоит определить, в основе патогенеза бронхиальной астмы лежат как структурные, так и функциональные нарушения эпителия.Активность протеаз в аллергенах подтверждает, что аллергенность возникает не только в результате реакции на эпитоп, участвующий в адаптивных иммунных ответах Т- и В-клеток, но и в результате нарушения барьерной функции дыхательных путей и активации врожденных иммунных ответов через эпителиальные клетки [138-138]. 140]. Стимуляция передачи сигналов PAR-2 ​​протеазными аллергенами участвует в воспалительном процессе и может служить связующим звеном между врожденными и адаптивными иммунными реакциями.

Анализ этих аллергенных протеаз, которые образуют чувствительные к протеазе пути в эпителиальных клетках дыхательных путей, необходим для выяснения патогенеза аллергической астмы.Ожидается, что полное понимание этих процессов приведет как к лечению, так и к профилактическим мерам против развития астмы.

Ультратонкие керамические наночастицы, модифицированные углеводами, для иммунотерапии аллергенами | Интернет-исследования в области здравоохранения и окружающей среды (HERO)

ID ГЕРОЯ

1762269

Тип ссылки

Журнальная статья

Заголовок

Ультратонкие керамические наночастицы, модифицированные углеводами, для иммунотерапии аллергенами

Авторы)

Панди, RS; Саху, С; Судхиш, MS; Мадан, Дж.; Кумар, М; Диксит, ВК

Год

2011

Рецензируется ли эксперт?

да

Журнал

Международная иммунофармакология
ISSN: 1567-5769

Объем

11

Проблема

8

Номера страниц

925-931

Язык

английский

PMID

21333772

DOI

10.1016/j.intimp.2011.02.004

Идентификатор Web of Science

WOS:000293723400004

Абстрактный

Использование систем доставки лекарств в аллерген-специфической иммунотерапии представляется многообещающим подходом благодаря их способности действовать как адъюванты, транспортировать аллергены к иммунокомпетентным клеткам и тканям и сокращать количество введений.Цель этой работы состояла в том, чтобы оценить модифицированные углеводами ультратонкие керамические наночастицы (аквасомы) на основе в качестве адъюванта/средства доставки в специфической иммунотерапии с использованием овальбумина (OVA) в качестве модели аллергена. Приготовленные наночастицы характеризовали по размеру, форме, дзета-потенциалу, целостности антигена, эффективности поверхностной адсорбции и высвобождению in vitro. Гуморальный и клеточно-индуцированный иммунный ответ, генерируемый аквасомами, адсорбированными OVA, изучали с помощью двух внутрикожных иммунизаций у мышей BALB/c.Мышей, сенсибилизированных OVA, лечили аквасомами, адсорбированными OVA, и гидроксидом алюминия, адсорбированным OVA, в соответствии с установленным протоколом. Через пятнадцать дней после терапии животных заражали OVA и оценивали различные признаки анафилактического шока. Разработанные аквасомы имели отрицательный дзета-потенциал (-11,3 мВ) и средний размер 47 нм с эффективностью адсорбции OVA ~60,2 мкг мг(-1) гидроксиапатитового ядра. Иммунный ответ in vivo после двух внутрикожных инъекций аквасом, адсорбированных OVA, приводил к смешанному иммунному ответу Th2/Th3-типа.Модель мышей, сенсибилизированных OVA, лечение аквасомами, адсорбированными OVA, вызывала более низкие уровни IgE (p<0,05), гистамина в сыворотке и более высокую выживаемость по сравнению с OVA, адсорбированными квасцами. Симптомы анафилактического шока у мышей, обработанных аквасомой OVA, были слабее, чем у мышей, индуцированных в группе OVA, адсорбированной квасцами. Результаты этого исследования демонстрируют ценное использование аквасом в иммунотерапии аллергенами.

Ключевые слова

аллергия; аквасомы; керамический; Специфическая иммунотерапия

Спектр аллергенов и биология аллергенов в Индии — Полный текст — Международный архив аллергии и иммунологии 2018, Vol.177, No. 3

Растущая распространенность аллергии и астмы в Индии стала серьезной проблемой здравоохранения с симптомами, варьирующимися от легкого ринита до тяжелой астмы и даже опасной для жизни анафилаксии. «Репертуар аллергенов» этого субконтинента очень разнообразен из-за разнообразия климата, флоры и пищевых привычек. Надлежащая идентификация, очистка и молекулярная характеристика молекул, вызывающих аллергию, необходимы для облегчения постановки точного диагноза и разработки иммунотерапевтических вакцин.Хотя имеется несколько отчетов о распространенных аллергенах, большинство из этих исследований были основаны на предварительном обнаружении и идентификации аллергенов. Лишь немногие из этих молекул аллергенов были охарактеризованы с помощью рекомбинантной технологии и структурной биологии. В настоящем обзоре сначала описывается состав, характер распространения и естественные источники преобладающих аллергенов в Индии, а также распространенность сенсибилизации к этим аллергенам по всей стране. Далее мы представляем исчерпывающий отчет о биохимической, иммунологической и молекулярной информации об аллергенах, о которых сообщалось до сих пор из Индии.Обзор также охватывает исследования по оценке биобезопасности трансгенных растений в отношении аллергии. Наконец, мы обсуждаем испытания аллерген-специфической иммунотерапии, проведенные в Индии.

© 2018 S. Karger AG, Базель

Введение

Аллергические заболевания стали серьезной проблемой здравоохранения во всем мире, и Индия не является исключением. В настоящее время более 25% всего населения Индии сенсибилизировано различными формами аллергенов [1]. Основными источниками аллергенов на этом субконтиненте являются пыльцевые зерна, споры грибов, пищевые продукты, насекомые и пылевые клещи [2, 3].Общие симптомы среди страдающих аллергией в Индии включают бронхиальную астму, атопический ринит, дерматит, крапивницу, оральные и желудочно-кишечные симптомы, глазную аллергию и даже опасную для жизни анафилаксию [4]. Различные отчеты, основанные на данных о госпитализации из разных частей Индии, показали резкое увеличение распространенности IgE-опосредованного атопического заболевания за последние несколько десятилетий [5]. Сообщается, что Индия, являющаяся страной с разнообразным климатом, растительностью, населением и пищевыми привычками, имеет широкий спектр аллергенов, начиная от ингалянтов и заканчивая пищевыми и контактными веществами.Несмотря на такой серьезный риск для здоровья, клиническим, а также фундаментальным исследованиям «молекулярной аллергологии» в Индии никогда не придавалось большого значения. Это сделало точную диагностику и терапевтическое вмешательство при аллергии в этой стране весьма затруднительным. В то время как в западных странах передовые диагностические инструменты на основе рекомбинантных аллергенов, такие как ImmunoCAP [6] и аллергенный микрочип [7], произвели революцию в молекулярной диагностике, Индия все еще отстает, полагаясь на кожный прик-тест вековой давности с использованием неочищенных экстрактов аллергенов [8, 9]. ].Более того, ясно, что экстракты аллергенов в Индии не стандартизированы и не разработан план действий по улучшению качества диагностических реагентов. Кроме того, существуют экономические ограничения для внедрения производства аллергенов из-за рубежа для улучшения ситуации из-за высоких налоговых ставок и юридических требований для лицензирования компаний. Также существует всего несколько надежных источников высококачественных аллергенных исходных материалов. Помимо диагностики, в западных странах за последние несколько десятилетий произошел качественный скачок в терапевтических мерах по борьбе с аллергией.Эти терапевтические меры относятся к иммунотерапии гипоаллергенными вариантами, пептидами/фрагментами, полученными из аллергенов, и генно-инженерными производными аллергенов [10]. С другой стороны, таких передовых иммунотерапевтических инструментов особенно мало в Индии. Настоящий обзор направлен на то, чтобы пролить свет на репертуары аллергенов, которые способствуют пандемическому аспекту IgE-опосредованных расстройств в Индии, а также на то, как эта информация может быть эффективно использована в трансляционных исследованиях для решения проблем со здоровьем огромного населения Индии.

Аллергия и исследования аллергенов в Индии

Распространенность аллергических заболеваний в Индии

Астма и заболевания верхних дыхательных путей являются распространенными проявлениями хронической аллергии, поражающей значительную часть населения всех возрастов во всех частях Индии. Они представляют собой значительное социально-экономическое бремя в результате снижения качества жизни. Самая последняя и пересмотренная оценка глобальной эпидемиологии атопической астмы в рамках проекта «Глобальное бремя болезней» предполагает, что около 334 миллионов человек страдают астмой [11].

Идя в ногу с глобальной эпидемиологией, заболеваемость аллергическими заболеваниями в Индии также растет угрожающими темпами, поскольку более 25% населения Индии страдают от различных форм аллергии [12]. Обследование на основе госпитализации, проведенное в Индии, показало, что 20–30% населения страдают аллергическим ринитом, а у 15% из них развилась атопическая астма [13, 14]. В дополнение к астме, другие формы аллергии, такие как атопический ринит, анафилаксия, лекарственная, пищевая аллергия и аллергия на насекомых, экзема, крапивница и ангионевротический отек, также имели тенденцию к росту с точки зрения распространенности, а также тяжести в Индии.Многоцентровое популяционное исследование, проведенное Jindal et al. [15] в разных частях Индии, названное Индийское исследование эпидемиологии астмы, респираторных симптомов и хронического бронхита (INSEARCH), показало, что у 20–30% населения Индии был клинически диагностирован аллергик (рис. 1). Исследование также оценило частоту астмы, хронического бронхита и аллергического ринита в 2,05, 3,5 и 3,3% соответственно. Это исследование также включало популяцию, страдающую детской аллергией, в которой 3.У 3% детей в возрасте 6–7 лет и у 5,6% детей в возрасте 13–14 лет диагностирован аллергический риноконъюнктивит. Другое многоцентровое исследование, проведенное Группой по изучению эпидемиологии астмы Индийского совета медицинских исследований, выявило распространенность аллергического ринита примерно у 20% населения Индии [16, 17]. По оценкам Всемирной аллергологической организации (WAO), распространенность аллергии на пыльцу среди всего населения колеблется от 10 до 40% [18].

Рис. 1.

Распространенность аллергии и атопической астмы в Индии и расположение различных исследовательских центров (взято из Jindal et al.[15] с небольшими изменениями).

Основные источники аллергенов в Индии и факторы окружающей среды, способствующие их росту

Различные перекрестные исследования позволили лучше понять взаимосвязь между воздействием аллергенов, аллергической сенсибилизацией и клиническими наблюдениями. Это привело к выявлению основных источников аллергенов в Индии. Более того, имеются клинические и биохимические отчеты о перекрестной IgE-реактивности между пыльцой и спорой, пыльцой и пищей, грибком и пылевым клещом и т.д.Индия представляет собой субконтинент с изменчивыми климатическими условиями [19]. Вся северная и северо-восточная части расположены в предгорьях Гималаев, прибрежные континентальные части окружены морями и океанами (Бенгальский залив, Индийский океан и Аравийское море), а центральная часть делится на северную и южную. области у скалистых гор Виндхья. Таким образом, переносимая по воздуху пыльца, а также грибная флора и их концентрация в значительной степени различаются в разных экозонах и сезонах в зависимости от сезонов цветения и метеорологических факторов [20, 21].Несколько исследователей провели обширную работу по составлению календаря пыльцы и опыления различных зон Индии. Завершен Всеиндийский скоординированный проект по аэроаллергенам и здоровью человека, спонсируемый Министерством окружающей среды и лесов правительства Индии [13]. Основываясь на частоте кожных проб и IgE-серологии, определенные источники аллергенов были определены как основные аллергены. Эти основные пыльцевые и грибковые аллергены из 18 различных мест были идентифицированы, количественно определены и частично охарактеризованы.Основные аллергенные пыльцевые зерна, зарегистрированные на данный момент из разных частей Индии, перечислены в таблице 1. Центр биохимических технологий при Совете по научным и промышленным исследованиям Индии опубликовал книгу с календарями пыльцы 12 различных штатов Индии [22, 23], где представлена ​​информация о пыльцевых сезонах различных аллергенных растений Индии.

Таблица 1.

Список семейств растений и видов, производящих аллергенные пыльцевые зерна, о которых сообщают различные исследователи из различных частей Индии

Повышенные температуры и более высокие уровни CO 2 привели к увеличению цикла опыления сорняков, тем самым увеличение пыльцевой нагрузки в воздухе [24].О связи между грозами и госпитализацией по поводу астмы уже давно сообщают несколько исследователей, устанавливая возможность вспышки астмы в результате осмотического разрыва пыльцы и последующего высвобождения респирабельных аллергенных частиц, широко известных как грозовая астма [25]. В Индии резкий рост заболеваемости астмой в период муссонов можно было бы объяснить этим явлением, хотя оно и не было тщательно исследовано. Помимо пыльцевых зерен, грибковые споры, насекомые и пылевые клещи также считаются основными источниками аэроаллергенной нагрузки в помещении [26-28].На самом деле концентрация спор и фрагментов грибов в воздухе значительно выше, чем в пыльцевых зернах [29, 30]. Считается, что тропические и субтропические климатические условия Индии наряду с высокой влажностью наиболее благоприятны для роста и размножения микробов типа плесени [13]. Было обнаружено, что сырость в помещении усугубляет тяжесть плесневой астмы [31]. Кроме того, низкий уровень санитарии, быстрая урбанизация и вырубка лесов являются другими ключевыми факторами, способствующими распространению аллергенов в окружающей среде [32].

Основной путь воздействия аллергенов

Почти все пути воздействия аллергенов наблюдались с одинаковой частотой среди атопического населения Индии, такие как вдыхание, проглатывание и контакт. Вдыхаемые частицы в воздухе, включая переносимые по воздуху пыльцевые зерна, насекомых, клещей и грибковые споры, были хорошо изучены и признаны важными причинами поллиноза, астмы и глазной аллергии в этой стране [33]. Кроме того, было обнаружено, что некоторые компоненты пылевых клещей и плесени действуют как контактные аллергены, приводящие к кожным заболеваниям [34].Пищевые аллергены также являются преобладающими сенсибилизаторами в Индии, поскольку по всей стране потребляется большое разнообразие продуктов [35].

Молекулярная аллергология в Индии

Последние достижения в молекулярной биологии способствовали значительному прогрессу в области биологии аллергенов или, точнее, «молекулярной аллергологии». Принимая во внимание неуклонный рост распространенности астмы и других аллергических заболеваний, Индия теперь должна сосредоточиться на разработке инструментов и стратегий для улучшения оценки и лечения аллергии.Было показано, что рекомбинантные аллергены очень полезны для характеристики аллергенов и понимания иммунного механизма IgE-опосредованного заболевания. В дополнение к этому рекомбинантные очищенные аллергены продемонстрировали перспективность разработки улучшенных терапевтических средств в ближайшем будущем. К настоящему времени охарактеризовано более 100 таких молекулярных аллергенов из разных частей западного мира, которые используются в клинической практике в качестве диагностических антигенов [36-38]. Эти достижения в области биомедицинских технологий направлены на создание «точной медицины» для лечения аллергии, в которой будут доступны «персонализированные иммунотерапевтические средства» в зависимости от фенотипа заболевания отдельного пациента [39].По сравнению с таким огромным развитием в области молекулярной аллергологии во всем мире, было всего несколько сообщений о молекулярной характеристике аллергенов, распространенных на Индийском субконтиненте [2, 3]. Это привело к недоступности усовершенствованной мультиплексной системы анализа для оценки сложности репертуара IgE, присутствующего в сыворотке пациентов с аллергией индийского происхождения. Как следствие, аллергологи все еще полагаются на устаревшие, менее охарактеризованные и менее стандартизированные экстракты аллергенов [40].Поскольку препарат рекомбинантного аллергена фармацевтического качества относительно дорог, в настоящее время основное внимание в Индии должно уделяться обеспечению наличия высококачественных источников аллергенов и экстрактов аллергенов. Некоторые из хорошо охарактеризованных аллергенов из Индии с официальными обозначениями IUIS приведены в таблице 2. Следует отметить, что все записи в базе данных аллергенов ВОЗ/ВМС не следует строго рассматривать как подлинные сенсибилизаторы, поскольку некоторые из этих белков являются считается, что они проявляют реактивность IgE просто из-за перекрестной реактивности и, следовательно, не являются клинически значимыми.Точная характеристика новых аллергенов является важным аспектом молекулярной аллергологии. Он относится к многоступенчатому подходу к открытию, состоящему из серодетекции, идентификации, очистки и, наконец, молекулярной характеристики отдельных молекул аллергена (то есть компонентов) из определенного источника. В следующем разделе мы шаг за шагом обсудим имеющиеся в настоящее время отчеты о различных аллергенах, основанные на молекулярных аллергологических исследованиях, проведенных в Индии.

Таблица 2.

Список некоторых основных аллергенов, зарегистрированных в Индии и одобренных IUIS с официальными названиями

Серологическое обнаружение и очистка аллергенов из природных источников

Пыльцевые аллергены выявлены [41-50]. В 1873 г. доктор Д.Д. Каннингем, британский врач, провел первую систематическую аэробиологию над президентской тюрьмой в Калькутте, тогдашней столице Индии, с помощью аппарата Aeroscope.Его работа была довольно обширной и опубликована в виде книги под названием
«Микроскопическое исследование воздуха » [51, 52]. Это была одна из пионерских работ по атмосферным биозагрязнителям, признанная во всем мире. Работа по аллергии на пыльцу в Индии была начата в 1950-х годах в Дели индийским врачом доктором Д. Н. Шивпури. В 1980 году аэробиологи и аллергологи из разных уголков Индии собрались, чтобы принять участие в семинаре «Современные тенденции в аэробиологии с особым упором на патологию растений и медицину», проходившем в Институте Бозе в Калькутте, где было создано и начало свою работу Индийское аэробиологическое общество (IAS). действует с 31 января 1980 года.После этого значение аэробиологических исследований и важность пыльцы и спор как аэроаллергенов в конце концов были осознаны, и такие исследования были предприняты учеными во многих лабораториях Индии. Ввиду климатического, топографического и экологического разнообразия страна была разделена на 5 биозон: восточную, западную, северную, южную и центральную. Таким образом, сообщения об аллергии на пыльцу в Индии весьма неравномерны (табл. 1), и крайне важно выявлять растения-поллинозы из каждого региона, а также готовить из них экстракты для биохимического анализа и клинической диагностики.

Клинические исследования на основе пыльцевых аллергенов проводились в различных медицинских центрах во всех 5 биозонах нашей страны в рамках Всеиндийского скоординированного проекта (AICP) по аэроаллергенам и здоровью человека, спонсируемого Министерством окружающей среды и лесов, Правительство Индии [53 , 54]. Работы выявили важную аллергенную пыльцу из различных регионов Индии. Антигены пыльцы были приготовлены и протестированы на пациентах с атопией. В северном городе Чандигарх чувствительность кожи оказалась самой высокой по отношению к Rumex acetosa и Ailanthus excelsa (17.6%), за которыми следуют Trewia nudiflora (9,7%), Argemone mexicana (9,5%) и Cedrus deodara (9,3%). В Дели у 12,6% атопической популяции был обнаружен кожный положительный результат на Amaranthus spinosus , у 8,5% на Populus deltoides и у 7,5% на Dodonea viscos a и Bauhinia vareigata . Экстракт пыльцы Imperata cylindrica был частично охарактеризован для обнаружения серореактивных белков с помощью TLIEF и SDS-PAGE с последующим ИФА и IgE-иммуноблоттингом, которые идентифицировали 7 основных IgE-реактивных компонентов [55].Моноклональные антитела, полученные против аллергенов группы 1, 4 и 5 экстракта пыльцы Phleum pratense , выявили некоторые новые гомологи аллергенов группы 5 и группы 4 в экстракте пыльцы Imperata cylindrica . Из этой пыльцы был выделен основной перекрестно-реактивный аллерген массой 67 кДа, который после обработки CnBr продуцировал 3 IgE-реактивных пептидных фрагмента [56].

В Восточной Индии в Институте Бозе, Калькутта, были начаты обширные исследования аллергии на пыльцу/споры. В мегаполисе Калькутта, 28.У 8% пациентов была обнаружена сенсибилизация к пыльцевым аллергенам Solanum sisymbriifolium , 21,1% к Crotalaria juncea и почти по 18% к Ricinus communis и Ipomoea fistulosa [20]. В последующие десятилетия для обнаружения и очистки пыльцевых аллергенов были применены передовые иммунобиохимические методы, такие как RAST, колоночная хроматография и анализы ингибирования IgE.

Семейство Palmae (Arecaceae) включает 4 обычно культивируемые пальмы в штате Западная Бенгалия в Индии, и было обнаружено, что пыльцевые зерна этих видов обладают высокой перекрестной реактивностью, что подтверждается экспериментами по подавлению иммуноблотов [57, 58].Из 70 пациентов, протестированных на реакцию кожи на эти 4 экстракта пыльцы, орех бетеля ( Areca catechu ) показал максимальный процент (48,5%) положительных кожных реакций, за которым следовал кокос ( Cocos nucifera ; 45,7%), финиковая пальма (48,5%). Phoenix sylvestris ; 42,85%) и пальмы пальмы ( Borassus flabellifer ; 38,5%). Впоследствии несколько рабочих провели иммунобиохимический анализ отдельных видов пальм, чтобы охарактеризовать основные аллергены.При предварительном скрининге в пыльце финиковой пальмы ( P. sylvestris ) были обнаружены 2 основные IgE-реактивные полосы, одна 33 кДа, а другая 66 кДа, обе из которых были частично очищены с помощью колонки для гель-фильтрации Sephacryl S-200. 59]. Позже, в более комплексном исследовании [60], была проведена аллергомика пыльцы финиковой пальмы, в которой сообщалось о 12 различных IgE-реактивных компонентах протеома пыльцы этого вида. Эти иммунореактивные белки впоследствии были идентифицированы как изофлавонредуктаза, бета-конглицинин, S-аденозилметионинсинтаза, 1,4-глюкансинтаза и бета-галактозидаза с помощью масс-спектрометрии и секвенирования de novo.Пыльцевые зерна B. flabellifer были обнаружены в большом количестве в воздухе. В восточной Индии почти 32% больных сезонным поллинозом были сенсибилизированы этим пыльцевым аллергеном. Гликопротеин с молекулярной массой 90 кДа был обнаружен в экстракте пыльцы B. flabellifer после иммуноблоттинга с сыворотками пациентов [61]. Этот нативный белок очищали до гомогенности эксклюзионной хроматографией и затем характеризовали на иммунореактивность. Шесть IgE-реактивных белков из экстракта пыльцы A.catechu были обнаружены иммуноблоттингом. Экстракт фракционировали на ионообменной и гель-фильтрационной колонке для отделения IgE-реактивных компонентов. В отдельной фракции были получены два IgE-связывающих белка с молекулярной массой 48 кДа и 118 кДа, а 48-кДа аллерген оказался перекрестно-реактивным с другими пальмовыми аллергенами [62]. Интересно, что некоторые пыльцевые аллергены перекрестно реагируют с экстрактом плодов ореха бетеля. Кокос широко культивируется в Индии, и его пыльцевые зерна являются переносчиками ингаляционных аллергенов.Всесторонний иммунопротеомный анализ был проведен с его пыльцевым зерном, в котором было обнаружено 14 различных IgE-реактивных белков [63]. Все эти 14 аллергенов были идентифицированы с помощью обширной масс-спектрометрии с последующим секвенированием de novo. Четыре основных аллергена пыльцы кокосовых орехов были идентифицированы как вицилиноподобный белок, изофлавонредуктаза, алкогольдегидрогеназа и енолаза. Вицилиноподобный белок представлял собой гликопротеин и очищался в натуральной форме с использованием аффинной колонки с конканавалином 4В с последующим катионным обменом и гель-фильтрацией.Очищенный основной аллерген тестировали на его аллергенную активность с помощью анализа высвобождения гистамина [63]. Гулмохар ( Delonix regia ) и Радхачурха ( Peltophorum pterocarpum ) — два популярных придорожных декоративных дерева из семейства бобовых (Caesalpiniaceae). пыльцево-аллергическая популяция [64]. В Delonix sp. гликопротеин массой 66 кДа был обнаружен в качестве основного аллергена и очищен до гомогенности [65].Этот аллерген вместе с 3 другими белками этой пыльцы показал перекрестную реактивность с аллергенами Peltophorum . У Peltophorum sp. было обнаружено, что 28-кДа реактивная полоса IgE является основным аллергенным компонентом [65]. Папайя ( Carica papaya ) — растение, культивируемое в основном ради съедобных плодов; однако его пыльцевые зерна вносят значительный вклад в аэроаллергенную нагрузку в наружном воздухе. В ходе исследования в его пыльце был обнаружен высокомолекулярный (около 100 кДа) мажорный аллерген с эстеразной активностью [66].Другое исследование, проведенное за рубежом, показало наличие в его плодах IgE-реактивных белков [67]. Таким образом, можно предположить, что папайя является пусковым фактором перекрестной сенсибилизации между пыльцой и фруктами и синдромом оральной аллергии. Подсолнечник ( Helianthus annuus ) — широко культивируемое масличное растение в Индии. Выявлено, что у фермеров и жителей (21% населения) вблизи полей подсолнечника часто наблюдается сезонный ринит. Недавнее иммунопротеомное исследование [68, 69] выявило группу из 7 новых аллергенов из его пыльцы.Основные аллергены были идентифицированы как 2 изоформы пектатлиазы, демонстрирующие значительную гомологию с Amb a 1.2 и одной цистеиновой протеазой. Было обнаружено, что пектатлиаза представляет собой гликопротеин, дегликозилирование которого приводит к значительному снижению связывания IgE. Необходимы дальнейшие проверки, чтобы проверить, связано ли это связывание IgE с подлинной сенсибилизацией или просто с перекрестной реактивностью с другими пектат-лиазами происхождения Asteraceae.

Из Южной Индии сообщается, что сорняк пиретрум ( Parthenium hysterophorus ) является важным источником аэроаллергенов [70, 71].В Бангалоре Rao et al. [72] сообщили об аллергенности экстрактов пыльцы P. hysterophorus у 34% пациентов с аллергическим ринитом и у 12% пациентов с бронхиальной астмой. Гупта и др. [73] сообщили, что пыльца этого вида содержит 3 гликопротеиновых аллергена с молекулярной массой 28, 31 и 45 кДа. Основной аллерген Par h 1 [74] был идентифицирован как экстенсин, класс богатых гидроксипролином гликопротеинов клеточной стенки с сахарным фрагментом, демонстрирующим сильное сродство к антителу IgE. Par h 1 проявлял значительную перекрестную реактивность с лектином клубней картофеля с молекулярной массой 50 кДа.Кроме того, некоторые другие аллергены пыльцы из Parthenium sp. выявлена ​​перекрестная реактивность с аллергенами амброзии. Лантана камара — придорожный кустарник, распространяющий пыльцу, содержащую аллергены, по окрестностям. Протеомное исследование выявило ряд новых аллергенов этого вида, в том числе связанный с патогенезом тауматин-подобный белок и бета-субъединицу АТФ-синтазы в качестве основных аллергенов [75].

Грибы

Влажный климат Индии считается идеальным для роста грибков.Следовательно, аллергические расстройства, вызванные плесенью, довольно часты почти во всех частях Индии, и периодически регистрируются госпитализации в связи с аллергией с типичными симптомами в помещении [76-78]. До сих пор предполагается, что источником аллергенов являются 112 родов грибов. На сегодняшний день 107 аллергенов из 28 различных родов были одобрены и названы IUIS, и некоторые из них происходят из Индии [77]. Большинство вызывающих аллергию домашних плесеней, зарегистрированных в различных индийских мегаполисах, были нитевидными и присутствовали в воздухе круглый год.Экстракты фильтрата культуры Fusarium solani , мицелия и спор анализировали методом иммуноблоттинга с сывороткой астматиков, что привело к идентификации 23 новых аллергенов [79]. Перекрестно-реактивный белок с молекулярной массой 45 кДа проявлял IgE-реактивность со всеми исследуемыми сыворотками (т. е. с частотой 100 %) и, таким образом, считается основным аллергеном [80]. При обработке CnBr основной аллерген высвобождает пептидный фрагмент IV-1, который проявляет реактивность IgE и, таким образом, рассматривается как эпитоп-содержащая область этого аллергена.Однако этот фрагмент не мог высвобождать гистамин из сенсибилизированных базофилов [81]. Фильтрат культуры содержал 18 внеклеточных аллергенов, что превышало количество антигенов, обнаруженных в фильтрате культур F. equiseti и F. moniliforme [82]; 14 из этих 18 аллергенов F. solani проявляли общую антигенность с аллергенами F. equiseti и F. moniliforme , что наблюдалось при ингибировании иммуноблотов. Различные виды Aspergillus преобладают в атмосферном воздухе Индии и являются основными факторами, способствующими развитию астмы, поскольку выделяют огромное количество спор, содержащих аллерген [83].Были проведены два отдельных иммунопротеомных исследования [84, 85], в которых несколько новых, а также ранее не зарегистрированных иммунореактивных молекул были идентифицированы из межклеточного, а также внеклеточного (секретомного) протеома A. fumigatus . Большинство этих антигенных молекул демонстрировали сильный ответ IgE и IgG у астматиков и пациентов с аллергическим бронхолегочным аспергиллезом (АБЛА). У пациентов с АБЛА чаще всего диагностируют высокие титры антител IgE к некоторым белкам, а также антител IgG.Заболевание представляет собой сложную иммунную реакцию. Во многих случаях невозможно разделить, какие белки вызывают аллергию, а какие являются сторонними антигенами. Также неясно, имеет ли какой-либо из этих белков 2 или более активных эпитопа IgE и способен ли он стимулировать активацию базофилов у субъектов с ABPA. До того, как белки будут включены в качестве рекомбинантных иммунотерапевтических средств, должно быть ясно продемонстрировано, что они вызывают реакции. Было обнаружено, что A. tamarii , другой источник аллергенов, вызывает аллергическую реакцию у 22% пациентов с грибковой аллергией.Шесть основных аллергенов были идентифицированы у этого вида с помощью иммуноблотов [86], 3 из которых перекрестно реагируют с A. flavus и 1 с A. niger . Рядом с Aspergillus sp . , Rhizopus и Epicoccum — два других рода грибов, которые были подробно исследованы для установления их роли в возникновении респираторной аллергии у населения Индии. Подробное протеомное исследование выявило 14 новых спорово-мицелиальных аллергенов из R.oryzae с помощью масс-спектрометрии [87]. Главный аллерген этого вида, обозначенный как Rhi o 1, был охарактеризован как аспарагиновая протеаза 44 кДа с N-концевым сигнальным пептидом длиной 20 аминокислот (аа). Rhi o 1 был очищен от этой плесени и охарактеризован по его иммунологическим свойствам [88]. Другим видом этого рода является R. nigricans , о котором часто сообщалось как о грибковом сенсибилизаторе из городов Северной Индии, таких как Дели. Иммунохимическое исследование выявило 31 отдельный антиген, присутствующий в этом экстракте [89].Аллергенные компоненты были очищены от этого вида с помощью колоночной хроматографии и FPLC. Два основных аллергена были идентифицированы как имеющие молекулярную массу 12 и 14 кДа, оба из которых были гликопротеинами. Четыре важные аллергенные молекулы были идентифицированы из протеома Epicocccum purpurascens с помощью анализа MALDI TOF/TOF [90]. Одним из основных аллергенов этого вида является гликопротеин с молекулярной массой 33 кДа, обладающий активностью сериновой протеазы. Позже этот аллерген был очищен, иммунологически протестирован, проанализирован на его биологическую активность и получил название Epi p 1 [91, 92].Экспериментально показано, что протеазная активность Epi p 1 необходима для индукции сильного аллергического ответа у мышей, поскольку инактивированная форма этого протеазного аллергена не способна вызывать воспалительный ответ у мышиной модели [93]. Предполагалось, что Epi p 1 проявляет свою аллергенную активность посредством отделения эпителиальных клеток от слизистой оболочки легких. Интересно, что Epi p 1 проявлял перекрестную IgE-реактивность с другими видами грибов, такими как A. fumigatus, Curvularia lunata , Cladosporium herbarum , Alternaria alternata и F.солани. Другим основным аллергеном этого вида был белок с молекулярной массой 12 кДа, который показал 70% диагностическую чувствительность среди соответствующей популяции пациентов [94]. Этот аллерген массой 12 кДа был очищен и протестирован на его иммунореактивность, способность к активации базофилов и способность к лимфопролиферации. C. lunata является еще одним важным сенсибилизатором для атопического населения Индии. Антигенный экстракт этой плесени был впервые стандартизирован с целью оптимизации продукции аллергенов [95].Было обнаружено, что полусинтетические среды, такие как бульон Сабуро, идеально подходят для культивирования C. lunata для этой цели. Некоторые из его аллергенов проявляли значительную перекрестную реактивность с A. alternata , E. nigrum, и A. fumigatus , когда неочищенные экстракты этих грибов использовались для проведения анализа ингибирования ELISA и иммуноблоттинга [96]. Гликопротеин C. lunata массой 31 кДа был идентифицирован как сериновая протеаза и очищен как ее основной аллерген.Аллергену было присвоено официальное обозначение Curl-1, а очищенная молекула исследовалась по-разному, чтобы охарактеризовать ее биологическую активность [97]. Другой вид этого рода, C. pallescens , сообщается как важный респираторный сенсибилизатор из восточной Индии. Было проведено обширное протеомное исследование [98], которое привело к идентификации некоторых новых аллергенов этого вида, таких как Brn-1, вакуолярная протеаза и фруктозо-бисфосфатальдолаза. Хотя до сих пор сообщалось о нескольких IgE-реактивных грибковых белках, грибы по-прежнему являются одними из самых трудных для оценки.Некоторые из этих видов грибов (или таксономически родственные) являются нормальными обитателями кожи, кишечника, половых путей и дыхательных путей. У многих грибов также есть альтернативные стадии жизни, такие как стадия гиф, стадия одноклеточных дрожжей и споры. Компании-производители аллергенов часто не имеют экстрактов, которые точно имитируют материал, которому пациенты подвергаются естественному воздействию. Даже некоторые исследователи идентифицировали аллергены просто на основе кажущейся молекулярной массы в SDS-PAGE и иммуноблотах.Следовательно, необходимы дополнительные исследования, чтобы понять значимость отдельных выявленных белков.

Продукты питания

Индия популярна благодаря разнообразным кухням и кулинарным привычкам по всей стране. Большое количество овощей, основных культур, морепродуктов, птицы и молочных продуктов потребляется в качестве повседневных продуктов. Некоторые из этих продуктов часто вызывают неблагоприятные аллергические реакции с симптомами, варьирующимися от синдрома оральной аллергии до опасного для жизни анафилактического шока.Наиболее распространенные типы пищевой аллергии, преобладающие среди населения Индии, включают аллергию на бобовые, аллергию на креветки, аллергию на баклажаны, аллергию на молоко и аллергию на яйца [99]. Было обнаружено, что фасоль ( Phaseolus vulgaris ), распространенный источник растительного белка, вызывает сенсибилизацию 22% населения с пищевой аллергией в Дели [100-102]. Это вызвало тяжелую реакцию в желудочно-кишечном тракте мышиной модели с сопутствующим увеличением биомаркеров гиперчувствительности типа 1. Два основных IgE-связывающих фитогемагглютинина были идентифицированы как возможные аллергены из семян, которые при сенсибилизации на мышиной модели проявляли значительные аллергические реакции и активацию базофилов.Всего с помощью иммуноблоттинга было обнаружено 6 IgE-связывающих белков. В дополнение к фитогемагглютинину (фазеолину) двумя другими важными аллергенами являются предшественник ингибитора альфа-амилазы и обильный белок позднего эмбриогенеза группы 3. Большинство этих аллергенов фасоли показали перекрестную реактивность с другими бобовыми. Некоторые из этих белков проявляли значительную перекрестную реактивность с аллергенами арахиса, черного грамма, чечевицы, гороха, голубиного гороха и нута. Позднее фитогемагглютинин с молекулярной массой 31 кДа был очищен и протестирован на его аллергенный потенциал.Этот аллерген, являющийся гликопротеином, не проявлял изменений в IgE-реактивности после модификации периодатом, а также после расщепления пепсином, что свидетельствует о высокостабильном эпитопе IgE. Однако в другом исследовании 3 различных бобовых, а именно фасоли, черного грамма и арахиса, наблюдалось значительное снижение связывания IgE-антител, а также аллергенной активности растворимых и нерастворимых фракций этих семян при обработке комбинированным нагреванием. и гамма-облучение [103]. Хотя пепсин сам по себе не мог улучшить аллергенные свойства бобовых аллергенов, было замечено, что определенная радикальная обработка бобовых аллергенов коктейлем сильных протеаз, таких как Flavorzyme® и ALCALASE® (Sigma), приводила к сильному снижению связывания IgE [104]. ].Черный грамм является одним из основных основных продуктов питания в Индии, и было обнаружено, что 1,7% пациентов с назобронхиальной аллергией чувствительны к экстрактам черного грамма. В семенах черного грамма был обнаружен ряд IgE-реактивных компонентов различной молекулярной массы, некоторые из которых сохраняли IgE-реактивность после термической обработки [105]. Из этого семени бобовых был выделен и охарактеризован главный гликопротеиновый аллерген массой 28 кДа, который показал частичную гомологию последовательности с Rho-специфическим ингибитором терминации транскрипции [106].Продукт деградации (16 кДа) из очищенного аллергена после обработки SGF (пепсином) оставался IgE-реактивным после 15 минут переваривания. Однако после 5-минутной обработки SIF (панкреатином) расщепленный фрагмент потерял свою IgE-реактивность. В дополнение к этому исследованию модель аллергии на черный грамм на мышах [107] выявила появление клинических симптомов, связанных с аллергией, в тканях легких и желудочно-кишечного тракта наряду с активацией маркеров, связанных с аллергией. Аналогичное исследование было проведено на аллергенах красного грамма ( Cajanus cajan ) [108], где некоторые новые аллергены были обнаружены с помощью иммуноблоттинга с индийскими сыворотками, такими как β-конглицинин, вицилины, белки, подобные Len c 1, Len c 2 и Арах 1.Некоторые ранее не идентифицированные новые аллергены красных граммов также были идентифицированы с помощью масс-спектрометрии. Аллерген нута массой 26 кДа был идентифицирован как растительный альбумин [109], который реагировал с IgE-антителами субъектов с аллергией на арахис. Сравнительное исследование стабильности обработанных SGF аллергенов из большинства широко потребляемых бобовых показало, что большинство аллергенов сохраняли IgE-реактивность после переваривания, что согласуется с предыдущими выводами о высокой распространенности аллергии на бобовые среди индийского населения. .Помимо бобовых, рис ( Oryza sativa ) является самой крупной выращиваемой основной культурой в Индии. Он показал 12% положительных кожных тестов среди населения с пищевой аллергией. Иммуноблот-анализ белкового экстракта вареного риса выявил 4 IgE-реактивных компонента [110]. Недавно сообщалось, что хитиназа с молекулярной массой 24 кДа является основным аллергеном этой культуры [111]. Среди пасленовых овощей баклажаны были изучены некоторыми индийскими исследователями на предмет выявления компонентов, вызывающих аллергию.Интересно, что в собранных плодах баклажанов после длительного хранения было обнаружено высокое содержание гистаминов как побочного продукта метаболизма [112]. Кожные пробы с этим гистаминосодержащим экстрактом во многих случаях приводили к ложноположительному диагнозу. Кроме того, также неясно, вызваны ли симптомы травления остаточными пестицидами, применяемыми к баклажанам во время выращивания. Несмотря на эти результаты, некоторые серологические исследования выявили определенные аллергены, в том числе один белок-переносчик липидов из этого овоща [113], и было обнаружено, что они сконцентрированы в кожуре и семенах.

Хильша ( Tenualosa ilisha ) и бампрет ( Pampus argenteus ) — две морские рыбы, широко потребляемые в Индии. Иммуноблот-анализ выявил наличие 50-кДа IgE-реактивной полосы, обычно присутствующей в мышечном экстракте этих рыб [114]. Однако основные IgE-реактивные полосы этих двух карпов были термолабильными. С другой стороны, аллергены, обнаруженные в приготовленных мышцах бхетки ( Lates calcarifer ) и скумбрии ( Rastrelliger kanagurta ), демонстрировали сильное распознавание IgE даже после варки [115].

Насекомые

Аллергия на насекомых преобладает в районах с плохой санитарией. В Индии аллергены тараканов рассматривались как один из пусковых факторов развития атопической астмы. Наиболее часто встречающимся видом тараканов является американский таракан ( Periplaneta americana ). В предварительном исследовании было показано, что коммерческие экстракты содержат сравнительно меньше антигенов, чем свежеприготовленные экстракты взрослых насекомых и нимф [116].В иммуноблотах пациентов с астмой, сенсибилизированных тараканами, свежеприготовленные лабораторные экстракты показали наличие 9 основных IgE-реактивных полос. Основной 28-кДа (Per a 10) аллерген этого насекомого был очищен на аффинной колонке и идентифицирован как функционально активная сериновая протеаза [117]. Очищенный натуральный Per a 10 проявлял сильную реактивность IgE у 80% пациентов, сенсибилизированных тараканами, а также дегрануляцию базофилов и лимфопролиферацию. Было показано, что протеазная активность Per a 10 имеет решающее значение для активации альвеолярного эпителия (клеточная линия A549) посредством расщепления рецептора PAR-2 ​​с выделением лигандного пептида SLIGKV, что в конечном итоге приводит к мобилизации внутриклеточного уровня кальция и его продукции. провоспалительных цитокинов, таких как IL-6, IL-8 и GM-CSF [118].Эта протеолитическая активность приводила дендритные клетки к фенотипу Th3 за счет усиления CD86 и IL6, но подавляла секрецию IL12 [119]. Протеазная активность природного Per a 10 также была важна для инициирования аллергической реакции на поверхности слизистой оболочки. Это увеличивало проницаемость эпителия легких за счет дезинтеграции белков клеточных соединений, чтобы усилить миграцию предшественников дендритных клеток, происходящих из моноцитов [119]. Функциональное свойство нативного Per a 10 также отвечало за вытеснение CD23 и CD25 с поверхности РВМС, очищенных В-клеток и очищенных Т-клеток.Следовательно, в дополнение к обычному IgE-опосредованному иммунному ответу, внутренние ферментативные свойства природного аллергена Per a 10 также оказались решающими для усиления воспаления дыхательных путей несколькими способами.

Рекомбинантные аллергены

Как уже упоминалось, сообщения о рекомбинантных аллергенах из Индии действительно очень редки по сравнению со странами Европы и Северной Америки. До настоящего времени в большинстве работ, посвященных распространенным аллергенам с Индийского субконтинента, описывается предварительная идентификация и очистка от природных источников.Тем не менее, лишь несколько важных респираторных аллергенов, которые были успешно клонированы для получения рекомбинантных версий, перечислены в таблице 1. Субтилизин-подобная сериновая протеаза с молекулярной массой 54 кДа из гриба C. lunata была впервые обнаружена с помощью IgE-иммуноскрининга экспрессии библиотеку, а затем клонировали в вектор экспрессии для получения рекомбинантного Cur 14 [120]. rCur 14 реагировал с сывороточным IgE 70% пациентов, сенсибилизированных к Curvularia , и, таким образом, представлял собой основной аллерген этого вида.Этот рекомбинантный аллерген был способен дегранулировать сенсибилизированные базофилы и показал ингибирование 65% связывания IgE с неочищенным экстрактом гриба, связанным с чашками. Другим рекомбинантным аллергеном этого вида является rCur l 2, который был идентифицирован как енолаза [121]. rCur l 3 проявлял IgE-реактивность, а также аллергенные свойства и определенную степень перекрестной реактивности с Cla h 6. A. alternata является важным источником комнатных грибковых аллергенов и аллергена глутатион- S -трансферазы с молекулярной массой 26 кДа. , известный как Alt a 13, был описан как рекомбинантный аллерген [122].Полноразмерная кДНК, кодирующая rAlt a 13, была выделена путем иммуноскрининга библиотеки экспрессии фага и затем экспрессирована в Escherichia coli . rAlt a 13 был уложен надлежащим образом, как природный Alt a 13, и проявлял активацию базофилов, а также пролиферацию РВМС. Сообщается, что из восточной Индии Rhi o 1 является наиболее распространенным грибковым аллергеном из R. oryzae . Полноразмерный ген вместе с сигнальным пептидом клонировали и экспрессировали в бактериальной системе [88]. rRhi o 1 также демонстрировал сходные иммунологические и биологические свойства, а также сходный паттерн укладки, как и нативный Rhi o 1.rRhi o 1 показал определенную степень перекрестной реактивности с аллергеном немецких тараканов rBla g 2. Грибковый циклофилин, Rhi o 2, также внесен в базу данных аллергенов IUIS [неопублик. data], и этот рекомбинантный циклофилин демонстрировал активацию базофилов, о чем свидетельствует дегрануляция RBL и активация CD203c. Еще один циклофилиновый аллерген 18 кДа, Cat r 1, был получен из пыльцы барвинка ( Catharanthus roseus ), которая обладала высокой перекрестной реактивностью с другими циклофилинами, такими как rAsp f 11 и rMala s 6 [123].rCat r 1 был надлежащим образом уложен и также сохранял аллергенную активность, что подтверждается анализом RBL. Хотя сообщалось, что циклофилин является IgE-реактивным, он вряд ли представляет собой важный аллерген, поскольку пыльцевые зерна барвинка практически не переносятся по воздуху. Аллерген тараканов Per a 10 также экспрессировался как рекомбинантный аллерген [119, 124]. rPer a 10 был IgE-реактивным; однако было замечено, что активность протеазы в rPer a 10 была несколько снижена, что привело к уменьшению аллергенных свойств.В более поздних исследованиях, анализирующих клеточную основу Per a 10-опосредованной аллергии, nPer a 10 был предпочтительнее rPer a 10. Рекомбинантный пищевой аллерген был выделен из риса в виде хитиназы с молекулярной массой 24 кДа [110]. Рекомбинантная хитиназа риса проявляла аллергенную активность in vitro и рассматривалась в качестве маркерного аллергена для диагностики аллергии на рис среди индийцев. В совокупности об этих 8 рекомбинантных аллергенах сообщалось до сих пор из Индии.

Структурная биология и картирование эпитопов

Циклофилин пыльцы Cat r 1 на сегодняшний день является единственным аллергеном из Индии, структура которого была решена с помощью ЯМР-спектроскопии [125, 126].Структура Cat r 1 показала характерную циклофилиновую складку, состоящую из внутреннего бета-бочонка с альфа-спиралями по обе стороны от него. В более ранних анализах in silico с циклофилиновыми аллергенами [127] было обнаружено, что циклофилины содержат 2 консервативных участка на своей поверхности. Позднее это наблюдение было подтверждено в решенной трехмерной структуре, где была идентифицирована высокая степень консервативности антигенной поверхности, которая, возможно, была ответственна за высокую степень перекрестной реактивности. В более раннем отчете было указано, что растительные циклофилины отличаются от других циклофилинов из-за наличия петли, делеция которой может привести к потере свойства связывания IgE.Следовательно, эта петля считалась важной для опосредования перекрестной реактивности среди растительных циклофилинов. Однако в этом отчете о Cat r 1 был получен мутант аллергена с делецией петли, который демонстрировал столь же сильное связывание IgE, как и интактный Cat r 1. В дополнение к этому циклофилину гомолог Bet v 1, известный как белок T1, сообщалось из C. roseus . Из-за высокой степени сходства последовательностей между T1 и Bet v 1 исследователи были заинтересованы в изучении его аллергенности.Однако белок T1 оказался естественным неаллергенным членом семейства Bet v 1, который, несмотря на сходство последовательностей на 35–85%, не проявлял IgE-опосредованной перекрестной реактивности с другими членами семейства Bet v 1. Семейство Bet v 1 [126, 127]. Общая кратность показанной модели T1 напоминала кратность группы Bet v 1. Сравнение аллергенно-активной димерной структуры Bet v 1 с неаллергенным мономером T1, BV16-связывающей поверхностью и P-петлей, по-видимому, имеет меньшее значение для Bet v 1-опосредованного перекрестного связывания IgE in vivo.Отсутствие перекрестной IgE-реактивности между Bet v 1 и T1 привело к отсутствию сохранения поверхности, что привело к конформационным изменениям, а также к электростатическим свойствам [128]. С другой стороны, некоторые изменения в последовательности, которые могли повлиять на димеризацию этого белка, возможно, привели к потере аллергенной активности. Локализация IgE-эпитопов на основе структуры также была выполнена на аллергенных осмотинах. Белок осмотин, как уже было описано ранее, оказался мощным IgE-связывающим белком и считался непригодным для разработки трансгенов [129, 130].Анализ эпитопов in silico трехмерной структуры осмотина путем создания модели, основанной на гомологии, выявил определенные линейные, а также конформационные области на его поверхности, которые, как предполагалось, ответственны за связывание антител. Предсказание in silico позже было подтверждено сайт-направленным мутагенезом специфических остатков, что привело к снижению связывания IgE, а также к уменьшению аллергенных свойств в мышиной модели in vivo. Важность вычислительных инструментов для точного предсказания эпитопов была хорошо известна для некоторых важных аллергенов, зарегистрированных в Индии.Гомологическое моделирование аллергена грибковой алкогольдегидрогеназы выявило наличие GroES-подобного каталитического домена, связанного с доменом надсемейства Россмана посредством альфа-спирали. Серверы прогнозирования эпитопов в режиме онлайн предсказали 6 предполагаемых В-клеточных эпитопов для этого аллергена, из которых 1 пептид демонстрировал связывание IgE [131, 132]. Этот пептид имел последовательность E(X) 2 GGP(X) 3 KK, консервативную в последовательностях белков, связанных с патогенезом, и высокую электроотрицательность.Аналогичный подход был использован для Cur l 3, в котором были предсказаны определенные В- и Т-клеточные эпитопы [132]. Все предсказанные В-клеточные эпитопы демонстрировали связывание IgE, в то время как Т-клеточные эпитопы демонстрировали сильный лимфопролиферативный ответ. Неожиданно было обнаружено, что один пептид, который первоначально был предсказан и подтвержден как Т-клеточный эпитоп, обладает IgE-реактивностью, сравнимой с реактивностью уже идентифицированных IgE-эпитопов. Этот загадочный эпитоп Cur 13 стимулировал секрецию IL4 из стимулированной культуры РВМС и служил потенциальным кандидатом для диагностики аллергии, опосредованной Curvularia .Грибковая аспарагиновая протеаза Rhi o 1 проявляла определенную степень перекрестной реактивности с Bla g 2. Было замечено, что анти-Bla g 2 mAb 4C3 приводило к частичному ингибированию связывания IgE с Rhi o 2 [88]. Молекулярный анализ стыковки показал наличие сходного сайта связывания 4C3 как на Rhi o 1, так и на Bla g 2, что, возможно, приводило к перекрестной реактивности. Однако этот перекрестно-реактивный mAb 4C3, распознаваемый эпитоп, не имел клинического значения, поскольку было замечено, что связывание IgE с Rhi o 1 в основном определялось линейными участками, которые были преобладающими антигенными детерминантами Rhi o 1.Комбинаторный подход, состоящий из компьютерного предсказания и экспериментальной проверки, привел к идентификации 2-16-мерных пептидов Rhi o 1 как вероятных областей связывания IgE [132]. Интересно, что эти 2 пептида были картированы на 2 концах структуры Rhi o 1; однако в свернутой конформации эти 2 области сближаются, образуя большой антигенный кластер. Следовательно, эти 2 пептида были фактически презентированы конформационным образом на поверхности Rhi o 1. Эпитоп IgE также был идентифицирован в аллергене хитиназе риса, следуя вышеупомянутой биоинформационной стратегии [110].Термостабильный тропомиозин с молекулярной массой 34 кДа, Pen i 1, был идентифицирован как основной аллерген аборигенных южноиндийских видов креветок ( Penaeus indicus ). В этом аллергене картирование эпитопа проводили путем ферментативного расщепления аллергена с последующим иммуноскринингом IgE продуктов расщепления [133]. Таким образом, 2 области (остатки 50–66 и 153–161) были обнаружены как вероятные области связывания IgE этого аллергена.

Оценка аллергенности трансгенных растений для обеспечения безопасности пищевых продуктов

Учитывая масштабы агроэкономики Индии, биотехнологические инновации необходимы для улучшения урожая.В настоящее время осуществляется несколько трансгенных подходов, позволяющих сельскохозяйственным культурам и овощам приобретать превосходные свойства для борьбы со стрессовыми факторами. Однако уровень безопасности этих трансгенных растений должен быть тщательно проверен посредством повторных экспериментов, чтобы гарантировать, что продукт чужеродного гена в генетически модифицированном (ГМ) урожае не приведет к каким-либо неблагоприятным реакциям у потребителей [134]. До сих пор ни одна преобладающая продовольственная культура, такая как горчица, кукуруза и соя, не получила одобрения регулирующих органов в Индии.В 2008 г. Индийский совет медицинских исследований при правительстве Индии принял процедуру оценки безопасности, почти идентичную Руководству Codex Alimentarius 2003 г. Здесь мы рассмотрим некоторые работы, в которых уровни безопасности с точки зрения аллергенности трансгенные продукты индийского происхождения были экспериментально оценены. Холиноксидаза (codA), ген толерантности к абиотическому стрессу, выделенный из Arthrobacter globiformis , использовали для разработки трансгенной горчицы, которая лучше работает в условиях засоления и холодового стресса.Белок codA, несмотря на то, что он имеет участок длиной 6 аминокислотных остатков, идентичный латексному аллергену Hev b 6, не проявляет связывания с IgE in vitro. Более того, белок codA полностью разрушался после расщепления SGF и не вызывал аллергических реакций ни у людей, ни у мышей [135]. Таким образом, был подтвержден связанный с аллергией уровень биобезопасности стабильных трансгенов, несущих бактериальный ген codA. Осмотин табака представляет собой многофункциональный белок семейства PR-5, используемый для создания трансгенных культур с осмотолерантностью, а также устойчивостью к грибковому поражению.Однако было замечено, что последовательность аа осмотина имеет значительную гомологию с известными аллергенами [136]. Кроме того, антитела IgE, присутствующие в сыворотке пациентов с пищевой аллергией (например, на яблоко и помидор), реагировали с белком осмотином в иммуноблотах у субъектов с аллергией. Кроме того, было обнаружено, что белок обладает высокой устойчивостью к расщеплению пепсином и термической обработке. В более позднем исследовании 3 линейных участка пептидов (57–70 а.о., 72–85 а.о. и 147–165 а.о.) были идентифицированы в последовательности осмотина с помощью in silico с последующим иммунобиохимическим анализом, который сильно реагировал с IgE-антителами и, следовательно, служил возможным эпитопы IgE.Кроме того, на этом белке был идентифицирован еще один конформационный эпитоп IgE [137]. Мутации в критических остатках этих эпитопов приводили к значительному снижению связывания IgE. Таким образом, была установлена ​​непригодность гена осмотина для разработки трансгенов, а вместо этого констатирована сконструированная гипоаллергенная версия белка как потенциальный кандидат для биотехнологических применений. Агглютинин листьев чеснока ( Allium sativum ), широко известный как ASAL, был идентифицирован как мощный инсектицидный белок.Ген, кодирующий ASAL, был использован для создания важных для сельского хозяйства трансгенных культур, обладающих устойчивостью к сосущим сок насекомым. Для большей эффективности ASAL позже была разработана мутантная версия этого белка, известная как mASAL, которая также демонстрировала такую ​​же инсектицидную эффективность, как и аналог дикого типа. Оба этих белка были протестированы с помощью in silico и иммунобиохимического анализа в соответствии с рекомендациями ФАО-ВОЗ. Результаты этих экспериментов показали, что ни ASAL, ни mASAL не обладают какими-либо аллергенными свойствами (т.т. е., отсутствие гомологии последовательностей с известными аллергенами, отсутствие аллергического воспаления в мышиной модели и отсутствие реактивности IgE в виде интактного или переваренного белка), и, следовательно, его можно безопасно использовать в трансгенных приложениях [138, 139]. Сообщалось, что дефенсины и подобные им белки являются мощными аллергенами из различных источников, таких как пыльца арахиса, оливкового дерева и полыни. Однако было обнаружено, что недавно обнаруженный дефензин-подобный белок из Rorippa indica , известный как RiD-белок, обладает инсектицидными свойствами и поэтому был использован для создания трансгенной горчицы с устойчивостью к тле.Как и ранее упомянутый белок ASAL, белок RiD также был протестирован на аллергенную активность и оказался биологически безопасным с точки зрения запуска аллергических реакций [140]. Следовательно, ожидается, что правительство Индии будет продолжать следовать руководящим принципам ICMR (2008 г.) вместе с данными полевых испытаний, чтобы продемонстрировать, что продукты останутся жизнеспособными, не представляя каких-либо потенциальных рисков для потребителей.

Аллергены для специфической иммунотерапии

В методологии аллергенспецифической иммунотерапии (АСИТ) наблюдается медленный переход от использования неочищенного экстракта к использованию очищенных природных и рекомбинантных аллергенов для продвижения иммунотерапевтических испытаний.Обычная СИТ включает повторное введение возрастающих доз неочищенных экстрактов аллергенов в течение длительного периода 2–3 лет или даже дольше. Очищенный аллерген (в природной или рекомбинантной форме) был предпочтительнее ненадежных экстрактов, в которых маркерных аллергенов меньше. Однако очищенные нативные аллергены всегда представляют риск IgE-опосредованных побочных эффектов во время контрольного заражения. Поскольку немодифицированные рекомбинантные аллергены имеют иммунологические характеристики, сходные с их природными аналогами, эти молекулы также имеют риск вызвать неблагоприятные системные реакции вследствие реактивности либо IgE, либо Т-клеток.Поэтому было сочтено необходимым использовать для лечения рекомбинантные производные аллергена со сниженной аллергенной активностью или пептиды, полученные из аллергена [141].

Двухлетнее двойное слепое плацебо-контролируемое исследование иммунотерапии стандартизированным экстрактом пыльцы P. sylvestris у пациентов с респираторными заболеваниями, чувствительных к этой пыльце, было проведено в государственной больнице Калькутты [142]. Он продемонстрировал значительное снижение тяжести заболевания, специфического IgE и сопутствующее увеличение титров ОФВ и IgG среди пациентов, прошедших исследование.Чтобы оценить эффективность рекомбинантных аллергенов при СИТ, рекомбинантную версию грибкового аллергена использовали на мышиной модели для лечения аллергии Alternaria . Две замещающие мутации в IgE-реактивном фрагменте Alt a 13 привели к мутанту со сниженным связыванием IgE и сниженной аллергенной активностью [143]. Стимуляция РВМС пациентов, сенсибилизированных к Alternaria , этим мутантом выявила сохраненную реактивность Т-клеток со сниженной продукцией IL-4. Эпитопы IgE вместе с критическими остатками Rhi o 1 были картированы, и в него были введены аланиновые замены, чтобы сделать его нефункциональным.Полученная мутантная версия Rhi o 1 оказалась гипоаллергенной по функции, но сохранила значительную иммуногенность. Благодаря своей иммуногенности гипоаллерген индуцировал высокий титр блокирующих антител для нейтрализации исходного аллергена. Таким образом, было обнаружено, что гипоаллергенный Rhi o 1 является важным шагом на пути к разработке эффективной индивидуальной вакцины для снижения бремени грибковой аллергии [144]. Осмотин представляет собой PR-белок, используемый для создания трансгеников с биотической и абиотической устойчивостью.Однако более ранние исследования установили роль осмотина в возникновении аллергических реакций. Определенные IgE-связывающие пептиды были идентифицированы и картированы на этом белке. Было замечено, что одиночные и двойные точечные мутации этих пептидов приводили к значительному снижению способности этих пептидов связывать антитела. Была разработана мышиная модель иммунотерапии, в которой повторное введение 4 различных гипоаллергенных пептидов приводило к перекосу Т-клеточно-опосредованного иммунного ответа у этих мышей от Th3 к толерогенному фенотипу Th2, о чем свидетельствуют повышенные уровни IFN-γ и IL10.Следовательно, был сделан вывод, что иммунотерапевтическая провокация гипоаллергенными пептидами, полученными из осмотина, может вызывать «анергию» и, таким образом, повышать толерантность к потреблению осмотина [137]. Иммунотерапевтический подход на основе пептидов также был продемонстрирован на примере грибкового аллергена Cur 13, в котором производные аллергена пептиды Р6, Р10 и 3 модифицированные версии Р6 использовались для СИТ. СИТ с двойным точечным мутантом Р6 (по остаткам цистеина и гистидина), обозначаемым как Р6.2, приводила к снижению уровня IgE, повышению уровня блокирующего антитела IgG2a и повышению уровня IL10 и IFN-γ.В целом, пептид Р6.2 оказался неаллергенным, но иммуногенным пептидом с иммунотерапевтическим потенциалом для лечения аллергии на плесень. Сообщалось о другом исследовании СИТ с аллергеном тараканов Per a 10. В этом исследовании использовали неактивную протеазную версию Per a 10. Заражение привело к индукции значительного уровня толерантности, о чем свидетельствует улучшение гистопатологии дыхательных путей и повышение уровня толерогенных цитокинов [145]. Аналогичный подход также применялся, когда SIT-провокация проводилась экстрактом тараканов у людей вместо использования очищенного аллергена или пептидов, полученных из аллергена, в мышиной модели.Через 1 год в сыворотке активной группы СИТ наблюдали значительно повышенный уровень аллерген-специфических защитных антител IgG4. С другой стороны, наблюдалось умеренное снижение интенсивности уровня специфического IgE [146]. Одной из основных проблем использования очищенных аллергенов в иммунотерапии является то, что популяция людей с аллергией на какой-либо один источник аллергена обычно включает людей с различной чувствительностью к белкам. Таким образом, невозможно точно предсказать, какие белки будут мишенями иммунотерапии, если сначала не будет определена их чувствительность.Также существуют проблемы недоступности очищенных аллергенов в Индии, для которых высококачественные стандартизированные экстракты также могут быть полезными и безопасными, если следовать протоколам, используемым аллергологами, практикующими в Европе, США и Японии. В ряде экспериментальных протоколов используются различные методы введения (SIT, OIT и накожное нанесение) с хорошими результатами. Успех иммунотерапии заметно зависит от пациентов и реагентов. Экстракты модифицированной аллерген-иммунотерапии (АИТ) обычно используются в Европе и в некоторых случаях в США.Было доказано, что некоторые модифицированные аллергены даже вредны. Пептидная терапия имела некоторый успех, но испытаний было недостаточно, чтобы доказать ее эффективность. Важно отметить, что испытания иммунотерапии на животных моделях не оказались очень успешными в прогнозировании исходов у человека. Попытки стандартизации экстрактов аллергенов предпринимались с 1980-х годов в некоторых странах с большим успехом в отношении основных источников аллергенов, таких как клещ домашней пыли, кошачья перхоть, амброзия короткая и некоторые травы.Однако в Индии не было инициировано эффективной стратегии по совершенствованию инструментов МСН. Важно сначала стандартизировать экстракты аллергенов под надзором регулирующих органов и экспертов. Затем можно оптимизировать дозы, адъюванты и модификации иммуногена, специфичные для субъекта.

AIT в Индии

AIT был популярен в нескольких странах в течение последних двух десятилетий [147-151]. На сегодняшний день это единственная эффективная причинно-следственная терапия аллергических заболеваний, которая может быть описана как процесс, вызывающий иммуномодуляцию (сдвиг с Th3 на Th2) при IgE-опосредованных заболеваниях, таких как аллергический ринит, риноконъюнктивит, аллергическая астма, атопический дерматит и гиперчувствительность к яду. .Во всем мире проводится достаточное количество клинических испытаний, чтобы доказать его эффективность и безопасность. В Индии, однако, AIT все еще находится в стадии разработки [152]. Несмотря на информированность, в стране отсутствуют хорошо оборудованные аллергологические центры с подготовленными клиническими аллергологами.

Первым и, несомненно, наиболее важным шагом в разработке успешного протокола АСИТ является идентификация конкретного аллергена, вызывающего нарушение, у конкретного пациента. Иногда это может быть чрезвычайно сложно из-за перекрестной реактивности между аллергенами.Кроме того, Индия как страна уникальна тем, что аэроаллергены меняются примерно каждые 200 км. Кроме того, различные почвенные условия (сельские или городские) и окружающая среда (прибрежная или холмистая местность) влияют на содержание белка, а также на антигенность аллергенов. Это делает стандартизацию экстрактов аллергенов для кожных тестов или специфических тестов IgE в сыворотке серьезной проблемой в Индии, и до тех пор, пока не будут доступны высококачественные экстракты аллергенов, клиническая история симптомов при воздействии рассматриваемого аллергена остается решающей при планировании АИТ.

Экстракты аллергенов, которые до сих пор оценивались в Индии, включают клещей домашней пыли, пыльцу, перхоть лошадей, насекомых (тараканы, комары и комнатные мухи) и смеси экстрактов аллергенов. Клинические испытания по астме и риниту, хотя и немногочисленные и различающиеся по продолжительности (от 6 месяцев до 15 лет), дизайну, а также аллергенам, продемонстрировали улучшение клинических параметров (оценка симптомов), снижение уровня IgE, повышение специфического IgG в посттерапевтическом периоде, улучшение объема форсированного выдоха за 1 с (ОФВ 1 ) и качества жизни [153-162].Иммунотерапия смесями экстрактов аллергенов показала переменный клинический ответ. Фактически простое включение всех аллергенов, к которым присутствуют IgE-антитела, без установления возможной клинической значимости делает АИТ менее эффективным [157]. Недавно в одном клиническом исследовании АИТ успешно использовалась в сочетании с анти-IgE-терапией. Однако в Индии требуются дальнейшие клинические испытания в этой области.

Выводы

Хотя в Индии были проведены различные исследования биологии аллергенов, все еще существует значительный пробел в понимании молекулярной природы аллергенов, распространенных в Индии.Большинство отчетов были в основном основаны на серологическом обнаружении и очистке аллергенов. Однако для лучшего понимания молекулярной основы иммунного распознавания аллергенов крайне важно выяснить первичную и третичную структуру аллергенов. Чем больше рекомбинантных аллергенов будет сообщено, тем больше будет улучшена мультиплексная молекулярная диагностика. В Индии исследования аллергенов всегда занимали маргинальное положение по сравнению с другими передовыми иммунологическими исследованиями.Мы выполнили интеллектуальный анализ текстов рефератов PubMed с последующим подробным ручным отбором литературы по аллергенам, опубликованной в Индии. Сравнительный анализ этой литературы выявил растущую тенденцию к изучению различных аспектов молекулярной аллергологии за последние два десятилетия в Индии, как показано на рисунке 2а. Мы также классифицировали отчеты на основе различных источников аллергенов, таких как «пыльца», «грибы», «насекомые» и «пищевые продукты». Было замечено, что сообщения о грибковых аллергенах предполагали наибольшее количество, за ними следовали пищевые и пыльцевые аллергены, как показано на рисунке 2b.Это наблюдение согласуется с высокой степенью преобладания грибковой аллергии на субконтиненте. Аллергены насекомых заняли наименьшее количество сообщений. Однако клиническое значение аллергии на насекомых в Индии не следует недооценивать. Предварительные клинические и госпитальные данные выявили значительный уровень заболеваемости бронхиальной астмой, связанной с пылевыми клещами. Удивительно, но, насколько нам известно, не было никаких сообщений о молекулярной и структурной природе аллергенов пылевых клещей из Индии.В большинстве случаев диагностика аллергии на клещей с помощью ImmunoCAP основывается на экстрактах и ​​очищенных аллергенах, выделенных из других стран. Тем не менее, мы твердо убеждены, что в Индии атмосферный аэрозоль содержит в значительной степени другой состав «тропических» видов пылевых клещей, и необходимо эффективно исследовать молекулы аллергенов этих видов. В совокупности наш обзор убедительно свидетельствует в пользу интенсификации молекулярных исследований репертуара аллергенов в Индии так же серьезно, как это делается в исследованиях рака и исследованиях различных инфекционных заболеваний.Финансирующие агентства Индии должны сосредоточиться на финансировании таких исследований, чтобы контролировать пандемическое распространение этого заболевания в этой развивающейся стране.

Рис. 2.

Последние тенденции в исследованиях аллергенов в Индии, о чем свидетельствует количество публикаций, доступных в NCBI PubMed по состоянию на сентябрь 2017 г. a Количество опубликованных и проиндексированных статей по теме «Аллергены из Индии» в базе данных PubMed за последние 17 лет (2001–2017 гг.). b Общее количество статей, опубликованных в Индии за последние 17 лет (2001–2017 гг.) по 4 различным типам источников аллергенов.

Заявление о раскрытии информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в отношении содержания данной обзорной статьи.

Авторское право: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме и любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование или любую систему хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка препарата: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор препарата и дозировка, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, в связи с продолжающимися исследованиями, изменениями в правительственных постановлениях и постоянным потоком информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на лекарства, читателю настоятельно рекомендуется проверять вкладыш в упаковке для каждого лекарства на предмет любых изменений в показаниях и дозировке, а также для дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендуемый агент является новым и/или редко используемым лекарственным средством.
Отказ от ответственности: заявления, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и участникам, а не издателям и редакторам.Появление рекламы и/или ссылок на продукты в публикации не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор(ы) отказываются от ответственности за любой ущерб людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в содержании или рекламе.

Аллергия — гомеопатическое лечение! — Доктор В.К. Pandey

Большинство людей в какой-то момент времени страдали аллергическими реакциями.Аллергическая реакция — это реакция гиперчувствительности, вызванная аллергеном (веществом, которое может вызвать аллергическую реакцию). Аллергия может быть многолетней или сезонной. Круглогодичная аллергия не зависит от сезона и может возникать в течение всего года.

Сезонная аллергия, с другой стороны, зависит от сезона, например, сенная лихорадка (вызванная пыльцой) является распространенной аллергической реакцией в весенний сезон.

Ряд веществ может выступать потенциальным аллергеном, вызывая у человека реакцию гиперчувствительности.Аллергены могут быть 

  1. Факторы окружающей среды, такие как пыльца, пылевые клещи, солнечный свет, шерсть некоторых животных или плесень
  2. Некоторые продукты питания, такие как молоко и молочные продукты, арахис, пшеница, соя, помидоры, баклажаны, алкоголь или моллюски.
  3. Синтетические и натуральные вещества, такие как пестициды, никель, латекс
  4. Некоторые лекарства, такие как сульфаниламидные препараты, пенициллин
  5. Укусы животных; в основном осы и пчелы, также могут вызывать аллергическую реакцию.

Аллергические реакции у человека могут различаться в зависимости от источника аллергена. Это может быть кожная аллергия, аллергия на нос и кашель, пищевая аллергия или аллергия на пыль. Лучший способ справиться с аллергической реакцией — определить возбудителя. Гомеопатические препараты очень эффективны против аллергических реакций. Хотя это отнимает много времени; гомеопатическое лечение обеспечивает длительное и постоянное облегчение. Кроме того, гомеопатические лекарства не имеют вредных побочных эффектов.Неудивительно, что все больше и больше людей выбирают гомеопатическое лечение.

Следующие гомеопатические препараты при регулярном и усердном приеме могут успешно лечить ряд аллергических реакций:

  • Arsenic Album : Многие люди страдают от слезотечения, постоянного чихания, насморка, сопровождающихся жжением. Все это признаки носовой аллергии. Arsenic Album — эффективное гомеопатическое средство против назальной аллергии.
  • Sulphur : Обеспечивает значительное облегчение кожных аллергий.Сера является благом для людей, страдающих от очень сухой и зудящей кожи.
  • Natrum Mur : Это эффективное гомеопатическое (натуральное) лекарство против назальной и кожной аллергии.
  • Pulsatilla, Natrum Carb и Aethusa Cynapium : Эти гомеопатические препараты действуют как благословение для людей, страдающих аллергией на молоко.
  • Urtica Urens : Если у вас аллергия на моллюсков, Urtica Urens как раз для вас.
  • Bromium и Lycopersicum : они очень эффективны против аллергии на пыль.Arsenic Album также является отличным вариантом.

Есть люди, у которых аллергия на некоторые краски для волос. Arsenic Album и Sulphur эффективно справляются с такой аллергией. Natrum Mur и Sepia также нельзя игнорировать. Не позволяйте аллергии сделать вашу жизнь несчастной. Переключитесь на гомеопатическое лечение и наслаждайтесь жизнью без стресса и аллергии.

В случае, если у вас есть проблема или вопрос, вы всегда можете проконсультироваться со специалистом и получить ответы на свои вопросы!

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.