Аватарка пустая вк – Как ВКонтакте поставить пустую аватарку, не удаляя фото?
Как поставить аву в вк
Как сделать аватар для ВКонтакте?
В настоящее время все больше людей общаются в социальных сетях, и все чаще встает необходимость сделать аватар для ВКонтакте. Аватар — это ваше лицо в виртуальном мире. Слово «аватара» связано с древним индуистским божеством, которое имеет множество воплощений и лиц. Каждое из них не похоже на остальные. То же самое и в социальной сети — с помощью аватара вы можете выбрать тот облик, который вам больше всего нравится, который привлекает внимание и представляет интерес для других пользователей. Аватары ВКонтакте не только помогают идентифицировать пол, возраст человека, но и делают процесс общения более интересным и увлекательным. От выбора аватара зависит не только ваше настроение, но и вашего гостя, который зашел на вашу страничку на любом форуме, блоге или социальной сети.
Сделать аватар для ВКонтакте может каждый. Необходимо лишь ваше желание и немного фантазии. Оригинальный аватар — это способ выделится из толпы, быть непохожим на других. Вы с легкостью сможете сделать аватар для Вконтакте с помощью программы Домашняя Фотостудия! Это универсальный графический редактор для обработки фотографий, позволяющий создавать потрясающе-красивые аватары для Вконтакте.
Итак, как же сделать аватар для Вконтакте? Для этого нужно осуществить ряд несложных действий.
1. Кадрирование фотографии
Очень часто при создании аватара перед нами встает потребность обрезки или кадрирования фотографии. Например, если нам не нравится фон фотографии, или мы хотим вырезать свой портрет. При кадрировании необходимо соблюдать соотношение ширины и высоты фотографии. Наиболее оптимальный вариант 1:2, либо 1:3. Для обрезки фотографии выбираем раздел меню Изображение > Кадрирование. В окне Редактирование выбираем пункт Пропорции, после чего задаем необходимое соотношение сторон.
2. Изменение размера
Чтобы сделать аватар для Вконтакте, прежде всего, мы должны учитывать размер фотографии. Высота аватара может варьироваться от 400 до 700 пикселей. Ширина — 200 пикселей. Для изменения размера фотографии заходим в раздел меню Изображение > Изменение размера. Чтобы сохранить качество изображения, выбираем бикубическую фильтрацию.
3. Декорирование аватара
Графический редактор Домашняя Фотостудия дает нам огромное количество возможностей для создания яркого, запоминающегося аватара. Программа содержит обширный набор спецэффектов, которые в большинстве своем являются уникальными. Например, чтобы сделать аватар для Вконтакте, вы можете использовать эффекты старинной фотографии, применять фантастические свечения, создавать эффект книжной иллюстрации и многое другое. Аватар подчеркнет вашу индивидуальность и неповторимый стиль!
Кроме того, вы можете украсить свой аватар стильной рамкой. Для этого нужно зайти в меню Оформление > Добавить рамку. В Домашней Фотостудии содержится несколько десятков различных рамок для оформления, и каждый найдет для себя что-то по вкусу.
Оригинальность вашему аватару придадут всевозможные маски, которые используются для обработки краев фотографии. Например, их можно сделать закругленными, мягко размыть, или придать сложную форму. Казалось бы, довольно простая обработка, но она создает некую изюминку для аватара, делает его уникальным и запоминающимся. Для использования масок выбираем раздел Оформление > Маски (обработка краев).
Чтобы сделать аватар для ВКонтакте, вы можете добавлять различные надписи. В программе Домашняя Фотостудия представлено огромное количество разнообразных шрифтов и стилей. Вы можете выбирать размер и цвет надписи, менять ее положение и направление на аватаре. Это может быть ваше имя, какой-либо слоган или прикол. Чтобы сделать аватар для ВКонтакте с надписью, заходим в меню Изображение > Добавить надпись. Далее выбираем нужные параметры текста, и аватар с надписью готов!
Подключайте фантазию, создавайте самые новые и необычные аватарки для контакта с помощью программы Домашняя Фотостудия!
Скачайте редактор «Домашняя Фотостудия» прямо сейчас!
Программа поддерживает Windows 7,8, Windows XP, Vista и Windows 10
steptosleep.ru
Пустая аватарка в вконтакте с фотоаппаратом
Жизнь богата яркими красками и впечатлениями. Даже когда, кажется, что ничего не происходит обязательно, что-то случается. Возможно, событие будет иметь малозначительный характер, а может, станет роковым приключением. Никто заранее не может предугадать, поэтому лучше иметь при себе пустая аватарка в вконтакте с фотоаппаратом. Ведь как знать, может все это происходит первый и последний раз, а если события приятные, то кощунство их не заснять на память.
В памяти всегда есть место для глупостей, и чем хуже глупости, тем ярче они запоминаются. У каждого человека определенно есть несколько казусных случаев, которые хотелось бы забыть. Но память, решает, что об этом непременно нужно помнить. Кто-то когда-то предложил, всегда иметь на случай казуса полнокадровые беззеркальные фотоаппараты nikon. Во-первых, можно сказать, что поступил умышленно, чтобы сделать снимок, а во-вторых – память об этом происшествии перестанет преследовать.
Важное место в жизни каждого человека занимает школа. Ведь в этом месте он вырос, провел лучшие годы своей жизни. И нет-нет, а временами вспоминается былое. Особенно на встречах выпускников. Вспышками мерцает фотоаппарат какие лучше, время летит весело и незаметно. А через несколько лет достаешь старый фотоальбом и недавние фото и начинаешь сравнивать, вспоминать и радоваться, что есть возможность увидеть тех, кого сейчас рядом нет.
Популярные пустая аватарка в вконтакте с фотоаппаратом
Большой спрос на фотоаппарат мгновенной печати картриджи, зеркальные фотоаппараты схема, купит фотоаппарат в ставрополе, фотоаппарат никон l26 купить, сервисные центры сони фотоаппарат в москве, алиэкспресс фотоаппараты мгновенной печати, сумки для фотоаппарата ижевск, цифровой фотоаппарат canon eos 1100d 18-55, фотоаппарат casio qv 5700, цена фотоаппарата canon powershot sx120 is.
Это сейчас, в веке цифровых технологий, фотография не более чем «нажатие кнопки». И нажимать ее можно сколько угодно раз. А ведь еще не так давно, чаще всего встречался физический размер матрицы в фотоаппарате пленочного образца. То есть, внутрь вставлялась пленка, которая проявлялась в фотосалонах и люди дорожили каждым кадром. Возможно в современной технике, тоже есть своя романтика, но главное помнить, что именно нужно запомнить на будущее, ведь каждый кадр – бесценное воспоминание.
И все-таки здорово проводить время со старыми друзьями. Собраться шумной толпой, вспомнить о прошлом, а потом еще несколько часов смеяться над забавными историями. Такие встречи никогда не забываются, и главное, чтобы на таком собрании был тот, у кого есть фотоаппарат samsung пишет карта защищена. Как знать, может в следующий раз кто-то не сможет прийти, зато его облик будет всегда смотреть с недавней фотографии.
fotms.tw1.ru
Фото пустая ава вк
Как разместить к…
Фото Лили, кошка…
Несколько вещей,…
Как избавиться о…
vkontakte-300×30…Как создать груп…
Trending photos:…
Часть 5: Как наз…
Очередная зачист…
Декабрьские обно…
ПУСТАЯ АВА. пуст…
Nole-Loca Подбор…
Ня картинки — ст…
ava_no.jpg
Мастерская авата…
ЛЕЙ ВСЕ ЧТО СВЯЗ…
Стань лицом пабл…
вид: аватары тем…
Как стать феей?…
Ава обманка Вк 2…
МОЛОДЕЦ! . 5! в…
ПК «Гранд-Смета»…
Александр Сахали…
Как убрать авата…
Помощь. Подписк…
Авторизация чере…
1 000 000 репост…
Петюня Иванов — …
Аватарка: Пустая…
Аватарки скачать…
Психология выбор…
Аватар вконтакте…
Записи: Компьюте…
Аватары для вКон…
Удаление страниц…
Введение в общую…
Кого называют со…
Все найденные ча…
Фото В Контакте …
Самые точные про…
0 подписчиков. …
Аватар вконтакте…
Windows 8 | обзо…
Ня картинки — не…
99px.ru аватар Д…
Источник: http://beauty-things.com/pustaya-avatarka-v-vkontakte-foto
mirsvarki72.ru
Авы [237] |
Картинки на аву [685] |
Фото на аву [329] |
Девушки на аву [423] |
Фотки на аву [186] |
Авы для вк [167] |
Авы для пацанов [185] |
Ава года [387] |
Прикольные авы [276] |
Со спины на аву [229] |
Брюнетки на аву [332] |
Блондинки на аву [375] |
Мальчики на аву [119] |
Фото лета на аву [201] |
Девочки на аву [243] |
Ава на одноклассники [163] |
Девушки на аву без лица [181] |
Мужчины на аву [339] |
Грустные авы [211] |
Парни на аву [171] |
Коты, кошки, котята на аву [402] |
Пары на аву [295] |
Цветы на аву [245] |
Рыжие на аву [95] |
Люди на аву [168] |
Животные на аву [280] |
Дети на аву [171] |
Грудь на аву [121] |
Шатенки на аву [106] |
Авы для девушек [227] |
Авы для парней [117] |
Аниме на аву [72] |
Глаза на аву [96] |
Ава про любовь [109] |
Красивые авы [137] |
Картинки на аву в одноклассники [167] |
Скачать аву [115] |
На аву вконтакте [124] |
Аватарки [150] |
Девушки на аватарку [266] |
Картинки на аватарку [291] |
Фото на аватарку [157] |
Аватарки для девушек [171] |
Прикольные аватарки [157] |
Аватарки для вк [113] |
Скачать аватарки [106] |
Аватарки для форумов [175] |
Аватарки для скайпа [121] |
Аватарки для парней [114] |
Аватарки для стима [142] |
Фотки на аватарку [136] |
Аватарки для группы [141] |
Аватарки для ютуба [143] |
Бесплатные аватарки [99] |
Попы, попки, попкинс [200] |
Спорт [146] |
Знаменитости [458] |
Спортсменки [171] |
Невесты [80] |
Лица мужчин [232] |
Часы [125] |
Лица девушек [260] |
Семья [124] |
Авто, машины, автомобили [507] |
Собаки, щенки [212] |
Космос [182] |
Мода, гламур [231] |
Спортсмены [195] |
Напитки, вода, соки [288] |
Руки [130] |
Дома, здания, постройки [237] |
Работа [164] |
Женщины [366] |
Деньги [443] |
Инопланетяне [73] |
Зима [146] |
Игры [157] |
Еда, блюда [1078] |
Логотипы [78] |
Толстые [101] |
Танки [145] |
Самолёты [262] |
Анимированные [82] |
Оружие, вооружение [219] |
Лица женщин [198] |
Драконы [43] |
Золото [112] |
Ужасы [172] |
Корабли, катера, лодки [87] |
Девушки в белье [162] |
Лица парней [50] |
Картинки для скайпа [253] |
Украшения, бижутерия, драгоценности [103] |
Брюнеты [39] |
Блондины [37] |
Фрукты [156] |
Овощи [337] |
Бельё [25] |
Врачи, доктора, лекари, медработники, медперсонал [99] |
Сладости [167] |
Праздники [148] |
Фотомодели [162] |
Мультики [101] |
Разные [106] |
Природа [184] |
Гороскоп [67] |
Мистика [77] |
Девушки в купальниках [148] |
Учёба [56] |
Осень [60] |
Посуда [98] |
Птицы [119] |
Ава на ватсап [172] |
Картинки для ватсапа [894] |
Техника, приспособления, девайсы, гаджеты [207] |
Ягоды [117] |
Пьяные [80] |
Спящие [90] |
Девушки на аву в вк [186] |
Для девочек на аву [97] |
Девушки в бикини [151] |
Бесплатно авы [102] |
Женское бельё [57] |
Весна [33] |
Красивые аватарки [107] |
Авы для стима [91] |
Крутые авы [150] |
Классные авы [127] |
Аватарки для вайбера [179] |
Женские имена [80] |
Мужские имена [32] |
Фото девушек на аву [178] |
Ава в инстаграм [93] |
Селфи на аву [76] |
Рисунки на аву [200] |
Новогодняя ава [77] |
Злая ава [50] |
Добрая ава [43] |
Смотреть аву [57] |
Звери [67] |
Смотреть аватарки [51] |
Лицо на аву [92] |
Аватарки телеграм [45] |
Аватарка для фейсбука [39] |
Аватарки для ватсапа [57] |
Страшная ава [24] |
ava-24.com
Аватарки в контакте
Аватарки в контакте юмор
Скачать аватарки в контакте юмор – Скачать – В архиве: 32 аватарки.
Аватарки в контакте любовь
Скачать аватарки в контакте любовь – Скачать – В архиве: 19 аватарок.
Аватарки в контакте мультфильмы
Скачать аватарки в контакте мульфильмы – Скачать – В архиве: 19 аватарок.
Аватарки в контакте имена
Скачать аватарки в контакте имена – Скачать – В архиве: 42 аватарки.
Аватарки в контакте смайлики
Аватарки в контакте учеба и работа
Скачать аватарки в контакте учеба и работа – Скачать – В архиве: 21 аватарка.
Аватарки в контакте vip
Скачать аватарки в контакте vip – Скачать – В архиве: 21 аватарка.
Если вам понравилась эта статья сохраните её!
Вместе с этой статьей сейчас читают:
vkontaktehit.ru
Авы [237] |
Картинки на аву [685] |
Фото на аву [329] |
Девушки на аву [423] |
Фотки на аву [186] |
Авы для вк [167] |
Авы для пацанов [185] |
Ава года [387] |
Прикольные авы [276] |
Со спины на аву [229] |
Брюнетки на аву [332] |
Блондинки на аву [375] |
Мальчики на аву [119] |
Фото лета на аву [201] |
Девочки на аву [243] |
Ава на одноклассники [163] |
Девушки на аву без лица [181] |
Мужчины на аву [339] |
Грустные авы [211] |
Парни на аву [171] |
Коты, кошки, котята на аву [402] |
Пары на аву [295] |
Цветы на аву [245] |
Рыжие на аву [95] |
Люди на аву [168] |
Животные на аву [280] |
Дети на аву [171] |
Грудь на аву [121] |
Шатенки на аву [106] |
Авы для девушек [227] |
Авы для парней [117] |
Аниме на аву [72] |
Глаза на аву [96] |
Ава про любовь [109] |
Красивые авы [137] |
Картинки на аву в одноклассники [167] |
Скачать аву [115] |
На аву вконтакте [124] |
Аватарки [150] |
Девушки на аватарку [266] |
Картинки на аватарку [291] |
Фото на аватарку [157] |
Аватарки для девушек [171] |
Прикольные аватарки [157] |
Аватарки для вк [113] |
Скачать аватарки [106] |
Аватарки для форумов [175] |
Аватарки для скайпа [121] |
Аватарки для парней [114] |
Аватарки для стима [142] |
Фотки на аватарку [136] |
Аватарки для группы [141] |
Аватарки для ютуба [143] |
Бесплатные аватарки [99] |
Попы, попки, попкинс [200] |
Спорт [146] |
Знаменитости [458] |
Спортсменки [171] |
Невесты [80] |
Лица мужчин [232] |
Часы [125] |
Лица девушек [260] |
Семья [124] |
Авто, машины, автомобили [507] |
Собаки, щенки [212] |
Космос [182] |
Мода, гламур [231] |
Спортсмены [195] |
Напитки, вода, соки [288] |
Руки [130] |
Дома, здания, постройки [237] |
Работа [164] |
Женщины [366] |
Деньги [443] |
Инопланетяне [73] |
Зима [146] |
Игры [157] |
Еда, блюда [1078] |
Логотипы [78] |
Толстые [101] |
Танки [145] |
Самолёты [262] |
Анимированные [82] |
Оружие, вооружение [219] |
Лица женщин [198] |
Драконы [43] |
Золото [112] |
Ужасы [172] |
Корабли, катера, лодки [87] |
Девушки в белье [162] |
Лица парней [50] |
Картинки для скайпа [253] |
Украшения, бижутерия, драгоценности [103] |
Брюнеты [39] |
Блондины [37] |
Фрукты [156] |
Овощи [337] |
Бельё [25] |
Врачи, доктора, лекари, медработники, медперсонал [99] |
Сладости [167] |
Праздники [148] |
Фотомодели [162] |
Мультики [101] |
Разные [106] |
Природа [184] |
Гороскоп [67] |
Мистика [77] |
Девушки в купальниках [148] |
Учёба [56] |
Осень [60] |
Посуда [98] |
Птицы [119] |
Ава на ватсап [172] |
Картинки для ватсапа [894] |
Техника, приспособления, девайсы, гаджеты [207] |
Ягоды [117] |
Пьяные [80] |
Спящие [90] |
Девушки на аву в вк [186] |
Для девочек на аву [97] |
Девушки в бикини [151] |
Бесплатно авы [102] |
Женское бельё [57] |
Весна [33] |
Красивые аватарки [107] |
Авы для стима [91] |
Крутые авы [150] |
Классные авы [127] |
Аватарки для вайбера [179] |
Женские имена [80] |
Мужские имена [32] |
Фото девушек на аву [178] |
Ава в инстаграм [93] |
Селфи на аву [76] |
Рисунки на аву [200] |
Новогодняя ава [77] |
Злая ава [50] |
Добрая ава [43] |
Смотреть аву [57] |
Звери [67] |
Смотреть аватарки [51] |
Лицо на аву [92] |
Аватарки телеграм [45] |
Аватарка для фейсбука [39] |
Аватарки для ватсапа [57] |
Страшная ава [24] |
ava-24.com
Аватары для контакта. Аватары ВКонтакте бесплатно
Для многих оформление их личной страницы ВКонтакте является первостепенной задачей, ведь то, как она выглядит, соответствует внутреннему миру пользователя, отражению их характера, взглядов, отношения к себе и окружающим. Проще говоря, оформление страницы ВКонтакте отражает внутренний мир пользователя. Поэтому столько внимания уделяется картинкам, и в первую очередь аватарам для контакта. Мы подготовили подборку замечательных, оригинальных аватаров ВКонтакте, которыми вы можете украсить вашу страницу.
Аватары ВКонтакте бесплатно
Все хотят выглядеть красиво. Стремление к красоте — это одно из качеств человека, и это особенно заметно по аватарам в контакте. Для девушек будет интересна коллекция из 100 аватаров ВКонтакте, которые можно описать одним модным словом — гламур.
Скачать бесплатно аватары ВКонтакте гламур по ссылке.
Мужчины предпочитают скорость и риск. Они любят драйв и полный контроль. Поэтому коллекция из 100 аватаров ВКонтакте многим придется по душе.
Скачать аватары ВКонтакте бесплатно авто по ссылке.
Мы — часть живой природы. Поэтому каждый из нас ассоциирует себя с каким-нибудь животным. Сейчас среди аватаров ВКонтакте можно встретить не только гламурных кошечек, но и грозных тигров. Коллекция из 100 аватаров для контакта для любителей природы.
Скачать аватары ВКонтакте бесплатно животные по ссылке.
Мы все ждем наступления Нового Года. Для кого-то это самый главный праздник в году, поэтому именно сейчас вы увидите ВКонтакте аватары новогодней тематики. Не обошли Новый Год и мы — вы можете скачать аватары ВКонтакте новогодней тематики (более 20 штук).
Скачать аватары ВКонтакте бесплатно новый год по ссылке
Ну и конечно же, нельзя не упомянуть фирменные аватары ВКонтакте, которые подчеркивают предпочтения пользователей в выборе социальной сети для общения. Вы можете скачать авары ВКонтакте с символикой этой социальной сети (60 штук) бесплатно и прямо здесь.
Скачать аватары ВКонтакте бесплатно vkontakte по ссылке.
Если вас обуревает жажда творчества, то вы можете сами создать аватар вконтекте, используя скачанные картинки. Для этого посмотрите наш подробный обзор сервисов для создания индивидуальных аватаров ВКонтакте: как сделать аватар для контакта бесплатно.
kontaktlife.ru
Описание производственной модели управления на базе AVA ERP
Установка для руководителя:
Можно сколько угодно совещаться, устраивать летучки и прочие пылесосы времени. Это просто потеря времени, как руководства, так и сотрудников. Все равно вы на этих планерках ничего толком не выясните. А даже, если и выясните, то уверенными быть не сможете, что это все действительно так, как вам говорят. Потеря времени — это потеря денег. Чем больше совещаний, тем меньше эффективности. Количество совещаний — индикатор эффективности предприятия. Чем их больше, тем ниже эффективность.
Наша модель управления производством построена на базе Теории Ограничений. Это индикаторы, которые показывают состояние дел на каждом участке вашего предприятия. Индикаторы — это рабочие места сотрудников компании. Очередь закупок, очередь входного контроля, очередь платежей, входной контроль, очередь изолятора, очереди производства и очереди ОТК. Шесть основных индикаторов. Задача руководителя — это контроль над ключевыми позициями заказов. Ключевая позиция — это самое проблемное место заказа. Вмешивайтесь только в те ситуации, где ключевая позиция находится в красно-черной зоне. Чтобы в компании было все хорошо — добейтесь отсутствия в заказах красно-черных ключевых позиций.
Все начинается с разработки дерева изделия. Кто-то заносит номенклатуру, которую мы планируем продавать и формирует заявку на разработку дерева. Конструктора + технологи совместными усилиями делают дерево и закрывают заявку на его разработку. Кто надо получает об этом уведомление и может это дерево утвердить (если это необходимо). Все, товар можно продавать. Если в будущем что-то в дереве изменится (например, технолог что-то изменит), то система сформирует извещение об изменении, чтобы конструктор внес соответствующие изменения в КД.
Перед занесением заказа можно попросить систему спрогнозировать дату отгрузки. Система встроит ваш заказ в текущие графики работ, оценит текущие запасы, текущее положение дел в закупках, посмотрит текущие очереди на каждом производственном участке и скажет, на какую дату можно принимать заказ.
Менеджер выписывает счет, заносит туда товар, указывает количество и дату, когда он хотел бы это отгрузить. Запускает счет в работу, если у клиента постоплата. Если предоплата, то система сама запустит счет после того, как вы загрузите банковскую выписку. Система копирует конструкторское дерево в заказ и начинает с ним работать. Решает, нужно ли что-то делать по этому счету, и если нужно, то что конкретно. Оценивает ситуацию, проводит замены на аналоги, если это требуется и т.д. Все, что требуется сделать по этому счету, встраивается в текущие графики работ на всех рабочих местах.
Вот так выглядит дерево изделия в счете. Это, так называемое, технологическое дерево. Оно может отличаться от конструкторского. Например тем, что здесь часть элементов может быть заменена на аналоги. Разумеется автоматически.
Картинки кликабельны.
Для руководителей проектов и менеджеров, отвечающих за конкретные заказы, это удобное место, где можно посмотреть состояние дел в заказе. Более того, система не просто показывает состояние дел вплоть до каждого винта, но еще и приоритет, показывая какие позиции являются наиболее важными. Но ключевые пользователи (закупки, ОТК, склад, производство и т.д.) здесь не работают. Все пользователи работают в своих графиках работы, в своих очередях. Не будет же менеджер по закупкам лазить по каждому счету и выяснять, что он там должен купить.
Хотя именно так и работают на многих предприятиях. Берут КД по каждому заказу и выписывают оттуда покупнину, затем рисуют себе в Excel потребность, где отмечают, что уже заказали поставщикам, причем заказывают не то, что надо, а то, что надо не заказывают. Ну, вы знаете, как это происходит.
Адский труд, отнимающий огромное количество времени и порождающий кучу ошибок.
Вот картинка понагляднее. Здесь много чего надо покупать и система по каждой позиции показывает, как с ней обстоят дела. Менеджер, ведущий проект, просто открывает свой счет и видит, где и какие проблемы с его изделием. Красные записи — это нехорошо. Надо жаловаться в соответствующие инстанции.
Здесь нет сортировки по приоритету, потому что это не график закупок, это конкретное изделие.
В системе есть несколько ключевых рабочих мест, по которым собственно и происходит управление всеми процессами производства. Я называю эти рабочие места «индикаторами». Руководство постоянно наблюдает за состоянием дел во всех индикаторах и вмешивается тогда, когда индикатор уходит в красную зону. Если этого не происходит, значит у нас все спокойно.
- очередь закупок
- очередь ожидания прихода
- очередь входного контроля
- входной контроль (ВК)
- очередь изолятора
- очередь производства (как по всему производству, так и по каждому участку)
- очередь оплат
Вот так выглядит очередь закупок. Фактически это рабочее место менеджеров по закупкам. Именно отсюда они формируют счета поставщиков. Смотрят сюда, понимают, чем заниматься, звонят поставщикам и заказывают. Таким образом появляются счета поставщиков. В этой очереди одновременно находятся как позиции под конкретные заказы, так и позиции для пополнения буферов запаса.
А вот это очередь ожидания. Это позиции, которые уже заказаны поставщикам. Чтобы ничего не прошляпить система и тут строит очередь ожидания и менеджмент за ней тоже наблюдает. Это важно, если поставщик, которому что-то заказали, начинает динамить. И чтобы не пропустить этот момент, смотрим постоянно сюда тоже. Как только какие-то позиции начали краснеть, сразу начинаем паниковать и жаловаться в соответствующие инстанции. Если счет поставщика оплачен, то инстанция — это сам поставщик, если не оплачен, то инстанция — это наша финансовая служба.
Затем менеджеры заносят заявки на оплаты этих счетов. В этих заявках точно такой же приоритет. Таким образом финансисты тоже понимают, что оплачивать в первую очередь, что потом. Это уже очередь платежей. То есть платим тоже не по интуиции, а с математической точностью. Сначала самый важный платеж, затем второй и т.д.
Разумеется все эти приоритеты динамичны. Верней, почти динамичны. Если ситуация как-то изменится, то система перестроит все графики и переориентирует все ресурсы на более важный заказ. А ситуация точно изменится, появятся новые заказы, перенесут старые, как-то изменятся складские запасы и т.д. По практике все графики пересчитывают один-два раза в день.
Очередь входного контроля — это список того, что нужно передать на входной контроль. Этот список может содержать сотни и даже тысячи записей. Поэтому здесь чрезвычайно важно понимать, что необходимо передать в первую очередь, что во вторую и т.д.
Передача на входной контроль происходит разумеется непосредственно из очереди. Инженер ОТК из очереди заносит заявку на ВК и эта позиция разрешается к отдаче с «зоны приема». После этого инженер ОТК идет на склад «зона приема» и ему отдают по заявке то, что он запросил.
Однако здесь есть не только приоритет, показывающий важность проверки той или иной позиции. Здесь еще есть колонка «Можно», которая говорит о том, а есть ли смысл проверять эту позицию сейчас. Если по результатам проверки вы все равно не сможете запустить производственное задание, то система в колонке «Можно» покажет 0. Не стоит проводить входной контроль, если в этом нет смысла, даже если очень высокий приоритет. Однако в некоторых случаях это делать стоит, тут надо смотреть по ситуации. Система не запрещает. Если на входном контроле проверяют пакет документов, то передавать все таки надо. Потому что если не передашь, то не узнаешь, есть ли необходимые документы. В будущем планируем сразу кладовщикам при приходе в «зону приема» показывать, какие именно проверить документы, сертификаты.
Следующий индикатор — Непосредственно сам входной контроль. Это то, что уже передано на ВК. Здесь тоже может быть довольно много позиций, особенно на старте, когда люди еще не привыкли к системе и не очень понимают, как необходимо работать. Не так много записей, как в очереди, но тоже прилично. В нормальной ситуации здесь не должно быть много записей.
Нормальная работа — это когда ты берешь себе на ВК позицию, когда ты готов ее проверять, а не просто потому что она в очереди черная. Этому люди учатся со временем.
По результатам проверки на ВК позиция передается либо на питающий производство склад (РЦ), либо в изолятор, либо в брак. Если товар требует прохождения ВК, то до тех пор пока он не пройден система не разрешит запустить производственное задание, которое в нем нуждается. В то же время система покажет, что это задание ждет именно вот этого болта, который сейчас лежит на входном контроле. Чуть ниже покажу, как это работает.
Кстати, номер перемещения на ВК — это и есть номер входного контроля, который можно наносить на изделия. В том числе и штрих-кодом.
Если позиция в порядке, то ее с входного контроля разрешают к приему на питающий склад. Несут туда, и кладовщик питающего склада принимает ее на склад в программе. Тут уже адресное хранение, все дела.
Если позиция физически в порядке, но не хватает важных документов, то ее кладут в изолятор. Она тут же попадает в очередь изолятора, за которой наблюдают закупщики. Все, что там есть — это предмет для беспокойства закупщиков. Это значит, что поставщик не привез нужные документы. В этом списке тоже может быть довольно много записей, поэтому и здесь мы показываем приоритет, чтобы закупщики понимали, какой позицией заниматься в первую очередь, какой во вторую и т.д.
Позиция, находящаяся в изоляторе, блокирует возможность запуска задания, но при этом система показывает, что проблема именно в этом болте, который лежит в изоляторе.
Если позиция бракованная, то ее переводят с входного контроля в брак, после чего система автоматически рождает новую потребность и эта же позиция опять появляется в графике закупок.
То есть разница между Изолятором и Браком состоит в том, что нахождение позиции в изоляторе не рождает новую потребность, а нахождение в браке — рождает.
Если все ок, то железка оказывается на питающем складе, откуда производству можно забирать комплектующие, о чем они и получат сигнал, что можно формировать производственное задание.
Производство запускает задания непосредственно из очереди. Каждый участок видит свою очередь.
Вот так выглядит единая очередь по всем участкам. Обратите внимание на первую запись. Написано «Можно» 0, но «Можно ВК» 52. Это значит, что что-то застряло на входном контроле.
Чтобы понять, что именно застряло, нажимаем специальную кнопочку и видим, что в «Зоне приема» застряло «Ребро УБГ-СГ 5131.01.02.01.104-03». Оно сейчас находится в очереди входного контроля.
Запустить это задание система не даст, пока не будет пройден входной контроль этого ребра.
В этом случае просто переходим к следующей позиции, которую производить можно и запускаем ПЗ.
Как только мы запустим ПЗ, система тут же создаст распоряжение на выдачу необходимых материалов с питающего склада. На материалы, которые есть на участке, никакого распоряжения, разумеется не будет. Печатаем бланк ПЗ и выдаем на участок вместе с маршрутным листом.
По факту исполнения ПЗ передаем его на ОТК и оно попадает в очередь ОТК. Инженеры ОТК работают с этой очередью. Если все ок, то позицию разрешают к приему на следующий участок. Если нет, то инженер ОТК возвращает ее обратно на участок и она уходит из очереди ОТК обратно в производство. При необходимости может написать, в чем конкретно проблема. Но обычно не пишут, потому что общаются )
Затем открывается ПЗ следующим участком, затем следующим и т.д. И так пока изделие не доберется до финиша.
Если производственный цикл короткий (изделие можно выполнить за смену), то тогда люди пользуются не узловой очередью, а очередью готовых изделий и стартуют изделие оттуда. Тогда система сразу создает все ПЗ для этого изделия на все участки.
Ну и, пожалуй, венец всей модели управления — это очередь платежей.
Круто управлять производством — это не только круто управлять всей логистикой, но и круто управлять деньгами. Иначе вся крутизна логистики разобьется о бессистемность платежей.
Ну и пожалуй, что все.
Затем все физические движения товара отправляются в 1с (где с ними что-то делают бухгалтеры) при помощи специального обработчика, который можно скачать здесь.
PS. Полное построение всех графиков работы (график производства, график закупок, график прохождения входного контроля, ОТК, изолятор и т.д.) занимает не более 30 минут!!! Это на самом сложном проекте, где некоторые изделия состоят из десяти тысяч элементов. На более простых проектах это занимает вообще несколько минут. Просто немыслимая цифра. Я как-то был в Челябинске на заводе, где уже лет пять пытаются внедрить BAAN. Верней уже даже и не пытаются. Так вот, там график производства считается часа четыре. Только производства. Графика закупок, как такового, нет, я уже не говорю про всякие очереди изоляторов, ОТК, входного контроля и т.д. Сколько бы это вместе считалось даже представить страшно. При этом никакой промышленной эксплуатации там нет, база пустая.
⟵ Новейшие разработки в области управления производством | Основы эффективного производства ⟶
как сделать, поменять + делаем прозрачный фон
Из этой статьи вы узнаете:
- Как сделать аву для Тик-Тока.
- Как поставить аватарку.
- Как поменять фото профиля.
- Как сделать прозрачную аву.
Как сделать аватарку в Тик-Токе: размеры и рекомендации
Сначала нужно подготовить фотографию или картинку для аватарки в TikTok. Рекомендуемый размер изображения — 100×100 пикселей, допустимый формат — JPEG. Это все требования социальной сети.
Если вы нашли крутую картинку большого размера — например, 1920×1080 пикселей, — то обрежьте ее в любом графическом редакторе. Или просто загрузите в приложение — там есть встроенный редактор: инструмент, который дает возможность обрезать аву.
Рекомендации по выбору аватарки:
- На фотографии должно быть видно лицо — даже если это вымышленный персонаж (например, герой фильма «Звездные войны» или компьютерной игры Fortnite). Если у вас личный блог, то добавьте свое фото — например, селфи. Это актуально и для девушек, и для парней.
- Картинки без пикселей и эффекта «мыла». Загружайте изображения в высоком качестве. Важно, чтобы на фотке были видны все мелкие детали: например, надписи.
- Используйте читаемый шрифт. Если вы добавили надпись на аватарку — имя, название бренда или компании, — то используйте разборчивый шрифт: без «красивых» завитушек и витиеватых узоров.
- Минимум фильтров. Не нужно накладывать на один снимок 5-6 фильтров. Одного будет достаточно.
- Тематические картинки. Фото профиля должно отражать тематику аккаунта и дополнять его: например, в блоге про кино можно использовать изображение известного персонажа из фильма.
Как поставить фотку на аву: пошаговая инструкция
Перейдем к практической части статьи и поставим фотку на аву. Откройте приложение Тик-Ток на смартфоне. Перейдите в раздел «Я».
В верхней части интерфейса находится иконка профиля — нажмите на нее. Откроется меню, где нужно выбрать вариант загрузки картинки: сделать новое фото или добавить готовое изображение из галереи.
Откроется инструмент «Обрезать». Здесь нужно выбрать область аватарки — она находится в круге. Нажмите кнопку «Сохранить».
Готово, вы установили новую аватарку для профиля.
Это интересно: хотите стать популярным в TikTok и начать зарабатывать? Значит вам нужна аудитория — много подписчиков и просмотров.
Накрутите просмотры, лайков, подписчиков через Likemania. Это дешево и безопасно (аккаунт не заблокируют). Просто выберите нужную социальную сеть из списка, укажите задание для накрутки и оплатите заказ. Можно накрутить живых пользователей и ботов.
Накрутить просмотры, лайки и подписчиков >>>
Как поменять фото профиля
Теперь покажем, как поменять аву. Для этого откройте раздел «Я» в приложении TikTok. Нажмите на текущее фото.
Изображение откроется на весь экран. В нижней части интерфейса нажмите кнопку «Изменить».
Загрузите новое изображение из галереи или сделайте фотографию — например, селфи.
Делаем прозрачную аву
Чтобы сделать прозрачную аву, нам потребуется редактор изображений. Рекомендуем Background Eraser. Это приложение есть на Android и iOS. Скачайте и установите программу на телефон — через Play Маркет или App Store.
Откройте приложение и загрузите нужную картинку, где необходимо сделать прозрачный фон. Нажмите кнопку «Erase» — она находится панели инструментов.
Пальцем удалите фон или лишние элементы с изображения. Нажмите кнопку «done», чтобы сохранить картинку.
Теперь вы можете загрузить прозрачную аватарку в Тик-Ток.
Ава для скайпа для девушек
Мы любим добавлять сюда классные картинки, которые можно использовать в качестве аватар. Здесь уже много отличных фотографий и рисунков, которые добавляют пользователи сайта. Благодаря активности посетителей, коллекция аватарок постоянно растёт, и на данный момент на сайте уже больше 36000 картинок. Для тех, кто хочеть быть в курсе всех новых картинок, есть возможность подписаться на любимую тему.
Популярные категории аватар
Новости проекта
Статистика министров
Уважаемые министры, поздравляем с завершением работы
Обновление сайта 2.61.0
Информация об обновлении сайта
23 Декабрь, 2019
Статистика министров
Уважаемые министры, поздравляем с завершением работы
Большой ноль!
Поздравляем всех участников проекта с завершением сезона
Хотите узнать о том, как установить оригинальную аватарку в Скайп? Прочитайте внимательно материалы статьи, и узнаете всю нужную для этого информацию.
Как установить картинку из интернета на аватар в Скайпе
Если у Вас появилось желание установить вместо фотографии на аватарку оригинальную картинку, скачайте ее из сети интернет. Для этого воспользуйтесь любым браузером, и в поисковой строке напишите такую фразу: “Скачать аватарку для Скайп”. Через несколько секунд перед вами появятся результаты поиска. Выберите понравившееся изображение, откройте его, и загрузите на свое устройство. Это очень легко сделать:
- наведите мышку на изображение;
- нажмите правую кнопку;
- выберите пункт “Сохранить изображение как…”;
- выберите подходящую папку для сохранения;
- нажмите на кнопку “Ок”.
Теперь нужно установить картинку в профиле мессенджера. Следуйте представленным рекомендациям, и все получится:
- войдите в приложение под своим именем;
- откройте меню программы;
- откройте вкладку “Личные данные”;
- выберите вкладку “Изменить мой аватар”;
- нажмите на кнопку “Обзор”, и с папки, куда была сохранена картинка выберите нужный файл, выделите его и нажмите на кнопку “Открыть”;
- дождитесь пока изображение загрузится;
- после загрузки картинки можно ее отредактировать, например, изменить размер. Перетащите бегунок в правую или левую сторону, и размер поменяется;
- если Вас все устраивает, кликните по кнопке “Использовать это изображение”.
Теперь все друзья будут видеть вместо фото оригинальный рисунок.
Установить изображение реально еще одним способом. Зайдите в Меню, откройте “Инструменты”, далее выберите вкладку “Настройки”, далее “Общие настройки”, и нажмите на ссылку “Изменить аватар”, она будет размещена внизу окна.
Как установить свое фото на аватар в Скайп
Установить фотографию на аватарку очень просто. Придерживайтесь представленных рекомендаций, и все получится.
- войдите в приложение;
- нажмите на персональные данные, они располагаются вверху списка контактов;
- откроется окно учетной записи, контактная информация и пустая рамка для изображения;
- под рамкой будет кнопка: “Изменить аватар”, нажмите на нее;
- откроется окно, в котором будут предоставлены варианты установки фото: загрузить готовое изображение или же сделать новое с помощью веб-камеры;
- если хотите сделать моментальное фото, нажмите на кнопку “Сделать фото”. На экране увидите свое лицо, выберите подходящий ракурс и нажмите на кнопку. Готовая фотография сразу появится вместо аватарки. Если снимок не получился с первого раза, не впадайте в отчаяние. Тут же на странице возможно удалить все некачественные снимки, стоит просто нажать на крестик, который расположен в углу фото.
- если хотите выбрать уже готовую фотографию с компьютера, откройте меню настроек, зайдите в раздел “Изменить аватар, нажмите на кнопку “Обзор” и загрузите заранее подготовленное фото с компьютера.
Какие есть крутые аватарки для парней и девушек
Предпочтения девушек и парней при выборе изображения для аватарки очень отличаются. Все еще зависит и от персональных предпочтений.
Для того, чтобы выбрать оригинальную картинку, откройте любой браузер, и в поисковой строке введите фразу: “крутые аватарки для девушек, или для мужчин”. Перед вами откроется много ссылок с готовыми вариантами картинок. Просмотрите их, и выберите подходящий вариант. На таких сайтах чаще всего все картинки разбиты на отдельные группы: “авы для парней”, “фото девушек для авы” и т.д.
Также на различных сайтах можно по желанию создать прикольное изображение с помощью программ-корректировщиков онлайн. Таким образом можно подобрать любой фон, изображение, изменить цвет глаз, волос, и все что пожелаете. Сделайте оригинальную картинку на интересующую Вас тематику, сохраните ее на компьютер, и установите на аватарку.
Теперь Вы знаете все о том, как загрузить и установить прикольный аватар на Скайп. Следуйте предоставленным инструкциям, и удивите друзей прикольной аватаркой.
Пропала Аватарка в Вотсапе | Почему в Ватсапе не видно Аву
Время прочтения статьи 2 минуты.
Информация актуальна! Материал проверен 24.05.2021.
Как и любой другой сервис, Whatsapp не лишен проблем и периодических сбоев в стабильной работе. зачастую проблемы связаны с исчезновением фотографий в профиле. Данная неисправность может зависеть как от самих пользователей, так и от разработчиков или серверов. Давай разберемся, почему пропала аватарка в Вотсапе, и что с этим можно сделать?
Возможные причины и как вернуть?
Есть несколько причин почему у твоих контактов или у тебя пропала аватарка:
- твой собеседник или ты сам поставил в режиме приватности «Никто»
- твой друг заблокировал тебя(;
- неисправности приложения или интернета на смартфоне;
- работа серверов.
Если же твоя аватарка WhatsApp исчезла в то время, когда у тебя отключился интернет или закончился трафик, то решение довольно простое – продлить тариф, либо подключиться к точке доступа Wi-Fi. Без доступа к сети приложение не сможет обрабатывать данные с сервером, а значит пользователь не увидит фотографий. Если с интернетом все нормально, то читай статью дальше.
Зачастую неисправность связана с багами приложения. В таком случае необходимо полностью удалить программу со смартфона или планшета, а после поставить заново из магазина приложений. Если ты не можешь по какой-либо причине переустановить утилиту, тогда зайди в настройки и убери галочку возле пункта «Контакты-все контакты» возле кнопки ОК, после чего верни галочку обратно и проверь изменения.
Второй вариант – это проблемы с серверами. В этом случае пользователь нужно либо просто подождать либо посмотреть решение трудностей вот тут: https://w-hatsapp.ru/faq-whatsapp.html
Теперь ты знаешь, почему в Ватсапе не видно аватарку и что с этим делать.
Интересное: Как поменять картинку/аватарку на профиле Вастапа?
/b/ — прошлая ава заебала . ходил с ней 2.5 года Выбираем аву для вк . правила обычные : на дабл
Главная Юзердоски Каталог Трекер Настройки MakabaMakaba VerdanaFutabaBurichanMuonNeutronGurochanНавигация/au//bi//biz//bo//c//em//fa//fiz//fl//ftb//gd//hi//hw//me//mlp//mo//mu//ne//po//pr//psy//ra//re//s//sci//sn//sp//spc//t//tv//un//w//wh//wm//wp//di//diy//pa//p//trv//cg//gb//tes//v//vg//a//fd//ma//vn//d//b//fag//soc//r//abu//fg//fur//g//ga//vape//h//ho//hc//e//fet//sex/Ответить в тред Ответить в тред
Разное
Политика
Тематика
Творчество
Техника и софт
Игры
Японская культура
Взрослым
Обратная связь
15467958350970.jpg (329Кб, 1280×960) 15424551428871.jpg (53Кб, 720×720) 15424566900453.jpg (80Кб, 474×800) 15424576856120.jpg (215Кб, 1280×1280) прошлая ава заебала . ходил с ней 2.5 года
Выбираем аву для вк . правила обычные :
на дабл — думаю , на трипл ставлю . 15473086326960.jpg (90Кб, 604×483) бамп 15472984635660.jpg (295Кб, 867×752) бамп >>189758731 (OP)
Моар или соус третьего пика! 15473691773431.jpg (360Кб, 1256×712) бамп
>>189758809
поищи в gg ее тред . оттуда взял 14bcaa8s-960.jpg (206Кб, 785×523) 15473214907922.jpg (53Кб, 480×480) бамп >>189758897
рандомпик ? или фото с космическим эффектом или сакральным смыслом? >>189758731 (OP)
Как насчёт перестать быть уродом и поставить на аву себя? DSC00002.jpg (238Кб, 819×614) cvKKNuHsgLA.jpg (102Кб, 487×604) Котя1.jpg (75Кб, 604×604) Бамп 31BrBJZF6A4.jpg (114Кб, 800×800) >>189758731 (OP)
ооо, да это же тред школьников! я ухожу. image.png (91Кб, 241×207) image.png (91Кб, 241×207) image.png (91Кб, 241×207) >>189759251
пидор в треде , акстись image.png (92Кб, 225×225) 15467795381150.jpg (164Кб, 640×622) бамп 1545583721278.jpeg (84Кб, 300×300) S90115-21422982.jpg (165Кб, 720×674) .jpg (397Кб, 2048×1536) Ставь эту. Нахуй ваши триплы-хуиплы. LBSO54 Dwo6420U[…].jpg (106Кб, 960×960) >>189760003
>>189759996
близко анончег 15469976283673.jpg (331Кб, 1141×1725) >>189758731 (OP)
ОП, ставь с пруфами >>189760111
>>189760172
Заебали роллящие уебки, иди нахуй, говно >>189758768
хуя я проиграл image.jpeg (248Кб, 600×600) Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. 1543643675986.jpg (514Кб, 675×1200) >>189759935
Напомни, как его прозвали на двоще? Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. >>189760172
Ролл не поставишь на аву, картинку выбивай, овощ. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. 14785312814820.jpg (61Кб, 604×453) Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. >>189760375
Не было. >>189760377
Банят, за вайп одной картинкой, тупой. 1544022320572.jpg (1061Кб, 2449×2505) Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. image.jpeg (81Кб, 395×402) Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. 15414948576510.webm (5760Кб, 620×349, 00:02:29) Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. image.jpeg (243Кб, 750×1334) Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. еролп.PNG (362Кб, 667×854) Внимание!
ОП даун нарушающий правила треда. >>189760411
На хуй иди, и роллы забери. >>189760472
Красота! >>189760482
Соси хуй быдло >>189760472
Привет, Ваня Томашев >>189760472
Молодец, Иван Томашев >>189760472
Классический обосрамс с замазываением, лол. >>189760411
He банят если ты не лох
А ещё не принято одно и то же несколько раз выкладывать. Если выложил одно и то же несколько раз ОП имеет право тебя послать нахуй
https://vk.com/vt1213
ВОТ ОП Сажа, ты нарушил правила >>189760547
Ты арестован за отрицательный айсикю сага долбоебу. наплодили вквыблядков
зря я на двач зашел опять. 14451937847000.jpg (89Кб, 640×619) 148502092518624[…].jpg (130Кб, 800×781) 14300431575540.gif (943Кб, 500×315) яндекс-интернет[…].jpeg (35Кб, 600×352) ну пишите , хуле. нашли и что дальше? Сажи ОПу-хую-школьнику >>189760472
Что то тут не так
Нельзя быть на столько ебанутым что бы не замазать там специально
Это подстава 15475204716150.jpg (46Кб, 345×431) >>189760646
и через 4 минуты 32 секунды за мной приедет пативен. скорой еще и записи разблокирую . а то скучная и пустая страница
adviser.jpg (122Кб, 695×690) >>189760779
Причем тут пативен? >>189760877
разблокировал >>189760970
Ты сам себе отвечаешь, мань >>189760999
Блядь, ты че, ебанутый? Он поправил ошибку в прошлом посте. Сука, убейся просто, дегенерат. >>189760999
я сообщил другим что сделал это , чмонь Пиздец аноны , ссыте почт написать? удалять буду только гомоеблю и цп >>189761170
Школьник, уймись уже. Здесь 3 постера. И если ты думаешь, что перед своими знакомыми таким образом выпендришься и покажешься особенным и крутым, то ты ошибаешься, тупое малолетнее ничтожество. 15470260563680.jpg (150Кб, 1920×1080) На дабл выбирайте статус >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761255
дохуя буков ты школьнику написал . даже читать не буду >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761317
>>189761321
Самсунго-блядь, ты? >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761284
Люблю сладких Кореяночек!!! >>189761349
Сегодгя в телефонотреде было два Самсунгобоярина. Я один из них, да. >>189761355
Красава >>189761381
Какой ты боярин, ты же поехавший на пиздоглазых, блядь. 02-09-070049.jpg (168Кб, 960×1280) бамп >>189760846
нахуй вы Шестакова суда притащили блять >>189763936
Твой протыклассник? 2a7dfbf0c657.jpg (49Кб, 600×400) >>189764085
Нахуй бы я еще учился бы с ним
>>189760121
Отсосал бы >>189760472
Отличная ава, Сергей 1D2458AF-4D87-4[…].jpeg (57Кб, 716×744) >>189764710
Уже был давно трипл. oAHbE9TIUc.jpg (385Кб, 1080×1080) UPI8yySj0kQ.jpg (403Кб, 1080×1080) Юзаю пикрил в стиме. от пиздалисов отбоя нет 15371636971320.jpg (79Кб, 1080×1074) 15447243377790.jpg (32Кб, 402×604) 15387787058760.png (325Кб, 833×430) 15387595521350.jpg (29Кб, 461×258) 15447243377790.jpg (32Кб, 402×604) >>189765333
Все, ставь ебана
Специально подгадывал cvgNsGJyods.jpg (6Кб, 174×189) ролл 421.jpeg (454Кб, 960×720) >>189765433
ска не поставишь у тебя гнойный свищ в очке вылезет
с вами был куряга-кун Внимание! В тред вкатился дебил не умеющий читать >>189760283
Картинка старше тебя, игрок. 15469976283651.jpg (126Кб, 965×1280) >>189764198
А ножки бы полизал? image.png (7796Кб, 2173×1836) Ебать ты рак блять. >>189764666
>>189764710
слишком охуенный трипл . [Some-Stuffs]Jo[…].jpg (151Кб, 1280×720) >>189761284
Люблю крабовый салат и оливье, считаю что это лучшие салаты. >>189761284
Какой же Красноярск красивый город! >>189761284
Смысл есть салат, если он не крабовый и не оливье? jB8sJaINXkI.jpg (67Кб, 1080×1026) s5-1toFDIGE.jpg (187Кб, 1359×1458) Ответить в тред Ответить в тред
Все права и копирайты на этой странице принадлежат правообладателям. За любую размещенную информацию несет личную ответственность постер (лицо, загрузившее эту информацию). Все комментарии принадлежат лицам, отправившим их.
Если вы обнаружили информацию, размещённую против правил, пожалуйста, сообщите нам об этом.
Зеркала Двача: 2ch.hk, 2ch.pm, 2ch.re, 2ch.tf, 2ch.wf, 2ch.yt, 2-ch.so
Ответить в тред X
Отправка поста
О чем молчит аватарка? | Социум
Один мой знакомый ребенок, склонный к философии (этакий маленький Сократ или Конфуций), как-то задумчиво изрек: «Люди – как кошки. Все такие разные!» Не знаю насчет кошек, но что разные – это точно. Социальные сети тому подтверждение – миллионы пользователей, и у всех – разные аватарки!
По-другому они еще называются «юзерпиками» и служат посланием к миру, которое говорит: «Я такой-то», «Относитесь ко мне так-то», «Дайте мне это». Аватарка выдает наши скрытые дефициты – то, чего не хватает, то, чем мы хотим казаться. О чем же так красноречиво молчит аватарка?
Аватарка – картинка, которую выбирает пользователь для создания своего виртуального «я» на форуме, в чате, других средствах общения в интернете. Маска – графический ник (кличка), характеризующая ее создателя.
Мы все похожи – и физически, и психологически. Каждый знает, что такое одиночество и печаль, хочет любви и расстраивается, когда его не любят. Люди со схожими психологическими чертами выбирают аватарку определенного типа. И по аватарке можно многое сказать о ее хозяине!
Хотите, чтобы ваше желание исполнилось? Приглашаем на трансформационную психологическую игру, которая запустит сбычу мечт!
Мы, интернет-пользователи, словно прячемся за своим компьютером, но аватарка – те самые «торчащие уши», по которым можно понять, кто же все-таки сидит за кустом: серый волк или заяц… А что изображено на вашей аватарке?
1. РЕБЕНОК
Собственные детские фотографии и любые другие изображения ребенка за исключением собственного ребенка (здесь особая символика), а также «умилительные» животные (котята, щенки т. д.), так как они тоже выступают в роли «ребенка».
Послание к миру: «Я – маленький! Хочу на ручки!»
Чего не хватает: чего хотят дети? Конечно, любви! И прилагающихся к ней заботы, внимания…
Ожидания от других: ждут, что о них будут заботиться и любить, то есть восполнять дефицит, возникший в детстве.
Портрет: в семье была либо гиперопека (чрезмерная забота), либо гипоопека (недостаточная забота). В первом случае детство видится сладостной сказкой, расставаться с ней не хочется. Подобно Питеру Пэну, человек не хочет взрослеть. В случае гипоопеки взрослеть «хочется, но не можется»: семечко не получило достаточно питательных веществ и не может прорасти. В обоих случаях это незрелая, достаточно инфантильная личность.
Читайте также: Виртуальный улов. Знакомства в интернете: как понять истинные цели
Внешне такой человек может быть взрослым и социально успешным, но внутри него сидит Ребенок, требующий любви и внимания, и временами он вырывается наружу. Это напоминает эпизод из фильма «Любовь-морковь 2»: маленький сын оказывается в теле отца (Гоша Куценко), приходит на работу, сидит в деловом костюме в собственном кабинете. А по кабинету летают самолетики, ездят паровозики…
Задача: повзрослеть.
2. ФОТО СВОЕГО РЕБЕНКА
Послание к миру: «Мой ребенок – это я. Я – это мой ребенок». Немного напоминает Людовика-Солнце: «Государство – это я!»
Чего не хватает: потеря себя и ориентиров в жизни, как следствие – нереализованность. Это ведет к слиянию с ребенком, к попытке заполнить свою жизнь им.
Ожидания от мира: пусть ребенок сделает то, что не сдалал(а) я. И тогда все меня зауважают!
Портрет: собственная нереализованность заставляет «делать ставки» на ребенка, он становится единственным светом в окошке. Как часто мама-балерина, не состоявшаяся в профессии, стремится сделать из своей дочки звезду балета! И дочке повезет, если ее желание и способности совпадут с мамиными, тогда из нее на радость нам может получиться Диана Вишнева. А если – нет?.. Со стороны такой родитель кажется любящим и заботливым, но это нездоровая любовь, а потребительская, за ней стоит эгоцентризм родителя. Подобное использование ребенка для самоутверждения называется «нарциссическим расширением».
Задача: жить своей жизнью.
Читайте также: Правила виртуальных знакомств. Кто, как и зачем ищет спутника в интернете
3. ФОТО С ПАРТНЕРОМ
Послание к миру: «У меня есть отношения, смотрите все!»
Чего не хватает: любви и уверенности в том, что можешь быть любим.
Ожидания от других: признания своей ценности как женщины/мужчины.
Портрет: в глубине души сидит неуверенность в себе, она-то и компенсируется любовными отношениями. То есть если предыдущий тип использовал для решения своих проблем ребенка, называя это «любовью», то этот тип делает то же самое с партнером. Этот механизм формируется в возрасте трех – пяти лет на так называемой эдипальной стадии, когда ребенок должен получить подтверждение своей ценности и того, что он любим. Если этого не происходит, он ищет подтверждения ценности за счет партнера. Так, согласно воспоминаниям сводной сестры, Эдит Пиаф в юности говорила: «Если на тебя смотрит парень, ты не пустое место. Ты существуешь».
Задача: чувствовать свою ценность вне зависимости от партнерских отношений.
Читайте также: Как определить в начале отношений, насколько подходит партнер
4. ПЕЙЗАЖ ИЛИ ДРУГОЙ ПРИРОДНЫЙ ЭЛЕМЕНТ
Послание к миру: «Пора в отпуск!»
Чего не хватает: внутренней гармонии. Возможно, это просто следствие накопившейся усталости.
Ожидания от других: таким людям нередко нужно внешнее подтверждение того, что они имеют право на отдых.
Портрет: внутренняя гармония нарушена, отсюда – интуитивное стремление к природе. Подобный выбор аватарки больше говорит не о глубинных психологических качествах, а о ситуации хронического стресса. Поэтому нужно понять: что к ней приводит? Возможно, конфликтная атмосфера в семье? Перегрузки на работе? Или же жизнь в мегаполисе – не для вас? А может, вы просто давно не были в отпуске?
Задача: хорошо отдохнуть, желательно – в уединении.
5. ОФИЦИАЛЬНОЕ ФОТО
Особенно если это фото, свидетельствующее о социальной успешности (на фоне машины, рядом со «звездой», в модном платье…).
Послание к миру: «Я успешен!»
Чего не хватает: неуверенность в своей «хорошести».
Ожидания от других: получение любви через признание успешности.
Портрет: в детстве такого ребенка хвалили за формальные поступки (за пятерки, грамоты), но ему не хватало безусловной любви – просто за то, что он есть. В результате сформировался механизм тождественности: «Я есть мои поступки», «Внутреннее равно внешнему». То есть, если у меня носки от «Версаче» – я хороший, а если другой марки – плохой. Это определенный вид нарциссизма, заставляющий гнаться за внешними достижениями, при том что внутри сидит одинокий недолюбленный ребенок. В поведении – закрытость. Даже если это общительный человек, в действительности близко к себе он никого не подпускает. А в душе – много одиночества, и со временем успехи в работе и модные сумочки радуют все меньше и меньше…
Читайте также: Как защититься от троллей в интернете
Задача: перенести свое внимание из внешнего поля на внутренний мир, уважать не только «материальные» ценности.
6. СМЕШНОЕ ФОТО
Послание к миру: «Давай посмеемся! Не надо ничего принимать всерьез…»
Чего не хватает: легкости. Внутри есть какая-то непрожитая грусть, от которой хочется сбежать.
Ожидания от других: поддержки механизма засмеивания и обесценивания чувств.
Портрет: классическая роль Шута, формируется к шести годам. В поле семьи было много напряжения, ребенок стал громоотводом, своими шутками или нелепостью разряжая атмосферу. Механизм формирования замечательно показан в фильме Н. С. Михалкова «12»: герой Михаила Ефремова, эстрадный исполнитель, рассказывает, как в детстве пытался рассмешить умирающую бабушку, чтобы облегчить ее боль, и с тех пор продолжает добиваться улыбок уже от зрителей. «Шут» использует механизм засмеивания и обесценивания как уход от эмоциональной боли. Иногда это идет на пользу и помогает решить проблему, но порой приводит к побегу от нее.
Задача: научиться смотреть проблемам в лицо.
7. ОТСУТСТВИЕ ФОТО
Послание к миру: «Не смотри на меня!»
Чего не хватает: безопасности. Если, конечно, отсутствие фото не связано с объективными причинами (это известный человек или же он работает в «органах»).
Ожидания от других: уважение к границам. Внимание – но безопасное.
Портрет: скрытность и недоверчивость, порой подозрительность, желание контролировать ситуацию. Создается впечатление, что человек увлекся игрой «Я тебя вижу, а ты меня – нет». Часто используются двойные послания: «Я хочу контакта с тобой, но так, чтобы между нами не было контакта», «Я три дня скакал за вами, чтобы сказать, как вы мне безразличны!» и т. д. Все это – следствие сформировавшегося в детстве базового недоверия к миру. При этом недоверие может быть как следствием личного опыта ребенка (родители не выполняли свои обещания), так и традицией всей семьи. Например, ваша семья могла пострадать от репрессий тридцатых годов, и память об этом заставляет вас до сих пор воспринимать мир враждебно.
Задача: научиться раскрываться и понять, что мир не злой. Да, он может быть таким – иногда. Но «иногда» не значит – «всегда».
СТЕСНИТЕЛЬНЫЙ СУПЕРГЕРОЙ
Виртуальное пространство всемирной паутины дает возможность не только самовыразиться, но и создать новый «образ себя» – такой, каким очень хочется стать или хотя бы казаться. Созданием «усовершенствованного “я”» нередко увлекаются люди, страдающие комплексом неполноценности.
Анонимность интернет-пространства дает стеснительным и не уверенным в себе пользователям возможность попробовать новый стиль общения и освоить стратегии поведения, совершенно не характерные для них в «реальной» жизни. Такие люди, как правило, выбирают в качестве аватарки изображения супергероев и коварных соблазнительниц. Проблема в том, что эйфория, вызванная успехами «усовершенствованного “я”» в сети, никак не способствует избавлению от неуверенности в реальной жизни. Скорее, наоборот, контрастность ощущений и впечатлений усиливает тревогу от общения «в реале», которая, в свою очередь, приводит к депрессивным состояниям.
Татьяна Волкова,
психолог, имидж-консультант, коуч
Полезно? Поделись статьей в Вконтакте или Фейсбук в 1 клик!
Молекулярные основы выпрямления переходного тока в электрическом синапсе
Sci Adv. 2020 июл; 6 (27): eabb3076.
Отделение неврологии, Медицинский факультет Университета Коннектикута, Фармингтон, Коннектикут 06030, США.
* Текущий адрес: Кафедра патофизиологии, Школа базовой медицины и Медицинский колледж Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай.
† Текущий адрес: Комплексный онкологический центр Розуэлл-Парк, Отделение патологии, Элм и Карлтон-стрит, Буффало, Нью-Йорк 14263, США.
Поступило 14.02.2020 г .; Принято 20 мая 2020 г.
Copyright © 2020 Авторы, некоторые права защищены; эксклюзивный лицензиат Американской ассоциации содействия развитию науки. Нет претензий к оригинальным работам правительства США. Распространяется по некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (CC BY-NC). Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution, которая разрешает использование, распространение и воспроизведение на любом носителе в течение длительного времени. в результате будет использовано , а не для коммерческой выгоды и при условии, что оригинальная работа правильно процитирована.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.Abstract
Выпрямляющие электрические синапсы (РЭС) существуют у всех видов животных, но их механизм выпрямления в значительной степени неизвестен. Мы исследовали, почему RES между премоторными интернейронами AVA и холинергическими мотонейронами A-типа (A-MN) в цепи выхода Caenorhabditis elegans проводят переходные токи ( I j ) только в антидромном направлении. Эти RES состоят из иннексина UNC-7 в AVA и иннексина UNC-9 в A-MN.UNC-7 имеет несколько изоформ, различающихся длиной и последовательностью аминоконца. В гетерологичной системе экспрессии только одна изоформа UNC-7, UNC-7b, может образовывать гетеротипические щелевые соединения (GJ) с UNC-9, которые сильно отдают предпочтение I j в направлении от UNC-9 к UNC-7. Нокаут unc-7b, сам по себе почти устранял I, j , тогда как AVA-специфическая экспрессия UNC-7b по существу устраняла дефект связывания мутанта unc-7 .Нейтрализация заряженных остатков на аминоконце UNC-7b отменяет свойство ректификации GJs UNC-7b / UNC-9. Наши результаты предполагают, что свойство выпрямления является результатом электростатических взаимодействий между заряженными остатками на аминоконце UNC-7b.
ВВЕДЕНИЕ
Щелевые контакты (ЩК) — это межклеточные каналы, которые могут обеспечивать прохождение ионов и сигнальных молекул. GJs между нейронами обычно называют электрическими синапсами (ES), потому что они позволяют току течь между нейронами.Хотя большинство ES, о которых сообщалось на сегодняшний день, проводят токи в двух направлениях, накопление доказательств указывает на то, что многие ES выпрямляют ES, которые позволяют току течь преимущественно или исключительно в одном направлении. Выпрямляющие ES были впервые обнаружены у раков ( 1 ), а затем обнаружены у дополнительных видов костистых ( 2 , 3 ), мух ( 4 ), миног ( 5 ), пиявок ( 6 , ). 7 ), крабы ( 8 ), черви ( 9 ) и крысы ( 10 ).Выпрямление ES может быть гораздо более распространенным, чем то, что было оценено, потому что их существование может быть обнаружено только с помощью электрофизиологической записи ( 10 , 11 ). Различные физиологические функции были приписаны выпрямлению ES, включая действие в качестве детекторов совпадений ( 12 , 13 ), содействие кооперативности афферентов с пресинаптическими нейронами ( 2 ) и усиление химической синаптической передачи в смешанной электрохимической синапсы ( 9 ).Поскольку выпрямление ES может комплексно влиять на функции нервной цепи, важно понимать молекулярные механизмы выпрямления.
GJs состоят из коннексинов у позвоночных и иннексинов у беспозвоночных. Каждый GJ представляет собой комплекс двух полуканалов, которые также известны как коннексоны или иннексоны в зависимости от молекулярного состава. В зависимости от того, имеют ли два полуканала идентичный молекулярный состав, GJs классифицируются на гомотипические и гетеротипические GJ.Молекулярные составы были предложены только для нескольких выпрямляющих ЭС, в том числе между гигантским волокном и мотонейронами или интернейронами у Drosophila ( 4 ), между слуховыми афферентами и клетками Маутнера у золотой рыбки ( 2 ) и между премоторными интернейроны и холинергические мотонейроны в Caenorhabditis elegans цепи выхода ( 9 ). Все эти выпрямляющие ES являются гетеротипическими GJ либо двух разных белков GJ ( 2 , 9 ), либо двумя разными изоформами одного белка GJ ( 4 ).Однако неизвестно, каким образом переходные токи ( I j ) проводятся предпочтительно в одном направлении при выпрямлении ES. Одно недавнее исследование показало, что внутриклеточный каркасный белок локализуется и функционирует исключительно на постсинаптической стороне ESs в системе клеток Маутнера у рыбок данио ( 14 ), но неизвестно, играет ли асимметричная локализация каркаса роль в ректификации. В другом исследовании ( 15 ) изучали эффекты замены N-концов (перед первым трансмембранным доменом или TM1) между двумя разными изоформами иннексина Shaking B, Neural +16 Shaking B (ShakBN16) и Shaking B Lethal (ShakBL). , на функцию GJ с использованием системы гетерологической экспрессии ооцитов Xenopus .ShakBN16 и ShakBL являются предполагаемыми пре- и постсинаптическими белками GJ, соответственно, выпрямляющих ESs в системе волокон гигантских мух ( 4 ). Замена N-конца ShakBL на ShakBN16 заставляла химерный белок (SBL-NTN16) функционировать подобно ShakBN16 в гетеротипных GJs с ShakBL. Однако замена N-конца ShakBK16 на ShakBL не заставляла химерный белок функционировать подобно ShakBL в гетеротипических GJs с ShakBN16. Кроме того, гомотипные GJs SBL-NTN16 напоминали таковые ShakBL вместо ShakBN16 в зависимости от трансъункционального напряжения ( В, j ) и свойств дезактивации I j ( 15 ).Из этих результатов трудно сказать, играет ли N-конец роль в ректификации. Эта трудность усугубляется тем фактом, что различия в аминокислотных последовательностях между ShakBL и ShakBN16 не ограничиваются N-концом, а простираются до TM2.
ЩК между парой премоторных интернейронов, известных как AVA, и холинергические двигательные нейроны A-типа (A-MN) в схеме выхода из C. elegans представляют уникальную возможность для раскрытия молекулярного механизма электрического выпрямления по ряду причин. .Во-первых, они проводят I j почти исключительно в одном направлении (от A-MN к AVA) ( 9 ). Во-вторых, их функциональные свойства могут быть проанализированы in vivo с использованием двухнейронных методов фиксации напряжения и тока ( 9 ). В-третьих, их молекулярный состав на пре- и постсинаптической стороне может быть генетически изменен клеточно-специфическим образом. Предыдущие исследования установили, что эти GJ состоят из иннексина UNC-7 в AVA и иннексина UNC-9 в A-MN ( 9 , 16 ).Однако UNC-7 имеет 10 различных изоформ от альтернативного сплайсинга. Неизвестно, какая изоформа UNC-7 важна для электрической связи и почему эта связь сильно выпрямляется. Здесь мы рассмотрели эти два вопроса посредством анализа биофизических свойств гомотипических и гетеротипных GJ, образованных UNC-9 и UNC-7 в ооцитах Xenopus , и анализа эффектов нокаута, нокаута, нокдауна и мутантного спасения изоформ-специфичных или нацеленных на клетки unc-7 о функции выпрямляющих ЭС in vivo.Наши результаты привели к идентификации конкретной изоформы UNC-7, UNC-7b, в качестве ключевого компонента выпрямляющих ES в цепи выхода червя, а также к предложению модели, в которой шарнирно-рецепторный механизм с участием UNC- 7b N-конец обеспечивает исправление. Это исследование показывает корреляцию ректификационных свойств между GJs in vivo и в гетерологичной системе экспрессии и представляет молекулярную модель механизма ректификации. Поскольку основные структурные и функциональные свойства сохраняются между GJs на основе иннексина и коннексина ( 17 , 18 ), это исследование может предоставить понимание молекулярных механизмов ректификации GJ в целом.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Гомотипические ЩК, образованные UNC-7 и UNC-9, различаются по биофизическим свойствам
Чтобы понять молекулярный механизм ректификации I j между AVA и A-MN, мы начали с анализа биофизических свойств гомотипных GJs, образованные UNC-7 и UNC-9 в ооцитах Xenopus . В то время как UNC-9 имеет только одну функциональную изоформу (другая изоформа, указанная на веб-сайте Wormbase, вряд ли образует GJ, поскольку у нее отсутствует N-конец, TM1 и часть первой внеклеточной петли), UNC-7 имеет 10 изоформ (www.wormbase.org). Различные изоформы UNC-7 могут быть разделены на шесть групп в зависимости от их различий в N-конце: UNC-7a / j, UNC-7b, UNC-7c, UNC-7d / e, UNC-7f / g и UNC- 7ч / я (). Сгруппированные вместе изоформы различаются только двумя последовательными аминокислотными остатками, валином (V) и глутамином (Q) во внутриклеточной петле, которые присутствуют в изоформах a, b, c, d, f и h, но не в остальных изоформах. Длина N-конца перед TM1 сильно различается среди вариантов UNC-7, от 24 аминокислот в UNC-7c до 168 аминокислот в UNC-7d / e ().UNC-7c похож на UNC-9 в длине конца N ().
Изоформы UNC-7 различаются в основном длиной и аминокислотной последовательностью N-конца.( A ) Диаграмма, показывающая топологию мембраны UNC-7 и расположение вариабельных остатков валина и глутамина во внутриклеточной петле. ( B ) Диаграмма, показывающая различия концов UNC-7 N. Линии идентичного цвета представляют идентичные аминокислотные последовательности. аа, аминокислота. ( C ) Выравнивание N-концов различных изоформ UNC-7.( D ) Выравнивание концов N UNC-7c и UNC-9.
Мы проанализировали гомотипические GJs, образованные UNC-9 и шестью различными изоформами UNC-7 (a, b, c, e, f и h), представляющими шесть групп. В каждой паре ооцитов, экспрессирующих идентичный иннексин, к одному ооциту (ооцит № 1) прикладывали серию ступеней мембранного напряжения ( В, м ) от напряжения удержания -30 мВ, в то время как другой ооцит (ооцит № 2) поддерживалась постоянной на -30 мВ до рекордного значения I j (). V j определяется как « V m ооцита № 2 — V m ооцита № 1». Отношение между установившейся проводимостью перехода ( G j ) и V j было приспособлено к функции Больцмана (см. Материалы и методы) для количественной оценки V 0 ( V j , при котором G j составляет половину максимального значения), G jmin (минимальное значение G j ) и A (константа кооперативности).Два разных антисмысловых олигонуклеотида коннексина 38 (Cx38) всегда совместно инъецировали с комплементарными РНК (кРНК) unc-7 и unc-9 для устранения потенциальных осложнений со стороны эндогенных I j (подробности в материалах и методах). По крайней мере, одну пару контрольных ооцитов, которым инъецировали только два олигонуклеотида, анализировали электрофизиологически в каждый день записи. Эндогенные I j у них никогда не обнаруживались, о чем свидетельствует запись одного такого контрольного эксперимента (рис.S1).
Биофизические свойства гомотипических ЩК UNC-7 и UNC-9, экспрессированных в ооцитах Xenopus .( A ) Схема эксперимента с ооцитами. ( B ) Представитель I j следов. ( C ) Нормализованные G j — V j отношения. ( D ) Сравнение V 0 , G jmin и A . ( E ) Сравнения постоянных времени деактивации кривых I j при V j -110 и +110 мВ, которые были подогнаны к двухчленной экспоненциальной модели (красные пунктирные линии).В (D) и (E) значимые различия между левыми и правыми кривыми G j — V j обозначены знаками решетки (#) (парный тест t ), тогда как между разными ГС в виде звездочек (*) и треугольников (Δ) для левой и правой кривых G j -V j соответственно (двусторонний смешанный дисперсионный анализ ANOVA с апостериорным критерием Тьюки). P <0,05, P <0,01 и P <0.001 обозначаются одним, двумя и тремя символами соответственно. Число зарегистрированных пар ооцитов ( n ) составляло 16 UNC-7a, 10 UNC-7b, 12 UNC-7c, 9 UNC-7e, 10 UNC-7f, 11 UNC-7h и 9 UNC-9.
Все иннексины были способны образовывать гомотипические ЩК в ооцитах Xenopus . Эти GJ отображали двунаправленно симметричные соотношения I j () и колоколообразные G j — V j () в ответ на положительные и отрицательные шаги V j .Однако они часто отличались очевидной зависимостью V j (наклон кривой G j — V j ) () и V 0 , G jmin и Параметры (и таблица S1). Они также различались скоростью деактивации I j , что было определено количественно путем подгонки кривых I j при -110 и +110 мВ, V j к двум экспонентам (и таблица S2).На основе очевидной зависимости V, j и G jmin (), GJs можно грубо разделить на две группы. Группа 1 включает UNC-7c и UNC-9, а группа 2 включает остальные изоформы UNC-7. Группа 1 показала гораздо более слабую зависимость V j и гораздо большую G jmin , чем группа 2, на что указывают количественные сравнения (). Поскольку N-конец короче в группе 1, чем в группе 2, эти наблюдения предполагают, что более длинный N-конец может давать более высокую степень зависимости V j и меньшую G jmin .Однако это не простая линейная зависимость между длиной N-конца и зависимостью V j . Например, UNC-7a был меньше V, j -зависимым, чем UNC-7e и UNC-7h, но его N-конец имеет промежуточную длину. В совокупности наши наблюдения предполагают, что зависимость V j зависит как от длины, так и от аминокислотной последовательности N-конца.
Гетеротипический UNC-7b / UNC-9 GJ является сильным выпрямителем
Далее мы соединили ооциты, экспрессирующие UNC-9, с ооцитами, экспрессирующими различные изоформы UNC-7, и зарегистрировали I j из обоих ооцитов.Эти гетеротипные ГК UNC-7 / UNC-9 часто отображали двунаправленно асимметричные I j в ответ на положительные и отрицательные шаги V j , при этом I j следов от одного ооцита отражали те, что были от одного ооцита. другой из пары ().
Биофизические свойства гетеротипических ЩК UNC-7 и UNC-9, экспрессируемых в ооцитах Xenopus .( A ) Представитель I j следов. ( B ) Нормализованные отношения G j — V j на основе I j , записанных из ооцита UNC-7.( C ) Сравнение V 0 , G jmin и A . Значительные различия между левыми и правыми кривыми G j — V j обозначены знаками решетки (#) (парный тест t ), тогда как между разными GJ — звездочками (*) и треугольниками ( Δ) для левой и правой кривых G j -V j соответственно (двухфакторный смешанный дисперсионный анализ с апостериорным тестом Тьюки).( D ) Сравнение пиков I j — V j кривых между различными GJ. Пик I j был нормализован по той же записи на +110 или -110 мВ V j . ( E ) Сравнение соотношений пиков I j (-110 более 110 мВ) для I j , зарегистрированных для ооцита UNC-7. В (D) и (E) значимые отличия от некорректирующих UNC-7a / UNC-9 GJ отмечены звездочками (* P <0.01 и *** P <0,001) на основе двустороннего смешанного (D) или одностороннего (E) дисперсионного анализа с апостериорным тестом Тьюки. Количество зарегистрированных пар ооцитов ( n ) составило 12 UNC-7a / UNC-9, 13 UNC-7b / UNC-9, 14 UNC-7c / UNC-9, 9 UNC-7e / UNC-9, 15 UNC. -7f / UNC-9 и 12 UNC-7h / UNC-9.
Для простоты мы сосредоточимся на I j , записанном из ооцита UNC-7, и производном соотношении G j — V j . Гетеротипные GJs можно разделить на две основные группы в зависимости от того, являются ли восходящие и нисходящие части кривой G j — V j грубо симметричными.Группа 1, включая ГК UNC-7f / UNC-9 и UNC-7h / UNC-9, показала симметричное соотношение G j — V j , тогда как группа 2, включая оставшиеся гетеротипные GJ, показала асимметричный G j — V j соотношение (). Группа 2 может быть дополнительно разделена на две подгруппы в соответствии с положением V j , соответствующего кажущемуся G jmax . Он был смещен влево (отрицательный диапазон В j ) с UNC-7b / UNC-9, но вправо (положительный диапазон В j ) с UNC-7e / UNC-9, UNC-7c / UNC-9 и UNC-7a / UNC-9 ().Различия между отношениями G j — V j различных GJ можно лучше оценить при количественном сравнении параметров V 0 , G jmin и A . из подгонки Больцмана (и таблицы S3). Гетеротипические GJ также различались по скорости активации и дезактивации, что было определено количественно путем сопоставления кривых I j при -110 и +110 мВ V j экспонентам (рис.S2A и таблица S4). Поскольку молекулярные различия между этими GJ ограничиваются вариациями N-конца UNC-7, эти результаты показывают, что N-конец UNC-7 играет важную роль в определении зависимости V j и других биофизических свойств гетеротипических GJ. . Примечательно, что UNC-7b / UNC-9 — единственный с очевидным G jmax при отрицательном V j . Учитывая, что V j = V m ооцитов UNC-7 — V m ооцитов UNC-9, как мы определили, результаты показывают, что UNC-7b / UNC-9 GJs больше активен, чем любой из других гетеротипических ЩК в отрицательном диапазоне V j (когда ооцит UNC-9 более деполяризован, чем ооцит UNC-7).
ГДж UNC-7b / UNC-9 отличались от других гетеротипных ГД более заметно по пику I j , который был измерен в идентичном временном окне как для положительного, так и для отрицательного V j шагов ( рис. S2B). В то время как другие допускали двунаправленный пик I j , гетеротипные GJ UNC-7b / UNC-9 проводили пик I j почти исключительно в направлении от ооцита UNC-9 к ооциту UNC-7 (), на что указывает обнаружение большого I j из ооцита UNC-7 при отрицательном V j , но из ооцита UNC-9 при положительном V j .Разницу в выпрямлении пиков I j между UNC-7b / UNC-9 и другими гетеротипными GJ легче оценить, сравнив нормализованные соотношения I j — V j () и отношение пика I j при −110 и +110 мВ (). Поскольку пик I j GJs UNC-7a / UNC-9 был симметричен между положительным и отрицательным диапазоном V j , использовалась их кривая I j — V j в качестве эталона для статистических сравнений, которые показывают, что пик I j ГДж UNC-7b / UNC-9 и UNC-7h / UNC-9 значительно выпрямляется, причем степень исправления в первом случае намного выше, чем в первом. последний ().Расчет пикового соотношения I j (-110/110 мВ) для записей со стороны UNC-7 показывает, что это отношение было значительно выше в ГДж UNC-7b / UNC-9 и UNC-7h / UNC-9. чем в UNC-7a / UNC-9 ГДж (). В редких случаях пик I j гетеротипных GJ UNC-7h / UNC-9 и UNC-7f / UNC-9 также демонстрировал сильное выпрямление, на что указывает диаграмма рассеяния в образце I j . следы на рис. S3. UNC-7f и UNC-7h больше похожи на UNC-7b по длине N-конца, чем другие изоформы UNC-7 ().Поскольку GJ UNC-7b / UNC-9 показали сильное выпрямление как в устойчивом состоянии, так и в пике I j и способствовали потоку I j в том же направлении, что и in vivo (из A-MN, экспрессирующих UNC- 9 до AVA, экспрессирующего UNC-7) ( 9 ), наши результаты предполагают, что UNC-7b, вероятно, является ключевым компонентом GJ UNC-7 / UNC-9 между AVA и A-MN.
UNC-7b важен для связывания AVA / A-MN
Чтобы подтвердить предполагаемую роль UNC-7b в связывании AVA / A-MN, мы сначала экспрессировали репортер зеленого флуоресцентного белка (GFP) под контролем unc- 7b промотор (P unc-7b ), чтобы сделать вывод о характере экспрессии UNC-7b.В этом эксперименте использовали подход гомологичной рекомбинации для включения всей потенциальной последовательности P unc-7b . В частности, мы сконструировали плазмиду, которая включала короткий фрагмент последовательности ДНК перед сайтом инициации unc-7b и часть первого экзона unc-7b , слитого в рамке считывания с GFP. Этой плазмиде совместно инъецировали фосмиду, содержащую последовательность геномной ДНК размером 32,7 т.п.н. перед сайтом инициации unc-7b , в существующий штамм с AVA, меченным mStrawberry ( 9 ).Гомологичная рекомбинация между плазмидой и фосмидой in vivo будет приводить к транскрипционному слиянию Punc-7b :: GFP (слева). У трансгенных червей экспрессия GFP наблюдалась во многих нейронах головы, включая два интернейрона AVA (справа), что позволяет предположить, что UNC-7b экспрессируется в AVA.
UNC-7b выражается в AVA и важен для связывания AVA / A-MN.( A ) unc-7b выражение в AVA. Слева: диаграмма, показывающая использование подхода гомологичной рекомбинации in vivo для создания транскрипционного слияния P unc-7b :: GFP.Плазмида, содержащая 525 п.н. проксимального промотора unc-7b (P unc-7b ) и часть первого экзона unc-7b , слитого в рамке считывания с GFP, была коинъектирована с фосмидой WRM0613cD09, которая содержит весь ген unc-7 в существующий штамм с AVA, меченным mStrawberry. Справа: экспрессия GFP наблюдалась в двух интернейронах AVA, меченных mStrawberry. ( B ) Схема и изображение, показывающие идентификацию VA5 и AVA на основе анатомического местоположения и маркировки GFP, соответственно, в электрофизиологических записях.( C ) Выбивка unc-7b устранила большую часть I j между AVA и VA5. ( D ) AVA-специфическая экспрессия UNC-7b дикого типа, но не UNC-7a, в значительной степени устраняла дефект связывания нуль-мутанта unc-7 (e5) . Данные в (C) и (D) были статистически проанализированы вместе (двухфакторный смешанный ANOVA). Показаны статистически значимые различия по сравнению с диким типом (C) или unc-7 (e5) (D) (* P <0,05, *** P <0.001). Количество проанализированных червей ( n ) было 7 дикого типа, 6 unc-7b нокаут, 7 unc-7 (e5) , 7 unc-7 (e5) с спасением UNC-7b, специфичным для AVA. и 11 unc-7 (e5) с спасением UNC-7a, специфичным для AVA.
Затем мы проанализировали влияние нокаута unc-7b на соединение AVA / A-MN у частично иммобилизованных червей. unc-7b был нокаутирован у червей дикого типа путем мутации кодона лизина 14 (K14) до преждевременной остановки с использованием подхода CRISPR-Cas9.Эксперименты с фиксацией напряжения с двумя нейронами были проведены для записи I j между AVA и VA5, который был выбран в качестве представителя A-MN, потому что его легче идентифицировать на основе анатомии, чем другие A-MN (слева) . Идентификация AVA была основана на экспрессии GFP, специфичной для AVA (справа). У червей дикого типа I j , зарегистрированные из AVA, были преимущественно во внутреннем направлении, тогда как червя из VA5 были преимущественно в наружном направлении в ответ на V j шагов от -80 до +80 мВ ( ). I j между AVA и VA5 не обнаруживались в unc-7 (e5) () и уменьшались более чем на 70% в нокаутном штамме unc-7b по сравнению с штаммом дикого типа (). Различные эффекты мутации unc-7 (e5) и нокаута unc-7b на электрическую связь обусловлены различиями в молекулярном повреждении unc-7 . В то время как UNC-7b был селективно элиминирован в нокаутном штамме unc-7b , все изоформы UNC-7 отсутствуют в мутанте unc-7 (e5) , что является предполагаемым нулевым результатом в результате преждевременного стоп-кодона в штамме предсказал первую внеклеточную петлю UNC-7 ( 19 ).Дефицит I j между AVA и VA5 в мутанте unc-7 (e5) был существенно устранен, когда UNC-7b дикого типа экспрессировался специфически в AVA с использованием подхода Cre-LoxP (). Чтобы определить, зависит ли спасительный эффект от конкретной изоформы UNC-7, мы протестировали эффект направленной на AVA экспрессии UNC-7a в AVA unc-7 (e5) , используя тот же подход. UNC-7a был выбран потому, что более раннее исследование показало, что его предполагаемая экспрессия в небольшом количестве нейронов, включая AVA, может восстанавливать дефект локомоции у мутанта unc-7 ( 16 ).Неожиданно, хотя UNC-7a мог образовывать функциональные гетеротипические GJ с UNC-9 в системе экспрессии ооцитов Xenopus , это не вызывало какого-либо заметного улучшения связывания AVA / A-MN у мутанта unc-7 (e5) . (). Поэтому мы спросили, можно ли правильно выразить UNC-7a в AVA, пометив его тегом GFP. Мы обнаружили, что, хотя UNC-7a :: GFP напоминал UNC-7a в формировании как гомотипических, так и гетеротипических GJ (с UNC-9) в системе экспрессии ооцитов Xenopus (рис.S4A), сигнал GFP не мог быть обнаружен в AVA после того, как слитый белок был экспрессирован с использованием подхода Cre-LoxP (рис. S4B). Неспособность обнаружить экспрессию UNC-7a :: GFP в AVA, вероятно, объясняет неспособность UNC-7a устранить дефект связывания AVA / A-MN у мутанта unc-7 (e5) . Вместе наши результаты показывают, что UNC-7b в AVA важен для соединения AVA / A-MN.
Ректификация зависит от заряженных остатков на N-конце UNC-7b
Почему UNC-7b уникален тем, что может образовывать сильно выпрямляющие GJ с UNC-9? Чтобы ответить на этот вопрос, мы исследовали потенциальную роль некоторых заряженных аминокислотных остатков на N-конце UNC-7b.Наше внимание привлекли два триплета противоположно заряженных аминокислотных остатков (HKK и DDD) на N-конце UNC-7 (). Хотя эти два триплета заряженных остатков не уникальны для UNC-7b (), электростатические взаимодействия между ними могут стабилизировать конформацию, которая позволяет уникальному N-концу UNC-7b (шар) связываться с рецепторным сайтом, чтобы блокировать поры GJ. (). Чтобы проверить эту гипотезу, мы нейтрализовали два триплета заряженных остатков в UNC-7b (H 45 K 46 K 47 и D 70 D 71 D 72 ) независимо замещением аланина и исследовали влияние мутаций на биофизические свойства ЩК UNC-7b / UNC-9 с использованием системы экспрессии ооцитов Xenopus .Свойство исправления было отменено мутацией DDD до AAA и сильно скомпрометировано мутацией HKK до AAA (). Мы подозревали, что неполное ингибирующее действие мутации HKK на AAA могло быть связано с другими молекулярными структурными различиями между исходными остатками и остатками аланина. Среди незаряженных аминокислотных остатков фенилаланин (F) и глутамин (Q) наиболее близки по структуре к H и K соответственно. Мы обнаружили, что замена остатков HKK в UNC-7b на FQQ по существу отменяет свойство ректификации GJs UNC-7b / UNC-9 ().
Ректификация гетеротипных GJ UNC-7b / UNC-9 зависит от заряженных остатков на N-конце UNC-7b.( A ) Аминокислотная последовательность N-конца UNC-7b. ( B ) Модель литника UNC-7b / UNC-9 GJ. N-конец UNC-7b (мяч) может связываться с предполагаемым рецепторным сайтом V j -зависимым образом, закрывая GJ. Красные линии представляют собой электростатические взаимодействия между двумя триплетами противоположно заряженных остатков [остатки «HKK» и «DDD» в (A)], тогда как знак плюс (+) представляет остатки K 13 K 14 в UNC- 7b.( C ) Представитель I j следов, показывающих эффекты нейтрализации заряженных остатков в UNC-7b. ( D ) Нормализованное I j — V j отношения пика I j . Звездочка (*) указывает P <0,001 по сравнению с диким типом (те же данные в двухфакторном смешанном ANOVA). Зарегистрированные пары ооцитов (из ооцитов UNC-7b / UNC-9) были 10/9 DDD AAA, 13/11 HKK AAA, 11/10 HKK FQQ и 11/9 KK AA.( E ) Типичные кривые I j , демонстрирующие эффекты перестановки местами двух триплетов противоположно заряженных аминокислотных остатков. ( F ) Пик I j — V j отношения. Пики , , , были нормализованы по пикам каждой записи на +110 или -110 мВ. Регистрируемые пары ооцитов составляли от 5 до 10 на группу.
Затем мы проверили, может ли UNC-7b по-прежнему придавать свойство ректификации гетеротипным GJ с UNC-9 после переключения положений двух триплетов заряженных остатков (HKK и DDD).Мы обнаружили, что мутировавший UNC-7b (DDD / KKH) не сохранил способность давать ректификацию (). Мы задавались вопросом, может ли комбинация переключения местоположений DDD и HKK и замены их другими аналогично заряженными остатками позволить UNC-7b восстановить свою способность к исправлению путем тестирования эффектов мутаций EEE / KKK и DDD / KKK. Однако эти две мутировавшие изоформы UNC-7b также не позволяли UNC-7b восстанавливать свою способность обеспечивать ректификацию (). Эти результаты предполагают, что расположение двух триплетов заряженных остатков также важно для правильного функционирования UNC-7b.
Наконец, мы исследовали эффект нейтрализации двух остатков лизина (K 13 K 14 ) на уникальном N-конце UNC-7b. Мы обнаружили, что мутация привела к уменьшению пика I j , зарегистрированного из ооцита UNC-9, но не из ооцита UNC-7b в гетеротипических GJs UNC-7b / UNC-9 (). Поскольку пик I j , зарегистрированный для ооцитов UNC-7b и UNC-9, имел идентичную движущую силу, но был результатом деполяризации ооцита UNC-9 и гиперполяризации ооцита UNC-7b соответственно, результаты предполагают, что присутствие эти два остатка лизина могут модулировать GJ gating зависимым от напряжения мембраны способом.Предположительно, два остатка лизина могут увеличивать проводимость гетеротипического GJ из-за электростатической силы от отрицательного электрического поля гиперполяризации ооцитов UNC-7b ().
DISCUSSION
Это исследование показывает, что UNC-7b является ключевым компонентом выпрямляющих GJs между AVA и A-MNs в C. elegans, выходящих из нейронной цепи, и что его N-конец играет критическую роль в выпрямлении. Эти выводы подтверждаются множеством доказательств, включая сильно выпрямленные пиковые и стационарные I j ГДж UNC-7b / UNC-9 в системе экспрессии ооцитов Xenopus , соответствие I j направление ректификации между системой экспрессии ооцита и сцеплением AVA / A-MN, устранение дефекта сцепления мутанта unc-7 с помощью AVA-специфической экспрессии UNC-7b, дефицит связывания AVA / A-MNs в нокауте unc-7b деформация и потеря свойства ректификации после нейтрализации одного из двух кластеров противоположно заряженных остатков на N-конце UNC-7b.Учитывая, что ЩК наблюдаются во всей нервной системе C. elegans ( 20 ) и что как UNC-7, так и UNC-9 экспрессируются во многих нейронах ( 21 , 22 ), можно предположить, что UNC-7b может также придавать ректификационные свойства GJs в другом месте, чтобы влиять на динамику и поведение цепи.
Наши анализы мутирующих заряженных аминокислотных остатков на N-конце UNC-7b отдают предпочтение модели, в которой свойство ректификации GJ UNC-7b / UNC-9 зависит от шарнирно-рецепторного механизма ().Однако эта модель, по-видимому, противоречит тому факту, что гомотипные GJ UNC-7b были проводящими и что присутствующие HKK и DDD не являются уникальными для UNC-7b. Эти два очевидных конфликта могут быть урегулированы путем введения элементов UNC-9-индуцибельного рецепторного сайта в UNC-7b иннексон и ограничения размера шарика N-конца, чтобы соответствовать предполагаемому рецепторному сайту. В этой модели стыковка иннексона UNC-9 с иннексоном UNC-7b индуцирует предполагаемый рецепторный сайт для N-конца UNC-7b. Гомотипические ЩК UNC-7b являются проводящими из-за отсутствия рецепторного сайта.N-конец UNC-7c не может закупоривать GJ, поскольку в нем отсутствуют остатки HKK. Хотя другие изоформы UNC-7 также имеют два триплета заряженных остатков, их N-концевые шарики слишком велики, чтобы поместиться в рецепторном сайте. Наша модель также объясняет, почему UNC-7f и UNC-7h, которые имеют немного большую длину N-конца, чем UNC-7b, могут иногда вызывать сильную ректификацию I j , и почему два положительно заряженных остатка (K 13 и K 14 ) в UNC-7b может способствовать V j -зависимому стробированию.Хотя мы не можем исключить другие возможности, эта модель кажется наиболее правдоподобной для объяснения того, как UNC-7 и UNC-9 могут формировать сильно выпрямляющие гетеротипические GJs между AVA и A-MN.
Шариковая и рецепторная модель UNC-7 / UNC-9 гетеротипного гейтирования GJ.( A ) Гомотипические ЩК UNC-7b являются проводящими из-за отсутствия рецепторной стороны для N-концевого шарика. ( B ) Рецепторный сайт для шарика (представленный выемкой, обращенной к поре канала) индуцируется в полуканале UNC-7 за счет стыковки полуканала UNC-9.Взаимодействие между мячом и рецептором зависит от предполагаемых солевых мостиков между HKK и DDD (показано горизонтальными красными линиями) и полярности V j . Шарик связывается с рецепторным сайтом, блокируя поры канала, когда клетка UNC-7b более деполяризована, чем клетка UNC-9, но отделяется от рецепторного сайта, когда клетка UNC-9 более деполяризована, чем клетка UNC-7b. Заряженные остатки K 13 и K 14 в уникальной N-концевой последовательности UNC-7b (представленной красными крестами) влияют на GJ-стробирование в зависимости от напряжения мембраны.В частности, более гиперполяризованный мембранный потенциал клетки UNC-7b увеличивает проводимость GJ из-за более сильного притягивающего эффекта на N-концевой шар от отрицательного электрического поля, создаваемого гиперполяризацией клетки UNC-7b. ( C ) Концы N других изоформ UNC-7 (кроме UNC-7c) слишком велики, чтобы поместиться в рецепторном сайте. ( D ) UNC-7c не способствует ректификации, поскольку в нем отсутствуют остатки, необходимые для образования солевых мостиков HKK-DDD. Сплошные синие и черные сферы представляют собой N-конец UNC-7c и UNC-9 соответственно.Символы «плюс» и «минус» указывают, является ли мембранный потенциал одной клетки более деполяризованным или гиперполяризованным по сравнению с мембранным потенциалом контактирующей клетки.
Мутанты unc-7 и unc-9 демонстрируют нерегулярные изгибы тела и значительно сниженную активность движения вперед по сравнению с диким типом ( 16 , 23 ). Предыдущие исследования определили, что две пары премоторных интернейронов, AVB и AVA, играют центральную роль в локомоции. В то время как AVA важна для обратной локомоции и связывается с холинергическими A-MN как через химические синапсы, так и через ES, AVB важна для продвижения вперед и связывается с холинергическими MN типа B (B-MN) только через ES ( 24 ).Более раннее исследование идентифицировало первые три изоформы UNC-7, включая UNC-7a (UNC-7 L), UNC-7b (UNC-7S) и UNC-7c (UNC-7SR), и предположило, что GJ между AVB и B-MN состоят из UNC-7b в AVB и UNC-9 в B-MN ( 19 ). Однако биофизические свойства GJs между AVB и B-MN и предполагаемая роль UNC-7b в сцеплении не были исследованы электрофизиологическими анализами. Последующее исследование показало, что экспрессия UNC-7a дикого типа под контролем промотора nmr-1 или rig-3 может устранить дефект локомоции у мутанта unc-7 ( 16 ).Поскольку оба промотора активны в AVA, но не в AVB, результаты показывают, что UNC-7a может функционировать в AVA, чтобы установить связь AVA / A-MN. Однако мы обнаружили, что UNC-7a не оказывает спасающего эффекта на связывание AVA / A-MN у мутантных червей unc-7 , возможно, из-за нарушения экспрессии UNC-7a в AVA. В соответствии с нашими наблюдениями, более раннее исследование не обнаружило ни спасительного эффекта UNC-7a дикого типа на поведение мутанта unc-7 , ни экспрессии слитого белка UNC-7a :: GFP у трансгенных червей ( 19 ).Мы предполагаем, что спасительный эффект UNC-7a на дефекты локомоции у мутанта unc-7 в предыдущем исследовании ( 16 ) мог быть связан с функцией UNC-7a в других нейронах, потому что nmr-1 и Промоторы rig-3 , используемые для экспрессии, нацеленной на AVA, также проявляют активность в некоторых других нейронах (www.wormbase.org).
В результате этого исследования возникли два очевидных вопроса. Почему небольшое количество I j сохранялось в нокаутном штамме unc-7b ? Почему не удалось полностью устранить дефект связывания AVA / A-MN у мутанта unc-7 путем экспрессии UNC-7b специфически в AVA? Одна возможность состоит в том, что иннексон UNC-7 в AVA представляет собой гетеромерный комплекс, состоящий из UNC-7b и другой изоформы UNC-7, и присутствие любого из них по отдельности недостаточно для образования полностью функциональных GJ с UNC-9.Идентификация другой предполагаемой изоформы UNC-7, функционирующей в AVA, потенциально представляет собой серьезную проблему, учитывая большое количество изоформ UNC-7 и множество возможных экспериментов, необходимых для правильного рассмотрения каждой возможности. Тем не менее, нет никаких сомнений в том, что UNC-7b является ключевым компонентом GJ между AVA и A-MN.
I j Кинетика гетеротипных GJ UNC-7b / UNC-9 сильно отличалась от кинетики GJ UNC-7 / UNC-9 in vivo. Различия в регуляторных белках и посттрансляционные модификации между этими двумя системами могут потенциально изменять функциональные свойства GJ.Например, GJ UNC-9 нуждаются в UNC-1, устьицеподобном белке, чтобы функционировать в C. elegans ( 25 , 26 ), но не в ооцитах Xenopus . Очевидная возможность использования UNC-1 для GJ UNC-9 в ооцитах Xenopus может быть связана с заменой UNC-1 эндогенным стоматиноподобным белком, поскольку геном Xenopus laevis содержит несколько стоматиноподобных генов ( 27 ). Стоит отметить, что система экспрессии ооцитов Xenopus использовалась для анализа биофизических свойств гомотипических и гетеротипических GJ, образованных UNC-9 и двумя разными изоформами UNC-7 (a и b) ( 19 ).Однако более раннее исследование не обнаружило каких-либо значительных различий в биофизических свойствах между гомотипными GJ UNC-7a и UNC-7b и между гетеротипными GJ UNC-7a / UNC-9 и UNC-7b / UNC-9. Был сделан вывод, что N-конец UNC-7 мало влияет на стробирование напряжения GJ. Неясно, почему предыдущее исследование не смогло выявить влияние N-конца UNC-7 на функцию GJ.
Хотя коннексины и иннексины принадлежат к двум разным семействам белков, образованные ими GJ имеют общие структурные и функциональные свойства.Например, N-концы коннексинов и иннексинов расположены в пространстве путей проникновения GJ ( 28 — 31 ). Исследования коннексинов привели к заключению, что N-конец контролирует зависимость V j ( 15 , 32 — 35 ), и эта функция зависит от заряженных аминокислотных остатков ( 32 — 34 , 36 ). Роли N-конца UNC-7b в GJ gating, описанные здесь, согласуются с этими структурными и функциональными данными GJs.Т.о., N-концы могут играть эволюционно консервативную роль в придании ректификационных свойств нейрональным GJs, чтобы влиять на динамику нервных цепей.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Культура и штаммы C. elegansГермафродиты C. elegans выращивали на чашках со стандартной питательной средой для нематод со слоем OP50 Escherichia coli при 22 ° C в камере для окружающей среды. В этом исследовании были использованы следующие штаммы (плазмиды для создания трансгенных штаммов обозначены цифрами с префиксом « wp »): ZW704: zwEx175 [Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP: : mCherry :: SL2 :: GFP (wp1383), Pgpa-14 :: Cre (pNP259)] .ZW731: zwEx175 [Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: mCherry :: SL2 :: GFP (wp1383), Pgpa-14 :: Cre (pNP259)]; unc-7 (e5). ZW1121: zwEx175 [Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: mCherry :: SL2 :: GFP (wp1383), Pgpa-14 :: Cre (pNP259)]; УНЦ-7 (ZW98) . ZW1251: zwEx175 [Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: mCherry :: SL2 :: GFP (wp1383), Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: unc-7a (wp1677), Pgpa-14 :: Cre (pNP259)]; Унс-7 (Е5) . ZW1252: zwEx175 [Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: mCherry :: SL2 :: GFP (wp1383), Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: unc-7b (wp1678), Pgpa-14 :: Cre (pNP259)]; Унс-7 (Е5) .ZW1414: zwIs143 [Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: mStrawberry (wp1392), Pgpa-14 :: Cre (pNP259), lin-15 (+)]; zwEx261 [Punc-7b :: GFP (wp1691 + p1692)]. ZW1531: zwEx276 [Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: UNC-7a :: EGFP (wp1961), Pflp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: mStrawberry (wp1339), Pgpa-14 :: Cre (pNP259)]; Унс-7 (Е5) .
клонирование кДНК
unc-7a комплементарную ДНК (кДНК) клонировали с помощью вложенной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) с использованием библиотеки первой цепи кДНК червей дикого типа в качестве матрицы.Смысловые / антисмысловые праймеры, используемые для первой и второй ПЦР, составляли 169/170 и 171/664 соответственно. Второй продукт ПЦР клонировали в вектор экспрессии ооцитов pXMX-T3 (-) по сайтам Bamh2 / EcoR1 для получения плазмиды unc-7a ( wp776 ). КДНК unc-7b получали с помощью ПЦР с использованием плазмиды wp776 в качестве матрицы и пары 2036/3036 смысловой / антисмысловой праймер. Праймер 2036 содержал 5′-концевую последовательность, уникальную для кДНК unc-7b , а праймер 3036 комплементарен общему 3′-концу кДНК unc-7 .Продукт ПЦР клонировали в pXMX-T3 (-) в сайтах Xho1 / Age1 для получения плазмиды unc-7b ( wp1275 ). unc-7c кДНК клонировали с помощью ПЦР с использованием wp776 в качестве матрицы и пары 1854/3036 смысловой / антисмысловой праймер. Продукт ПЦР клонировали в pXMX-T3 (-) в сайтах Bamh2 / Age1 с получением экспрессионной плазмиды unc-7c ( wp1239 ). unc-7e кДНК клонировали вложенной ОТ-ПЦР с использованием библиотеки кДНК первой цепи червей дикого типа в качестве матрицы.Смысловые / антисмысловые праймеры, используемые для первой и второй ПЦР, были 3491/3492 и 3539/3540 соответственно. Второй продукт ПЦР клонировали в pXMXT-3 (-) в сайтах Pst1 / Age1 для получения экспрессионной плазмиды unc-7e ( wp1742 ). КДНК unc-7f клонировали с помощью ПЦР с использованием плазмиды wp776 в качестве матрицы и пары смысловой / антисмысловой праймер 3695/3036. Праймер 3695 содержал 5′-концевую последовательность, уникальную для unc-7 f . Продукт ПЦР клонировали в pXMX-T3 (-) в сайтах Bamh2 / Age1 для получения плазмиды unc-7f ( wp1814 ). unc-7h кДНК клонировали с помощью двух стадий ПЦР с использованием плазмиды wp776 в качестве матрицы. Смысловые / антисмысловые праймеры, использованные для первой и второй стадий, составляли 3696/3036 и 3697/3036 соответственно. Смысловые праймеры 3696 и 3697 содержали 5′-концевую последовательность, уникальную для unc-7 h . Второй продукт ПЦР клонировали в pXMX-T3 (-) в сайтах Bamh2 / Age1 с получением плазмиды unc-7h ( wp1815 ). Плазмида unc-9 ( wp778 ) была получена путем вырезания вставки кДНК unc-9 из ранее описанной плазмиды ( 37 ) и клонирования ее в pXMX-T3 (-) по сайтам Bamh2 / Age1. .Последовательности праймеров, используемых для клонирования кДНК unc-7 , перечислены в таблице S5. Плазмида unc-7a :: GFP для экспрессии ооцитов ( wp1960 ) была получена с помощью двух последовательных этапов: (i) клонированная кодирующая последовательность GFP (EGFP) из существующей плазмиды ( wp757 ) в другую плазмиду ( wp572 ) на сайтах Age1 и Nhe1 для получения wp1959 , в котором кодирующая последовательность EGFP была слита в рамке считывания с 3′-концом unc-7a , и (ii) клонировать unc-7a :: egfp Вставка из wp1959 в wp776 на сайтах Bamh2 и EcoR1 (для замены вставки unc-7a ).
Экспрессия кРНК
Плазмиды unc-7, и unc-9 , описанные выше, были линеаризованы с использованием рестрикционного фермента Fsp I и использованы в качестве матриц для синтеза кРНК. Кепированные кРНК синтезировали с использованием набора для транскрипции mMESSAGE mMACHINE T3 (AM1348, Thermo Fisher Scientific). Каждый раствор для инъекции кРНК представлял собой смесь конкретной кРНК (от 500 до 800 нг / мкл) и двух антисмысловых олигонуклеотидов коннексина 38 (по 100 нг / мкл каждого). Нуклеотидные последовательности двух олигонуклеотидов были 5′-GCTTTAGTAATTCCCATCCTGCCATGTTTC-3 ‘и 5′-AGCAGAAGAGTATACTTCTGTTTGT-3’ ( 38 ).Приблизительно 50 нл смеси вводили на ооцит с помощью инжектора Drummond Nanoject II (Drummond Scientific). Желточную мембрану ооцита удаляли с помощью пинцета Dumont # 5 (500341, Word Precision Instruments, Сарасота, Флорида) во время процесса спаривания. Спаривание ооцитов и последующие записи выполняли в чашке Петри объемом 3 мл, в которой небольшой вырезанный кусок Nunc MicroWell MiniTray (438733, Nalge Nunc International, Рочестер, Нью-Йорк) был приклеен ко дну с двумя ооцитами, помещенными в каждую лунку, а также описано другими ( 38 ).Введенные ооциты инкубировали в растворе ND96 [96 мМ NaCl, 2 мМ KCl, 1,8 мМ CaCl 2 , 1 мМ MgCl 2 и 5 мМ Hepes (pH 7,5)] в течение 2–5 дней в камере для окружающей среды (15 ° C) перед сопряжением. Парные ооциты инкубировали в растворе ND96 от 12 до 24 часов при комнатной температуре (от 20 до 22 ° C) перед электрофизиологической записью.
Электрофизиология ооцитов
Записи с фиксацией напряжения выполнялись с использованием двух усилителей Oocyte Clamp (OC-725C, Warner Instruments LLC, Hamden, CT), оснащенных датчиками дифференциального напряжения (7255DI, Warner Instruments).Усилители были переведены в режим измерения тока на стороне высокого напряжения для записи I j . Электроды тока и напряжения (сопротивление от 1,5 до 1,8 МОм), а также электроды дифференциального напряжения вытягивали из капилляров из боросиликатного стекла (TW150F-4, World Precision Instruments). Наконечники электродов дифференциального напряжения были вручную сломаны до большего размера (сопротивление ~ 0,2 МОм), заполнены раствором ND96 и подключены к головным каскадам через держатели микроэлектродов (MEh2S15, World Precision Instruments).Два ооцита каждой пары поддерживали при -30 мВ, после чего к одному ооциту применяли серию ступеней напряжения (от -150 до +90 мВ), в то время как другой поддерживали постоянным при -30 мВ для записи I j . Впоследствии протокол измерения напряжения был повторен, но два ооцита поменялись местами, чтобы быть приемником шагов напряжения и монитором I j . Интервалы между последовательными шагами В, , , составляли 10 мВ, за исключением добавления шагов -5 и +5 мВ.В каждой записи поочередно применялись положительные и отрицательные В j шагов от высокого к низкому (например, +120, -120, +110, -110, ……, +10, -10, +5, -5 мВ). I j из первых двух V j шагов (+120 и -120 мВ) были исключены в последующих анализах данных. Данные фильтровались с частотой 1000 Гц и дискретизировались с частотой 2000 Гц. Использование лягушек соответствовало руководящим принципам институционального комитета по уходу за животными и использованию и было одобрено институциональным наблюдательным советом.
unc-7b knockoutunc-7b isoform-specific knockout был достигнут с использованием подхода CRIPR-Cas9. В частности, направляющую последовательность из 19 п.н., идентичную целевой последовательности в первом экзоне unc-7b , клонировали в вектор pDD162 (P eft-3 :: Cas9 + пустая одиночная направляющая РНК, Addgene # 47549). В полученную конструкцию одновременно вводили восстанавливающий праймер (3475), в который был введен стоп-кодон. Нокаут-черви были идентифицированы с помощью ПЦР с использованием пары специфических праймеров (3476/3477) и подтверждены секвенированием.
unc-7 спасение мутантакДНК, кодирующих UNC-7b дикого типа, UNC-7a дикого типа и UNC-7a :: GFP, были экспрессированы в интернейронах AVA unc-7 (e5) с использованием двух промоторы (P flp-18 и P gpa-14 ) в подходе Cre-LoxP ( 39 ). В этих экспериментах кДНК unc-7a и unc-7b были клонированы независимо в wp1338 (pCoS10, P flp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: ChR2 :: mCherry :: SL2 :: GFP) ( 39 ) для создания двух плазмид: wp1677 (P flp-18 (3.3 кб) :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: UNC-7a) и wp1678 (P flp-18 (3.3 кб) :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: UNC-7b). wp1961 (P flp-18 (3.3 kb) :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: UNC-7a :: GFP) был создан путем клонирования вставки unc-7a :: egfp из wp1959 в wp1677 на сайтах Nhe1 и Nco1. Три плазмиды ( wp1677 , wp1678 и wp1961 ) независимо друг от друга инъецировали с wp1339 (pNP259: P gpa-14 :: Cre) в мутант unc-7 (e5) для достижения AVA. -нацеленное выражение ( 39 ).Интернейроны AVA в этих трансгенных штаммах были помечены GFP с использованием того же подхода.
Сайт-направленный мутагенез
Плазмиды для экспрессии различных мутированных изоформ UNC-7b в ооцитах Xenopus были созданы путем мутации wp1275 с использованием специфических смысловых и антисмысловых пар праймеров и PfuUltra (Agilent Technologies, Ла-Джолла, Калифорния, США) в подходе на основе ПЦР (сайт-направленный мутагенез QuickChange). Область вставки кДНК unc-7b каждой вновь созданной плазмиды была полностью секвенирована, чтобы подтвердить, что только предполагаемая мутация была введена в unc-7b .
unc-7b определение паттерна экспрессииКороткий геномный фрагмент (563 п.н.), включающий часть первого экзона unc-7b и непосредственно предшествующую последовательность, амплифицировали с помощью ПЦР с использованием пары праймеров 3382/3383 и слили с GFP в векторе экспрессии червя, полученном из pPD118.20. Полученную плазмиду ( wp1692 ) линеаризовали с помощью Hind III и совместно вводили в lin-15 (n765) с фосмидой WRM0613cD09, которая была линеаризована с помощью Tth III, и плазмиды восстановления lin-15 .Чтобы определить, экспрессируется ли unc-7b в интернейронах AVA, трансген был скрещен с интегрированным штаммом, экспрессирующим mStrawberry в AVA ( ZW1140 ), который был создан путем совместной инъекции wp1392 (P flp-18 :: loxP :: LacZ :: STOP :: loxP :: mStrawberry), wp1339 и lin-15 , спасающую плазмиду в lin-15 (n765) .
C. elegans электрофизиологияВсе электрофизиологические эксперименты проводились на взрослых гермафродитах.Животное обездвиживали путем нанесения тканевого адгезива Vetbond (3M Company, Сент-Пол, Миннесота) на переднюю спинную часть, позволяя его хвосту свободно раскачиваться во время эксперимента. Вдоль области склеивания был сделан продольный разрез, чтобы обнажить AVA и VA5. После очистки внутренних органов отсасыванием через стеклянную пипетку лоскут для кутикулы отгибали назад и приклеивали к покровному стеклу. Препарат рассеченного червя обрабатывали коллагеназой А (0,5 мг / мл -1; Roche Applied Science, каталожный номер 10103578001) в течение 10-15 с и перфузировали внеклеточным раствором до 5-10-кратного объема ванны.Моторный нейрон VA5 был идентифицирован на основе его анатомического местоположения, тогда как идентификация AVA была облегчена путем экспрессии GFP в AVA с использованием двух промоторов и подхода Cre-LoxP ( 39 ). Микроэлектроды (сопротивление ∼20 МОм), вытянутые из капилляров из боросиликатного стекла (BF120-69-10, Sutter Instruments, Novato, Калифорния, США) и отполированные огнем, использовались для записи двухнейронных фиксаторов напряжения с усилителем (MultiClamp 700B, Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния, США) и программное обеспечение Clampex (версия 10, Molecular Devices).Классическая цельноклеточная конфигурация была получена путем приложения отрицательного давления к записывающей пипетке. I j были записаны, удерживая либо AVA, либо VA5 на уровне -30 мВ, в то время как его аналог был изменен на серию мембранных напряжений (от -110 до +50 мВ). Данные фильтровались с частотой 2 кГц и дискретизировались с частотой 10 кГц. Раствор пипетки содержал 120 мМ KCl, 20 мМ КОН, 5 мМ трис, 0,25 мМ CaCl 2 , 4 мМ MgCl 2 , 36 мМ сахарозу, 5 мМ EGTA и 4 мМ Na 2 АТФ (pH 7.2). Раствор ванны содержал 140 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 5 мМ CaCl2, 5 мМ MgCl2, 11 мМ декстрозу и 5 мМ Hepes (pH 7,2).
Анализ данных и построение графиков
Анализ устойчивого состояния I j GJs в ооцитах XenopusУсредненное установившееся состояние I j из последних 500 мс каждого V j шаг были количественно определены и преобразованы в G j . Впоследствии G j гомотипных и гетеротипных GJ обрабатывались несколько иначе.Для гомотипных GJ значения G j в отрицательном и положительном диапазонах V j были сначала независимо согласованы с функцией Больцмана, G j = (1 — G jmin ) / {1 + exp [ A ( V j — V 0 )]} + G jmin , для экстраполяции G jmax при 0 мВ V j , а затем нормализованы на основе экстраполированного G jmax для повторного соответствия функции Больцмана.Результаты второго подбора были использованы для статистического анализа. Для гетеротипных GJ все значения G j каждой записи были нормализованы на наибольшее значение G j (номинальное значение G jmax ) либо из отрицательного, либо из положительного диапазона V j . Восходящая и нисходящая части результирующего соотношения G j -V j были независимо подогнаны к функции Больцмана с результатами подгонки, используемыми для статистического анализа.В функции Больцмана V 0 — это V j , при котором G j — половина максимального значения, G jmin — минимальное значение G j и A. — константа кооперативности. Зависимые переменные из подгонки Больцмана ( V 0 , G jmin и A ) сравнивались между положительным и отрицательным диапазоном V j с помощью парного теста t и между различных ГД с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующими тестами Тьюки с использованием OriginPro 2019 (OriginLab, Нортгемптон, Массачусетс, США) и SPSS (IBM Corp., Армонк, штат Нью-Йорк, США) соответственно.
Анализы пика I j гетеротипических GJ в ооците XenopusПик I j на каждом шаге V j были количественно определены с помощью ClampFit и нормализованы по I j при -110 или +110 мВ от В j , как указано в подписях к рисункам, для построения зависимости пика I j — V j .В случаях сильного выпрямления (например, все ГДж UNC-7b / UNC-9 и несколько ГДж UNC-7f / UNC-9 и UNC-7h / UNC-9) пик I j на стороне малого тока были определены количественно из той же временной точки пика I j на противоположной стороне. Результирующий пик I j — V j отношения и отношения пика I j различных гетеротипических GJ сравнивали либо с помощью двухстороннего смешанного дисперсионного анализа, либо с помощью однофакторного дисперсионного анализа, как показано на рисунке. легенды.Статистически значимые различия были обнаружены с помощью тестов Тьюки.
Анализ I j между AVA и VA5Усредненное значение I j между 100 и 200 мс каждого шага V j было количественно определено с помощью ClampFit и использовано для построения графика I j — V j отношения, которые сравнивали между разными генотипами с помощью смешанного дисперсионного анализа с использованием SPSS с напряжениями в качестве фактора внутри субъектов и генотипов в качестве фактора между субъектами.Статистически значимые различия были обнаружены с помощью тестов Тьюки. Данные представлены как средние значения ± SE. P <0,05 считается статистически значимым. Все графики были сделаны в Origin Pro.
Благодарности
Мы благодарим C. Peracchia за помощь в методике регистрации соединительных токов между ооцитами Xenopus и К. Ванга и К. Вакера за полезные комментарии к рукописи. Финансирование: Это исследование было поддержано NIH R01NS109388 (Z.-W.W.), NIH R01MN085927 (для Z-W.W.) И NIH GM113004 (для BC). Авторский вклад: Ю.С. провели все эксперименты с ооцитами Xenopus , создали трансгенные и нокаутные штаммы червей и провели анализ данных. П.Л. провели все электрофизиологические эксперименты с C. elegans и провели анализ данных. H.Z. провели предварительные эксперименты. ДО Н.Э. помог с экспериментальным дизайном. Z.-W.W. руководил проектом и написал рукопись при участии соавторов. Конкурирующие интересы: Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов. Доступность данных и материалов: Все данные, необходимые для оценки выводов в статье, представлены в документе и / или дополнительных материалах. Дополнительные данные, относящиеся к этой статье, могут быть запрошены у авторов.
ССЫЛКИ И ПРИМЕЧАНИЯ
2. Раш Дж. Э., Курти С., Вандерпул К. Г., Камасава Н., Наннапанени С., Паласиос-Прадо Н., Флорес К. Э., Ясумура Т., О’Брайен Дж., Линн Б. Д., Букаускас Ф. Ф., Надь Дж. И., Переда А. Э., Молекулярная и функциональная асимметрия электрического синапса позвоночных. Нейрон 79, 957–969 (2013). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 3. Ауэрбах А. А., Беннет М. В., Выпрямляющий электротонический синапс в центральной нервной системе позвоночного животного. J. Gen. Physiol. 53, 211–237 (1969). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Фелан П., Гулдинг Л. А., Там Дж. Л. Ю., Аллен М. Дж., Даубер Р. Дж., Дэвис Дж. А., Бэкон Дж. П., Молекулярный механизм выпрямления в идентифицированных электрических синапсах в гигантской волоконной системе Drosophila .Curr. Биол. 18, 1955–1960 (2008). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Рингхэм Г. Л., Локализация и электрические характеристики гигантского синапса в спинном мозге миноги. J. Physiol. 251, 395–407 (1975). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Вадепуль М., Подавление возбуждающих мотонейронов одним нейроном в центральной нервной системе пиявки. J. Exp. Биол. 143, 509–527 (1989). [PubMed] [Google Scholar] 7. Рела Л., Щупак Л., Коактивация мотонейронов регулируется сетью, объединяющей электрические и химические синапсы.J. Neurosci. 23, 682–692 (2003). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Шрути С., Шульц Д. Дж., Летт К. М., Мардер Э., Электрическая связь и экспрессия иннексина в стоматогастральном ганглии краба Cancer borealis . J. Neurophysiol. 112, 2946–2958 (2014). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Лю П., Чен Б., Мейллер Р., Ван З.-В., Щелевые соединения, выпрямляющие антидром, усиливают химическую передачу в функционально смешанных электрохимических синапсах. Nat. Commun.8, 14818 (2017). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Девор А., Яром Ю., Электротоническая связь в нижнем оливковом ядре, выявленная при одновременной двойной записи участков. J. Neurophysiol. 87, 3048–3058 (2002). [PubMed] [Google Scholar] 11. Гутьеррес Г. Дж., Мардер Э., Выпрямление электрических синапсов может повлиять на влияние синаптической модуляции на устойчивость выходного паттерна. J. Neurosci. 33, 13238–13248 (2013). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Эдвардс Д. Х., Йе С.Р., Красне Ф. Б., Обнаружение совпадений нейронов с помощью чувствительных к напряжению электрических синапсов. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 95, 7145–7150 (1998). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Мардер Э., Электрические синапсы: помимо скорости и синхронности вычислений. Curr. Биол. 8, R795 – R797 (1998). [PubMed] [Google Scholar] 14. Марш А. Дж., Мишель Дж. К., Адке А. П., Хекман Э. Л., Миллер А. С., Асимметрия внутриклеточного каркаса электрических синапсов позвоночных. Curr. Биол. 27, 3561–3567.e4 (2017). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 15. Маркс В. Д., Скерретт И. М., Роль аминоконца в стробировании напряжения и переключающем выпрямлении встряхивающих иннексинов B. J. Neurophysiol. 111, 1383–1395 (2014). [PubMed] [Google Scholar] 16. Кавано Т., По М. Д., Гао С., Люн Г., Рю В. С., Чжэнь М., Дисбаланс: щелевидные соединения снижают активность обратной двигательной цепи до смещения C. elegans для движения вперед. Нейрон 72, 572–586 (2011). [PubMed] [Google Scholar] 18.Скерретт И. М., Уильямс Дж. Б., Структурное и функциональное сравнение каналов щелевых соединений, состоящих из коннексинов и иннексинов. Dev. Neurobiol. 77, 522–547 (2017). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 19. Старич Т. А., Сюй Дж., Скерретт И. М., Николсон Б. Дж., Шоу Дж. Э., Взаимодействия между innexins UNC-7 и UNC-9 опосредуют специфичность электрических синапсов в двигательной нервной системе Caenorhabditis elegans . Neural Dev. 4, 16 (2009). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20.Уайт Дж. Г., Саутгейт Э., Томсон Дж. Н., Бреннер С., Строение нервной системы нематоды Caenorhabditis elegans . Филос. Пер. R. Soc. Лондон. B Biol. Sci. 314, г. 1–340 (1986). [PubMed] [Google Scholar] 21. Бхаттачарья А., Агаева Ю., Бергхофф Э. Г., Хоберт О., Пластичность электрического коннектора C. elegans . Клетка 176, 1174–1189.e16 (2019). [PubMed] [Google Scholar] 22. Алтун З. Ф., Чен Б., Ван З.-В., Холл Д. Х., Карта высокого разрешения Caenorhabditis elegans белков щелевого соединения.Dev. Дин. 238, 1936–1950 (2009). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23. Старич Т. А., Герман Р. К., Шоу Дж. Э., Молекулярный и генетический анализ unc-7 , гена Caenorhabditis elegans , необходимого для скоординированного передвижения. Генетика 133, 527–541 (1993). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 24. де Боно М., Марик А. В., Нейрональные субстраты со сложным поведением в C. elegans . Анну. Rev. Neurosci. 28, 451–501 (2005). [PubMed] [Google Scholar] 25.Чен Б., Лю К., Ге К., Се Дж., Ван З.-В., UNC-1 регулирует щелевые соединения, важные для передвижения у C. elegans . Curr. Биол. 17, 1334–1339 (2007). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 26. Джанг Х., Леви С., Флавелл С. В., Менде Ф., Латам Р., Циммер М., Баргманн К. И., Рассечение нейрональных цепей щелевых контактов, которые регулируют социальное поведение у Caenorhabditis elegans . Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 114, E1263 – E1272 (2017). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27.Сессия AM, Уно Ю., Квон Т., Чепмен Дж. А., Тойода А., Такахаши С., Фукуи А., Хикосака А., Судзуки А., Кондо М., ван Херинген С. Дж., Куигли И., Хайнц С., Огино Х., Очи Х., Хеллстен У., Лайонс Дж. Б., Симаков О., Путнам Н., Ститес Дж., Куроки Й., Танака Т., Мичиуэ Т., Ватанабе М., Богданович О., Листер Р. , Georgiou G., Paranjpe SS, van Kruijsbergen I., Shu S., Carlson J., Kinoshita T., Ohta Y., Mawaribuchi S., Jenkins J., Grimwood J., Schmutz J., Mitros T., Mozaffari С.В., Сузуки Ю., Харамото Ю., Ямамото Т.С., Такаги К., Хилд Р., Миллер К., Хауденшильд К., Кицман Дж., Накаяма Т., Изуцу Ю., Роберт Дж., Фортриде Дж., Бернс К., Лотай В., Карими К. ., Ясуока Ю., Дихманн Д.С., Флажник М.Ф., Хьюстон Д.В., Шендур Дж., Дюпаскье Л., Визе П.Д., Цорн А.М., Ито М., Маркотт Е.М., Уоллингфорд Дж. Б., Ито Ю., Асашима М., Уэно Н. , Мацуда Й., Винстра Дж.Дж., Фудзияма А., Харланд Р.М., Тайра М., Рохсар Д.С., Эволюция генома аллотетраплоидной лягушки Xenopus laevis . Природа 538, г. 336–343 (2016).[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28. Маэда С., Накагава С., Шуга М., Ямасита Э., Осима А., Фудзиёси Ю., Цукихара Т., Структура канала щелевого контакта коннексина 26 при разрешении 3,5 Å. Природа 458, г. 597–602 (2009). [PubMed] [Google Scholar] 29. Осима А., Тани К., Фудзиёси Ю., Атомная структура канала щелевого контакта иннексин-6, определенная с помощью крио-ЭМ. Nat. Commun. 7, 13681 (2016). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 30. Пурник П. Э., Бенджамин Д. К., Верселис В. К., Барджелло Т. А., Дауд Т. Л., Структура аминоконца белка щелевого соединения. Arch. Biochem. Биофиз. 381, г. 181–190 (2000). [PubMed] [Google Scholar] 31. Майерс Дж. Б., Хаддад Б. Г., О’Нил С. Э., Чорев Д. С., Йошиока К. С., Робинсон К. В., Цукерман Д. М., Райчоу С. Л., Структура нативного линзового коннексина 46/50 межклеточных каналов с помощью крио-ЭМ. Природа 564, г. 372–377 (2018). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 32. О С., Ривкин С., Тан К., Верселис В. К., Барджелло Т. А., Детерминанты гейтирования полуканала коннексина 32.Биофиз. Дж. 87, 912–928 (2004). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Верселис В. К., Гинтер С. С., Барджелло Т. А., Противоположные полярности стробирования напряжения двух тесно связанных коннексинов. Природа 368, г. 348–351 (1994). [PubMed] [Google Scholar] 34. Пурник П. Э. М., О С., Абрамс К. К., Верселис В. К., Барджелло Т. А., Инверсия стробирующей полярности щелевых контактов путем замены отрицательного заряда в N-конце коннексина 32. Biophys. Дж. 79, 2403–2415 (2000). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 35.Осима А., Тани К., Толоуэ М. М., Хироаки Ю., Смок А., Инукай С., Кон А., Николсон Б. Дж., Сосинский Г. Э., Фудзиёси Ю., Асимметричные конфигурации и N-концевые перестановки в каналах щелевых контактов коннексина 26. J. Mol. Биол. 405, г. 724–735 (2011). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 36. Муса Х., Фенн Э., Край М., Джемел Дж., Бейер Э. К., Винстра Р. Д., Аминоконцевые остатки глутамата придают чувствительность к спермину и влияют на стробирование напряжения и проводимость канала щелевых контактов коннексина 40 крысы.J. Physiol. 557, г. 863–878 (2004). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 37. Лю К., Чен Б., Гайер Э., Джоши Дж., Ван З.-В., Щелевые соединения с низкой проводимостью обеспечивают специфическое электрическое соединение в мышечных клетках стенки тела Caenorhabditis elegans . J. Biol. Chem. 281, 7881–7889 (2006). [PubMed] [Google Scholar] 38. Пераккия К., Ван Х. Г., Пераккия Л. Л., Химическая вентиляция каналов щелевых соединений. Методы 20, 188–195 (2000). [PubMed] [Google Scholar] 39. Шмитт К., Шультейс К., Хассон С. Дж., Левальд Дж. Ф., Готшалк А., Специфическая экспрессия channelrhodopsin-2 в одиночных нейронах Caenorhabditis elegans . PLOS ONE 7, e43164 (2012). [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]Кажется, мы не можем найти эту страницу
(* {{l10n_strings.REQUIRED_FIELD}})
{{l10n_strings.CREATE_NEW_COLLECTION}} *
{{l10n_strings.ADD_COLLECTION_DESCRIPTION}}
{{l10n_strings.COLLECTION_DESCRIPTION}} {{addToCollection.description.length}} / 500 {{l10n_strings.TAGS}} {{$ item}} {{l10n_strings.PRODUCTS}} {{l10n_strings.DRAG_TEXT}}{{l10n_strings.DRAG_TEXT_HELP}}
{{l10n_strings.LANGUAGE}} {{$ select.selected.display}}{{article.content_lang.display}}
{{l10n_strings.AUTHOR}}{{l10n_strings.AUTHOR_TOOLTIP_TEXT}}
{{$ select.selected.display}} {{l10n_strings.CREATE_AND_ADD_TO_COLLECTION_MODAL_BUTTON}} {{l10n_strings.CREATE_A_COLLECTION_ERROR}}Twisted Games (Twisted, # 2) от Ana Huang
Она никогда не может быть его … но он все равно забирает ее.Стоический, задумчивый и высокомерный, элитный телохранитель Риса Ларсена придерживается двух правил: 1) Защищайте своих клиентов любой ценой 2) Не поддавайтесь эмоциональному влиянию.Всегда.
Он ни разу не поддался искушению нарушить эти правила… до ее.
Бриджит фон Ашеберг. Принцесса с полосой упрямства, которая соответствует его собственной, и скрытым огнем, уменьшающим
Она никогда не может быть его … но он все равно забирает ее.Стоический, задумчивый и высокомерный, элитный телохранитель Риса Ларсена придерживается двух правил: 1) Защищайте своих клиентов любой ценой 2) Не поддавайтесь эмоциональному влиянию. Всегда.
Он ни разу не поддался искушению нарушить эти правила… до ее.
Бриджит фон Ашеберг. Принцесса с полосой упрямства, которая соответствует его собственной, и скрытым огнем, превращающим его правила в пепел. Он не ожидал от нее ничего, и все, о чем он никогда не подозревал, ему нужно.
День за днем, дюйм за дюймом, она ломает его защиту, пока он не столкнется с истиной, которую больше не может отрицать: он поклялся защищать ее, но все, что он хочет, — это разрушить ее. Возьми ее.
Потому что она его.
Его принцесса.
Его запретный плод.
Все его развратные фантазии.
***
Царственная, волевая и связанная цепями долга, принцесса Бриджит мечтает о свободе жить и любить по своему усмотрению.
Но когда ее брат отрекается от престола, она внезапно сталкивается с перспективой безлюбия, политически целесообразного брака и трона, которого она никогда не хотела.
И пока она разбирается в хитросплетениях — и предательствах — своей новой роли, она также должна скрывать свое желание мужчину, которого у нее не может быть.
Ее телохранитель.
Ее защитник.
Ее окончательное разорение.
Неожиданная и запретная, их любовь может разрушить королевство … и обречь их обоих.
Twisted Games — это современный роман о королевских телохранителях со средней и средней яркостью. Это вторая книга из серии Twisted, но ее можно читать как отдельную книгу.
Предупреждение: эта книга содержит притяжательного альфа-героя, откровенно сексуального содержания и ненормативной лексики.
Студенты собирают 1302 доллара на новый комбинезон для отдела K-9 департамента шерифа округа Калхун
У студентов Монтессори Академии Батл-Крик большие сердца
Студенты собирают 1302 доллара на новый костюм для отдела K-9 департамента шерифа округа Калхун
Студенты Монтессори Академии Батл-Крик собрали 1 302 доллара для подразделения K-9 на покупку нового защитного костюма.Академия Монтессори Батл-Крик поддерживает тесные отношения с департаментом шерифа округа Калхун. Каждый месяц в школу приходит заместитель Дэйв Уиндер, чтобы преподавать по учебной программе, которая включает такие темы, как безопасность, издевательства, осведомленность о наркотиках и «опасность для незнакомцев».
Во время последнего визита помощника Дейва он и помощник помощника Мэтта Берпи Dog’s Rocket и Риццо показали студентам, как они обучают полицейских K9 распознавать запах взрывчатых веществ и наркотиков.
«Он показал нам, как собака может вынюхивать людей и следы», — сказала Ава, дошкольница из Батл-Крик, Монтессори.«Его собака чует больше нас, потому что она может выслеживать людей, которых вы не смогли бы найти, чтобы они не могли сбежать. Я хочу быть полицейским, как заместитель Дэйва ».
Класс Авы собрал наибольшую сумму денег — 210 долларов.
ДепутатДэйв также поделился важностью использования защитных костюмов при обучении полицейских K9s. Во время сценарного обучения прикусные костюмы позволяют дрессировщику правильно научить собак подходить к «плохим парням», как их называл депутат.
После того, как в прошлом месяце школу посетили заместитель Дэйв и заместитель Мэтт, директор школы Джессика Элдридж и несколько других учителей поделились идеями о том, как они могли бы поддержать департамент шерифа округа Кэлхун.Они решили провести «войну за пенни» и «дни перекуса» между классами, чтобы собрать деньги на покупку нового костюма для укусов.
«Нашей чертой характера в декабре было сострадание», — сказал Элдридж. «Мы хотели проявить сострадание к нашим местным полицейским силам, поскольку они постоянно обеспечивают нам безопасность и сострадание. Мы благодарны за их безоговорочную поддержку и услуги, которые они предоставляют нашему школьному сообществу ».
Департамент шерифа округа Калхун был взволнован, узнав о поддержке Монтессори в Батл-Крик.
«Было унизительно узнать, что дети в Монтессори Академии Батл-Крик захотели сотрудничать с нами, чтобы помочь собрать средства на костюм для укуса, который мы могли бы использовать в учебных целях», — сказал заместитель Дэйв Уиндер. «Укусы очень важны для нас при обучении наших собак, чтобы мы могли влиять на борьбу с преступностью в нашем сообществе».
Монтессори-академия Батл-Крик любит сотрудничество с департаментом шерифа округа Калхун. Детям нравится проявлять сострадание и уважение к тем, кто их охраняет.
Чтобы узнать больше о подразделении K-9 департамента шерифа Баттл-Крик, посетите сайт https://www.battlecreekmi.gov/285/K-9.
книг для взрослых | Мишель Хазен
ТАК ВЫ ДУМАЕТЕ, ЧТО ВЫ МАТЧ?
«Безумно смешная» романтическая комедия для друзей и влюбленных. Поклонники Кристины Лорен и Салли Торн потеряют сознание в этой возне из зоны друзей к запретной любви.
Харлоу — амбициозная профессиональная женщина, которая всегда играет по правилам.Бишоп — беспечный плохой мальчик, который нарушит любой закон, чтобы спасти свою больную сестру. Почему же тогда их приложение для знакомств объявило их совпадением? Мужчина пятьдесят оттенков неправильного. Конечно, он заставляет ее смеяться, но отношения — это не только смех, верно?
Она определенно должна перестать писать ему. Ага. В любой день.
Вскоре они начинают смеяться над всеми совпадениями своих приложений. Спустя одно неудачное свидание они стали соседями по комнате со случайными выгодами.
Харлоу слишком весело проводит время, чтобы сбавлять обороты, и все становится только лучше, когда она получает работу своей мечты… до тех пор, пока все в ее жизни проходят проверку биографических данных.Без проблем. Вот только Бишоп скрывает огромный секрет о том, как он платит за лечение своей сестры от рака.
И скоро все изменится.
Amazon | БИН | Яблоко | Кобо | Goodreads
Предварительная похвала за то, что вы думаете, что вы подходите
«Мишель Хейзен — королева кокетливого подшучивания. Взаимодействие между ответственным Харлоу и Ртутью Бишоп восхитительно и жарко. На вашем лице будет улыбка на протяжении всего прочтения ». -Кристин Райт, автор бестселлеров Amazon Самый темный цветок
«Сложные персонажи борются с серьезными проблемами, и все же история полна шарма, романтики и смехотворного юмора.Это книга, которая заставит вас думать — и чувствовать — и заботиться о том, куда она приведет вас на странице и в вашем сердце ». -Индия Холтон, автор книги The Wisteria Society of Lady Scoundrels
«С шипящей химией, веселым подшучиванием и душераздирающими ставками эта история заставляла меня то падать в обморок, то лихорадочно переворачивать страницы. So You Think You’re A Match действительно помещает rom и com в rom-com ». -Аланна Мартин, автор книги Сердца на поводке
«Читатели романсов, привыкшие к типичной одномерной интрижке, обнаружат, что под поверхностью книги« Итак, вы думаете, что вы соответствуете », гораздо больше закипает.
В основе его романтики лежит заставляющее задуматься соображение о том, что заставляет противоположности притягиваться, как убеждения и ценности меняются обстоятельствами и романтикой и в чем заключаются границы любовной связи ». -Рецензия на книгу Среднего Запада
«Сжимая свое сердце и фыркая, я не мог достаточно быстро перелистывать страницы в этой единственной в своем роде ромкоме. Противоположности не просто притягиваются друг к другу в «Итак, вы думаете, что вы подходите». Харлоу и Бишоп сталкиваются во взрыве искр, осыпая читателя своей электрической химией.»- Келли Сискинд, отмеченный наградами автор
«Если вы ищете хорошо проработанных персонажей, которые полны юмора и подлинности, тогда не ищите ничего, кроме этого романа между друзьями и влюбленными. Хейзен — мастер создания глубоко проработанной и честной истории. Вы будете сбиты с толку, когда Бишоп (современный Робин Гуд) встретит своего соперника в лице честного и трудолюбивого Харлоу. Их химия звучит на каждой странице, напоминая вам, что из друзей действительно получаются лучшие любовники ». -Элли Берлин, автор серии Flambé
.«И снова Мишель Хейзен сочетает в себе юмор и сердце в этой восхитительной истории онлайн-свиданий с ее злыми подшучиваниями и химией, заставляющей вас краснеть.»- Дебора Марулис, автор книги Внутри и без
«Мишель Хейзен настолько забавна, что вы подумаете, что вам не нужно ничего, кроме ее остроумия рапиры. Но потом она идет и бросает сцены секса, от которых у вас скручиваются пальцы ног. Теперь у меня книжное похмелье века ». -Деври Уоллс, автор международных бестселлеров
Ожидается 8.24.21
ДЫХАТЬ НЕБО
Два незнакомца начинают спасать животных и в конечном итоге спасают друг друга в этом трогательном романе от автора Unbreak Me.
Мари Такер — биолог, занимающийся дикой природой, которая выкапывает кроликов и находящихся под угрозой исчезновения черепах на строительных площадках. Ее все еще преследует ее прошлое, она устраивается на самые удаленные работы в пустыне Мохаве, чтобы избегать людей и прятаться от бывшего. Это простая, тихая жизнь, наполненная милыми животными и выпечкой на солнечной энергии, пока она не попадает в команду Джека Вятта.
Громкий, сквернословной характер прораба Джека Вятта держит в узде даже самых суровых мужчин в его бригаде.Ни одна ошибка не упускается из виду, потому что в пустыне это может означать жизнь или смерть. По его мнению, на этом рабочем месте не место для чувствительных биологов, особенно для такой застенчивой, как Мари. Но вместо того, чтобы увядать от жары и тяжелой работы, Мари побеждает Джека и его команду по одному домашнему пирожному за раз.
Джек и Мари находят удобный ритм и строят дружбу, редкость для них обоих. После тяжелого детства Джека у них стало больше общего, чем они думали. Но даже солнце Мохаве не может прогнать тени, когда прошлое настроено выследить их…
Пресс
Я дал интервью Morning Edition NPR! Было захватывающе рассказывать о Breathe the Sky и моей работе с черепахами, а также об истории, лежащей в основе названия…
Запись интервью NPR находится ЗДЕСЬ
Интервью с подкастом Smart Bitches Trashy Books ЗДЕСЬ
Интервью в блоге ботаников Джинс: Ссылка ЗДЕСЬ
Функция Popsugar: Ссылка ЗДЕСЬ
Feature on Publisher’s Weekly: ссылка ЗДЕСЬ
Статья на Fresh Fiction: Ссылка ЗДЕСЬ
Предварительная похвала за дыхание небаAmazon Top 10 Лучшие романсы августа
Августовские романы Попсугара, которые заставят вас упасть в обморок
Номинация на лучшую аудиозапись по версии ReadRChat Awards
Номинация на лучшее разрешение / воссоединение в Top Shelf Awards
Финалист конкурса Best Contemporary Romance in Booksellers ’Best Awards
«Хейзен разворачивает эту необыкновенную историю о неожиданной любви в пустыне Мохаве в Калифорнии.Медленно разгорающийся роман и яркие описания пустыни Хейзеном заставляют листать страницы. Этот милый, чувственный современник наверняка тронет сердца читателей «. -Publisher’s Weekly (звездный обзор)
«Последний душераздирающий и чрезвычайно страстный современный роман Хазена — бальзам для души для всех, кто пережил насилие и выжил, чтобы снова полюбить». — Список книг (помеченный обзор)
«Невероятно красивый роман, грохочущий, как тихий гром, по пустыне, обещающий, что любовь может достичь даже самых утомленных душ.- Мэри Энн Марлоу, автор книги Some Kind of Magic
«Романтика, доказывающая, что никогда не поздно найти любовь. Как всегда, герои Хейзена великолепно проработаны и до боли трагичны. Жар выжженной солнцем пустыни ощутим, когда милая Мари и грубый Джек оказываются друг с другом. Красиво написано от начала до конца! » -Келли Сискинд, автор серии One Wild Wish
«Душевный роман Хейзен с самого начала заинтересует читателей ее яркими и хорошо развитыми персонажами.»-Библиотечный журнал
«Грубый, втайне милый мужчина + сдержанная, умная женщина / (преодоление прошлой травмы) x (искреннее уважение) = самая восхитительно трогательная история любви, которую я когда-либо читал». -Маргарет Т., обозреватель Netgalley
«Я поражен тем, что такая тяжелая тема может быть затронута в контексте теоретически легкого чтения — баланс так умело установлен, что у меня закружилась голова. В одну минуту я был бы тронут до слез; в следующий раз я фыркаю от смеха и получу взгляды.»- Мэри, обозреватель Goodreads
.«Эта история сексуальна, своевременна, лична, душераздирающая и наполняет сразу все. Плюс секс-сцены … Я удивлен, что мой Kindle не загорелся! » -Дебора Марулис, автор книги Внутри и без
«Когда я начал, я не хотел откладывать книгу. Были сцены, которые заставляли меня смеяться, а другие заставляли меня тянуться за салфеткой ». -Barbara, обозреватель Goodreads
«Наблюдать, как они осознают свои чувства друг к другу, — все равно что смотреть, как цветок распускается из бутона.”-Suzette, обозреватель Goodreads
«Это, честно говоря, один из самых красиво написанных любовных романов, которые я когда-либо читал. Его развитие похоже на покадровую фотографию раскрывающегося цветка ». -Gj, рецензент Amazon
«Заставит вас улыбнуться. У них обоих ожесточенные сердца, но липкие центры медленно движутся наружу ». -Кэтлин Джи, обозреватель Amazon
.«6 звезд !!! Одна из лучших книг, которые я когда-либо читал! Я не думал, что Мишель Хейзен сможет дожить до потрясающей книги «Разбей меня», но она сделала это.Я так же любил Breathe the Sky ». — Криста, рецензент Amazon
.«Я прочитал всю эту книгу за один прекрасный день». -Рэйчел, обозреватель Goodreads
«Десять звезд и больше за эту, одну из моих любимых книг года». -Удобный диван Обзоры книг
«В этой книге есть милые черепахи / черепахи, горячие строители, пирожные и сладкая любовь. ЧТО ЕЩЕ МОЖЕТ ВАМ НУЖНО ?? -Алексис, обозреватель Goodreads
Доступно сейчас в Penguin Random House в электронной, торговой книге в мягкой обложке и аудиокниге!
Найдите здесь:
РАЗБИРАЙТЕ меня
Что может быть общего у двух обеспокоенных душ из разных слоев общества? Может все.
Андра Лоулер живет изолированно на конном ранчо своей семьи, в плену воспоминаний о нападении в колледже. Когда ей нужна помощь в дрессировке жеребят, она нанимает гаитянско-креольского ковбоя из Нового Орлеана со смехом размером с небо Монтаны.
LJ Delisle не выносит мысли, что Андра может быть одинок или ест замороженные обеды по телевизору. Он пробирается к ней на кухню с лимонным бархатным тортом и предлагает ей уроки кулинарии, которые направляют их на путь романтики. Но даже их любовь не может избежать тени того, через что они прошли.Несмотря на их растущую дружбу и нежное взаимопонимание с лошадьми, LJ по-прежнему остается аутсайдером, сталкивающимся с подозрениями жителей маленького городка.
Прежде чем они смогут решить свои проблемы, LJ вызывает домой по семейным обстоятельствам. На многовековых, неряшливо перестроенных улицах Нового Орлеана ему предстоит столкнуться с воспоминаниями об урагане «Катрина» и знакомой дискриминации. И Андра должна решить, достаточно ли у нее храбрости, чтобы покинуть убежище на ранчо в неопределенном будущем с LJ.
Предварительная похвала для Unbreak MeЛучший романс месяца на Amazon
Топ-10 романсов 2019 года из Книжного списка
Лауреат премии Lonestar в области современного романа
«Хейзен с изяществом и состраданием пишет о жизни после травмы, плавно обращаясь к расизму, сексуальному насилию и крупномасштабным бедствиям без простых ответов и банальностей.Это настоящий слезник для любого фаната романтики «. — Еженедельный обзор издателя STARRED
«Два выживших после травмы находят любовь и принятие в теплом и вдумчивом современном мультикультурном романе Хейзена. Хорошо проработанные персонажи Хейзена, мягкие и горячие любовные сцены и изысканно детализированные декорации делают эту историю любви выигрышной ». -STARRED Обзор списка книг
«Соблазнительный, неспешный роман, полный нежности, надежды и трансформации» — Таммара Уэббер, автор бестселлеров New York Times
«От стремительного неба Монтаны до яркости Нового Орлеана — Мишель Хейзен вкладывает эмоциональный удар в каждое слово этой захватывающей истории.Unbreak Me — это непримиримый роман, который откровенно сталкивается с противоречивыми проблемами и захватывает ваше сердце с первой страницы ». ~ Келли Сискинд, автор книги New Orleans Rush
«Я буквально не переставал кричать о Unbreak Me с тех пор, как взломал первую страницу. Я даю ему все звезды. ВСЕ ЗВЕЗДЫ. Мне это так понравилось, что я вернулся к началу и начал снова ». -Маргарет, обозреватель Goodreads
«Мишель Хейзен создает красивый, динамичный мир с невероятными фонами в двух очень разных условиях.Но не равнины Монтаны или магия Нового Орлеана украли мое сердце, а ее главные герои. Широта их эмоций и конфликтов, с которыми они сталкиваются, заставили меня до поздней ночи перелистывать страницы, надеясь и молясь, что они найдут способ заставить любовь работать вопреки всему. «Unbreak Me» оставил меня с чувством тепла в моем сердце, и я не могу дождаться, чтобы увидеть, что ждет Хейзен на горизонте ». — Максим М. Мартино, автор Kingdom of Exiles
«Я любил Андру как лучшую подругу, а LJ… он САМЫЙ БОЛЬШОЙ книжный парень.❤️ Смелые и красивые рассказы, ошибочные персонажи, которые надолго останутся со мной. Все в Unbreak Me было безупречным ». -Хизер Ван Флит, автор серии «Безрассудные сердца»
.«Unbreak Me сломал меня. Эта книга цепляется за первые страницы и не отпускает до конца … У меня слезы были на 20%, и я не плачущий. Действительно приятное чтение ». -Мэри Энн Марлоу, автор книги «Знакомства по книге
».«Горячо! Горячий! Горячий! Мишель изящно и честно решает многие сложные вопросы.»-Терри М., обозреватель goodreads
«Эта книга заслуживает всех звезд! «Unbreak Me» — мощная книга, в которой рассказывается о расизме и сексуальном насилии, а также о прекрасной истории любви между двумя необычными людьми ». -Readsandreviews.com
«Святая Ханна. Эта книга просто поразила меня. «Unbreak Me» — это динамичная смесь милого, трогательного романа, противопоставленная суровым, честным и заставляющим задуматься о реальных травмах. Эта история была невероятной и важной, и я подозреваю, что она останется со мной еще некоторое время.Он был многослойным, детализированным и прекрасно написанным. Я даже не ожидал выхода этой книги, и это меня просто потрясло! » Книжный блог Bookgasms
«Способность Хейзена с уважением и состраданием решать деликатные и сложные вопросы сделала эту книгу одной из моих любимых книг года!» -Трисия Линн, автор Moonlight & Whisky
Уже в продаже!Amazon | БИН | Nook | Кобо
Серии «Секс, любовь и рок-н-ролл»
Следуйте за рок-группой из баров в большое время, поскольку секреты их сексуальной жизни начинают отражать битвы их музыкальной карьеры.От смешного выплевывания кофе до такого душераздирающего, что вы будете хватать салфетку, чтобы промокнуть глаза, эта серия подарит вам ощущения от всех .
Жестокая красота — Книга 1
Окунитесь в этот роман между друзьями и любовниками, который обозреватели называют «горячим, юмористическим, честным» и «шоколадным кайфом».
Джера Макнайт любит музыку, без ума от горячих парней, но отстой в сексе. Джейкоб Тейт — ее идеальный шторм: любящая каламбур обнаженная модель с сердцем размером с его коллекцию пластинок.
Когда в результате несчастного случая с доставкой газеты он попадает в ее гостиную, у него возникает соблазн заставить ее забыть, что она никогда не была достаточной для мужчины — в постели или вне ее. Конечно, он смеется над ее непонятными шутками и даже примет рейтинг PG, если это означает, что он проводит с ней время, но он также кое-что скрывает. И все это связано с запретной комнатой в его квартире.
Джера вкладывает все свое смятение и тоску в свою ударную установку, что окупается, когда ее группа подписывает контракт с записью своей мечты.Кроме Джейкоба, было бы слишком хорошо прийти без улова.
Она не знает, достаточно ли хороша ее музыка, чтобы привлечь лучший контракт, или достаточно, чтобы соблазнить такого человека, как Джейкоб, раскрыть свои секреты. Но если эта рокерша слишком боится ставить на себя, она может просто сыграть в пустой дом.
Сегодняшний душераздирающий и мрачный роман одним щелчком мыши!
Предварительная похвала за жестокую красоту
«Как Сьюзен Элизабет Филлипс с более грязным чувством юмора.
— Шейла Афины, автор ускорителя
«Горячо, с юмором и честно. Благодаря уникальному голосу Хейзен эта тревожная история любви стала увлекательной. — Лейла Рейн, автор книг Agents Irish and Whisky , серия
. «Написано красиво, а концовка заставила меня усмехнуться от ушей до ушей».
-GJ, обозреватель Goodreads
«Умный и веселый, с потрясающим голосом, ЖЕСТКИЙ ВИД КРАСИВОЙ заставит ваше сердце биться до конца». -Кэти Голдинг, автор Order Up
«Сладкий и сексуальный, с сюжетной линией, которая глубоко затягивает, ЖЕСТКОЕ КРАСИВОЕ — это все, что я обожаю в романах.
— Хизер Ван Флит, автор серии «Безрассудные сердца»
«Наблюдать, как Джейкоб носит Jera вниз, не только весело, но и приятно и реально. Хейзен пишет сцены их совместной любви, как будто она заглядывает в умы своих читателей ». -ReadsandReviews.com
Электронная книга за 3,99 доллара США / за 9,99 доллара в мягкой обложке
Уже в продаже!
Заполните меня — Книга 0.5
3 друга. 1 полоса. Судьба начинается здесь.
Барабанщик гаражной группы, которая не может удовлетворить своего парня.
Басист, выступающий на более мрачных сценах, чем музыкальные, и не умеющий отличить свою лучшую подругу.
Ведущий певец, который, кажется, не может удерживать место хедлайнера в своих дружеских отношениях.
Это всего лишь еще один концерт в дайв-баре, но сегодня вечером раскрываются все секреты группы.
Этот приквел представляет собой небольшой рассказ о группе The Red Letters. Он происходит перед книгами о каждом из участников группы, но может быть прочитан до или после Книги 1.
Предварительная похвала для Fill Me
«Раньше встречаться с персонажами, а затем возвращаться к небольшому пониманию их жизни было намного веселее, и это заставило меня полюбить их так же, как я влюбился в Джеру и Джейкоба в первой книге. Как будто у Мишель есть удивительный дар переключаться с сексапильности и курения на смешное и остроумное на одном дыхании, и это опьяняет ». -Cheridan, обозреватель Goodreads
«Хейзен говорит о многом в нескольких словах и обладает довольно мощным ударом.Мы получаем несколько глав из точки зрения каждого персонажа, где мы знакомимся с проблемой, которая их определяет, что, в конце концов, является тем, к чему мы все можем иметь отношение: чувство того, что вас недостаточно, и желание найти то, что заставит нас почувствовать себя завершенными ». -ReadsandReviews.com
БЕСПЛАТНАЯ электронная книга!
Уже в продаже!
Воспроизведение пауз — Книга 2
Погрузитесь в пар этого романа о друзьях с выгодой, который читатели называют «тлеющим», «увлекательным» и « лучше, чем , чем« Пятьдесят оттенков серого ».”
Кейт — профессиональная женщина, путешествующая по всему миру, которую нельзя связывать.
Дэнни — доминирующий музыкант и татуировщик, которому нужна ее помощь, чтобы изучить его истинные изгибы.
У Кейт только что начался большой перерыв, она провела международный тур для растущей группы. Ее работа для нее все … по крайней мере, до тех пор, пока она не встретит загадочного басиста группы.
После того, как они сталкиваются в одну незабываемо эротичную ночь на балконе отеля, он приходит к ней с предложением. Как бывший исполнитель БДСМ-клуба, Дэнни так долго воплощал в жизнь чужие фантазии, что теперь он хочет вернуть свои собственные — и он говорит, что она единственная, кто может помочь.
Попасть в постель со своим боссом могло стоить ей карьеры, и все же в тихой напряженности Дэнни есть что-то, перед чем она не может устоять. Он сильно ворует ее сердце. Но близится конец тура, и их работа направляется в два разных направления.
Чтобы быть вместе, одному из них придется прекратить гастролировать, но единственное, чего они жаждут не меньше друг друга, — это музыки.
Один клик по этому горячему и душераздирающему роману уже сегодня!
** Эта книга содержит спойлеры к более ранним книгам серии, но ее можно читать и понимать как отдельную.Никаких обманов, никаких захватывающих моментов, гарантировано HEA. **
Плейлист: https://goo.gl/Ex3mg7
Чтобы просмотреть дополнительные главы, плейлисты и забавные закулисные новости, нажмите здесь!
Предварительная похвала за воспроизведение пауз
«Дэнни: мальчик, для которого были изобретены смайлики с сердечками». -Кристи, обозреватель Goodreads
«С одним очень сексуальным описанием своих татуированных рук Дэнни завладел моим сердцем». -ReadsandReviews.com
«Благодаря безжалостной химии и быстрому письму невозможно не стать стойкой поклонницей Дэнни, Кейт и The Red Letters.Драматические взлеты и падения закулисного рок-мира безжалостно ярки. Я проглотил эту книгу до последней страницы ». — Келли Сискинд, автор серии Over the Top
Электронная книга $ 3,99 / мягкая обложка $ 9,99
Уже в продаже!
Свяжите меня — Книга 2.5
Погрузитесь в этот душераздирающий роман на расстоянии, который рецензенты называют «вызывающим сильное привыкание» и «одним из самых проникновенных романов, которые я когда-либо читал.”
Однажды тур-менеджер и бас-гитарист влюбились друг в друга.
Много месяцев и миль спустя Кейт и Дэнни пытаются построить совместную жизнь между двумя работами по установке самолетов. Но, несмотря на их образ жизни в стиле БДСМ, Кейт стесняется веревки, когда открывается дверь спальни.
Втайне она жаждет большего, чем просто профессиональное удовлетворение, хотя и поклялась, что никогда не променяет пропуск за кулисы на частокол. Но этому Дому потребуется нечто большее, чем просто слова, чтобы помочь его самоуверенной сабмиссивной осознать, что она никогда не была более свободной, чем когда она была связана.
Идеально подходит для фанатов, жаждущих счастливого конца, который, похоже, может случиться в реальной жизни. Нажмите на копию этой сексуальной душераздирающей новеллы прямо сейчас!
** Эта новелла является продолжением, а не отдельной книгой. Лучше всего прочитать Книгу 2: Воспроизведение пауз для первой части истории Кейт и Дэнни, хотя вам не обязательно читать оставшуюся часть серии, чтобы понять эти две. HEA гарантировано! **
Предварительная похвала за то, что связала меня
«Это была отличная история !!!! Определенно моя любимая книга в этом году.”- М., обозреватель Amazon
.«Это была самая милая, самая удивительная новелла, которую я когда-либо читал !!» -Кассандра, рецензент Amazon
«Tie Me Down делает вымышленный HEA реалистичным». -Блог о непослушных мамах
«Эмоционально! Интересно! Восхитительно!
Я был удивлен, узнав, что медленный старт был совсем не медленным… он просто настраивал читателя на один из самых мощных человеческих обменов, которые я читал. КОГДА-ЛИБО.
Сделайте себе большое одолжение и рискните с этим.”- Джин, обозреватель Amazon
.«Эта серия вызывает все большее привыкание с каждой новой книгой, которую автор выпускает». Блог о собачьих мечтах
Электронная книга 1,99 $ / мягкая обложка 6,49 $
Уже в продаже!
Ненасытный — Книга 3
Погрузитесь в гламур этого романа между друзьями и влюбленными, который обозреватели называют «всепоглощающим», «любящим и остроумным» и «прекрасным финалом удивительного сериала».
Как солист Red Letters, Джаксу Стерлингу легко скрывать свое одиночество за образом жизни плохого парня … пока он не отправляется в тур с богиней хард-рока, которая заставляет его хотеть отношений, которые бывший наркоман никогда не может себе позволить. .
На сцене Ава — это все цепи, кнуты и гитарные звуки, но признания за кулисами, которые они разделяют, темнее их кожи.
Она хочет Джакса, но он хочет для нее лучшего, чем он.
Но затем падают плохие новости, которые угрожают жизни одного из его товарищей по группе и лояльности другого. В ужасе от того, как мало у него осталось, если он потеряет своих лучших друзей, Джакс делает решительный шаг, чтобы впустить в свою жизнь кого-то еще.
До тех пор, пока Ава не узнает его ужаснейший грех, и она ничего не сможет простить.
Один клик по этому мощно эмоциональному роману сегодня!
** Эта книга содержит спойлеры к более ранним книгам серии, но ее можно читать и понимать как отдельную. Никаких обманов, никаких захватывающих моментов, гарантировано HEA. **
Предварительная похвала ненасытным
«Эта книга привлекла меня, как запах свежесваренного кофе». -JJ, Amazon обзор
«Вау. Эта книга. Эмоционально насыщенное чтение, затрагивающее сложную тему с нюансами, заставляющими задуматься.»- Кат, обозреватель
«Здесь столько драмы, столько эмоций, но, к счастью, достаточно юмора, чтобы не было слишком мрачно». -H, рецензент Amazon
«Ненасытный — прекрасная история о любви. Это романтическая любовь, любовь между друзьями, часто болезненная любовь, которую мы разделяем с нашей семьей, и для Джакса, наконец, способность любить себя «. -Блог чтения и обзоров
«Чрезвычайно талантливая Мишель Хейзен по-настоящему поразила меня своим« Insatiable », и после прочтения такого мощного рассказа я испытываю сильнейшие эмоции.Я НАСТОЯТЕЛЬНО РЕКОМЕНДУЮ ВСЕМ! » -Сила трех читателей
Электронная книга $ 3,99 / мягкая обложка $ 9,99
Уже в продаже!
Рождество с оркестром — Книга 3.5
Татуировки, домашние пожары и домашний арест: это Рождество с группой!
Все, что Джакс хочет на Рождество, — это чтобы его любимые люди ладили. Поэтому, когда он забирает Аву домой на каникулы, она клянется, наконец, помириться с его барабанщиком.Вместо этого она получает домашний пожар, домашний арест и ужин, который никто из них никогда не забудет.
Эта комическая игра из праздничной истории окутывает мир сериалов «Секс, любовь и рок-н-ролл» красным кружевным бантом.
Уже в продаже!
$ 0.99 Электронная книга
Коробочный набор из 6 книг о сексе, любви и рок-н-ролле
Этот отмеченный наградами сериал повествует о рок-группе, которая из баров превратилась в знаменитость.
Познакомьтесь с пылкой барабанщицей, мощной басисткой с чувственным секретом и харизматичной солисткой с темной стороной.
Отправляйтесь в путешествие по их жизням, преследуя свои мечты, и посмотрите, кто в конечном итоге покорит их сердца!
** Совершенно новый бонусный контент! Эксклюзивные интервью между автором и каждым из трех персонажей группы, чтобы узнать обо всех сплетнях о том, что происходило с момента окончания сериала! Эти веселые и душераздирающие интервью доступны только в этом коробочном наборе.**
Уже в продаже!
Набор электронных книг за $ 9,99 — скидка 33% при покупке каждой книги по отдельности!
Порядок чтения
Секс, любовь и рок-н-ролл, сериалы
Хронологический
0,5 Наполни меня
1,0 Жестокий вид прекрасного
2,0 Воспроизведение пауз
2,5 Свяжи меня
3,0 Ненасытный
3,5 Рождество с браслетом
Рекомендуемый автором порядок чтения
1.0 A Cruel Kind of Beautiful
0.5 Fill Me
2.0 Воспроизведение пауз
2.5 Tie Me Down
3.0 Insatiable
3.5 Рождество с группой
Сохранить
Сохранить
Сохранить
Сохранить
Сохранить
классических экспонатов — поиск дизайна экспоната
Добавьте дизайны и фотографии в свою личную галерею, просто нажав на ссылку + Моя галерея
Затем отправьте свою «мою галерею» по электронной почте коллегам, друзьям или вашему любимому выставочному дизайнеру.Нет лучшего способа начать разработку дизайна, отражающего ваши маркетинговые цели выставки.
Примечание. Моя галерея использует временные файлы cookie браузера для хранения вашей галереи. Мы рекомендуем вам отправить свою галерею на свой адрес электронной почты, если вам нужно сохранить ее более 30 дней.
Exhibit Weight зависит от упаковки и способа доставки. Переменные включают, но не ограничиваются:- Размерный вес по сравнению с фактическим весом: Размерный вес определяется как размер ящика или ящика.На большинстве авиаперевозок габаритный вес превышает фактический
- Переносные ящики и деревянные ящики или формованные ванны (если применимо): Приложение конструкции, для которых требуется один деревянный ящик, потребуют нескольких переносных ящиков. Выбор одного vs. другой влияет на общий вес (габаритный или фактический).
- Грузовой перевозчик: LTL перевозчики (меньше, чем грузовик) указывают стоимость перевозки по используемому пространству. UPS, FedEx и авиаперевозчики указывают фрахт на основе габаритный или фактический вес отправления.
- Уровень обслуживания грузовых перевозок (количество дней): Уровни обслуживания варьируются от того же Дневная доставка до двухнедельной доставки.
- Встроенный vs.Островные Подставки
- Устройства для извлечения свинца
- Кабели для компьютеров и мониторов
- Демонстрационное оборудование
- Верхнее освещение
- Прокладки и их размещение в счетчиках
- Верхний и напольный источник питания
- Полы и электропроводка
- Варианты скрытия шнуров и кабелей
- Плоские и круглые электрические шнуры
- Розетки и удлинители с несколькими вилками
бесплатных эротических романсов для Amazon Kindle Daily
Социальные сети и безжалостные миллиардеры: электронные книги о бесплатных романах
StarDust (Книга пяти элементов 2) Николь Уэллс: На Земле существует серьезный дисбаланс, вызывающий стихийные бедствия и редкие силы. Войдите в мир Пяти Элементов вместе с Авророй и Брайденом, пока она превращается из суперзвезды в супергероя. Узнайте, почему отмеченные наградами авторы и ведущие рецензенты называют эту книгу любимой книгой года! Идеально подходит для поклонников трилогии «Все души» Деборы Харкнесс, которые хотят получить фантастический поворот.
Эта книга станет бесплатной 16 ноября 2021 года
Kindle Nook Kobo Google
Every Breath You Take (Переодетые миллиардеры: Джорджи и Ксан, книга 1) Блэр Вавилон: Джорджи Джонсон на свадьбе в высшем обществе знакомят с Александр де Валентинуа, потомственный герцог ничтожества, называющий себя «одним из тех презренных, праздных богачей». Но у Александра есть темная сторона. Его также зовут Ксан Валентайн, и он фронтмен рок-звезды Killer Valentine. Включает «Alwaysland», приквел ксана Валентина.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 года
Kindle Nook Kobo Apple Google
Невеста (Книга 1 серии «Невеста») С. Дойла: Мне было шестнадцать, когда умер мой отец. Государство хотело поместить меня в приемную семью. Джейк, начальник моего отца, этого не допустит. Вместо этого он женился на мне.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 года
Kindle
Набор «Волк фон Брандта», созданный Кристал Шеннан: «Оборотни Где-то в Техасе, найдите своих товарищей!» От встречи ковбоя с застрявшей светской львицей до благотворительного холостяцкого аукциона, на котором собираются два незнакомца, — эта коллекция повествует о раскаленной страсти.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 г.
Kindle Nook Kobo Apple Google
Bellhop (The Hotel at Brew by Brewer Book 1) Элси Джеймс: После развода жизнь Эмери совсем не такая, как она ожидала. Но быть матерью-одиночкой имеет свои преимущества, и Эмери живет своей жизнью… Так было до тех пор, пока ее сын не рассыпал в дыму ее самые продуманные планы. Не о чем беспокоиться, сексуальный пожарный Лукас готов спасти положение. Летят искры! Но это любовь или он просто пускает дым?
Эта книга выйдет бесплатно 16 ноября 2021 г.
Kindle
Захвати момент (книга братьев О’Брайен 1) Сьюзан Ковентри: молодая вдова.Лучший друг ее мужа. Запретная любовь. Харпер овдовела уже два года, когда обнаруживает, что ее привлекает лучший друг покойного мужа. Мне кажется неправильным хотеть его, и она отчаянно пытается скрыть свои чувства. Финн не был ее первой любовью, но будет ли он последним? Узнайте в Capture the Moment.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 г.
Kindle
«Щепотка обязательств» (Книга 2 «Покрывала и клятвы»), написанная Джин Орам: шеф-повар Лили Харпер росла вслед за Итаном, спасшим ее от хулиганов, грязевых луж и быть аутсайдером.Когда Лили убегает от неприятного бывшего, который не понимает намека, она возвращается домой в Блуберри-Спрингс, заключает тайную брачную сделку со своим защитником детства Итаном.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 года
Kindle Nook Kobo Apple Google
Рождественский демон для Клары (Candy For Demons Book 1) Хлои Элис Балкин: Все, что демон переедает, — это лучший лимонный батончик на Земля. Клара может быть пекарем, но есть две небольшие проблемы: она отказывается печь их не в сезон, и ангел был послан, чтобы убить ее.Взять ее в ад, чтобы заставить ее печь прутья, пока он обращается с ангелом, кажется лучшим планом — пока он не встретит ее сестер.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 года
Kindle
Сделка с дьяволом (Книга 1 трилогии Кузницы) Меган Марч: автор бестселлеров New York Times Меган Марч рассказывает вам историю безжалостного расчетливого миллиардера Джерико Форджа и его последняя жертва, чемпионка по покеру Индия Батист, которая за свою жизнь увлечена игрой с высокими ставками.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 года
Kindle Nook Kobo Apple Google
Snowed In (Snowed In Book 1) Триша Вентворт: Единственное, что Джордин Мак ненавидит больше, чем маленькие городки, — это футболистов. Но когда ее босс посылает ее с миссией нанять «Харпера разбитых сердец» для их рекламы Суперкубка, она встретилась лицом к лицу с обоими. Городской романтический сериал из трех книг. В честь выхода третьей и последней книги на этой неделе первая книга бесплатна.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 года
Kindle
Starlight Love (Starlight Ridge Book 3) Кэт Беллемор: Искры летают, когда великолепный голливудский актер Эли Хант решает снять фильм в шоколадном городке Аделины Бейкер. магазин. Жаль, что она не может поверить ни единому слову, которое слетает с его уст, потому что Эли известен только в одном. Он никогда не выходит за рамки персонажа во время съемок фильма — даже вне съемочной площадки.
Эта книга станет бесплатной 16 ноября 2021 г.
Kindle Nook Kobo Apple Google
Safe In A Stranger’s Arms (Katherine Bay Romance Book 2) Ширли Вайн: Кому она посмела доверять? Преданная всеми, своей семьей, соседями, Дженна не дает покоя словам умирающей матери: «Не продавай землю.«Ее настойчивые вопросы беспокоят мутную воду, и опасность угрожает ей на каждом шагу. Когда застройщик Гейб Каллахан предлагает свою помощь, она насторожилась. С жизнями на кону, она не видит другого выхода.
Эта книга бесплатно 16 ноября 2021 года
Kindle Nook Kobo Apple
Солдатская жена (книга 1 семейной трилогии Деверо) Мэрион Рейнольдс: теплая семейная сага, действие которой происходит в Ирландии в неспокойные годы ранней эпохи. двадцатый век. Романтичная и наивная Эллен влюбляется в Джеймса, ирландца, служащего в британской армии.Джеймс едет во Францию, чтобы сражаться в Первой мировой войне, Эллен остается в Дублине со своими детьми. Могут ли сила и выносливость семейной любви спасти семью Деверо?
Эта книга будет бесплатной 16 ноября 2021 г.
Kindle
«Останься со мной» («Восхождение Лазаря», книга 3 ») Синтии Иден: Шелли Хэмптон намерена провести каникулы одна в горной хижине своей семьи, но когда наступит снег незнакомец появляется на пороге ее порога, ее планы рушатся прямиком к черту. Но действительно ли Джон Смит — мужчина, которого она может любить… или он тот, кого ей следует бояться? Потому что даже когда снег становится сильнее, смертельная угроза приближается к ее маленькой хижине.
Эта книга станет бесплатной 16 ноября 2021 года
Kindle
Бесстрашный горец (книга 1 защитника Хайленда) Эми Джареки: наследник самого печально известного клана в Хайленде, Хью Макайн скрывает свою личность, будучи заключенным в недрах ада Форт-Уильяма. Да, этот воинственный воин пережил ужасы, которые должны были привести к его смерти, хотя теперь кажется, что именно кровавый поток отправит его в огонь сатаны.
Эта книга бесплатна 16 ноября 2021 года
Kindle
Mafia Captive (Mafia Ménage Trilogy Book 1) Джулии Сайкс: Два могущественных силовика мафии одержимы невинной студенткой колледжа Эшлин, которая ничего не знает о своем темном преступном мире .Когда ее связь с ними подвергает ее опасности, собственнические мужчины сделают все возможное, чтобы защитить ее от своих врагов … даже если это означает ее похищение.
Эта книга станет бесплатной 16 ноября 2021 г.
Kindle Nook Kobo Apple Google
Эти книги больше не бесплатны? Подпишитесь на нашу электронную почту и никогда больше не пропустите бесплатную книгу! .