Как вк добавить в чс с компа: как посмотреть, как убрать человека из ЧС (черного списка)

Содержание

Как посмотреть черный список друга В Контакте: простые лайфхаки

Если вы любите банить надоедливых пользователей, вас должен интересовать вопрос как посмотреть черный список В Контакте. Причина может быть любой: вспомнить обидчиков или удалить оттуда того, с кем помирились. В разделе можно редактировать и корректировать все свои действия.

Доступ к секции осуществляется с мобильных устройств, ноутбуков, стационарных компьютеров. Был бы интернет, да установлено приложение. Узнаем, как В Контакте посмотреть кто у человека в черном списке разными способами. А также, как посмотреть черный список (ЧС) в ВК у друга (и возможно ли это).

Ищем черный список на своей странице

В собственном профиле найти раздел не сложно. Он спрятан в секторе настроек.

Через компьютер

В компьютерной версии сайта посмотрите на верхнюю синюю рамку. Найдите на ней круглый значок с аватаркой, кликните по нему;

В появившемся меню выбирайте клавишу настроек , переходите в раздел;

Структура и подразделы сектора указаны в колонке справа. Найдите black-лист, щелкните мышью;

Перед вами загрузится перечень заблокированных ранее страничек. Можете добавлять, удалять, просматривать профили;

Длинную колонку легко посмотреть, включив поиск по людям. Вверху перечня есть поле поисковика. Начните печатать начальные буквы требуемого имени, и все неподходящие пользователи сразу отфильтруются;

Если вы никого не блокировали, на пустом поле вы увидите сообщение, что черный список пуст.

Также рекомендуем Вам ознакомиться с нашей статьей о том, как узнать, у кого я в ЧС. Она поможет Вам понять, кто же их друзей забанил именно Вас!

Через смартфон

Узнать, кто у человека в ВК в ЧС, используя телефон, можно так же – через настройки.

В мобильной версии они обозначены круглым знаком, похожим на шестеренку.

Зайдите в приложение, найдите внизу строку состояния со значками. Последний справа в виде трех палочек вызывает главное меню;

В этом разделе наверху вы увидите шестеренку, кликните по ней и по разделу ЧС;

Появится список забаненных людей. Отсюда можно переходить на их страницы, удалять «прощенных» пользователей.

Как посмотреть чужой black-list?

Иногда так хочется узнать, кто в ЧС у друга ВК, такое любопытство порой доводит до невроза. Можно попытаться уловкой завладеть его устройством или выведать пароль от профиля В Контакте. Других способов нет.

В интернете встречаются приложения, которые предлагают помочь вам увидеть черный список друга ВКонтакте. Некоторые – платные или содержат кучу рекламы, обязательной к просмотру. В конечном итоге выясняется, что программа лишь помогает узнать, у кого в бане сам пользователь, и это максимум.

Обратите внимание, black-лист – это личный перечень хозяина странички. Вряд ли кому-то захочется с ним делиться. Подумайте, стоит ли портить отношения со знакомым, влезая в его закрытое пространство. Всегда есть реальный риск прямо туда и угодить за чрезмерное любопытство.

faqkontakt.ru

Как узнать кто в ЧС у друга ВК?

Хочу узнать кого внес мой друг в свой черный список в Контакте. Как это можно сделать, чтобы он не заметил?
Зайти с его компа под его именем не предлагать — не даст.

Для этого нужно зайти «Управление сообществом» находится под аватаркой группы, далее перейти на вкладку «Участники» → «Черный список».

Если человек нарушающий правила является подписчиком, его можно найти на вкладке «Участники» или воспользоваться «Поиск по подписчикам».

Если человек не является подписчиком, копируем ссылку страницы пользователя, которого нужно блокировать и нажимаем ENTER.

Напротив выбранного пользователя нажмите «Заблокировать».

В новом открывшемся окне «Блокировка пользователя» нужно сделать настройки блокировки.

Отдельной услуги «содержимое черного списка» для выбранного участника вКонтакте нет. Равно как и нет услуги «показать, у кого я в черном списке». Подтвердить сомнения можно, попытавшись послать подарок или сообщение тому, у кого вы, предположительно, в ЧС. Появится соответствующее сообщение. Но оно распространяется и на ограничение приватности. А вот добавить в друзья такого человека нельзя по однозначной причине — Вы у него в ЧС.

Где вы этот черный список находите, я вот никак не могу его открыть. Надо одного чудака в него добавить, а то уже все уши прожужжал, спамер фигов.

Настройки — черный список. Чтобы найти «черный список» в обновленном ВК нужно открыть страницу, нажать на аватарку. Выбрать «Мои настройки- Черный список». Внести имя в строку «Пользователь» и нажать Enter, в открывшемся списке нажать кнопку «В черный список» после этого человек которого вы выбрали больше не сможет писать вам сообщения и заходить на вашу страничку.

Зайди в его профиль и найди настройки. Если у вас смартфон на андройде, то у вас есть кнопка справа. Нажмите и увидите заблокировать и все в принципе.

Может немного не по теме вопроса, но если ЧС не узнать, то может можно сообщения глянуть у друга?
Мой парень скрывает свои отношения на стороне и я хочу деталей.

Если вы хотите прочитать личную переписку другого пользователя Вконтакте, то это уже что-то нехорошее, ведь это уже взлом страницы В Контакте.
Во-первых это незаконно.
А вот-вторых взломать контакт малорельно в принципе.
А программы в интернете для взлома чужих переписок — это сборище вирусов, способных заразить ваш компьютер и потырить ваши пароли.

Кто знает, это реально?

Нельзя самоудалиться из чужого списка. Только друг может убрать вас у себя.

Как узнать, что меня заблокировали в группе? Заходя на страницу группы, ты будешь видеть такое: «Вы добавлены в чёрный список этого сообщества». К этому может быть добавлен комментарий администратора группы — прочти его, чтобы понять, почему тебя заблокировали. Если ты считаешь, что тебя заблокировали несправедливо, и хочешь разблокироваться в группе, постарайся связаться с ее администратором (или попроси кого-нибудь из друзей это сделать). Не стесняйся извиниться, если был неправ. А можно просто молча сидеть, тогда ничего не произойдет и ты останешься заблокированным до конца времен. Тогда ни в коем случае никому не плати, а сделай все по инструкции.

Узнать нельзя, это уже понятно.
А как добавить в черный список друга в вк?

От любых неприятных Вам пользователей можно защититься чёрным списком, который находится в настройках: vk.com. Пользователь, занесённый в чёрный список, не сможет присылать Вам заявки в друзья, личные сообщения или беспокоить любым другим способом.

Также можно воспользоваться кнопкой «Заблокировать» на странице пользователя (кнопка в виде трёх точек под аватаром → «Заблокировать»). Она есть только у пользователей, которые не являются Вашими друзьями.

Есть какие то троянские программы якобы дающие доступ к черному списку друга, но это вирус, который вместо этого внедрит в ваш комп или смартфон вредоносного шпиона. Не устанавливайте всякую гадость, узнать чужой ЧС невозможно в принципе!

Люба, с вас хочется ржать)))

Почему сразу такая реакция?
Человек по делу задает вопросы, а вы ерундой тут занимаетесь, т.е. Засоряете интернет бесполезной перепиской.

Как посмотреть? Будете у него в гостях зайдите в его комп, когда его не будет в комнате и посмотрите.

www.zaboltay.ru

Черный список ВКонтакте: как посмотреть, как убрать человека из ЧС (черного списка)

Посмотреть свой ЧС (черный список) ВКонтакте требуется, чтобы определить, кого ты туда занес и заблокировал (то есть эти люди больше не могут тебе писать и не могут смотреть твою страницу). Может быть, ты заблокировал человека по ошибке, а может, это было осознанное решение, но сейчас обида уже прошла и ты хочешь удалить его из черного списка. Обо всем этом читай дальше.

Как посмотреть черный список ВКонтакте (узнать, кого я заблокировал)?

Твой черный список людей ВКонтакте находится в настройках. Чтобы открыть настройки в обычной версии ВКонтакте, нажми справа вверху на свое имя или на аватарку — откроется меню. Затем выбери там пункт Настройки:

Настройки состоят из нескольких разделов. Тебе нужен Чёрный список — нажми на этот пункт в правой колонке.

А еще свой черный список можно сразу открыть по этой ссылке: Мой черный список.

Перед тобой откроется список всех людей, кого ты когда-либо заблокировал. Когда ты заносишь кого-нибудь в черный список, он остается там навсегда. Точнее, до тех пор, пока ты его сам не разблокируешь.

Как открыть черный список ВКонтакте в мобильной версии, в приложении на телефоне?

Примерно так же. Сначала нажми на кнопку главного меню (три полоски слева вверху), потом прокрути меню вниз (если его не видно целиком), нажми

Настройки и затем Чёрный список. Кроме того, в мобильной версии можешь попасть туда по этой ссылке: Мой черный список.

Как разблокировать человека ВКонтакте, убрать из черного списка?

Эти способы для полной версии ВКонтакте. Для мобильной — смотри дальше.

Сначала открой черный список (смотри выше, как это сделать). Далее, напротив каждого человека есть ссылка Удалить из списка. Выбери человека, которого ты хочешь разблокировать, и нажми «Удалить из списка». После этого он сразу же сможет смотреть твою страницу и писать тебе в личку.

Зайди на страницу этого человека и найди кнопку с тремя точками (меню) — под главной фотографией. Нажми на нее и выбери пункт Разблокировать. Нажми на него. Вот и все!

Если человек совсем заблокирован ВКонтакте, это другое. Значит, его страница заморожена по каким-то нехорошим причинам, и он вообще не может пока пользоваться сайтом. Об этом подробнее написано здесь: Заблокировали ВКонтакте. Что делать?

Как разблокировать человека ВКонтакте, убрать из черного списка в мобильной версии ВКонтакте?

1-й способ в мобильной версии

Открой черный список по ссылке Мой черный список. Нажми на человека, которого хочешь убрать из заблокированных, затем на его странице найди в «Действиях» пункт Разблокировать и нажми на него.

2-й способ в мобильной версии

Точно так же открой черный список, переключись на полную версию (ссылка «Полная версия» в самом-самом низу страницы) и нажми Удалить из списка напротив нужного человека. Если мелко, увеличь изображение пальцами. Затем ты сможешь вернуться к мобильной версии по ссылке в левой колонке — «Перейти к мобильной версии».

Как найти человека в своем черном списке?

В самом верху черного списка есть поле Поиск по черному списку. Нажми туда и начни набирать имя или фамилию человека, который тебя интересует — ты быстро его найдешь. Эта функция полезна, когда в твоем черном списке много людей.

Как посмотреть чужой черный список? Как узнать, есть ли я в черном списке?

Посмотреть чужой черный список нельзя, это личная тайна каждого пользователя. Но можно легко определить, находишься ли ты в черном списке конкретного человека. Вот инструкция: Как узнать, что тебя заблокировали ВКонтакте.

Как заблокировать человека, занести в черный список?

Новый вход ВКонтакте

Попробуй стартовую страницу «Вход» — она удобна и дает много интересных возможностей для твоей страницы ВКонтакте:

vhod.ru

Как посмотреть черный список в ВК

Как посмотреть черный список в ВК – вопрос, казалось бы, несложный, но вызывает замешательство у некоторых пользователей. Предположим, вы случайно занесли профиль в чёрный список, а теперь хотите достать оттуда, чтобы человек вновь обрёл возможность с вами общаться и просматривать стену. Где искать список пользователей, занесённых в ЧС? Расскажем далее.

Как найти черный список в ВК

Частенько добавляете людей в черный список, забыли, кто там находится и решили освежить в памяти? По чистой случайности добавили не того и хотите исправить ошибку, пока он не заметил неладного? Забыли, где искать «список отверженных и надоедливых пользователей» – начнём с полной версии, открытой для удобства на ПК.

Войдите в свой профиль и перейдите в раздел «Настройки».
На панели с правой стороны выбираем пункт «Черный список», переходим к редактированию.
Интуитивно понятно, как добавить или исключить аккаунт. Для добавления в ЧС ему не обязательно находиться в числе друзей – достаточно будет и >Чтобы заблокировать человека, лишить возможности общения и просмотра профиля, перейдите на страничку и в раскрывающемся меню под аватаркой добавьте в ЧС.

Как посмотреть свой черный список Вконтакте с телефона

Мобильное приложение Вконтакте обладает теми же возможностями, что и полная версия, но в компактном режиме. Рассказываем, как посмотреть черный список в Вконтакте через приложение:

Найдите на панели инструментов пункт «Настройки».
Из предложенных выберите «Черный список». Откроется список добавленных профилей с именами, миниатюрами главных фото страницы.
Можете просматривать и вносить коррективы (удалять текущих / добавлять новых).

Как посмотреть черный список в ВК у друга

Доступ к личной информации другого пользователя имеет только владелец (в свободном доступе, как записей на стене, их нет). Со своей страницы посмотреть список профилей, добавленных в ЧС, вы не можете, а редактировать и подавно.

Единственный способ узнать интересующие сведения – попросить друга открыть нужный раздел или войти в ВК с его странички. Последнее желательно делать с разрешения пользователя, иначе рискуете нарваться на скандал и испортить отношения.

Кому нравится, когда без его ведома лазят по страничке в социальной сети?

В заключение добавим, что внесение профиля в черный список не решает сопутствующих проблем, хоть и кажется, что поступаете правильно и обдуманно.

vk-guide.ru

Как посмотреть чёрный список в ВК

Одна из примечательных функций сервиса Вконтакте – чёрный список. ЧС позволяет блокировать нежелательное вмешательство в личную жизнь, ограничивая определённым лицам возможность наблюдать за вашей публичной страницей.

Как посмотреть чёрный список В Контакте с ПК

Алгоритм действий следующий:

Залогиньтесь в ВК, войдите в меню «Настройки», активировав панель справа сверху. Выберите раздел «Чёрный список».

Теперь вы можете воспользоваться поиском, вводя имя нужного человека, чтобы уточнить его нахождение в данном перечне.
Помимо этого, присутствует возможность добавить любую страницу пользователя или сообщества в ЧС через кнопку справа «Добавить в чёрный список».

Посмотреть ЧС с телефона

Используя мобильное приложение Вконтакте, произведите следующие шаги:

Откройте раздел «Дополнительно» в меню снизу справа. Сверху будут «Настройки», отображённые как небольшая шестерёнка. Там найдите пункт «Чёрный список».

Обратите внимание, что добавлять в ЧС так же, как на компьютере, нельзя. Вы можете делать это только вручную, раз за разом заходя на страницы пользователей, которых хотите заблокировать.

Как узнать ЧС друга в ВК

Этой функции Вконтакте не существует. Но вы можете узнать о том, у кого вы в ЧС подробнее, обратив внимание на другую статью.

Все способы взаимодействия с чёрным списком были нами рассмотрены. Надеемся, что статья оказалась вам полезной.

vkbaron.ru

Как посмотреть черный список ВКонтакте?

Как известно, в ВК есть возможность блокировать людей, которые, к примеру, вам надоедают, спамят, достают и т.д. В результате формируется так называемый черный список, который вы всегда можете увидеть в своем аккаунте. Для начала мы покажем пример для веб-версии сайта, а затем — для мобильного приложения.

Веб-версия ВКонтакте

В меню, что находится в левой части экрана, нажмите на пункт «Мои настройки».

В разделе настроек выберите вкладку «Черный список». Здесь находятся все заблокированные вами за все время пользователи ВК. Что бы разблокировать их, нажмите «Удалить из списка».

Мобильное приложение ВК

В мобильном приложении найти ЧС ничуть не сложнее. В меню выберите «Настройки».

Затем — «Черный список».

Что бы удалить человека из ЧС, тапните по крестику.

Как видите, процесс оказался совсем несложным.

vkhelpnik.com

Как посмотреть список заблокированных пользователей во ВКонтакте

Практически каждый пользователь социальной сети ВКонтакте знает, что на сайте есть возможность ограничения доступа к своему профилю определенных людей. Эта функция называется Черный список ВК. В него можно отправлять “избранных” людей, которые например вас спамят, надоедают различными предложениями или просто раздражают. Чтобы этой функцией воспользоваться, нужно перейти в определенный раздел в настройках страницы. Люди, занесенные туда, не смогут зайти к вам на страницу или написать вам.

Как посмотреть черный список ВКонтакте

Всех пользователей, которые попали под вашу блокировку, можно увидеть в разделе “Черный список”. Посмотреть его может исключительно хозяин аккаунта. Эта процедура выполняется как на официальном сайте, так и в мобильном приложении вашего Андроида. Рассмотрим каждый из перечисленных выше способов.

Способ 1: на компьютере

Чтобы посмотреть пользователей, находящихся в “Черном списке” с помощью персонального компьютера, необходимо:

Зайти на главный сайт VKontakte и открыть “Главное меню”. В нем, в верхнем правом углу, кликаем по аватарке.
В открывшемся списке выбираем строку “Настройки”.
Затем в навигационном меню нажимаем “Черный список”.
Здесь отобразятся люди, находящиеся в нем. Их можно посмотреть или удалить оттуда. Также есть возможность добавить и новых участников.

Пожалуй, какие-либо трудности с просмотром черного списка через персональный компьютер возникнуть не должны.

Способ 2 : на телефоне

Множество людей, которые пользуются сайтом VKontakte, делают это не только с помощью полной версии, а обращаются к использованию мобильного приложения в телефоне. В этом случае тоже существует возможность посмотреть “Черный список”. Для этого необходимо:

Открыть мобильное приложение ВКонтакте и в верхнем углу с левой стороны дисплея нажать на “Главное меню”.
В открывшемся окне, в самом низу предоставленного списка с возможностями нажимаем на раздел “Настройки”.
В настройках, пятая строка сверху, находится “Черный список”, нажимаем на него.
После проделанных выше указаний отобразится список пользователей, которые там находятся. Для того, чтобы удалить из него выбранного человека, необходимо кликнуть по значку, имеющему вид крестика.

Кроме описанных выше методов для просмотра черного списка, существует возможность его просмотра и на других платформах. Алгоритм действий при этом аналогичен с описанными способами выше. Надеемся, трудностей с просмотром заблокированных людей у вас теперь не будет.

greatchat.ru

Как вк добавить в чс с компа – Как добавить в ЧС в ВК? — Компьютеры, электроника, интернет

Как добавить в чс вк

Как добавить человека в черный список вконтакте

Общеизвестно о том, что в популярном российском социальном сервисе “Вконтакте” имеется возможность добавления некоторых пользователей в “чёрный” список. Пользователь, который был добавлен в бан-лист, уже не сможет больше просмотреть Вашу страничку или же отправить Вам сообщения. Функциональная возможность довольно удобная, для некоторых случаев даже очень необходимая.

Для того, чтобы в “чёрный” список добавить пользователя, необходимо будет проделать следующее:

1. Заходите в меню “Мои настройки”, которое находится на сайта справа.
2. Переходите на вкладку “Чёрный список”. Адрес: http://vk.com/settings?act=blacklist
3. Вводите ссылку на страничку пользователя, которого хотите добавить в “чёрный” список (или же его имя).
4. Выбираете из предложенного Вам списка необходимого пользователя и нажимаете “Добавить в бан-лист”.

А чтобы из “чёрного” списка удалить пользователя, необходимо проделать следующие действия:

1. Заходите в меню “Мои настройки”.
2. Переходите на вкладку “Чёрный список”.
3. Нажимаете на “Удалить из списка” напротив нужного Вам пользователя.

Следует напомнить о том, что пользователь, добавленный в бан-лист, не сможет просматривать Вашу страничку, оставлять к Вашим записям свои комментарии и отправлять для Вас сообщения.

Как узнать у кого я в черном списке?

Каждый пользователь согласится с тем, что иногда возникает желание узнать не только о своих друзьях, но и о недоброжелателях — то есть о тех, у которых Вы состоите в “чёрном” списке. И совершенно недавно, благодаря одному из программистов, которые работают в компании “Вконтакте”, появилась такая возможность.

Странички всех Ваших друзей и всех друзей Ваших друзей просканируются приложением “Blacklist”. а затем будет выдан список тех людей, которые ограничили для Вас доступ к своей страничке, то есть добавили в бан-лист.
Приложение при этом не вмешивается в механизм действия сайта и абсолютно не мешает нормальному функционированию, а следовательно, не нарушает установленных социальной сетью правил.

Для того, чтобы узнать, кто же из пользователей занёс Вас в свой “чёрный” список, необходимо просто запустить приложение “Blacklist”. Проделать это возможно, перейдя по ссылке: http://vk.com/app3256362 .

Общеизвестно о том, что в популярном российском социальном сервисе «Вконтакте» имеется возможность добавления некоторых пользователей в «чёрный» список. Пользователь, который был добавлен в бан-лист, уже не сможет больше просмотреть Вашу страничку или же отправить Вам сообщения. Функциональная возможность довольно удобная, для некоторых случаев даже очень необходимая. Для того, чтобы в «чёрный» список добавить пользователя, необходимо будет проделать следующее: 1. Заходите в меню «Мои настройки», которое находится на сайта справа. 2. Переходите на вкладку «Чёрный список». Адрес: http://vk.com/settings?act=blacklist 3. Вводите ссылку на страничку пользователя, которого хотите добавить в «чёрный» список (или же его имя). 4. Выбираете из предложенного Вам…

Как в новом ВК добавить человека в Черный список?

Да, действительно, после выхода абсолютно новой версии в Вконтакте, многие пользователи начали плутать и терять старые функции в данной социальной сети.

Также, у многих была проблема с поиском черного списка.

Для того, чтобы войти в черный список, для вас нужно выполнить:

заходите в настройки;
и среди настроек, найдете пункт, или функцию «черный список», кликните на нее, и там можете посмотреть на людей, которые вы добавил в ЧС, а также там, можно и добавить новых пользователей в ЧС.

автор вопроса выбрал этот ответ лучшим

Для начала нажимаем на вертикальные три белые точки, который расположены в правом вернем углу. Данные точки обозначают переход в группу настроек личного аккаунта.

Далее необходимо обратить внимание на раздел под названием «Чёрный список».

Затем, уже всё делается на интуитивно понятном уровне. Необходимо нажать на кнопку «Добавить в чёрный список» и указать (пометить галочкой) на лицо, с которым вы не хотите контактировать.

в избранное ссылка отблагодарить

Посмотрите внимательно в самый верхний правый угол вашей странички ВК. Там вы увидите свое имя, аватарку и маленький треугольничек с опущенной вниз вершиной. Он-то нам и нужен, кликаем по нему.

Справа появится перечень опций, среди которых нам нужно отыскать Черный список, нажимаем на него.

Далее вы сможете увидеть, какие страницы уже занесены в ваш ЧС. Чтобы добавить еще кого-то, нужно нажать на синюю кнопочку «Добавить в черный список».

Появляется новое окно, сверху вы увидите строчку, в которую можно вписать ссылку на страницу, которую вы хотите ограничить от себя. Под этой строкой расположены все ваши подписчики.

в избранное ссылка отблагодарить

В правом верхнем углу, где светится ваша аватарка, нажимаете на стрелочку, там высвечиваются настройки, нажимаете на настройки, и справа, под вашей авой, высветится список, в котором будет пункт «черный список». Выбираете его, затем выбираете «добавить в черный список», а затем просто указываете ссылку страницы или сообщества, которое хотите занести в чс. Все очень просто.

в избранное ссылка отблагодарить

Добавить В ЧС в новом ВКонтакте можно в настройках. Они будут доступны при выборе в вашем профиле, справа вверху небольшая стрелочка вниз. Там выберите функцию «Черный список» и нажмите на кнопку «Добавить в ЧС». Дальше остается только выбрать профиль того человека или группы, которые вам нужны.

Если у вас появилась необходимость в том, чтобы какого-либо человека отправить в новом Вконтатке в чёрный список, то для этого вам нужно с правой части странички вашего профиля нажать на стрелочку (там будет ваше фото в кружочке). Далее появится меню, где выбирайте настройки, а там уже нажимайте на «чёрный список». И можете сюда вносить кого пожелаете:

Чтобы добавить в чс в новом дизайне вк. нужно зайти в настройки аккаунта, выбрать там пункт Черный список. Затем нажать кнопку Добавить в черный список. и в появившемся окошке выбрать профиль нужного человека. Ну и осталась старая возможность зайти на профиль, и под аватаркой выбрать пункт меню Заблокировать .

Как добавлять в черный список вконтакте

В настройках вашей персональной страницы вконтакте, есть раздел «Черный список». Он нужен для того, чтобы пользователи, которые вам надоедают или мешают, более не могли получить доступ к вашей странице. Это ограничение позволит вам исключить нежелательных посетителей.

Итак, как добавить человека в черный список вконтакте ?

Как это работает?

После того, как вы добавите человека в черный список, для него будет ограничен доступ к вашей странице (см. у кого я в чс вк ). При попытке захода на нее, пользователь увидит вот такое сообщение.

Человеку будут доступны только 3 функции на вашей странице: пожаловаться на вас. заблокировать или добавить в закладки.

Как добавить в черный список в вк

Мы заходим на свою страницу, и идем в раздел «Мои настройки». Здесь переходим на вкладку «Черный список» .

Вы увидите вот такой инструмент.

Здесь в строке поиска, вам нужно ввести имя пользователя, или id его страницы.

Имейте ввиду, что когда вы укажите id (см. как узнать id пользователя вконтакте ), то пользователь сразу будет добавлен, по нажатию соответствующей кнопки. Если же вы начнете писать его имя, то после нажатия кнопки «Добавить в черный список». будут отображены все совпадения. Пример можно увидеть на картинке ниже:

Среди найденных людей, найдите того, которого вы хотите заблокировать. И рядом с его аватаркой, нажмите ссылку «Заблокировать» .

В независимости от того, используйте вы id или ФИО, результат будет аналогичен.

Используем ссылку на блокировку, прямо со страницы пользователя

Можно пойти другим путем. Переходим на страницу человека, которого нужно добавить в черный список. Прокручиваем немного вниз, до дополнительного блока меню. Здесь нажимаем ссылку «Заблокировать. (будет имя пользователя)» .

После этого он попадет в черный список, и потеряет доступ к вашей странице.

Заключение

Обратите внимание на два момента.

Вы всегда можете исключить пользователя из данного списка, и он снова сможет контактировать с вами (см. как написать человеку если он ограничил доступ к своей странице ).

Также у него будет такая возможность, если он воспользуется любой другой страничкой (см. купить аккаунты вк ). В таком случае, вам придется добавлять каждую из них, в черный список вк.

Источники: http://lifevkontakte.com/sekrety-vkontakte/kak-dobavit-cheloveka-v-chernyiy-spisok-vkontakte.htm, http://www.bolshoyvopros.ru/questions/2151380-kak-v-novom-vk-dobavit-cheloveka-v-chernyj-spisok.html, http://vksetup.ru/privatnost/kak-dobavlyat-v-chernyj-spisok-vkontakte.html

vkontakteblog.ru

Как добавлять в чс в вк

Как в новом ВК добавить человека в Черный список?

Также, у многих была проблема с поиском черного списка.

Для того, чтобы войти в черный список, для вас нужно выполнить:

заходите в настройки;
и среди настроек, найдете пункт, или функцию «черный список», кликните на нее, и там можете посмотреть на людей, которые вы добавил в ЧС, а также там, можно и добавить новых пользователей в ЧС.

автор вопроса выбрал этот ответ лучшим

Далее необходимо обратить внимание на раздел под названием «Чёрный список».

в избранное ссылка отблагодарить

Справа появится перечень опций, среди которых нам нужно отыскать Черный список, нажимаем на него.

в избранное ссылка отблагодарить

Как добавить человека в черный список вконтакте

Для того, чтобы в “чёрный” список добавить пользователя, необходимо будет проделать следующее:

А чтобы из “чёрного” списка удалить пользователя, необходимо проделать следующие действия:

Как узнать у кого я в черном списке?

Как добавлять в черный список вконтакте

Итак, как добавить человека в черный список вконтакте ?

Как это работает?

Как добавить в черный список в вк

Мы заходим на свою страницу, и идем в раздел «Мои настройки». Здесь переходим на вкладку «Черный список» .

Вы увидите вот такой инструмент.

Здесь в строке поиска, вам нужно ввести имя пользователя, или id его страницы.

В независимости от того, используйте вы id или ФИО, результат будет аналогичен.

Используем ссылку на блокировку, прямо со страницы пользователя

После этого он попадет в черный список, и потеряет доступ к вашей странице.

Заключение

Обратите внимание на два момента.

Источники: http://www.bolshoyvopros.ru/questions/2151380-kak-v-novom-vk-dobavit-cheloveka-v-chernyj-spisok.html, http://lifevkontakte.com/sekrety-vkontakte/kak-dobavit-cheloveka-v-chernyiy-spisok-vkontakte.htm, http://vksetup.ru/privatnost/kak-dobavlyat-v-chernyj-spisok-vkontakte.html

vkontakteblog.ru

Как в ВК кинуть в черный список – инструкция с изображениями

Приветствую!

Чёрный список на ВК помогает искоренить беспокойство, что вызывают некоторые пользователи своими сообщениями, комментариями или в целом действиями. После отправки человека в чёрный список, он более не сможет ничего написать как вам лично, так и на вашу страницу. Кстати, и возможность просмотра вашей страницы также будет ограничена этому пользователю.

Действительно удобное и эффективное средство, позволяющее решить проблему с навязчивыми и оскорбительными действиями со стороны некоторых не совсем адекватных личностей, что наравне с остальными находятся в популярной социальной сети ВК.

Закинуть в чёрный список, дабы избавить себя от избыточного негатива со стороны той или иной персоны, достаточно просто.

Это можно осуществить несколькими способами. Избранный вами вариант будет зависеть от того, с помощью какого конкретно способа вы заходите на ВК и пользуетесь его сервисами. Это может быть и браузер, что используется на компьютере и соответственно с помощью которого осуществляется доступ на сайт соц. сети ВК, а может и мобильное приложение, которое позволяет с удобством пользоваться всеми возможностями социальной сети посредством смартфона.

Рассмотрим оба способа детально.

Как на ВК кинуть человека в чёрный список с компьютера

Открыв сайт ВК, следует зайти на страницу беспокоящего вас пользователя, которого вы желаете кинуть в чёрный список.
Тут надо уточнить, что если данный человек у вас в друзьях, то его оттуда надо убрать, в ином случае не будет доступен пункт занесения его в чёрный список. Делается сие очень быстро, подробнее на изображении.
Теперь осталось осуществить столь же быструю операцию, а именно нажать на менюшку под аватаркой и выбрать сам за себя говорящий вариант.
Всё, более ничего делать не требуется. Раздражающий вас человек закинут в чёрный список.

Как через приложение ВК кинуть человека в чёрный список

В данном случае процедура практически аналогична, только расположение меню и пунктов несколько иначе.

Открыв в приложении ВК страничку неугодного, воспользуйтесь кнопочкой меню и в выведенном подменю соответствующим вариантом.
Нажав на пункт, будет запрошено подтверждение данного действия – согласитесь с ним.
Отлично. Желаемое сделано – нежелательный человек более не сможет докучать вам.

Как мы видим, закинуть в ЧС человека просто, как собственно и убрать из него, ежели такая необходимость возникнет. Об этом читайте в статье «Как убрать человека из черного списка в ВК».

it-actual.ru

Как в Одноклассниках добавить человека в черный список

Умеют же некоторые люди нас доставать! Даже если удается избегать общения с ними в реальной жизни, они находит нас в соцсетях. Однако виртуальная среда вовсе не обязывает нас терпеть чье-то неприятное присутствие. А значит, господа незваные гости, добро пожаловать в черный список!

Черные списки (блэк-листы) хранят имена людей, с которыми владелец аккаунта не желает общаться. Такая функция есть и на сайте Ok.ru. Сегодня поговорим, как в Одноклассниках добавить человека в черный список четырьмя простыми способами. А также – как его оттуда убрать и можно ли исключить себя из блэк-листа другого пользователя.

Отправка в блэк-лист посетителя страницы

Итак, чтобы отправиться в черный список, нежеланному гостю даже не нужно делать вам гадости. Достаточно просто побывать на вашей страничке. Конечно, самостоятельно он в блэк-лист не попадет (а хотелось бы), но вы можете это сделать буквально двумя щелчками мыши:

Откройте раздел «Гости».
Наведите курсор на фото посетителя.
В меню, которое появится следом, выберите «Заблокировать».

В следующем окошке нажмите «Заблокировать» еще раз. Этим вы подтвердите желание отправить человека в черный список.

Заблокированный посетитель больше не сможет зайти на вашу страницу, написать вам сообщение, оценить фотографию или оставить комментарий. Однако он будет видеть, когда вы находитесь на сайте.

Блокировка спамеров и зануд, которые пишут ненужные сообщения

Избавиться от распространителей спама и назойливых любителей писать в чат или на форум тоже довольно просто. Для этого не придется искать «графомана» среди гостей. Вы можете его забанить прямо «на месте преступления».

Бан через «Сообщения»

Откройте раздел «Сообщения» и перейдите в чат с нужным (точнее, ненужным) пользователем.
Нажмите на значок в виде шестеренки в верхнем правом углу чата. В раскрывшемся меню выберите опцию «Заблокировать».

Подтвердите свое намерение еще раз, нажав кнопку «Заблокировать» в окошке, которое откроется после этого.

Бан через форум

На своей странице: зайдите в раздел «Еще», который находится в менюшке справа от вашей фотографии. Выберите «Форум».
Наведите курсор на сообщение нежеланного пользователя. Справа под сообщением появятся кнопки «Заблокировать» и «Спам». Нажатие первой перенесет автора в ваш блэк-лист. Если в дополнение к этому вы нажмете вторую – о рассылке спама узнает администрация ресурса.

Как наказывать тех, кто ставит низкие оценки за ваши фотографии

Если кому-то из посетителей не нравятся ваши фотки и он выражает это выставлением «двоек» и «единиц», вы вправе сделать так, чтобы он вообще больше не мог их смотреть. Как? Ну конечно, занесением в блэк-лист, а заодно – удалением нежелательных оценок.

Зайдите в альбом, где хранится нужный фотоснимок, и, не открывая его, кликните по значку «Оценки» (обведен рамкой на скриншоте ниже).

Наведите мышь на оценку, которую хотите убрать. Справа от нее появится отметка времени и крестик (опция «Удалить»). Нажмите на него.

После удаления оценки вам будет предложено заблокировать оценившего. Поставьте флажок в соответствующем поле и подтвердите намерение.

Как бороться с комментаторами, которые пишут гадости

Удалить можно не только оценку, но и неприятный комментарий к фотографии. А также – навсегда распрощаться с его автором. Манипуляция очень похожа на удаление оценки и не более сложна.

Откройте фотоальбом и найдите нужный снимок. Щелкните по показанному на скриншоте значку «Комментарии».

Наведите на нежелательный коммент курсор мыши. С правой стороны от него появится метка времени и крестик. Нажатие последнего удалит текст сообщения.

Чтобы заодно отправить в бан написавшего, отметьте в следующем окошке «Заблокировать автора комментария» и подтвердите свое решение.

Как удалить человека из черного списка

Бывает, что вместо недругов в блэклист случайно попадают друзья. Это нехорошо. Чтобы исправить ошибку, зайдите в меню «Еще» и выберите опцию «Черный список». Это перенесет вас в раздел страницы, где находятся пользователи, которых вы заблокировали.

Наведите мышь на фотографию друга и щелкните «Разблокировать». Всё!

Кстати, попасть в раздел «Черный список» можно еще одним способом: через меню в нижней части любой станицы сайта.

Можно ли удалить себя из блэк-листа другого пользователя Одноклассников?

Увы, нельзя. Иначе в этой функции не было бы практического смысла. Однако это не значит, что вы потеряли связь с человеком навсегда, ведь кроме технических средств Одноклассников есть другие возможности.

Нет, я не призываю вас пытаться взломать аккаунт друга (ведь это нечестно по отношению к человеку, с которым вы хотите общаться). Гораздо эффективнее метод переговоров. Для этого зарегистрируйте новый профиль на Ok.ru или используйте иные средства связи. Не важно, какие именно – важно найти слова, которые убедят человека восстановить с вами контакт. И если он не слишком на вас обижен, можно надеяться, что вы покинете его блэк-лист.

Удачи!

Как заблокировать человека в вк?

Хотите заблокировать человека, чтобы он не мог смотреть вашу страницу и писать сообщения? Тогда вам нужно занести его в черный список ( ЧС ). Сейчас покажу как это сделать несколькими способами через комп:

Добавить друга в черный список с жалобой администрации Вконтакте

1. Заходим на чужую страницу, которую хотим заблокировать.

2. Нажимаем на 3 точки под аватаром и выбираем пункт “Пожаловаться на страницу”.

3. Если вы хотите пожаловаться на страницу пользователя, то выберите одну из предложенных причин. А затем, по желанию, напишите комментарий модератору, чтобы уточнить причины жалобы.

И последний, самый важный шаг, это нажать галочку “Закрыть ФИО доступ к моей странице”. После чего нажимаем кнопку отправить.

Если наберется определенное количество жалоб – страницу пользователя заблокирует социальная сеть и человек потеряет к ней доступ.

Добавить друга в черный список без жалобы

Хотите просто заблокировать доступ пользователю без жалобы, тогда:

1. Нажмите в правом верхнем углу, рядом с миниатюрой аватарки, стрелочку вниз. В открывшемся меню выберите пункт “Настройки”.

2. В меню справа выбираем раздел “Черный список”, после чего нажимаем на синюю кнопочку “Добавить в черный список”.

Вы можете сразу перейти в ЧС, если кликните по этой ссылке: https://vk.com/settings?act=blacklist.

3. Выбираем из списка друзей, кому хотим запретить доступ к профилю, и нажимаем “Заблокировать”.

Если список друзей большой и не хочется искать, то можно просто вставить ссылку на страницу пользователя, после чего его заблокировать.

Кстати, таким способом, с помощью ссылки, можно отправлять в ЧС и людей не находящихся у вас в друзьях. Но зачем, если я покажу способ сделать это проще в следующем пункте:

Как кинуть человека в ЧС, если он не в друзьях

1. Переходим в профиль человека, которому хотим ограничить доступ к своей странице.

2. Нажимаем на три точки, под фото пользователя, а затем “Заблокировать ИМЯ”. Все, Заблокировали!

Узнает ли человек что его добавили в черный список Вконтакте?

Конечно, узнает. Зайдя на вашу страницу, после того, как вы добавили его в Черный Список он увидит следующую картину:

Как видите, нет ничего сложного чтобы ограничить доступ пользователю к своей профилю в вк с помощью компьютера. Но самое главное, не стоит забывать, что вы в любой момент можете передумать и разблокировать человека в несколько кликов мыши.

Как посмотреть черный список Вконтакте?

У вас есть возможность блокировать пользователей, добавляя их в черный список. Это действие полностью ограничивает для них возможность просмотра вашей страницы, и связи с вами (см. как добавить в черный список в контакте).

Если вы хотите посмотреть список пользователей, которые находятся у вас в черном списке, сделать это не сложно. И сейчас я дам вам пошаговую инструкцию.

Итак, как посмотреть черный список Вконтакте?

Оглавление:

Просмотр черного списка с компьютера
Смотрим через телефон
Видео урок: как посмотреть людей в черном списке вконтакте
Заключение

Просмотр черного списка с компьютера

Переходим к своей странице, и идем в раздел «Настройки».

Дальше открываем раздел «Черный список». Здесь будет показан список пользователей, которых мы заблокировали.

Вы можете убрать ограничения для пользователя, щелкнув на ссылку «Убрать из списка». Либо добавить сюда человека. Для этого нажмите кнопку «Добавить в черный список».

Смотрим через телефон

Запускаем приложение «Вконтакте» (см. скачать приложение вконтакте для андроид).

Открываем меню, находим раздел «Настройки». Здесь нажимаем «Черный список».

Вы перейдете к списку заблокированных пользователей. Он выглядит вот так.

Из функций здесь доступен просмотр, и удаление пользователя из списка.

Видео урок: как посмотреть людей в черном списке вконтакте

Заключение

Читайте также:

Ну что можно сказать. Если вы часто блокируете пользователей, то просмотр черного списка в вк, позволит вам узнать, кто сейчас не имеет возможности просматривать вашу страницу, и связываться с вами.

Вопросы?

Вам помогла эта информация? Удалось решить возникший вопрос?

Понравилась статья? Пожалуйста, подпишитесь на нас Вконтакте!

Facebook

Twitter

Мой мир

Одноклассники

Google+

Загрузка…

Как посмотреть страницу ВКонтакте, если ты в черном списке

Черный список в соцсети ВКонтакте позволяет заблокировать надоедливого или недоброжелательного пользователя, ограничивает ему доступ к вашему контенту. Чтобы узнать у кого я в черном списке, придумано несколько способов. Зачем это нужно?

Полезно узнать истинное отношение со стороны знакомого;
Чтобы не испытать внезапное разочарование, случайно обнаружив себя в блоке со стороны друга в ВКонтакте;
Это отличная возможность выяснить, с кем встречается бывший (бывшая). Новые половинки часто блокируют предыдущих;
Люди, отправившие тебя в бан, заслуживают внимания, хотя бы чтобы понять причину.

Ручной способ

Понять, что тебя заблокировали В Контакте, очень просто, и далее мы расскажем, что именно нужно для этого сделать.

Определите радиус своих подозрений, выберите несколько явных претендентов;
Начните методично посещать их странички ВКонтакте;
Если зашли в профиль, можете отправить сообщение, просмотреть фотографии – в вас не добавляли;
Если видите лаконичное сообщение, что автор страницы ограничил доступ к аккаунту, или ваши , значит вы в блоке. Доступны фотография-аватар, фамилия, имя пользователя.

Можно легко проверить, у кого я в черном списке В Контакте, легко, но этот путь работает, когда есть конкретные люди, подозреваемые в совершении действия.

Если нужно получить глобальную информацию о черных списках ВКонтакте, и понять, кто из незнакомых личностей испытывает к вам негатив – существует другой способ.

С помощью специальных приложений

Их много и все обещают исчерпывающие результаты, но безопасных и надежных всего два. Они являются онлайн дополнениями соцсети, поэтому их использование гарантирует конфиденциальность, сохранность личной информации.

Сложно проверить сомнительную деятельность сторонних ресурсов, поэтому будьте благоразумны. Легко нарваться на мошенников, которые начнут вымогать деньги. Или воспользуются вашей страницей для рассылки спама, заполучив логин и пароль. Или еще что-то похуже.

Полезное приложение, которое позволяет отслеживать тайную деятельность любого пользователя. При вводе можно увидеть скрытых друзей автора, его группы, возраст, местоположение. Сервис поможет посмотреть и узнать, кто кинул в черный список ВК, выполнив поиск по контактам из вашего листа, и их круга общения. Опция занимает некоторое количество времени.

Сервис Blacklist&Hidden

Как узнать, у кого ты в ЧС в ВК, посмотреть, кто заблокировал меня или скрыл наше общение? Эта платформа работает эффективно, быстро. Как предыдущее приложение, она функционирует онлайн.

Чтобы воспользоваться услугами обоих сервисов, просто забейте их названия в поисковике. Переходите по ссылке. Если вы залогинены в ВКонтакте, приложения сразу откроются, без необходимости выполнять вход.

Выбирайте нужное действие в разделе с черными списками, нажимайте старт и дожидайтесь окончания сканирования.

Не расстраивайтесь, если результат окажется неутешительным. Всегда можно найти способ связаться с людьми, и наладить отношения. Будьте вежливы и внимательны, вполне возможно, что вас забанили по ошибке. Приятного дня!

Как посмотреть черный список ВКонтакте (узнать, кого я заблокировал)?

Настройки состоят из нескольких разделов. Тебе нужен Чёрный список — нажми на этот пункт в правой колонке.

А еще свой черный список можно сразу открыть по этой ссылке: Мой черный список .

Как открыть черный список ВКонтакте в мобильной версии, в приложении на телефоне?

Примерно так же. Сначала нажми на кнопку главного меню (три полоски слева вверху), потом прокрути меню вниз (если его не видно целиком), нажми Настройки и затем Чёрный список . Кроме того, в мобильной версии можешь попасть туда по этой ссылке: Мой черный список .

Как разблокировать человека ВКонтакте, убрать из черного списка?

Эти способы для полной версии ВКонтакте. Для мобильной — смотри дальше.

1-й способ

Сначала открой черный список (смотри выше, как это сделать). Далее, напротив каждого человека есть ссылка Удалить из списка . Выбери человека, которого ты хочешь разблокировать, и нажми «Удалить из списка». После этого он сразу же сможет смотреть твою страницу и писать тебе в личку.

2-й способ

Как разблокировать человека ВКонтакте, убрать из черного списка в мобильной версии ВКонтакте?

1-й способ в мобильной версии

Открой черный список по ссылке Мой черный список . Нажми на человека, которого хочешь убрать из заблокированных, затем на его странице найди в «Действиях» пункт Разблокировать и нажми на него.

2-й способ в мобильной версии

Как найти человека в своем черном списке?

В самом верху черного списка есть поле Поиск по черному списку . Нажми туда и начни набирать имя или фамилию человека, который тебя интересует — ты быстро его найдешь. Эта функция полезна, когда в твоем черном списке много людей.

Как посмотреть чужой черный список? Как узнать, есть ли я в черном списке?

Данная функция введена создателями социальной сети для того, чтобы все пользователи могли самостоятельно регулировать круг общения и избавляться от ненужных людей в своем окружении. Услуга полностью бесплатна, поэтому пользоваться ей сможет абсолютно каждый, что делает ЧС еще более полезным. Вы можете постоянно редактировать ваш ЧС, добавляя или удаляя оттуда людей. Пользователь, чья страница находится в ЧС, не сможет вам писать, смотреть ваши материалы, комментировать записи и ставить классы. Он будет видеть на вашей странице только аватар. Читайте на нашем сайте подробную инструкцию о том, страницу другого человека.

Как узнать, у кого я в черном списке в Одноклассниках?

Отдельного сервиса или функции в самой социальной сети для определения тех, кто вас занес в ЧС, не существует. Эту услугу вам не смогут предложить ни за деньги, ни бесплатно. Однако вы легко узнаете, что пользователь отправил вас в ЧС, если зайдете на его страницу. Если, посетив анкету человека, вы увидели только аватарку, а все кнопки для связи отсутствуют (даже добавление в друзья), это значит, что человек отправил вас в ЧС.

Что дает черный список в Одноклассниках?

Эта функция весьма полезна для тех, кто хочет точно настроить и определить свой круг общения в рамках социальной сети ОК. Смело добавляя в ЧС всех, кого считаете нужным, вы сделаете ваше пребывание в интернете комфортным и спокойным. Общайтесь только с приятными вам людьми. Также данная функция помогает избавиться от назойливых ботов и рассылки рекламы в личные сообщения. Парой кликов вы можете . Об этом на нашем информационном портале вы найдете пошаговую инструкцию.

Что означает и как работает черный список в Одноклассниках?

ЧС – это лист, в котором находятся пользователи, которые не могут получить доступ к вашей личной странице. Вы лично выбираете, какую анкету добавить в ЧС. После этого выбранный вами человек заносится в список и не может больше с вами контактировать в рамках социальной сети ОК. Однако он может написать вам или добавиться в друзья с другой странички. Помните, что вы блокируете всего лишь аккаунт. Пользоваться услугой Blacklist можно как со стационарного компьютера, так и с телефона/планшета через мобильную версию сайта или официальное приложение. На нашем портале вы можете прочесть подробную статью про .

Как себя убрать из черного списка в Одноклассниках?

Вы никак не сможете извлечь свою страницу из блэклиста другого человека. Вы можете только попросить его об этом, зайдя с нового аккаунта или через страницу, которая находится в его френд-листе.

В этом главное преимущество данной возможности: без разрешения того, кто вас заблокировал, вы не сможете совершать никаких действий в отношении этого человека, тем самым, не будете его беспокоить. Если вы были добавлены в ЧС, значит на то была причина у хозяина аккаунта, либо он просто решил ограничить свой круг общения в социальной сети.

Как добавить гостя в черный список в Одноклассниках?

Для этого вы должны выполнить следующий порядок действий:

откройте анкету человека, который посещал ваш профиль и которого вы хотите заблокировать, если он вам кажется подозрительным;
под аватаркой нажмите на кнопку «Другие действия», чтобы открыть дополнительное меню;

Иногда случается ситуация: читаете новости, решаете написать и отправить сообщение пользователю в Одноклассниках, поставить оценку его фотографии, однако нет возможности выполнить действия. Доступ закрыт. Вы в черном списке. По каким причинам вы попали туда – неважно. Если человек внес вас в такой список, значит, были на это свои причины.

Как узнать что я в черном списке в Одноклассниках

Получив сообщение: «информация недоступна, этот пользователь добавил вас в черный список», будьте уверены, ваше имя в черном списке.
По каким причинам – неважно. Подобная ситуация может коснуться любого.

СПРАВКА.
Заблокированный пользователь не сможет посетить страничку, оставить послания, комментарии, оценить фотографии.

Как узнать у кого я в черном списке в Одноклассниках

Люди, что внесли вас в черный список, не отобразятся на вашей странице в удобном виде, чтобы вы могли легко и свободно увидеть имена. Только переходя на страницы пользователей, вы можете узнать, что в ЧС.

Как выйти из черного списка

Многие пользователи задаются вопросом: «как убрать себя из черного списка».
Самостоятельно удалить себя из черного списка, невозможно. Подобная возможность не предусмотрена сервисом. Списком может управлять только владелец.
В интернете имеется множество программ, обещающих взломать, обойти блэклисты. Большинство подобных приложений — вредоносные.

ВНИМАНИЕ
Не верьте сайтам, программам, обещающим решить проблему. Все, чего вы сможете добиться – вручить данные учетных записей.

Рассмотрим несколько вариантов.

Выбираем самый простой вариант. Что следует сделать?

Создать вторую страничку, зайти на нее, найти друга, с которым нужно пообщаться или изучить информацию о нем.
Можно написать человеку сообщение с новой страницы с просьбой разблокировать черный список, узнать причину, то есть спросить: почему внес меня в ЧС, при желании извиниться.
При положительном развитии сюжета оппонент исключит вас из черного списка, и проблема будет решена.

Если не получилось, придется искать более сложные пути.

Нужен анонимайзер или программа для изменения ip.
Поменяв ip – адрес, на странице настроек измените пароль, удалите страницу.

Более подробно о том, как удалить страницу в Одноклассниках, читайте

Далее пишете в поддержку ОК с просьбой о , уже со своего ip. Объясняете, что вас пытались взломать, все удалено..
Администрация ОК восстановит страницу, вам удалось обойти ЧС.

ВНИМАНИЕ!
Применяя способ, учитывайте риски.

Войдите в социальную сеть под другим логином, используя верный пароль.
Пролистайте вниз, найдите нужную кнопку. Теперь можно посмотреть всех людей ЧС.

Подведите курсор мыши к своему имени.
Выберите «разблокировать».
Подтвердите удаление.

Учтите, в течение суток информация профиля недоступна.

Старайтесь уважать своих собеседников, не ссорьтесь, тогда вероятность оказаться в таком щекотливом положении значительно уменьшается.
Никто не будет ограничивать доступ или считать вас нежелательной персоной, не придется искать ответы на вопросы, которые можно было бы избежать.

WhatsApp является наиболее распространенной и популярной мобильной платформой для обмена сообщениями. С его помощью легко отправлять сообщения, фотографии и даже видео различным пользователям при условии, если вы не заблокированы. Часто пользователи продолжают посылать сообщения, не зная о том, что находятся в черном списке. Как понять, что вас заблокировали в Whatsapp? На самом деле, все довольно просто.

Способ № 1: Обратите внимание на последний статус

Одной из особенностей приложения WhatsApp является возможность увидеть последний статус других людей, то есть когда они последний раз были в сети. Но если кто-то заблокировал вас, последнее посещение не будет видно. Будет видно только пустое пространство все время.

Тем не менее, одна вещь может опровергнуть это пустое пространство, как прямое указание на то, что номер заблокирован. Может быть, что человек через настройки скрыл данную информацию для всех пользователей, либо что-то случилось с его мобильным устройством.

Способ № 2: Посмотреть фотографию профиля

Если кто-то заблокировал ваш номер на Ватсапе, обнаружить этот факт можно, взглянув на изображение профиля человека. То есть, если пользователь заблокирован в Whatsapp, он не сможете видеть фотографию абонента, отправившего его в черный список.

Может быть видна контактная картина этого человека, сохраненного в вашем телефоне, на месте WhatsApp изображение профиля. Или это будет выглядеть так, как будто человек не установил фотографию для своего аккаунта.

Способ № 3: Проверьте, доставляются ли сообщения

Если кто-то ограничил вам доступ, ваши сообщения не будут доставлены к этому человеку. Это означает, что вы никогда не увидите двойную галочку на отправленных сообщениях.

Прочтение (двойной знак) отображается только тогда, когда приемник принимает сообщение. Если он не отображается, это просто означает, либо пользователь не использует WhatsApp в то время, либо вы в черном списке.

Способ № 4: Попробуйте сделать вызов

Если кто-то надумал блокировать вас, вы не сможете совершить вызов этому абоненту. Он просто автоматически прекратится без подключения, и вы всегда будете видеть сообщение вызова End.

Создание группы тестирования

Это самые простые способы, отвечающие на вопрос, как узнать о возможности блокировки. Но одновременно все эти показатели могут быть лишь признаком того, что пользователь просто прекратил использовать приложение.

Разработчики WhatsApp намеренно сделали этот вопрос неоднозначным для того, чтобы защитить частную жизнь любого, кто желает блокировать кого-то. Любой индикатор, который будет сходу говорить о факте блокировки, нарушает неприкосновенность частной жизни такого человека.

Поэтому можно воспользоваться еще одним методом.

Данный метод предполагает следующие действия:

Прежде всего понадобится создать группу и назвать ее «Test».
Введите имя человека, которого необходимо проверить, чтобы добавить в группу, и нажмите кнопку «Создать».
Если друг отправил вас в черный список, то вы увидите сообщение «Невозможно добавить пользователя».

Узнать также можно, обновив свой список контактов. Имя контакта будет либо не отображаться в списке, или он появится с опцией «Пригласить».

Без проверки вручную вы также можете воспользоваться помощью нескольких автоматизированных инструментов и приложений, которые могут показать весь список абонентов, ограничивших вам доступ к своему профилю.

Это самые простые и оперативные способы, позволяющие узнать, кто заблокировал вас на WhatsApp.

Заблокированный пользователь в контакте что видит

Содержание

1 Как зайти на страницу человека, который тебя заблокировал, или написать ему сообщение?
2 У человека закрыта личка, как ему написать?
3 Как узнать всех, кто заблокировал меня (добавил в черный список)?
4 Может ли тот, кто заблокировал, заходить на мою страницу?
5 Как меня заблокировали? Как мне самому заблокировать человека?
6 Как разблокироваться, удалиться из черного списка?
7 Как узнать, что меня заблокировали в группе?
8 Нет, это не то, меня совсем заблокировали, я не могу войти на страницу!
9 Что значит заблокировать человека Вконтакте?
10 Блокировка с компа: как это сделать?
11 Если заблокировать человека в ВКонтакте, что будет и что он увидит?

Когда другой пользователь ВКонтакте тебя заблокировал, ты будешь видеть сообщение «Пользователь ограничил доступ к своей странице». Если раньше, когда ты заходил на его страницу, такого не было, а теперь появилось, то это верный признак, что этот человек заблокировал тебя лично (добавил в свой черный список).

Слово «заблокировали» может означать и другое! Если твоя страница заблокирована (заморожена) администрацией и ты вообще не можешь войти ВКонтакте, читай Заблокировали ВКонтакте. Что делать? Решение. Также об этом немного рассказано здесь в конце страницы.

Что это значит? Кроме данного пользователя, для тебя ничего не меняется ВКонтакте. Ты можешь пользоваться всеми функциями, смотреть другие страницы, общаться с людьми. Но именно на страницу этого человека ты зайти не сможешь. Кроме того, ему нельзя написать сообщение или добавить в друзья. Если вы были друзьями в ВК, то перед блокировкой ему пришлось удалить тебя из друзей.

Это его личное решение, тебе с этим ничего не сделать. Видимо, он не хочет общаться именно с тобой. Также это иногда называют «забанил» (от слова «бан» — блокировка). Однако возможно и то, что он внес тебя в черный список по ошибке. Если ты считаешь, что это ошибка, попробуй связаться с ним другими способами — например, через ваших общих друзей, по телефону, по почте.

Не пытайся быть назойливым и преследовать человека, если он этого не желает. Он может пожаловаться на тебя, и есть риск, что твою страницу заблокирует администрация — тогда ты вообще не сможешь пользоваться ВК и потеряешь связь со всеми друзьями.

Как зайти на страницу человека, который тебя заблокировал, или написать ему сообщение?

Возможно, ты сможешь это сделать, если создашь другую страницу в ВК. Но может оказаться, что человек ограничил доступ и для тех, кто не состоит у него в друзьях. Кроме того, можно попробовать выйти из ВКонтакте и зайти на страницу человека по ее адресу (адрес — это то, что написано в адресной строке браузера, когда ты находишься на странице; например, vk.com/id126494354). Если страница не скрыта, то ты ее увидишь (может быть, частично). В общем, все зависит от того, как именно человек настроил свою страницу.

У человека закрыта личка, как ему написать?

Когда ты заходишь в сообщения и пытаешься написать этому пользователю в личку, ты видишь такое: «Вы не можете отправить сообщение этому пользователю, поскольку он ограничивает круг лиц, которые могут присылать ему сообщения».

Возможно, в какой-то момент этот человек закрыл личку от посторонних, и теперь ему могут писать только друзья. Но если ты с ним переписывался раньше, то еще в течение недели после этого ты мог ему писать. Может быть, он даже забыл, что это сделал, и на самом деле ждет от тебя сообщения! Поэтому попытайся сообщить ему об этом — через ваших общих друзей, по телефону или еще как-нибудь. Прочитай эту инструкцию:

Обрати внимание, что сообщения могут не отправляться и по какой-то другой причине. Читай здесь:

Как узнать всех, кто заблокировал меня (добавил в черный список)?

Если ты хочешь увидеть сразу всех людей, которые тебя заблокировали (список), то такой возможности нет, и об этом официально сообщает центр помощи ВКонтакте:

Увы, возможности увидеть весь список пользователей, которые предпочли ограничить Вам доступ к своей странице, нет.

Но ты можешь зайти по очереди на страницу каждого человека, которого подозреваешь в том, что он тебя заблокировал, и проверить. Если видишь надпись «Пользователь ограничил доступ к своей странице», значит, ты у этого человека в черном списке. Косвенный признак, по которому можно определить подозреваемого — то, что он удалился у тебя из друзей.

Может ли тот, кто заблокировал, заходить на мою страницу?

Да, может. Для него ничего не меняется. Он только запретил тебе писать ему и смотреть его страницу. То есть это работает в одностороннем порядке. Но ты можешь сам заблокировать его в ответ, читай дальше:

Как меня заблокировали? Как мне самому заблокировать человека?

Про это есть отдельная очень хорошая страница:

Как заблокировать человека ВКонтакте

Также тебе может пригодиться и вот эта инструкция:

Как пожаловаться ВКонтакте

Как разблокироваться, удалиться из черного списка?

Возможно, человек, с которым ты хочешь общаться, заблокировал тебя случайно. Разблокировать тебя может только он сам. Нужно дать ему эту инструкцию: Черный список ВКонтакте: как посмотреть, как убрать человека из черного списка.

Как узнать, что меня заблокировали в группе?

Заходя на страницу группы, ты будешь видеть такое: «Вы добавлены в чёрный список этого сообщества». К этому может быть добавлен комментарий администратора группы — прочти его, чтобы понять, почему тебя заблокировали.

Если ты считаешь, что тебя заблокировали несправедливо, и хочешь разблокироваться в группе, постарайся связаться с ее администратором (или попроси кого-нибудь из друзей это сделать). Не стесняйся извиниться, если был неправ. А можно просто молча сидеть, тогда ничего не произойдет и ты останешься заблокированным до конца времен.

Нет, это не то, меня совсем заблокировали, я не могу войти на страницу!

Если ты вообще не можешь войти на свою страницу ВКонтакте, значит, это другое. Обычный пользователь ВК не мог такого сделать. Тебя могла заблокировать администрация сайта за нарушение правил пользования. Например, если твой компьютер был заражен вирусом и от твоего имени рассылалась нежелательная реклама. Что делать? Читай эту инструкцию: Заблокировали, заморозили ВКонтакте. Что делать? Решение.

Есть также вероятность того, что твой компьютер заражен вирусом и на самом деле ты входишь не ВКонтакте, а на сайт мошенников, которые будут просить деньги за «разблокировку». Тогда ни в коем случае никому не плати, а сделай все по инструкции — Не входит в Контакт? Решение.

Обеспечить комфортное времяпровождение в социальной сети легко. Достаточно знать, как заблокировать пользователя в контакте. Информация рано или поздно обязательно пригодится. В интернете случается всякое. Иногда приходится защищать себя.

Что значит заблокировать человека Вконтакте?

Блокировка пользователя в ВК с компа может носить разный характер.

Личный – блокируется доступ только к вашей странице, в остальном его возможности для общения в сети никак не ограничиваются.

Общий – пользователь банится администрацией и не может пользоваться функциями ВК на протяжении определенного срока.

Блокировка с компа: как это сделать?

Функционал социальной сети ВКонтакте обширен. Создатели интернет-ресурса позаботились, чтобы каждый пользователь мог настраивать степень приватности своей страницы, ограничивая доступ нежелательным посетителям.

Люди часто спрашивают, как ВКонтакте заблокировать человека, которого нет в друзьях? Принципы блокировки юзеров, состоящих и не состоящих в друзьях, одинаковы. Но первых необходимо сначала удалить из друзей.

Рассмотрим несколько способов, дающих возможность избавиться от неприятного общества.

Способ №1: Блокировка на странице

Самый легкий метод бана неугодно человека состоит из трех простых действий.

Переходите к нему на страницу.
Нажимаете кнопку с тремя точками.

Выбираете пункт «Заблокировать».

Вуаля, он лишается доступа к вашей странице, альбомам, переписке. Сколько времени ушло на блокировку? Пара минут, не больше.

Способ №2: Добавление в черный список

Для блокировки с компа зайдите в настройки аккаунта на вкладку «Черный список»Способ №3: Жалоба администрации
Метод более жесткий и серьезный. Его применяют к страничкам спамеров, злоумышленников и мошенников. Не стоит таким способом пытаться заблокировать профиль бывшего друга. Модераторы отклонят заявку, если правила пользования соцсетью не были нарушены.
- Заходим к спамеру на страницу.
- Нажатием кнопки с тремя точками вызываем всплывающее меню.
- Выбираем пункт «Пожаловаться на страницу».
- Заполняем комментарии, выбираем причину для жалобы.
- Отправляем форму.
Человеку закроют доступ к вашей странице и, возможно, выдадут бан на постоянной основе.
Способ №4: Помощь зала
Третий способ не всегда срабатывает. Иногда одной жалобы для блокировки человека в ВК недостаточно. Тогда обратитесь в специальное сообщество. Таких сейчас много. На стене группы надо оставить сообщение с просьбой о помощи.
Не сомневайтесь, вскоре нужная страница будет заблокирована, даже если человек не является вашим другом.
Если заблокировать человека в ВКонтакте, что будет и что он увидит?
Блокировка человека в ВКонтакте может быть вызвана разными причинами. Но если вы закрыли доступ к своей странице, пользователь не сможет увидеть практически ничего. На виду остается аватар, информация о возрасте, стране проживания и родном языке.
Политика приватности социальной сети строгая. Попав в черный список, невозможно обойти запреты и обмануть систему с заблокированного профиля. Но можно создать новый профиль и попытаться продолжить общение. Впрочем, для этого придется приобрести новую сим-карту. Вряд ли ваш недруг захочет тратиться только ради того, чтобы вам насолить
LIVE запись закреплена
Мы уже делали не одну публикацию о чёрном списке и о том, какие возможности он несёт, помимо очевидных. Сегодня хотим всё это собрать в один материал, упомянув все нюансы, и подать в удобном формате. Поехали!
При занесении пользователя в чёрный список профиля:
— Пользователь теряет доступ к любой информации профиля, кроме основной, а также к главной фотографии без возможности открыть её.
— Пользователь не сможет писать вам личные сообщения и послать заявку в друзья.
— Пользователь перестаёт быть вашим подписчиком, если являлся им. По очевидным причинам его не будет и в списке друзей. При удалении его из чёрного списка спустя примерно 15 минут в подписчики или друзья он автоматически не вернётся.
— Отключаются уведомления об ответах этого пользователя на ваши комментарии.
— Отключаются уведомления о его комментариях под вашими записями, опубликованными в чужом профиле или сообществе.
— Будут также отключены любые уведомления об упоминаниях вашего профиля (через * или @) в записях, комментариях и сообщениях.
— Игнорируются и уведомления об упоминаниях вас в записях от имени сообщества, которые публикует заблокированный вами пользователь.
— Удаляются все недавние лайки пользователя к вашим записям в профиле. Однако, чтобы это произошло, пользователя нужно заблокировать через список лайкнувших (там на миниатюре фото каждого пользователя при наведении появляется крестик).
При занесении сообщества в чёрный список профиля:
— Администраторы этого сообщества не смогут делать в него репосты ваших записей, комментариев или медиаконтента.
— Вас нельзя будет пригласить в это сообщество или на мероприятие, организованное им.
— Вы удалитесь из блока контактов в сообществе, если находились там.
— Вы потеряете права руководителя в этом сообществе.
При занесении пользователя в чёрный список сообщества:
— Если это бан навсегда, такой пользователь не будет видеть контент на странице сообщества и перестаёт быть его участником.
— Если это временный бан, пользователь не сможет оставлять комментарии, создавать темы, предлагать новости, писать сообщения сообществу и делать любые другие действия. При этом он остаётся участником, может читать записи и получать их в новостную ленту, делать репосты и ставить лайки, просматривать их список, комментарии и другой контент.
При занесении сообщества в чёрный список другого сообщества вы ограничиваете возможность одного делать репосты другого, а также оставлять комментарии от имени этого сообщества.
“>

Как добавить человека или друга в черный список в одноклассниках. Как добавить в черный список ВКонтакте с телефона Добавить пользователя ВК в черный список

Бывают ситуации, когда вам постоянно пишет человек, с которым вы не хотели бы продолжать общение. При этом в социальной сети «Одноклассники» есть специальная функция: «Заблокировать пользователя». Этот список может пополнить любой человек, даже если он не друг или его профиль закрыт. Эта статья полностью ответит на вопрос, как добавить человека в черный список в Одноклассниках.

Вы должны знать, что человек, которого вы заблокировали, больше не сможет отправлять вам сообщения, пока он не будет удален из черного списка. Ваши фото ему не будут доступны, конечно, он тоже не сможет им понравиться. Все, что может сделать заблокированный пользователь:

посмотреть миниатюру фотографии на своей странице;
заблокирует вас.

С компьютера

Если в вашем распоряжении есть компьютер, с которого вы можете авторизоваться на своей странице в Одноклассниках, то заблокировать пользователя не составит труда.Есть несколько способов, в зависимости от того, в его черном списке вы или нет. а также от других факторов. Ниже мы рассмотрим их более подробно.

Если я в его черном списке

Здесь все предельно просто. Заходим на страницу этого человека в социальной сети, где будет отображаться уменьшенная копия его фото с главной страницы и кнопка «Заблокировать пользователя». Щелкните по нему и подтвердите свое действие в следующем окне. В результате пользователь попадет в черный список.

Если его нет в друзьях

В этом случае последовательность действий будет немного другой.Перейти на страницу пользователя. В правом верхнем углу есть раскрывающееся меню, на которое нужно просто навести курсор, чтобы увидеть возможные варианты. Нажмите кнопку «Заблокировать», и он больше не сможет отправлять вам сообщения и потеряет доступ к вашим данным.

Теперь вы увидите еще одно окно, требующее подтверждения ваших действий. Это необходимо для того, чтобы вы отказались от выбора, если случайно нажали не в том месте. Если вы уверены, что сделали правильный выбор, нажмите на кнопку «Заблокировать пользователя».

Теперь этот человек внесен в ваш черный список в Одноклассниках.

Если я его друг

Здесь еще больше возможностей, но функция добавления в черный список выглядит так же. Отличие от предыдущей инструкции в том, что теперь вы можете удалить его из списка друзей и пригласить в группу, помимо блокировки. Функция доступна как в мобильной, так и в полной версии сайта.

Из раздела сообщений

Это еще один способ добавить человека в черный список, независимо от того, дружите вы или нет.Важно знать, что в этом случае пользователь должен был написать вам хотя бы одно сообщение. Вы также можете написать ему сообщение, а затем заблокировать его.

Помните, что это удобнее делать из полной, чем из мобильной версии сайта.

Перейти в раздел сообщений. В правом верхнем углу есть раскрывающееся меню под значком шестеренки. Здесь у вас есть несколько вариантов. Чтобы добавить пользователя в черный список, нажмите «Заблокировать собеседника».

После этого снова наблюдаем окно подтверждения.Нажимаем «Заблокировать».

С телефона или планшета

Также легко заблокировать страницу любого пользователя с мобильных устройств. Перейдите на страницу пользователя и нажмите кнопку с выпадающим меню в правом верхнем углу. Щелкните «Заблокировать».

В окне подтверждения нажмите «Заблокировать пользователя». Готово. Этот человек занесен в черный список и больше не сможет вас беспокоить.

Видео

Разблокировать

Если вы хотите, чтобы пользователь мог писать вам, вам необходимо снять блокировку его аккаунта.Перейдите на страницу человека. В выпадающем меню под фото есть еще одно меню, в котором находится нужная нам кнопка «Разблокировать». Как только операция будет завершена, пользователь выйдет из черного списка и сможет писать вам сообщения и выполнять любые другие действия. Вы также можете добавить его в друзья.

Прочитав эту статью, вы узнаете, как добавить в черный список в Одноклассниках со своего телефона, а также все возможные способы это сделать.

Создатели социальной сети OK предусмотрели удобную функцию добавления в список заблокированных страниц.С его помощью пользователи могут рассылать спам в личные сообщения и всячески мешать тишине в сети. На нашем портале вы можете прочитать подробную инструкцию, как внести в «черный список» в Одноклассниках с персонального компьютера. Вы также можете выполнить эту операцию с мобильных устройств.

Способы добавления в аварийные ситуации с телефона

Добавить недоброжелателя или бота в ЧС можно следующими простыми способами:

Оба варианта отлично работают как на Android, так и на iOS.Вы можете войти в экстренную ситуацию на своем смартфоне и планшете. Давайте рассмотрим оба метода шаг за шагом.

Как добавить в черный список в Одноклассниках в мобильной версии?

Чтобы использовать веб-сайт, выполните следующие действия:

откройте браузер на телефоне и введите в адресной строке m.ok.ru;

перейти в список друзей и перейти на страницу пользователя, которого вы хотите добавить в экстренную службу;

под своим аватаром нажмите кнопку «Дополнительные действия»;

в открывшемся меню выберите пункт «Заблокировать».

Теперь пользователь окажется в аварийной ситуации и больше не сможет вас беспокоить.

Как добавить в черный список в Одноклассниках по телефону: заявка

Перед этим нужно скачать официальное приложение через Play Market или App Store, в зависимости от операционной системы вашего смартфона. Далее следуйте инструкциям:

- открыть программу с рабочего стола или через меню телефона;

перейти на страницу нужного вам человека любым удобным способом;

, затем щелкните значок «… «в правом верхнем углу экрана, чтобы открыть меню;

в меню выбрать «Заблокировать пользователя».

Теперь в приложении «Одноклассники» можно добавлять людей в аварийные ситуации. Оба метода практически идентичны, поэтому выбирайте тот, который вам удобнее. Также с мобильных устройств вы можете очистить черный список и внести любые изменения, доступные для полной версии социальной сети.

Добавить в черный список с телефона

В социальной сети есть так называемый черный список, с помощью которого вы можете заблокировать конкретного пользователя.Благодаря блокировке пользователь не сможет заходить на вашу страницу, просматривать фотографии, писать сообщения, видеть сообщения на стене и т. Д. Вещь очень полезная, особенно если у вас много слишком надоедливых фанатов. Сегодня я расскажу о том, как правильно заблокировать пользователя, то есть добавить его в черный список.

Итак, первое, что вам нужно сделать, это решить, кого вы хотите заблокировать. Есть два способа заблокировать, и я начну с более простого.

Заходим на страницу к пользователю. Если он среди ваших друзей, первым делом удаляем его из друзей, иначе ничего не поделаешь.Теперь прокручиваем страницу вниз и ищем фразу «Заблокировать имя пользователя». Имя пользователя — это имя пользователя, в моем случае это Анастасия.

Если вы видите такую надпись, значит, пользователь действительно попал в черный список. Теперь он не сможет вам ничего сделать, если, конечно, не перейдет на страницу с другого аккаунта.

Чтобы проверить, добавлен ли пользователь в черный список, нажмите «Настройки», вкладку «Черный список». Здесь вы увидите список всех тех пользователей, которых вы заблокировали.

Как видите, вы можете сразу разблокировать любого из заблокированных пользователей, нажав на ссылку «Удалить из списка».

А теперь второй способ — занести пользователя в черный список. В этом же пункте меню найдите строку «Введите имя пользователя или ссылку на его страницу», рядом с которой есть кнопка «Добавить в черный список». Просто скопируйте сюда ссылку на пользователя и нажмите кнопку «Добавить в черный список», после чего пользователь будет заблокирован.

Как видите, добавить человека в черный список так же просто, как и удалить его из последнего.Действуй. Главное, не заблокировать не того пользователя.

Привет, ребята. Если вам интересно, как добавить человека в черный список в Одноклассниках, то в этой статье вы найдете все ответы по этой теме. Итак, сначала дадим определение понятию «черный список» и его предназначение.

Черный список — это сервис социальной сети Одноклассники, с помощью которого вы можете заблокировать любого пользователя или друга, который вам не нравится, чтобы предотвратить доступ к информации из вашего профиля.Другими словами, если вы добавили человека в черный список, то он больше не сможет просматривать ваши фотографии, писать вам сообщения, просматривать ваш профиль и т. Д.

Причин, по которым людей вносят в черный список, может быть огромное количество:

— Ссоры всякие;

— Возникающая неприязнь к человеку;

— раздражение собеседника;

— Подозрение личности и др.

В любом из этих и других случаев вам понадобится четкий алгоритм добавления людей в черный список.

Рассмотрим несколько вариантов его реализации.

Способ № 1. Авторизуйтесь в своей учетной записи в Одноклассниках и перейдите на страницу того пользователя, которого хотите добавить в черный список.

Если вы хотите заблокировать своего друга, то перейдите по ссылке — Друзья (горизонтальное меню) в своей учетной записи, затем выберите друга, щелкнув один раз левой кнопкой мыши по его фотографии (если у вас много друзей, то вы можете использовать поиск, который находится сразу над списком друзей).

Откроется его личная страница, где под фото выберите пункт меню — другие действия и перейдите по ссылке — пожаловаться.

В открывшемся окне установите флажок — добавить этого человека в «черный список» и нажмите кнопку Пожаловаться.

В следующем окне нажмите кнопку «Закрыть».

Вот и все, человек успешно добавлен в черный список и больше он вас не побеспокоит.

Способ №2.Воспользуйтесь поиском внутри социальной сети Одноклассники и найдите пользователя, с которым вы не хотите поддерживать никаких отношений (с помощью этого метода вы можете заблокировать как друга, так и пользователя, которого нет в вашем списке друзей). Далее процедура такая же, как и выше.

Всем полезно! На сайте DoctorSmm.com вы можете получить большое количество друзей и подписчиков в Одноклассниках, а также хорошо раскрутить свою группу или сообщество.

Способ №3. Возникает вопрос — как добавить человека в черный список в Одноклассниках, если он не друг? Все очень просто.Находясь на своей странице, в самом верхнем горизонтальном меню выберите пункт меню — Гости и посмотрите, есть ли человек, которого вы хотите заблокировать.

http://ok.ru/gests

Если человек присутствует в появившемся списке, то наведите курсор мыши на его фотографию и выберите элемент — блок.

Подтверждаем наши действия, нажав кнопку «Заблокировать».

Способ №4. В верхнем горизонтальном меню выберите пункт меню — Сообщения, затем выберите пользователя, которого хотите заблокировать (можно воспользоваться поиском), нажмите ссылку — подробнее и выберите пункт — Заблокировать собеседника.

В следующем окне подтвердите действия, нажав кнопку «Заблокировать».

Мы выполнили свою задачу.

Часто бывает необходимо разблокировать конкретного пользователя и удалить его из черного списка. Для этой процедуры прочтите статью, которую я написал ранее -.

Это все друзья. Теперь вы знаете, как добавить человека в черный список в Одноклассниках. Мы разобрались, как добавить в этот список друга, а также обычного пользователя, которого нет в вашем списке друзей.Если остались вопросы, задавайте их в

Сегодня мы поговорим о так называемом черном списке в Одноклассниках. Сразу проанализируем следующий вопрос: можно ли добавить человека в ЧС, если он не друг? Нет проблем, вы можете занести в черный список любого пользователя Одноклассников, независимо от того, является он вашим другом или нет. Приведем пример блокировки как с компьютера, так и с телефона. Процесс очень простой, вы сразу все вспомните.

Как с компа добавить в черный список в Одноклассниках?

Самый простой вариант — добавить человека в черный список со своей страницы.Зайдите в профиль пользователя. Под аватаркой вы увидите небольшое меню, в нем нажмите на строку «Дополнительные действия».

Появится дополнительное меню, в котором нужно нажать на строку «Пожаловаться».

Далее на экране появится окно «Жалоба пользователя», но мы не будем на это жаловаться. Установите флажок «Добавить этого человека в черный список», затем нажмите оранжевую кнопку «Пожаловаться».

Вы видите подтверждение того, что пользователь был добавлен в аварийную ситуацию.

Есть еще вариант. Перейдите в раздел «Гости», в котором отображаются пользователи, посетившие вашу страницу. Наведите указатель мыши на гостя, и появится раскрывающееся меню. В нем нажмите на строчку «Заблокировать».

Подтвердите блокировку пользователя, нажав на кнопку «Заблокировать».

Сразу после этого пользователь попадет в черный список.

Как с телефона добавить в черный список в Одноклассниках?

Рассмотрим пример в мобильном приложении «Одноклассники».

Перейти на страницу пользователя, вверху страницы есть кнопка в виде трех точек — это кнопка меню. Нажмите здесь.

Появилось меню, нажимаем на строчку «Заблокировать пользователя».

Подтвердите блокировку пользователя.

Пользователь добавлен в черный список. Вы можете в этом убедиться, если окажетесь в экстренной ситуации.

В мобильной версии сайта блокировка происходит аналогично.

Беспроводная система экстренной телемедицины для мониторинга и диагностики пациентов

В последнее десятилетие системы удаленного здравоохранения привлекают все большее внимание, что объясняет, почему интеллектуальные системы с мониторингом физиологических сигналов для электронного здравоохранения становятся новой областью развития.Таким образом, в этом исследовании используется система, которая включает в себя непрерывный сбор и оценку нескольких показателей жизнедеятельности, долгосрочное медицинское обслуживание и сотовую связь с медицинским центром в экстренных случаях, а в обычных случаях оно передает все полученные необработанные данные через Интернет. Предлагаемая система может непрерывно регистрировать четыре различных физиологических признака, например ЭКГ, SpO2, температуру и артериальное давление, и затем передавать их в интеллектуальную схему анализа данных для диагностики аномальных импульсов для исследования потенциальных хронических заболеваний.Предлагаемая система также имеет удобный веб-интерфейс, позволяющий медицинскому персоналу наблюдать за мгновенными импульсными сигналами для удаленного лечения. Как только произошло ненормальное событие или подтвержден запрос на отображение показателей жизнедеятельности в реальном времени, все физиологические признаки будут немедленно переданы на удаленный медицинский сервер как через сотовые сети, так и через Интернет. Также данные могут быть переданы на мобильный телефон члена семьи или телефон врача через GPRS. Был успешно разработан и внедрен прототип такой системы, которая обеспечит высокий стандарт здравоохранения при значительном снижении затрат для нашего общества.

1. Введение

Система здравоохранения за последнее десятилетие стала возможной благодаря недавним достижениям в беспроводных и сетевых технологиях, связанным с последними достижениями в области нанотехнологий и повсеместных вычислительных систем. Термин телемедицина относится к использованию телекоммуникационных технологий для медицинской диагностики, лечения и ухода за пациентами [1]. Целью телемедицины является предоставление квалифицированной медицинской помощи удаленным объектам, не укомплектованным персоналом, с помощью современных телекоммуникаций (беспроводной связи) и информационных технологий.Одним из преимуществ телемедицины является экономия средств, поскольку транспортировка информации обходится дешевле, чем люди. Достижения в области медицинских технологий привели к ускоренному росту пожилого населения во многих странах, что привело к увеличению требований к домашнему мониторингу здоровья, чтобы гарантировать, что пожилые пациенты могут вести самостоятельную жизнь [2]. Многие физиологические сигналы могут быть измерены от людей в их среде обитания во время повседневной деятельности и потенциально могут применяться для наблюдения за отклонениями в состоянии здоровья на ранней стадии или для автоматического оповещения медработников в экстренных случаях [3].Специально для удаленного мониторинга физиологических параметров все исследования, разработанные и используемые в настоящее время в этой области, можно разделить на несколько аспектов: тип датчиков, тип передачи данных, устройство мониторинга и обработка сигналов / медицинские алгоритмы [4]. Итак, эти аспекты наряду с недавними исследованиями будут обсуждаться в этом разделе. Как показано на Рисунке 1, основные компоненты системы телемедицины в последние годы включают датчики биосигнала, блоки обработки, сети передачи данных и центр медицинского обслуживания.

Датчики биосигнала отвечают за получение физиологических данных (жизненно важных функций пациента) и передачу их в блок обработки сигналов. Проведено несколько исследований, направленных только на то, чтобы эти датчики были крошечными по размеру [5], сохраняли мобильность пациента [6] и потребляли низкую рабочую мощность для уменьшения размера батареи, которая может работать в течение более длительного времени [7]. Набор переносных медицинских датчиков может обмениваться данными через персональную сеть или сеть для тела [8], которую можно даже интегрировать в одежду пользователя [9].На следующем этапе сенсорный уровень каждой системы удаленного мониторинга обычно подключается к устройству обработки для сбора, обработки, анализа и форматирования сигналов, которые будут отправлены на уровень связи. Блок обработки может оценивать состояние пациента и тенденции его состояния здоровья. Блоком обработки может быть ПК [10], мобильный телефон [11] или встроенная система (микроконтроллер, процессор DSP и FPGA) [12]. Многие медицинские алгоритмы были разработаны в недавних телемедицинских исследованиях, чтобы помочь в диагностике пациентов [13] и раннем обнаружении сердечно-сосудистых заболеваний [14].Среди сигналов жизнедеятельности человека оценка пульса долгое время была областью исследований в области физиологии, поскольку пульс отражает состояние здоровья человека [15]. Во многих исследованиях были предложены системы мониторинга, которые могут измерять различные биосигналы и обеспечивать обнаружение QRS и классификацию аритмий [14], алгоритм классификации ЭКГ в реальном времени [13] и измерение вариабельности сердечного ритма [14]. Кроме того, последние достижения в области беспроводных и сетевых технологий позволяют разработать беспроводную телемедицинскую систему, которая предлагает эффективные средства предоставления медицинских услуг пациентам.Системы телемедицины можно разделить на два режима работы: режим реального времени, в котором данные пациента доступны на стороне сервера сразу после сбора данных, и режим с промежуточным хранением, который предполагает доступ к данным в более позднее время. В обоих режимах показатели жизнедеятельности передаются на сервер через компьютерные сети [16], сотовые сети [17], телефонные сети общего пользования [18] или сети кабельного телевидения [19]. В этих моделях системы ожидается, что эксперт будет в местах, где он / она может использовать ПК для доступа к серверу для анализа данных о жизненно важных функциях, а пациент ограничен в фиксированном месте, например, дома или в медицинском центре, где ПК оборудован для передача этих данных.Использование компьютеров, подключенных к проводной сети, ограничивает свободу передвижения врачей и пациентов.
Для повышения мобильности врача для подключения к серверу была использована глобальная система мобильной (GSM) связи сеть мобильной телефонии [20]. В [21] Хунг и Чжан реализовали систему дистанционного мониторинга на основе протокола беспроводных приложений (WAP). Он использовал устройства WAP в качестве мобильных терминалов доступа и позволял врачам просматривать отслеживаемые данные на устройствах WAP в режиме промежуточного хранения [22].В таких системах улучшение мобильности пациента намного меньше, чем у врача. Во многих предыдущих системах телемедицины сенсорный блок состоял из схемы сбора данных ЭКГ, аналого-цифрового преобразователя и блока хранения. Чтобы обеспечить очень ограниченную подвижность пациента, это устройство было оборудовано внутренним беспроводным передатчиком для передачи контролируемых данных на ПК, подключенный к сети [18, 21]. GSM-модем был оснащен ПК для передачи данных ЭКГ в режиме реального времени от движущейся машины скорой помощи в [23].В [24] Расид и Вудворд предложили систему мобильного дистанционного мониторинга, использующую процессор с поддержкой Bluetooth, который передает контролируемые данные на мобильный телефон Bluetooth, а затем через сеть GSM / GPRS (общие услуги пакетной радиосвязи) на сервер. С другой стороны, Engin et al. [25] использовали мобильный телефон для передачи измеренного сигнала ЭКГ в режиме реального времени. В этих конструкциях [24, 25] улучшается подвижность пациента. Однако анализ ЭКГ не выполняется в том месте, где снимается ЭКГ; например, ЭКГ анализируется на стороне сервера.Фактически, есть потеря эффективности при использовании сети GSM / GPRS, потому что также передаются нормальные ЭКГ, что подразумевает высокую стоимость. Lin et al. [26] разработали мобильную систему наблюдения за пациентом, которая объединяет технологию КПК и технологию беспроводной локальной сети (WLAN) для передачи показателей жизнедеятельности пациента в режиме реального времени на удаленный центральный блок управления. Система была основана на малогабаритном мобильном записывающем устройстве ЭКГ, которое отправляет данные измерений по беспроводной сети на мобильный телефон [27].В мобильном телефоне полученные данные анализируются, и в случае каких-либо отклонений, обнаруженных среди частей данных измерений, они будут отправлены на сервер. Однако из-за ограниченного количества процессоров в мобильном телефоне, общая производительность вряд ли могла работать в идеальных условиях [28]. Задержка в передаче данных также может нарушить анализ данных и измерения. В соответствии с обсуждаемыми компонентами системы телемедицины все разработанные системы можно разделить на несколько категорий: тип датчиков, тип связи между датчиками, устройство мониторинга / обработки, технология передачи данных и алгоритмы обработки сигналов.В таблице 1 представлен набор исследований телемедицины за последние десятилетия, а также аспекты, которые касаются каждого исследования.
Номер ссылки
Датчики биосигналов Коммуникационные технологии Медицинский алгоритм Комментарии
GSM / GPRS
Интернет 29] ЭКГ, АД, ЧСС
ТЕМП. √ √ WSN, тип метода локализации для пациентов и энергоэффективная стратегия передачи, потоковое видео.
[3] HR, SPO2,
TEMP., RESP. √ Реализовать прототип системы телемедицины на основе беспроводной технологии с использованием GSM и GPS.
[4] Вес, активность,
BP √ √ Android-приложение для мониторинга и использования датчиков с поддержкой Bluetooth.
[5] BP, HR, TEMP. √ √ Конструкция датчиков для снижения энергопотребления с использованием VLSI и FPGA.
[6] ЭКГ, ЧСС, SPO2,
ТЕМП., ДЫХ. √ Носимый ремень; разработаны и собраны вместе высококачественные и гибкие модули для формирования сигналов.
[9] ЭКГ, АД, ЧСС
ТЕМП., PPG √ √ Передача малого радиуса передачи ЧСС по ЭКГ.
[14] ЭКГ √ √ Алгоритм обнаружения QRS, извлечение вариабельности сердечного ритма, реализованный в КПК и GPS.
[13] ЭКГ √ √ √ A в реальном времени, алгоритм определения ЭКГ и алгоритм определения ЭКГ в реальном времени, GPS алгоритм.
[15] Импульсный сигнал √ √ Схема интеллектуального анализа данных для диагностики аномальных импульсов для выявления потенциальных хронических заболеваний.
[22] ЭКГ, ЧСС, SPO2,
ТЕМП., ДЫХ. √ Важные сигналы принимаются от монитора с помощью интерфейса RS232 и передаются через Интернет.
[23] ЭКГ, АД, ЧСС
ТЕМП. √ √ √ Коммерческие мониторы используются для сбора биосигналов и алгоритма Хаффмана для сжатия сигнала ЭКГ, GSM, GPRS, POTS или спутника.
В этой статье мы предлагаем беспроводную телемедицинскую систему, которая объединяет сенсорный блок, блок обработки и блок связи в одном чипе, прикрепленном к телу пациента, который называется мобильным блоком обслуживания. Это улучшит подвижность пациента и не повлияет на активную повседневную жизнь во время наблюдения. Чтобы снизить стоимость использования сети GPRS, передаются только аномальные показания, поэтому предлагаемая система работает в двух режимах: режиме с промежуточным хранением и режиме реального времени.В режиме с промежуточным хранением медицинское учреждение записывает и передает показатели жизнедеятельности пациента на сервер через Интернет. Когда обнаруживается ненормальное сердцебиение, которое беспокоит врача, отделение передает его на сервер через сеть GPRS в режиме реального времени. Врач на стороне сервера может общаться с пациентом также с помощью SMS, если это необходимо. Предлагаемая система также имеет удобный веб-интерфейс, позволяющий медицинскому персоналу наблюдать за непосредственными показателями жизненно важных функций для удаленного лечения, что повысит мобильность медицинского персонала.Остальная часть статьи организована следующим образом. Система описана в разделе 2. Предлагаемая система состоит из мобильного отделения и сервера. Аппаратное и программное обеспечение мобильного отделения описано в Разделе 2.2. Система внедрена и протестирована. Наконец, раздел 3 содержит некоторые обсуждения и выводы.
2. Проектирование системы
В этом разделе подробно описывается конструкция системы, основанная на физиологическом датчике, обработке сигналов, встроенной системе, беспроводной связи и технологиях World Wide Web.Рисунок 2 иллюстрирует архитектуру предлагаемой системы. В разделе 2.1 представлен обзор архитектуры системы. В разделе 2.2 описаны компоненты системы и детали работы системы.

2.1. Архитектура системы
Целью данного исследования является разработка и внедрение системы телемедицины с интеллектуальным анализом данных на основе физиологических датчиков, встроенной системы, беспроводной связи и всемирной паутины для мониторинга жизненно важных функций, диагностики пациентов и ухода на дому.Архитектура предлагаемой системы показана на рисунке 2. Она в основном состоит из следующих частей: (1) Мобильное отделение: оно может быть привязано к телу пациента и может получать информацию о жизненно важных функциях в реальном времени или периодически, не влияя на его нормальную деятельность. Затем применяется интеллектуальная схема анализа данных для выявления аномальных импульсов и передачи этих данных на удаленный сервер посредством беспроводной связи через Интернет в режиме промежуточного хранения для нормального случая или сотовые сети в режиме реального времени для ненормального случая.Передачей данных пациента в режиме реального времени также можно управлять вручную. Всякий раз, когда пользователь чувствует себя некомфортно, он может передать свои текущие показатели жизнедеятельности в подразделение управления для консультации или осмотра. Таким образом, стоимость использования сети GPRS снижается, поскольку передаются только аномальные сигналы. Для возможного длительного режима с промежуточным хранением необработанные данные могут храниться в расширенной защищенной цифровой флэш-памяти, содержащейся в мобильном отделении. (2) Удаленный сервер: он сохраняет полученные показатели жизнедеятельности в физиологии человека. база данных и отображает физиологические сигналы медицинскому персоналу через прикладную программу для диагностики.Кроме того, он обеспечивает удаленный доступ для лиц, осуществляющих уход, и врачей для получения показателей жизнедеятельности через веб-интерфейс через Интернет для отслеживания этих данных на их широко распространенных устройствах. После изучения данных о жизненно важных функциях врач может отправить пользователю MMS-сообщение с обратной связью. Сообщение может содержать медицинский совет и / или список команд управления мобильному устройству для повторной отправки данных о жизненно важных показателях аномального пациента. Также удаленный сервер может предупредить члена семьи в случае нештатной ситуации и вызвать службу экстренной помощи, чтобы доставить пациента в ближайший медицинский центр.(3) Распространенные устройства: распространенные устройства включают ноутбук, карманный компьютер (КПК) и мобильный телефон. С помощью этих терминальных устройств члены семьи или врачи могут получать обширную информацию о получателях медицинских услуг в любом месте и в любое время.
2.2. Компоненты системы
В этом разделе подробно описаны системные компоненты предлагаемой системы экстренной телемедицины для мониторинга и диагностики пациентов.
2.2.1. Мобильное отделение
В предлагаемой системе мобильное отделение было разработано таким образом, чтобы оно было портативным и легким, что означает, что его легко переносить и легко использовать, и пациенты ничего не делают.Мобильное отделение в основном состоит из трех модулей. В основном это модуль сбора сигналов жизненно важных функций, модуль управления и обработки данных (MCU) и модуль передачи данных. Таким образом, он может собирать важные биосигналы, включая ЭКГ в трех отведениях, ЧСС, артериальное давление и SpO2, которые являются жизненно важными показателями. Кроме того, он может оценивать состояние пациента и тенденции в его медицинском состоянии, а также генерировать экстренное оповещение, если состояние пациента критическое. Кроме того, он должен поддерживать беспроводную связь и быть совместимым с глобальной системой информации о местоположении для определения местоположения пациента для оказания экстренной помощи.На рисунке 3 показана блок-схема мобильного отделения. Также мобильная установка включает локальное хранилище данных, которое используется для записи необработанных данных вместе с результатами обработки сигналов.

(1) Модуль регистрации сигналов жизнедеятельности . Модуль сбора сигналов жизненных знаков отвечает за сбор показателей жизнедеятельности, а затем отправляет их в модуль обработки для АЦП, обработки и обнаружения отклонений от нормы. Экран датчика электронного здоровья V2.0 выбран для работы в качестве модуля сбора сигналов жизненно важных функций.Этот модуль может непрерывно регистрировать физиологические признаки, такие как ЭКГ, SpO2, температура тела и артериальное давление, как показано на рисунке 3. Все измерения жизненно важных функций будут неинвазивными. Неинвазивное измерение жизненно важных функций, безусловно, имеет преимущество перед своим инвазивным аналогом из-за простоты использования и отсутствия рисков, связанных с такими измерениями.
Датчик ЭКГ . ЭКГ — это биоэлектрический сигнал, который регистрирует электрическую активность сердца в зависимости от времени. Электрокардиограмма получается путем измерения электрического потенциала между двумя точками тела с использованием специальной схемы кондиционирования.В предложенном передвижном отделении сигналы ЭКГ от электродов усиливаются с коэффициентом усиления 300 и фильтруются с частотой отсечки 0,5 Гц в фильтре высоких частот и 100 Гц в фильтре низких частот.
Сигналы ЭКГ обычно имеют размах 1 мВ; усиление 300 необходимо, чтобы сделать этот сигнал пригодным для определения частоты сердечных сокращений и реализации точного морфологического воспроизведения. Дифференциальный усилитель с коэффициентом усиления 20 позволяет избежать помех, подавляющих сигналы ЭКГ; это достигается с помощью инструментального усилителя (INA321EA), CMRR 100 дБ, и, в конце концов, используется операционный усилитель (Analog AD8625) для усиления сигнала с коэффициентом усиления 15.Сигналы ЭКГ ограничиваются полосой пропускания 0,5–100 Гц с использованием фильтров верхних и нижних частот Баттерворта второго порядка после первых этапов усиления. Помехи линии электропередачи в сигнале ЭКГ фильтруются режекторным фильтром 50 Гц, который выбирается пользователем, чтобы избежать потери составляющей 50 Гц сигналов ЭКГ. Затем сигнал ЭКГ поступает на аналоговый вход блока обработки для оцифровки и анализа. На рисунке 4 показана блок-схема оборудования для сбора сигнала ЭКГ.

Датчик температуры. Температура здорового человека около 37 ° C; он может незначительно или временно увеличиваться в жаркой среде или при физической активности; при экстремальных усилиях увеличение может быть очень большим. Измерение температуры тела имеет большое медицинское значение. Причина в том, что ряд заболеваний сопровождается характерными перепадами температуры тела. Аналогичным образом, за течением некоторых заболеваний можно следить, измеряя температуру тела, и врач может оценить эффективность начатого лечения.Был выбран промышленный датчик температуры на интегральной схеме CMOS, показанный на рисунке 5 (a), который был подключен к схеме преобразования сигнала, показанной на рисунке 5 (b), для калибровки и усиления сигнала перед подачей его в блок обработки.
Измерение оксигенации крови (SpO2) и частоты пульса. SpO2 или пульсоксиметрия — это мера насыщения крови кислородом, которая связана с пульсом сердца, когда кровь перекачивается из сердца в другие части тела человека. Когда сердце качается и расслабляется, будет разница в поглощении света тонкой точкой человеческого тела.Кислородный гемоглобин поглощает больше инфракрасных световых волн и пропускает больше красных световых волн. Однако деоксигенированный (или восстановленный) гемоглобин поглощает больше красных световых волн и позволяет проходить большему количеству инфракрасных световых волн. Это уникальное свойство гемоглобина по отношению к красной и инфракрасной световой волнам позволяет неинвазивно определять насыщение кислородом. Пульсоксиметрия — простой, но надежный метод измерения насыщения кислородом, которое в противном случае пришлось бы измерять инвазивными методами.Красный (660 нм) и инфракрасный (940 нм) светодиоды были выбраны и размещены на датчике, изготовленном по индивидуальному заказу, показанном на Рисунке 6. Помимо насыщения крови кислородом, используемый датчик также показывает частоту сердечных сокращений. Выходной сигнал датчика SpO2 / HR поступает в блок обработки через модуль сбора данных. Характеристики различных физиологических параметров, контролируемых в предлагаемой системе, приведены в таблице 2.
ЭКГ
Физиологический параметр Технические характеристики Типичные значения для среднего здорового человека
Частота: 0.5 Гц – 100 Гц
Амплитуда: 0,25–100 мВ Амплитуда R-ВОЛНЫ:> 4,5 мв
Комплекс QRS: (0,04–0,12) мс
Частота сердечных сокращений (ЧСС) 40–220 ударов в минуту 60–100 ударов в минуту
Температура тела 32–40 ° C Около 37,5 ° C
Артериальное давление Систолическое: 50–300 мм рт. Ст.
Диастолическое: 40–140 мм рт. Ст. Систолическое: менее 120 мм рт. Ст.
Диастолическое: менее 80 мм рт. 50 вдохов / мин. Взрослые: 12–24 вдоха в минуту

(2) Модуль управления и обработки данных. Модуль управления и обработки данных — это сердце медпункта. Основную функцию этого модуля можно разделить на две части: в первой части разработанный алгоритм синхронизирует, контролирует и поддерживает точную работу и связь всех остальных модулей. Во второй части разработанный алгоритм оцифровывает и обрабатывает полученные сигналы жизненно важных функций, чтобы определить, превышают ли их соответствующие значения заданный предел или нет.Если какое-либо из этих значений или все они превышают соответствующие критические значения, включается сигнал тревоги. После этого все обработанные данные передаются на коммуникационный уровень. Этот модуль в основном состоит из микроконтроллера, который выбирается для проверки определенных характеристик. Блок микроконтроля (MCU) с мощными возможностями обработки и управления необходим для адаптации сбора и обработки большого количества данных. Кроме того, этот модуль также обладает высокой степенью системной интеграции, а также большим количеством интерфейсов расширения.В качестве микроконтроллера медицинского пункта мы выбрали 8-битный микроконтроллер PIC18F458. Он имеет встроенную схему ввода-вывода и периферийные устройства, что позволяет ему более или менее напрямую взаимодействовать с реальными устройствами, такими как датчики. Современные микроконтроллеры часто нуждаются в небольшом количестве внешних схем. Среди наиболее доступных — микроконтроллеры PIC. Микроконтроллер уже содержит все компоненты, которые позволяют ему работать автономно, и он был разработан, в частности, для задач мониторинга и / или управления.Следовательно, в дополнение к процессору он включает в себя блоки памяти RAM, ROM и EEPROM, контроллеры интерфейсов SPI, I2C, CAN, ADC и UASRT, один или несколько таймеров, контроллер прерываний и контакты ввода-вывода общего назначения. На рисунке 7 показана архитектура MCU.

Мы можем резюмировать основные функции MCU в предлагаемой системе следующим образом. (1) Он принимает и оцифровывает сигналы, полученные от датчиков жизненно важных функций. (2) Он контролирует работу всех подключенных модулей, как показано на рисунке 8 .(3) Он обрабатывает полученные сигналы, используя различные методы и алгоритмы обработки. (4) Он устанавливает соединение с удаленным сервером и передает ему результаты анализа и необработанные данные, используя методы связи. (5) Он сохраняет результаты анализа. и необработанные данные во флэш-память.

(3) Программные компоненты Процессорного блока. MCU контролирует и координирует все действия мобильного отделения. На рисунке 9 показан рабочий процесс мобильного отделения.Программное обеспечение было написано на языке C для моделирования MCU и его компонентов. Он основан на следующих концепциях. (1) Компонент инициализации датчика и модуля: он отвечает за запуск, инициализацию и настройку медицинского пункта. (2) Компонент восприятия жизненно важных функций: он получает значения показателей жизнедеятельности от датчика. (3) Компонент обработки показателей жизнедеятельности: он выполняет преобразование и обработку данных и выполняет диагностику пациента, определяя его состояние здоровья. (4) Компонент передачи информации: обмен данными между мобильным отделением и сервером осуществляется с помощью этого компонента.(5) Компонент приема информации: он помогает узлу получать управляющие или запрашивающие запросы от сервера. (6) Компонент уведомления об исключении: когда появляется аномальная информация обнаружения, он немедленно отправляет сообщение на сервер и отправляет сигнал тревоги как как можно скорее.

(4) Модуль передачи данных. Модуль передачи данных помогает медицинскому персоналу получать физиологические данные пациента, подключая медицинское учреждение к другим сетям, таким как сотовая сеть или Интернет.Он отвечает за загрузку полученных данных о жизненно важных функциях на сервер удаленного обслуживания через сотовую сеть для выполнения мониторинга и диагностики состояния здоровья пациента. Этот модуль работает в двух режимах: режиме с промежуточным хранением, в котором мобильное устройство для ухода за пациентом непрерывно записывает жизненно важные показатели пациента до указанного периода и передает их на удаленный сервер, и в режиме реального времени, который работает при обнаружении аномального сердцебиения. Мобильное отделение в режиме реального времени передает все показатели жизнедеятельности на удаленный сервер через сеть GSM / GPRS.В предлагаемой системе медицинское учреждение может отправлять данные через Интернет-сеть по протоколам UDP или TCP с использованием модуля Ethernet ENC28J60, показанного на рисунке 10 (а). Для связи в режиме реального времени в экстренных случаях жизненно важные показатели передаются через сети GSM / GPRS с использованием модуля sim900 GSM / GPRS, показанного на Рисунке 10 (b). Используемый модуль GSM / GPRS работает на четырех диапазонах 850/900/1800/1900 МГц и управляется с помощью AT-команд.
2.2.2. Удаленный серверный модуль
При применении телемедицины медицинская информация обычно должна быть распределена между врачами и устройствами отображения, архивирования и анализа.Поэтому удаленный серверный модуль разработан с целью получения, хранения и распространения данных о жизненно важных функциях пациентов. Сервер состоит из уровня представления, веб-уровня и уровня базы данных. Многоуровневая архитектура позволяет разделить задачи, когда любой уровень в системе может быть расширен и обновлен с минимальным влиянием на клиентские уровни или без него. В следующих подразделах обсуждаются три уровня более подробно.
(1) Уровень представления. Уровень представления позволяет авторизованному пользователю взаимодействовать с полученными данными пациента с помощью прикладной программы, разработанной с использованием языка C #.Дизайн интерфейса обеспечивает большинство общих, а также функциональных требований, а именно: (i) Ограничения доступа применяются постоянно на основании авторизованного пользователя, зарегистрированного в базе данных. (Ii) Он включает списки пациентов и личную информацию о пациентах. (iii) Он отображает жизненно важные сигналы пациентов и устанавливает пороговые значения для каждого измеряемого параметра. (iv) Он предупреждает медицинских работников о ненормальных случаях. (v) Он добавляет нового пациента, новую консультацию и рецепт на лекарства. (vi) Он показывает прошлые медицинские записи для всех пациентов, включая болезни, прошлые операции, клинические данные, прошлые лекарства, аллергии и изображения.(vii) Он обеспечивает поиск всех зарегистрированных пациентов по идентификатору пациента или имени пациента. (viii) Он показывает примечания (опыт пациента) во время измерения. (ix) Он отправляет сообщения, включая инструкции для пациентов и рецепты лекарств. (x) Данные датчика будет автоматически перезагружаться через заранее определенные промежутки времени, чтобы представление постоянно обновлялось.
Снимки экранов разработанного программного обеспечения показаны на рисунках 11, 12 и 13.

(2) Веб-уровень. Веб-уровень позволяет различным пользователям, таким как врачи, врачи и медицинский центр, взаимодействовать с сервером через веб-интерфейс. Пользователь удаленного доступа в Интернет будет иметь постоянный доступ в режиме реального времени к показателям жизнедеятельности пациентов через Интернет. Веб-пользователь взаимодействует с веб-компонентами, используя протокол HTTP через соединение TCP / IP. Информация и контент предоставляются пользователю с помощью интернет-браузера через веб-страницу, разработанную с помощью Microsoft Visual Studio 2010. Разработанная веб-страница обеспечивает наиболее общие функции разработанного приложения на уровне представления, о котором говорилось ранее.Снимки экрана созданной веб-страницы показаны на рисунках 14 и 15.

(3) Уровень базы данных. Уровень базы данных отвечает за хранение, извлечение, обновление и целостность данных, передаваемых на уровень представления и веб-уровень. Наиболее распространенный способ доступа к базе данных — использование драйверов, которые позволяют получить доступ к управлению реляционной базой данных (СУБД) для запроса или обновления записей данных. Драйвер, используемый при реализации предлагаемой системы, — это драйверы JDBC, а база данных развернута на сервере базы данных SQL.Уровень базы данных предоставляет возможность делать следующее: (i) хранить, извлекать и обновлять записи пациента, включая контактную информацию о его / ее медицинском персонале и другие детали; (ii) сохранять и извлекать полученные данные физиологических датчиков, переданные медицинским учреждением. ; (iii) хранить, извлекать и обновлять консультации пациентов и рецепты на лекарства; (iv) сохранять и извлекать записи пациента во время сеансов; (v) сохранять, извлекать и обновлять зарегистрированных врачей, врачей и медсестер; (vi) сохранять, извлекать и обновите данные ЭКГ, время записи, местоположение зубца R и предполагаемый тип сердечных сокращений.
На рисунке 16 показан снимок экрана, показывающий, как искать.

2.2.3. Блоки мониторинга
Веб-уровень на удаленном сервере разработан, чтобы позволить удаленному пользователю получать обширную информацию о получателях медицинских услуг в любом месте и в любое время с помощью широко распространенных устройств, таких как ноутбук, КПК и мобильный телефон. Наконец, мы можем сказать, что предлагаемая система может работать в следующих трех ситуациях: (1) Соединение на основе времени: все данные, необходимые для удаленных опекунов или специалистов, должны быть выгружены.Сжатие данных необходимо для ограничения времени загрузки. В этой ситуации удаленный опекун должен определить график загрузки всех данных пациента на удаленный сервер. Расписание хранится в мобильном отделении, поэтому данные будут загружаться в соответствии с этим графиком. (2) Экстренное соединение: для снижения стоимости использования сети GSM / GPRS мы разрабатываем алгоритм, который обнаруживает аномальные сердцебиения. Таким образом, во время сенсорного мониторинга, если передвижное отделение обнаруживает ненормальное состояние, оно отправляет собранные данные на удаленный сервер для получения клинической оценки и планирования лечения.(3) (Уведомление о событии) соединение по запросу: мобильное медицинское учреждение выгружает объем данных, запрошенных удаленными опекунами или специалистами для наблюдения за состоянием здоровья пациента.
3. Заключение и перспективы на будущее
В этом документе предлагается разработка и реализация беспроводной телемедицинской системы, в которой все физиологические показатели жизненно важных функций передаются на удаленный медицинский сервер через обе сотовые сети в экстренных случаях и через Интернет в обычных случаях в течение длительного времени. срочный мониторинг.Таким образом, стоимость использования сети GSM / GPRS снижается, так как только ненормальные случаи будут передаваться через сотовую сеть. Также предлагаемая система представляет собой удобный веб-интерфейс, позволяющий медицинскому персоналу наблюдать за основными жизненно важными показателями для удаленного лечения. Сравнивая эту систему с другими системами, которые упомянуты во введении [18–28], предлагаемая система объединяет сенсорный блок, блок обработки и блок связи в одном чипе, прикрепленном к телу пациента, который называется мобильным блоком ухода, чтобы пациент мог выполнять свои обязанности. ее повседневная деятельность во время наблюдения.Другими словами, это улучшит подвижность пациента. Также предлагаемая система дает возможность непрерывного мониторинга жизненного состояния пациента вместо дискретных измерений.
В будущем можно будет проделать большую работу по трем основным аспектам систем телемедицины для улучшения услуг здравоохранения. Три основных аспекта — это тип датчиков, алгоритмы обработки сигналов и технология передачи данных. На сенсорном уровне может быть спроектирована беспроводная сенсорная сеть из носимых неинвазивных сенсорных блоков.Изготовление датчиков может быть улучшено, чтобы получить датчики небольшого размера и малой мощности, чтобы улучшить мобильность пациента и продлить срок службы сети. Также мы можем увеличить количество передаваемых жизненно важных функций, чтобы иметь полную картину состояния пациента. Для дальнейшего совершенствования систем телемедицины можно разработать множество медицинских алгоритмов, которые помогут в диагностике пациента и раннем обнаружении сердечно-сосудистых заболеваний, а анализ показателей жизнедеятельности в реальном времени может быть выполнен в том месте, где регистрируются показатели жизнедеятельности.Последнее достижение на рынке смартфонов предоставило возможность интегрировать смартфоны в системы телемедицины. Например, можно разработать приложение для мониторинга пациентов с мобильными телефонами на базе Android, которое позволит врачам отслеживать состояние здоровья пациента с помощью простого для понимания пользовательского интерфейса (UI). Это приложение также предоставляет предупреждения, напоминания и экстренных уведомлениях для важных измерений, чтобы помочь врачам принимать своевременные решения в экстренных ситуациях. Наконец, что касается технологий передачи данных, во многих странах в настоящее время установлены и работают мобильные сети 3G, такие как UMTS, которые обеспечивают максимальную пропускную способность до 2 Мбит / с (обычно сотни кбит / с) [30].Это позволит передавать больше информации, например 12 непрерывных отведений ЭКГ, при наблюдении за кардиологическими пациентами из движущейся машины скорой помощи. Кроме того, текущее внедрение новых услуг, таких как видеотелефония через беспроводные сети, является дополнением, которое может помочь в установлении связи между поставщиком медицинских услуг (медсестрами, парамедиками) и опытным врачом. Текущая деятельность в так называемых мобильных сетях 4G обещает повсеместный доступ к различным технологиям радиосетей, таким образом предлагая, помимо расширенного покрытия, также наиболее эффективный режим соединения в точке контакта, даже используя одновременно несколько технологий беспроводного доступа и плавно перемещаясь между ними.Использование систем определения местоположения, таких как глобальная система позиционирования (GPS), географические информационные системы (GIS) и интеллектуальные системы управления дорожным движением, также имеет потенциал для улучшения медицинских услуг, например, когда движущаяся машина скорой помощи пытается добраться до города. пациенту, который использует самый быстрый маршрут или когда машина скорой помощи с пациентом пытается добраться до базовой больницы.
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов в отношении публикации этой статьи.
VK-11 — THOMAS & BETTS — Крышка для подвесного монтажа,
Политика отгрузки и исполнения
Когда вы заказываете товары на Anixter.com, заказ обрабатывается в течение одного-двух рабочих дней. Заказы, полученные в нерабочие дни, обрабатываются на следующий рабочий день.
У вас есть несколько вариантов доставки посылок: стандартная доставка от 5 до 7 рабочих дней, от 2 до 3 рабочих дней или на следующий рабочий день.
Anixter.com заказывает доставку по адресам в США.Заказы Anixter.com в настоящее время не доставляются по адресам за пределами США или военным / правительственным пунктам APO / FPO. Мы также не можем отправлять на адреса почтовых ящиков. Если вы хотите отправить товар по адресу за пределами США или в военное / правительственное учреждение, обратитесь к местному торговому представителю Anixter, чтобы обсудить возможные варианты.
Кроме того, Anixter.com предлагает вариант «LTL» для товаров, которые не могут быть отправлены посылкой. Для продуктов, которые будут отправляться через LTL, вам будет предоставлен набор аксессуаров на выбор, чтобы предоставить Anixter дополнительные сведения о доставке, такие как доставка на дом, внутренняя доставка, подъемная дверь или ограниченный доступ.
Доставка по месту жительства — Плата за доставку по месту жительства применяется к отправлениям на дом или в частную резиденцию, включая места, где бизнес ведется из дома, или к любому отправлению, в котором грузоотправитель указал адрес доставки в качестве места жительства.
Внутренняя доставка — по запросу грузовой перевозчик выгружает грузы из или в районы, которые не находятся рядом с прицепом, такие как торговые центры или офисные здания. Лифт должен быть доступен для обслуживания этажей выше или ниже прицепа.
Liftgate — Грузовой перевозчик предоставляет услуги подъемной двери, если это необходимо, для загрузки и разгрузки груза, когда погрузочно-разгрузочные доки недоступны.
Пункты ограниченного доступа — Пункты ограниченного доступа — это места, где вывоз или доставка ограничены или ограничены.
Стоимость доставки рассчитывается на основе выбранного вами варианта доставки и оплачивается вами во время доставки.
Мужская майка Bremner’s Vancouver серии VK
ОБЩИЙ ОТКАЗ
Указывая свое согласие, вы понимаете, соглашаетесь, гарантируете и обязуетесь о следующем: Я знаю, что участие в серии соревнований по трейлраннингу в онлайн-формате как мероприятие, при котором я бегаю самостоятельно, в дату и время по моему выбору, в месте, которое не будет поддерживаться Организатором гонки (Кофейня на Саммит) , и спонсоры серии, является потенциально опасным занятием, включая, помимо прочего: падения, контакт с другими пешеходами, погодные условия, включая высокую температуру и / или влажность, движение и условия дороги или тропы, все такие риски могут быть известны или неизвестны и оценены мной при самостоятельном беге без какой-либо поддержки со стороны местных властей или организаторов мероприятия, что может привести к травмам или смерти.Я подтверждаю, что участвую в деятельности, предусмотренной этим мероприятием, по собственной воле и на свой страх и риск. ВЫ ПОНИМАЕТЕ, ЧТО СОБЫТИЯ МОГУТ БЫТЬ СОБЫТИЯ НА ОБЩЕСТВЕННЫХ ДОРОГАХ И ПАРКАХ, ОТКРЫТЫХ ДЛЯ ОБЩЕСТВЕННОСТИ ВО ВРЕМЯ СОБЫТИЯ, И ПО КОТОРЫМ МОЖНО ОЖИДАТЬ ОПАСНОСТИ. УЧАСТИЕ НЕСЕТ ОПРЕДЕЛЕННЫЕ ВНУТРЕННИЕ РИСКИ, КОТОРЫЕ НЕ МОЖЕТ БЫТЬ УСТРАНЕНЫ ПОЛНОСТЬЮ, ОТ НЕБОЛЬШИХ ТРАВМ ДО КАТАСТРОФИЧЕСКИХ ТРАВМ, ВКЛЮЧАЯ СМЕРТЬ. Я беру на себя свои медицинские и неотложные расходы в случае несчастного случая или другой нетрудоспособности или травмы, возникших в результате моего участия.Я согласен с тем, что я проверю погодные условия перед тем, как пройти какой-либо из серийных курсов, и я провел достаточно исследований по курсам, чтобы попробовать их в пределах моего уровня способностей. Я также согласен с тем, что организатор гонки или его спонсоры не несут ответственности за безопасную доставку вас домой после участия во время или после завершения любого из маршрутов гонки. Я принимаю на себя ответственность провести достаточное исследование навигации по маршруту и освобождаю организатора гонки и спонсоров от любых претензий, даже если они были небрежны, в отношении указаний, касающихся трасс, включая места старта, маршрут гонки и возвращение после завершения. гоночных трасс.Я подтверждаю, что я физически здоров и достаточно подготовлен для этого напряженного соревнования, и я не буду участвовать в мероприятии, если я не буду иметь медицинские возможности и надлежащим образом обучен, и своей подписью я подтверждаю, что я могу с медицинской точки зрения участвовать в этом соревновании, и что я в добром здравии, и я должным образом обучен. Я согласен с тем, что трасса может быть отмечена Организатором гонки как «Открытая», но я возьму безопасность в свои руки и проведу собственное предварительное исследование, прежде чем пытаться пройти любую из предлагаемых трасс. Если погодные условия станут небезопасными или выходят за рамки моего уровня комфорта и / или опыта, я согласен, что я поверну назад и не продолжу путь.Если я поверну назад или продолжу, я решаю сделать это по собственному желанию и отказываюсь от любого права подавать в суд или предъявлять иск против сторон, которых я освобождаю. Я согласен соблюдать все правила безопасности пешеходов, в том числе бегать по тротуару, если это возможно, а не по дороге. Я согласен соблюдать правила дорожного движения, если нет тротуаров или многоцелевых маршрутов, и я буду бежать против встречного движения, а не с движением транспорта. Принимая этот отказ, я намерен принять на себя юридические обязательства и настоящим для себя, моих наследников, исполнителей и администраторов навсегда отказываюсь, освобождаю и отказываюсь от любых претензий, требований, ответственности, убытков, издержек и расходов любых любого рода, в том числе личные травмы или противоправная смерть в отношении Дивана Саммита, спонсоров и наследников, которые могут возникнуть в результате моего участия в серии Vancouver Vertical KM, или во время поездки на мероприятие или обратно, даже если они были полностью или частично частично по небрежности или по другой вине сторон, лица или лиц, которых я настоящим освобождаю.Я ПОЛНОСТЬЮ ПОНИМАЮ, Я НАВСЕГДА ОТКАЗЫВАЮСЬ ОТ ЛЮБОГО ПРАВА НА ПОДАТЬ ЗАЯВЛЕНИЕ ИЛИ ПОДАТЬ ПРЕТЕНЗИЮ К СТОРОНАМ, Я ОТЗЫВАЮ, ЕСЛИ Я ПОЛУЧАЮ ТАКИЕ ТРАВМЫ И УЩЕРБ, ДАЖЕ ХОТЯ НЕ ЗНАЮ, ЧТО И КАК И КАК ДОЛЖНЫ БЫТЬ ВОЗМЕЩАЮТСЯ ПОМОЩИ. ПРИНЯТЬ РИСК ТАКИХ ТРАВМ И ПОВРЕЖДЕНИЙ. Я ПОНИМАЮ И СОГЛАШАЮСЬ, ЧТО В СООТВЕТСТВИИ С РАЗРЕШЕНИЕМ НА УЧАСТИЕ В МЕРОПРИЯТИИ, Я И ЛЮБАЯ ЗАРЕГИСТРИРОВАННАЯ СТОРОНА, НАСЛЕДНИКИ, ЛИЧНЫЕ ПРЕДСТАВИТЕЛИ ИЛИ НАЗНАЧЕНИЕ ВАС ИЛИ ЗАРЕГИСТРИРОВАННАЯ СТОРОНА НАСТОЯЩИМ ОТПУСКАЮТ, ОТКАЗЫВАЮТ, ОТКАЗЫВАЕТСЯ ОТ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА САММИТ ИЛИ ЛЮБЫХ СПОНСОРОВ ДЛЯ ЛЮБОЙ И ВСЕЙ ОТВЕТСТВЕННОСТИ ОТ ЛЮБЫХ И ВСЕХ ПРЕТЕНЗИЙ, ВЫЯВЛЯЮЩИХСЯ В РЕЗУЛЬТАТЕ УЧАСТИЯ В СОБЫТИИ ВАМИ ИЛИ ЛЮБОЙ ЗАРЕГИСТРИРОВАННОЙ СТОРОНОЙ.Я согласен подчиняться любому решению организатора гонки, касающемуся открытия или закрытия трасс, принятия или отклонения предоставленного времени и попыток прохождения трасс. Я подтверждаю, что прочитал правила серии гонок и согласен их соблюдать. Я соглашаюсь отозвать претензию к организатору гонки или ее спонсорам, если я оспариваю решения организаторов гонки, касающиеся попыток, времени, рейтинга и призов. Я передаю права на любой фотографический материал, кинофильм, видеокассету, записи и / или компьютерную информацию, которые организаторы могут пожелать опубликовать для этого мероприятия, без каких-либо обязательств передо мной.УКАЗЫВАЯ ПРИНЯТИЕ НАСТОЯЩЕГО СОГЛАШЕНИЯ И ОТКАЗА ОТ ДАННОГО СОГЛАШЕНИЯ, ВЫ ПОДТВЕРЖДАЕТЕ, ЧТО ВЫ ПРОЧИТАЛИ И ПОНИМАЛИ ДАННОЕ СОГЛАШЕНИЕ И ОТКАЗ И ПОЛНОСТЬЮ ПОНЯЛИ ЕГО УСЛОВИЯ. ВЫ ПОНИМАЕТЕ, ЧТО ВЫ ОТКАЗЫВАЕТЕСЬ ОТ СУЩЕСТВЕННЫХ ПРАВ, ВКЛЮЧАЯ ПРАВО НА подачу иска. ВЫ ПОДТВЕРЖДАЕТЕ, ЧТО ВЫ ПОДПИСЫВАЕТЕ СОГЛАШЕНИЕ И ОТКАЗЫВАЕТСЯ ОТ СВОБОДНО И ДОБРОВОЛЬНО И ПРЕДНАЗНАЧЕНЫ своим ПРИНЯТИЕМ БЫТЬ ПОЛНЫМ И БЕЗОГОВОРНЫМ ОТКАЗОМ ОТ ВСЕЙ ОТВЕТСТВЕННОСТИ В МАКСИМАЛЬНОЙ СТЕПЕНИ, РАЗРЕШЕННОЙ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВОМ.
Блог аварийных уведомлений | Code Blue Healthcare
Массовое уведомление для Code Blue
Медицинские учреждения создают множество проблем, когда дело доходит до передачи информации нужной группе людей.Потребности пациентов, запросы посетителей и обязанности врача — все это может затруднить доступ к нужным людям с правильным посланием. В здравоохранении одним из наиболее важных средств коммуникации является предупреждение Code Blue. Согласно Healthline, «синий код указывает на неотложную медицинскую помощь, такую как остановка сердца или дыхания». Это часто требует немедленной реакции со стороны врачей и медсестер, которые могут обеспечить надлежащий уход за пациентом. Системы массовых уведомлений могут помочь доставить эти сообщения нужной аудитории и дать людям возможность ответить, чтобы отправитель знал, что ситуация обрабатывается.В этом сообщении блога мы рассмотрим различные методы уведомления и подтверждения, которые медицинские учреждения могут использовать для эффективного реагирования на Code Blue.
Разработка и отправка предупреждений синего цвета с кодом
InformaCast Fusion предлагает поставщикам медицинских услуг быстрый и простой способ активировать предупреждения Code Blue. Когда происходит сердечное или респираторное заболевание, важна каждая секунда. Время, необходимое для того, чтобы предупредить медицинских работников и заставить их отреагировать, может означать разницу между жизнью и смертью.InformaCast Fusion предоставляет локальные и мобильные методы оповещения, которые помогают убедиться, что ваше сообщение увидят нужные люди.
Используя InformaCast Command Center, кризисные группы здравоохранения могут предварительно создавать сообщения для событий Code Blue, к которым можно получить доступ с веб-консоли или мобильного приложения InformaCast. Сообщение может быть четко обозначено как «Code Blue», может быть изменено с использованием синего цвета и даже может включать значок, чтобы пользователям было как можно проще идентифицировать и активировать. Когда пользователь нажимает кнопку, он может включать запрос номера палаты пациента, в которой происходит событие.Затем номер комнаты будет включен в сообщение, которое будет распространяться, чтобы лучше направлять тех, кто отвечает. Сообщение также может предлагать пользователю выбрать группу для отправки сообщения. Такая настройка может быть полезной, так как вы доставляете сообщения только сотрудникам, которые находятся на объекте, и можете оказывать помощь, не предупреждая излишне тех, у кого может быть выходной.
Подробнее о массовых уведомлениях для здравоохранения
Когда сообщение отправлено, оно может быть доставлено в виде всплывающего окна на настольном компьютере на посту медсестры или на мобильные устройства в виде телефонного звонка, push-уведомления или текстового SMS-сообщения.Каждый из этих методов может побудить получателя подтвердить ответ, сообщив, могут ли они помочь или недоступны. Показатели в реальном времени может просматривать человек, активировавший сообщение из мобильного приложения или веб-консоли, поэтому он знает, что кто-то отвечает.
InformaCast также предлагает возможность настроить ваше сообщение так, чтобы оно выходило только в определенных зонах. Это может помочь членам медицинской бригады снизить беспокойство среди членов семьи, которые могут находиться в зонах ожидания, поскольку оповещения транслируются только в тех местах, к которым имеют доступ медицинские бригады.
Синий код и коронавирус
Пациенты с сердечными и респираторными заболеваниями особенно подвержены риску заражения коронавирусом. Массовые уведомления могут способствовать распространению передовых практик в области здравоохранения путем отправки напоминаний с помощью текстовых SMS-сообщений и публикаций на цифровые вывески и настольные компьютеры. Регулярные напоминания о правильных гигиенических привычках могут помочь людям знать о происходящем кризисе здоровья и принять меры, чтобы внести свой вклад в предотвращение распространения болезни.Массовое уведомление также может помочь медицинским учреждениям общаться со своим персоналом в случае притока пациентов, чтобы они могли определить ожидания и запросить дополнительных членов команды для управления рабочей нагрузкой при массовом несчастном случае.
Другие чрезвычайные ситуации
Эту функцию можно настроить, чтобы медицинские учреждения могли предупреждать и реагировать на любую чрезвычайную ситуацию, с которой они могут столкнуться. Жестокие злоумышленники, предупреждения о биологической опасности, суровые погодные условия и многое другое можно настроить как кнопки командного центра InformaCast, чтобы легко запускать массовые уведомления, которые достигают локальных и мобильных устройств.В дополнение к упомянутым выше мобильным уведомлениям и настольным оповещениям, IP-динамики, IP-телефоны и цифровые вывески также могут использоваться для доставки массовых уведомлений. Инструменты для совместной работы, такие как Microsoft Teams и Cisco Webex Teams, могут служить конечными точками и предлагать организациям способ собрать людей в виртуальных пространствах, где они могут оценить ситуацию и спланировать ответные действия. Дополнительные триггеры, такие как виртуальные или физические кнопки паники на IP-телефонах, отслеживаемые каналы CAP от Национальной службы погоды и датчики Интернета вещей, могут активировать массовые уведомления, чтобы быстро и легко сообщить о потенциально опасных ситуациях.
Какими бы ни были ваши потребности в безопасности и предупреждении для вашего медицинского учреждения, массовое уведомление может помочь обеспечить безопасную среду, основанную на надежных методах коммуникации.
Важные друзья ВКонтакте потерялись. Как опустить человека в список друзей ВКонтакте
Социальная сеть ВКонтакте — один из самых популярных интернет-проектов во всей России и странах бывшего Советского Союза. Ежедневно, из года в год, ресурсом пользуются миллионы пользователей, которые заходят в ВК.com, чтобы не только пообщаться друг с другом, но и узнать новости, послушать свои любимые аудиозаписи, посмотреть фильм или сериал, узнать что-то интересное и даже наметить, куда пойти для обновления гардероба.
На данный момент каждый может добавить в друзья до 10 тысяч других «обитателей» социальной сети, а, как показывает статистика, в друзьях среднестатистического пользователя ресурса около 200-300 друзей. Тем не менее, просматривая список ваших друзей ВКонтакте, вы можете неожиданно обнаружить, что они расположены в другом порядке и иногда могут меняться местами.Почему это происходит и как формируется весь этот список?
Как было до
Прежде чем ответить на заданный выше вопрос, хочу вспомнить, как несколько лет назад формировался список друзей ВКонтакте. Несколько лет назад люди, фигурировавшие в списках друзей пользователя, сортировались по рейтингу. Здесь все ясно: чем выше рейтинг страницы пользователя, тем выше он отображался в списке друзей. Рейтинг можно было получить, заполнив информацию на своей странице или купив дополнительные голоса.Позже было решено отказаться от рейтинга, что сильно расстроило пользователей, купивших большое количество голосов и / или отдавших их другим «обитателям» социальной сети.
Как сейчас формируется список друзей
Сейчас список друзей в самой популярной социальной сети формируется по-другому : те пользователи, с которыми вы общаетесь чаще всего, находятся на первых позициях в списке. Однако сортировка этого списка друзей ВКонтакте может сбивать с толку некоторых пользователей.Например, некоторые задаются вопросом, почему человек, с которым общение крайне редко, занимает такое высокое место в списке. Ответ прост — при создании списка учитываются не только сообщения, но и лайки, просмотры страниц, ответы, комментарии к постам. Получается, что первым в вашем списке друзей может быть не только тот пользователь, с которым вы не так много общаетесь.
Однако есть одно небольшое исключение из этого правила: пользователи, которых вы недавно добавили в список друзей, обычно находятся на 5-м или 6-м месте списка, по мнению разработчиков социальной сети, чтобы вы не упускали из виду их.
Заказ друзей которые находятся на сайте
Теперь стоит упомянуть, как пользователи из вашего списка друзей сортируются в Интернете. Здесь, по большому счету, точно такой же принцип: расположение друзей совпадает с таковым в общей последовательности, но показаны только те пользователи, которые находятся в сети. Если использовать опции «Коллеги», «Лучшие друзья» и подобные, то и распределение списков друзей в них также будет аналогичным.
Как список друзей передается другим пользователям
Если ситуация с местонахождением собственных друзей более-менее ясна, то как тогда быть с друзьями других пользователей, которых мы видим с собственной страницы? Здесь все немного иначе: распределение друзей здесь происходит по количеству общих знакомств с человеком, страницу которого вы просматриваете.В случае, если у вас нет общих друзей, список друзей формируется по дате регистрации пользователей на сайте.
Могу ли я сделать повторный заказ?
После того, как про сортировку друзей ВКонтакте все прояснилось, можно поговорить о том, можно ли изменить этот порядок. К сожалению, разработчики социальной сети не предусмотрели эту функцию, поэтому вы не можете изменить порядок друзей самостоятельно.
Если вы хотите, чтобы ваш любимый всегда оставался на вершине списка друзей, постарайтесь больше общаться с ним.В противном случае сведите общение к минимуму. Однако не забывайте, что никакие социальные сети не заменят реальное общение с друзьями и близкими вам людьми!
Если вы откроете список своих друзей, то в верхней части вы увидите страницы пользователей, с которыми вы чаще всего общаетесь, чьи страницы вы просматриваете и т. Д. Именно на основе этих факторов создается список важных друзей образуется (см.).
Доступен вашим гостям (см.). Таким образом, любой может узнать, кого вы предпочитаете.
Это не всем подходит. Могу я что-нибудь сделать? Да, ты можешь. Сейчас я покажу вам как удалить важных друзей ВКонтакте .

Как вк убрать человека из важного
Это достигается за счет понижения приоритета. Это делается следующим образом.
Открываем раздел «Новости». Здесь нам нужно найти публикацию нужного человека. Когда запись будет найдена, откройте для нее меню в правом верхнем углу и нажмите «Это не интересно».
Запись будет исключена с ленты, и вам будет предложено полностью удалить новость от этого пользователя. Нажмите кнопку Не показывать XXXX новости.
После этого нам сообщат, что приоритет пользователя понижен.
Теперь этот пользователь будет удален из числа важных друзей и перейдет в общий список ниже.
Видеоурок: как удалить важных друзей ВКонтакте
Заключение
Это самый простой, но не единственный способ.Достаточно начать проявлять большую активность на страницах других друзей. Они автоматически поднимутся на верхние позиции поиска, а человек, которого мы хотели удалить из списка важных, опустится вниз.
Вопросы?
В контакте с
Иногда социальная сеть Вконтакте неправильно расставляет порядок друзей на странице профиля и из-за этого становится неудобно общаться с друзьями. Так что вы сами можете создать список важных друзей, Давайте разберемся, как поднять друга в списке ВК, какие для этого есть способы.
Метод №1 как воспитать друга ВК
Это долгосрочный метод. Чтобы поднять друга ВК таким способом на 1 место, может потребоваться больше 1 дня. Вам не нужно постоянно сидеть в соцсети — достаточно ежечасно заходить на свою страничку и заходить в профиль человека, которого вы хотите поставить на первое место в списке друзей ВКонтакте.
На личную страницу человека лучше заходить через вкладку «Друзья». Постепенно клик за кликом (при условии, что вы будете заходить в его профиль чаще, чем на чужие страницы), этот друг поднимается в список важных друзей и занимает верхнюю позицию.
Способ №2 как воспитать друга в списке друзей Vk
Второй способ похож на, но требует немного больше труда и быстрее. Вам нужно будет не только зайти в профиль человека, которого вы хотите поднять в друзья, но и показать активность на его странице:
лайкать его сообщения;
комментировать фотографии и посты;
отправлять сообщения;
написать на стене;
для репоста своих заметок.
Способ № 3 как переместить друга ВК в список важных друзей
Это самый простой способ изменить порядок важных друзей.Для его реализации нужно взять человека у друзей, а потом снова добавить. Затем он автоматически переместится вверх. А если этого не произойдет, просто напишите человеку несколько сообщений, вроде записи, и он поднимется по списку.

Дело в том, что Вконтакте работает по такому принципу, что у новых друзей и тех, с кем вы чаще всего входите в важных друзей. Так что если вы хотите, чтобы ваш друг поднялся и не узнал, что вы сделали это специально, то чаще заходите на его страницу, реже — на страницы других профилей.Если вы сделаете это вместе, то удалите его у друзей, а потом снова добавьте — и алгоритм ВК будет работать в нужном вам направлении.
Вы когда-нибудь знали, что у ВК есть количество друзей? Да, на момент написания это 10 000 пользователей вместе с запросами в друзья. А если друзей будет больше? Значит, они будут вашими подписчиками.
Найти пользователей, у которых есть 10 тысяч друзей, мягко говоря, не так уж и просто. Для большинства эта цифра намного ниже — 200-500 друзей-пользователей.Но сегодня мы поговорим не о друзьях, а о том, как формируется список друзей пользователя. Здесь, как выясняется, все далеко не так просто.
Важные друзья
Вы, наверное, спросили себя, почему одни пользователи в списке выше других? Причина проста — вверху списка друзей находятся те пользователи, с которыми вы чаще всего общаетесь. Однако, если вы встретите вверху списка пользователя, с которым вы давно не переписывались, он попал туда не по ошибке — помимо общения на сортировку влияют и другие факторы, в том числе лайки друзьям, ответы на комментарии, репосты и т. д.Поэтому в список важных друзей (а он так и называется) попадут те пользователи, которым вы, грубо говоря, уделяете больше внимания, чем другие.
Из этого правила есть важное исключение: те пользователи, которых вы недавно добавили в друзья, также отображаются в списке. Это сделано для того, чтобы вы не забыли о них и пообщались. Если вы не общаетесь с ними, то со временем список будет реорганизован и эти пользователи будут ниже в списке друзей.
Друзья других пользователей
Могу ли я применить вышеперечисленное к друзьям других пользователей? Нет, это невозможно, потому что в этом случае список формируется на основе общих знакомств.Если общих друзей нет, то список можно формировать по дате регистрации пользователя. Но не исключено, что пользователей можно будет ранжировать случайным образом, если не брать в расчет общих друзей.
Друзья онлайн
Если мы говорим о списке друзей, которые находятся в сети, сортировка в нем происходит по «важности» друга, то есть в первом случае нет никакой разницы, за исключением того, что только друзья, которые в данный момент находятся в сети, будут будет отображаться в списке времени.
Формирование списка друзей в окне «Друзья в сети» формируется, вероятно, в случайном порядке — при каждом обновлении список может полностью меняться.Смеем предположить, что это было сделано не просто так, а чтобы увидеть кого-то из старых знакомых, вы решаете написать ему.
Мобильное приложение
В мобильном приложении есть список важных друзей, он называется «Важные». Порядок появления в нем пользователей такой же, как и в первом случае, описанном выше.
Могу ли я изменить список друзей?
Сам по себе список важных друзей и друзей в целом формируется исключительно автоматически.Но вы можете влиять на рейтинг. Например, чем больше вы общаетесь с пользователем, чем больше он вам нравится, делаете репосты и т. Д., Тем выше он будет в списке.
Многие юные интернет-пользователи задаются вопросом: а можно ли узнать в ВК список лучших друзей от своего друга? Или кто из моих друзей причисляет меня к разряду важных? В этой статье я отвечу на эти вопросы и поделюсь своим опытом выявления важных друзей с моими друзьями в социальной сети ВКонтакте.Первоначально вам нужно понять, что в целом означают эти термины.
Кого мы свяжем с важными друзьями
Важные (лучшие) друзья в ВК формируются из общего списка, с которым чаще всего общается владелец аккаунта. Это не значит, что имеется в виду личная переписка. Под словом «общение» подразумеваются все виды деятельности, совершаемые по отношению к конкретному пользователю ВКонтакте.
Здесь приписываются:
Посмотреть новые фото и последние новости;
Написание комментариев;
Размещение репостов;
Частое посещение страницы;
Лайков.
При этом активность может выражаться не с одной стороны, а с обеих. То есть когда друг из списка пользователя открывает свою страницу, пишет там комментарий, ставит лайк под фото, то в автоматическом режиме он попадает в группу лучших друзей.
Кроме того, все люди, недавно добавленные в список друзей, на какое-то время останутся в группе лучших. Так будет до тех пор, пока система не определит, что владельцы обеих учетных записей не проявляют интереса к записям друг друга.
Все лучшие друзья находятся наверху списка друзей. Недавно добавленные люди перемещаются в самый верх списка, чтобы пользователь «не терял их из виду» и не забывал о них.
Можно ли определить, кто лучший друг пользователя
Вы можете определить, насколько важен друг из списка друзей другого пользователя ВКонтакте, прочитав список его друзей. Но это не будет стопроцентной гарантией того, что они действительно важны для него.
Возможно, он их совсем недавно добавил в свой список, или они сами проявили внимание к этому пользователю. Ведь, как мы помним, чтобы попасть в категорию «важных», просто зайдите на страницу друга и напишите комментарий или поставьте лайк.
Присмотритесь к своему собственному списку друзей, и вы также заметите в верхних строчках тех людей, с которыми вы сегодня даже не общались и не посещали их страницы несколько дней.
Скорее всего, они ваши «фанаты», им интересно, что вы пишете на своей стене и что публикуете на странице.Будучи активными по отношению к вам, они не один день останутся в числе «лучших» друзей.

Узнаем, кто в «важном» списке у друга
А теперь давайте проанализируем, что имеют в виду лучшие друзья, и как узнать этот список у своего друга. Когда мы добавляем себе новых друзей, ВК автоматически предлагает нам их отсортировать.
То есть мы можем указать, кем у нас добавлено лицо:
член семьи;
близкий друг;
коллега по работе;
друзей в университете и др.
Чтобы узнать, кто входит в раздел «лучшие» друзья вашего друга в ВКонтакте, вы можете открыть его список друзей.
Вы можете сделать это, посетив страницу своего друга и просмотрев его список друзей.
Вы также можете использовать собственный список друзей — напротив аватара вашего друга нужно нажать на иконку «просмотреть друзей».
После перехода к списку друзей вашего знакомого рядом с фотографией вы увидите значки, обозначающие «важных» друзей, «родственников» и т. Д.
Ваш аватар будет вверху списка, и вы сразу увидите, входите ли вы в «лучшие» друзья.
Итак, просмотрев всех своих друзей, вы узнаете, кто находится в списке «важных», а кто — в категории обычных друзей.
Многие пользователи не обращают внимания на все эти категории, объективно полагая, что «лучший» друг не нуждается в широкой огласке. И, может быть, они правы!
IFITM3 функционирует как каркас PIP3 для усиления передачи сигналов PI3K в B-клетках
Никаких статистических методов не использовалось для предварительного определения размера выборки.Эксперименты не были рандомизированы, и исследователи не были закрыты для распределения во время экспериментов и оценки результатов.
Анализ экспрессии генов пациента и данных результатов
Данные микроматрицы экспрессии генов трех больших групп пациентов с пре-В ОЛЛ были загружены из GSE5314 ²⁷ (Клиническое испытание E2993 Восточной совместной онкологической группы (ECOG)), GSE11877 ²⁸ (Клиническое испытание P9906 Детской онкологической группы (COG)), педиатрическая исследовательская больница Св. Джуда ALL ²⁹ (http: // www.stjuderesearch.org/site/data/ALL3/). В ECOG E2993 образцы костного мозга или периферической крови перед лечением были взяты при постановке диагноза перед началом лечения у 83 пациентов с Ph ⁺ B-ALL, включенных в Совет медицинских исследований (MRC) UKALLXII / Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) E2993, фаза III. испытание. В наборе данных из детства Сент-Джуда 15 случаев Ph ⁺ B-ALL были отобраны из исходных 327 диагностических аспиратов костного мозга. Данные о минимальной остаточной болезни (MRD) были доступны для пациентов с педиатрическим B-ALL высокого риска (COG P9906). Уровни экспрессии IFITM3 были измерены у пациентов с положительным статусом MRD (MRD ⁺) или отрицательным статусом MRD (MRD ^–). В клиническом исходе COG P9906 профили экспрессии были получены в образцах лейкемии до лечения от 207 равномерно пролеченных детей с ОЛЛ высокого риска ³⁰, категория риска в значительной степени определяется клиническими характеристиками до лечения. Пациенты прошли тестирование MRD с помощью проточной цитометрии с двумя комбинациями (CD20 / CD10 / CD45 или CD9 / CD19 / CD34 / CD45) и были определены как MRD-положительные или MRD-отрицательные в конце индукционной терапии (29 день) с использованием порога 0. .01%, как описано ранее ³¹. Затем РНК была очищена из 207 диагностических образцов перед обработкой с более чем 80% бластов (131 костный мозг, 76 периферическая кровь) и подвергнута микроматрицам. Лог-ранговый тест использовался для оценки статистической значимости.
Первичные человеческие образцы и клеточные линии
Образцы пациентов (дополнительная таблица 7) были получены этично от пациентов, давших информированное согласие, и соответствовали требованиям внутренних наблюдательных советов Исследовательского института Бекмана города Надежды.Мы соблюдаем все соответствующие этические нормы. Образцы пациентов были взяты из биопсии костного мозга пациентов с ОЛЛ на момент постановки диагноза или рецидива. Все образцы трансплантировали сублетально облученным мышам NOD.Cg- Prkdc ^scid Il2rg ^tm1Wjl / SzJ (мыши NSG, Лаборатория Джексона) посредством инъекции в хвостовую вену. После сбора образцов полученные от пациентов первичные ксенотрансплантаты человеческого пре-B ALL культивировали на строме OP9 в Alpha Minimum Essential Medium (MEMα; Life Technologies) с GlutaMAX, содержащим 20% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 МЕ мл ^-1 пенициллин, 100 мкг мл ^-1 стрептомицина и 1 мМ пирувата натрия.Линии клеток человека (дополнительная таблица 8) культивировали в RPMI-1640 (GIBCO) с GlutaMAX, содержащим 20% FBS, 100 МЕ мл ^-1 пенициллина, 100 мкг мл ^-1 стрептомицина при 37 ° C в увлажненном инкубаторе. с 5% CO ₂. Все первичные образцы и клеточные линии человека оказались отрицательными на микоплазму с помощью набора для обнаружения (MycoAlert PLUS, LONZA).
Генетические модели мышей
Генетические модели мышей, использованные в этом исследовании, перечислены в дополнительной таблице 9. NOD.Cg- Prkdc ^scid Il2rg ^tm1Wjl / SzJ (NSG) мыши были приобретены в лаборатории Джексона. Ifitm3 ^tm1Masu (ref. ³²) мышей подвергали обратному скрещиванию с фоном C57BL / 6J в течение более восьми поколений. B6.C (Cg) — Cd79a ^{tm1 (cre) Reth} / EhobJ (Mb1 – Cre) мышей были приобретены в лаборатории Джексона. Мыши B6.129S2- Ighm ^tm1Cgn / J (мкМТ) были приобретены в лаборатории Джексона. C; 129S4- Pten ^tm1Hwu / J ( Pten ^{fl / fl}) мышей были приобретены в Jackson Laboratory.Для мышей домашнего разведения однопометники одного пола были рандомизированы в экспериментальные группы. Для анализа инициации лейкемии in vivo перед инъекцией случайным образом распределяли самок мышей NSG в возрасте 8-10 недель. Для создания модели предлейкемических предшественников В-клеток, экспрессирующих BCR – ABL1, LSL -Bcr ^{+ / BCR-ABL1} мышей ³³ скрещивали со штаммом Mb1-cre ( Mb1-cre × LSL -Bcr ^{+ / BCR-ABL1}) для удаления стоп-кассеты в ранних пре-B-клетках.Для анализа онкогенного примирования in vivo с использованием Mb1-cre × LSL -Bcr ^{+ / BCR-ABL1} B-предшественников B-клеток перед инъекцией произвольно распределяли самок мышей NSG в возрасте 8-10 недель. Температуру 18–23 ° C при влажности 40–60% поддерживали с циклом 14 часов света / 10 часов темноты. Следующие баллы считались конечной точкой: (1) отказ от еды или питья воды в течение 24 часов; (2) невозможность произвести нормальную регулировку позы или вести себя нормально; и (3) когда опухолевая нагрузка достигла 1.5 см × 1,5 см × 1,5 см (образование язв опухоли не ожидалось). Если мышь потеряла 25% своей начальной массы тела (или достигла массы тела 16 г, независимо от начальной массы), или если мы наблюдали потерю массы на 15% при двух последовательных измерениях веса, мы немедленно умерщвляли мышь. Все эксперименты на мышах подлежали институциональному одобрению Комитетом по уходу и использованию животных Бекмана научно-исследовательского института города Надежды.
Первичные клетки и лейкозные клетки мыши
Клетки костного мозга мышей в возрасте 6–10 недель собирали промыванием полостей бедренной и большеберцовой костей охлажденным PBS с последующей фильтрацией через сито 40 мкм с получением суспензии одноклеточных. .Клетки селезенки или тимуса экстрагировали напрямую, проталкивая ткани через 40-мкм фильтр в охлажденный PBS. Отфильтрованные клетки дополнительно инкубировали с буфером для лизиса (RBC Lysis Buffer, BioLegend) для лизиса эритроцитов. После промывки PBS клетки подвергали дальнейшим экспериментам. Для IL-7-зависимой культуры пре-B-клеток клетки костного мозга собирали и культивировали в модифицированной Iscove среде Дульбекко (IMDM) (GIBCO) с GlutaMAX, содержащей 20% FBS, 50 мкМ 2-меркаптоэтанола, 100 МЕ мл ^-1 пенициллин, 100 мкг мл ^-1 стрептомицин в присутствии 10 нг мл ^-1 рекомбинантный мышиный IL-7 (Peprotech).Для модели лейкемии BCR-ABL1 пре-B-клетки ретровирусно трансформировали BCR-ABL1 , а затем IL-7 удаляли для отбора трансдуцированных клеток. Nras ^G12D ВСЕ клетки были отобраны с помощью пуромицина (GIBCO) и поддерживались IMDM с добавлением IL-7.
Ретровирусная и лентивирусная трансдукция
Ретровирусный супернатант получали котрансфекцией клеток HEK 293FT ретровирусными конструкциями вместе с pHIT60 (gag-pol) и pHIT123 (для мыши) или pHIT456 (для экотропной оболочки человека) с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen).Лентивирусный супернатант для CRISPR-опосредованного редактирования генов получали путем котрансфекции клеток HEK 293FT лентивирусными конструкциями вместе с pCDNL / BH и EM140. Трансфицированные клетки HEK 293FT культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко с высоким содержанием глюкозы (DMEM) (GIBCO) с GlutaMAX, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, 100 МЕ мл ^-1 пенициллин, 100 мкг мл ¹ стрептомицин, 25 ммоль / л ¹ HEPES, 1 ммоль л ^-1 пируват натрия и 0,1 ммоль л ^-1 заменимых аминокислот в течение 16 часов.После индукции бутиратом натрия (10 мМ) в течение 8 ч супернатант вируса собирали и фильтровали через фильтр 0,45 мкм. Содержащие вирус супернатанты загружали центрифугированием (2000 g , 90 мин при 32 ° C) на покрытые 50 мкг мл ^-1 ретронектина (Takara) 6-луночные планшеты для нетканевых культур. Для ретровирусной трансдукции 3–5 × 10 ⁶ клеток на лунку трансдуцировали центрифугированием при 600 g в течение 30 минут в соответствующей культуральной среде и выдерживали при 37 ° C и 5% CO ₂ в течение 48 часов.Для лентивирусной трансдукции 3–5 × 10 ⁶ клеток на лунку центрифугировали при 600 g в течение 30 мин в присутствии лентивирусного супернатанта и поддерживали при 37 ° C и 5% CO ₂. На следующий день надосадочную жидкость лентивируса заменяли свежей средой.
Вестерн-блоттинг
Клетки, промытые PBS, лизировали в буфере CelLytic (Sigma-Aldrich) с добавлением 1% смеси ингибиторов протеазы (Roche Diagnostics), 1% смеси ингибиторов фосфатазы (EMD Millipore) и 1 мМ PMSF на льду.Всего 10 мкг клеточных лизатов разделяли на мини-сборных гелях (Bio-Rad) и переносили на нитроцеллюлозные мембраны (Bio-Rad). Мембраны зондировали соответствующими первичными антителами. Затем мембраны инкубировали с вторичными антителами, конъюгированными с щелочной фосфатазой (Invitrogen) и хемилюминесцентным субстратом (Invitrogen), и дополнительно детектировали с помощью экспонирования пленки, системы визуализации UVP BioSpectrum 810 (Thermo Fisher Scientific) или с помощью системы визуализации ChemiDoc MP (BioRad).Антитела, использованные в этом исследовании, представлены в дополнительной таблице 10 и использовались при разведении от 1: 750 до 1: 1000 в блокирующем буфере.
Проточная цитометрия
Клетки, промытые PBS, блокировали блокатором Fc в течение 10 минут на льду, а затем окрашивали соответствующими антителами, перечисленными в дополнительной таблице 10, или изотипическим контролем в течение 25 минут на льду. Затем клетки промывали и ресуспендировали в охлажденном PBS, содержащем 0,75 мкг / мл ^-1 DAPI, чтобы исключить мертвые клетки. Сбор данных выполняли с помощью проточного цитометра LSRFortessa (BD Biosciences) с программным обеспечением BD FACSDIVA.Сортировку клеток на основе флуоресценции выполняли с помощью FACSAria II (BD Biosciences) с программным обеспечением BD FACSDIVA. Данные FACS анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (FlowJo). Для анализа апоптоза использовали аннексин V и 7-AAD (BD Biosciences). Для анализа клеточного цикла использовали набор для проточной цитометрии BrdU (BD Biosciences) в соответствии с инструкциями производителя. Для внутриклеточного окрашивания цитоплазматических белков клетки сначала окрашивали на антигены клеточной поверхности, а затем фиксировали в растворе для фиксации и пермеабилизации (BD Biosciences), содержащем 4% параформальдегида и детергентный сапонин.Затем клетки промывали и ресуспендировали в буфере Perm / Wash Buffer (BD Biosciences) и окрашивали соответствующими антителами. Для статистической количественной оценки данные были нанесены на график с помощью GraphPad Prism 7 или SigmaPlot. Антитела FACS, перечисленные в дополнительной таблице 10, были предварительно разведены 1: 5–1: 10. Два мкл разведенного антитела добавляли к 1-2 миллионам клеток на 50 мкл в PBS для конечного разведения 1:50 для клеток человека или 1: 200 для клеток мыши.
Фармакологические ингибиторы и реагенты
Иматиниб был приобретен в LC Laboratories.Исходные растворы готовили в стерильной воде в концентрации 10 ммоль л ^-1 и вводили в концентрации 10 мкмоль л ^-1. Дазатиниб был приобретен в компании SelleckChem. Исходные растворы готовили в стерильном ДМСО в концентрации 25 мкмоль ^-1 и вводили в концентрации 25 нмоль ^-1 (дополнительная таблица 11).
Анализ иммунопреципитации хроматина с данными секвенирования
Иммунопреципитация хроматина IKZF1 с секвенированием (ChIP-seq) была проведена, как описано ранее ³⁴, с полученной от пациента линией ксенотрансплантатов человеческого B-ALL (LAX2), которая экспрессирует дикий тип полноразмерный IKZF1 и отсутствие детектируемого уровня доминантно-отрицательной изоформы IKZF1.Дорожки ChIP-seq (GSE58825) для антитела IKZF1 в LAX2 на промоторных областях гена IFITM3 показаны в нижней части расширенных данных на рис. 1m. Ось y представляет нормализованное количество считываний на миллион считываний для вершины пика для каждого трека. Дорожки ChIP-seq (GSE86897) для обогащения RNAPII и h4K4me3 в локусе Ifitm3 в пре-B-клетках из Ikzf1 ^{exon5fl / fl} мышей после Cre-опосредованной делеции Ikzf показаны вверху расширенных данных Рис.1м. Пики ChIP-seq были вызваны вызывающим MACS пиком путем сравнения плотности считывания в эксперименте ChIP относительно считывания входного контроля хроматина, и показаны в виде полос под каждой дорожкой покачивания. Генные модели показаны в браузере генома UCSC hg19. Integrative Genomics Viewer (IGV) использовался для визуализации треков ChIP-seq.
Индуцибельная экспрессия IKZF1
Положительные по хромосоме Филадельфии человека ( Ph ⁺) пре-B ALL-клетки (BV173), несущие делеции IKZF1 , трансдуцировали с помощью pRetroX-Tet3G-Neo.Клетки, устойчивые к неомицину, трансдуцировали pRetroX-TRE3G-IKZF1-Puro дикого типа. Экспрессию IKZF1 дикого типа в устойчивых к пуромицину клетках инициировали обработкой 1 мкг / мл ^-1 доксициклина (TetOn).
Индуцибельное восстановление CD19
Для индуцибельного восстановления CD19 мышиный CD19 сливали с лиганд-связывающим доменом мутантного рецептора эстрогена (ER ^T2) на С-конце CD19. BCR-ABL1-трансформированные мышиные клетки B-линии ALL ретровирусно трансдуцировали MSCV CD19-ER ^T2 -Puro.Клетки, устойчивые к пуромицину, обрабатывали 4-гидрокситамоксифеном (4-OHT) (Sigma-Aldrich) или контрольным носителем, чтобы вызвать восстановление CD19.
Анализ жизнеспособности клеток
Сто тысяч BCR – ABL1-трансформированных мышей B-линии ALL клеток высевали в объеме 100 мкл в среду в 1 лунку 96-луночного планшета (BD Biosciences). Иматиниб (LC Laboratories) добавляли в указанной концентрации в общем объеме 150 мкл. После культивирования в течение 3 дней в каждую лунку добавляли 15 мкл резазурина (R&D) и инкубировали в течение 4 ч при 37 ° C.В качестве бланка использовали среду без клеток. Флуоресценция считывалась при 535 нм, а эталонная длина волны составляла 590 нм. Относительную жизнеспособность рассчитывали с использованием исходных значений клеток, обработанных носителем, в качестве эталона.
Анализ образования колоний
Анализы образования колоний метилцеллюлозы проводили с 10 000 клеток. Клетки ресуспендировали в мышиной среде MethoCult (без цитокинов для BCR-ABL1 -трансформированных клеток; с IL-7 для NRAS ^G12D -экспрессирующих клеток) и культивировали на чашках диаметром 3 см с дополнительным емкость для подачи воды, чтобы предотвратить испарение.Колонии были визуализированы и подсчитаны через семь дней с использованием GelCount (Oxford Optronix), микроскопа Olympus IX71 и Q-Capture pro 7.
In vitro IFITM3 – HA crosslinking
Восемь миллионов полученных от пациентов B-ALL клеток на образец ресуспендировали в полную среду и обрабатывали либо 2,5 мкг мл ^-1 поликлональных анти-HA (Abcam), либо изотипическим контролем в течение указанного времени. Фрагменты F (ab) для антитела против НА были получены с использованием набора для приготовления F (ab) в соответствии с инструкциями производителя (Thermo Fisher Scientific).Фрагментацию F (ab) подтверждали с помощью сборных гелей без пятен Criterion TGX (Bio-Rad).
Измерение мобилизации внутриклеточного кальция
В расширенных данных Рис. 2f, 1 миллион свежих спленоцитов инкубировали с 4 мкМ Rhod-2-AM Ca ²⁺-связывающим красителем (Thermo Fisher Scientific) в течение 15 минут при комнатной температуре. в темноте. Затем клетки ресуспендировали в PBS и поддерживали при 37 ° C, и ответ Ca ²⁺ индуцировали добавлением 10 мкг мл ^-1 поликлональных анти-IgM (Southern Biotech) через 50 с после получения фоновой флуоресценции.Внутриклеточную мобилизацию Ca ²⁺ в ответ на сшитый IgM измеряли до 300 с с помощью проточной цитометрии. На рис. 4с с расширенными данными 1 × 10 ⁶ жизнеспособных клеток Jurkat инкубировали с 4 мкМ Fluo4-AM Ca ²⁺-связывающим красителем (Thermo Fisher Scientific) в течение 15 минут при комнатной температуре в темноте. Затем клетки ресуспендировали в PBS и поддерживали при 37 ° C, и ответ Ca ²⁺ индуцировали добавлением 10 мкг / мл ^-1 моноклональных (OKT3) очищенных NA / LE античеловеческих CD3 (Biolegend) при 50 с. после получения фоновой флуоресценции.Внутриклеточную мобилизацию Ca ²⁺ в ответ на сшитый IFITM3 измеряли до 300 с с помощью проточной цитометрии. Та же процедура была выполнена для расширенных данных (рис. 6f); 1 × 10 ⁶ жизнеспособных клеток Jeko1 инкубировали с 4 мкМ Fluo4-AM (Thermo Fisher Scientific). Ответ Ca ²⁺ индуцировали добавлением 10 мкг мл ^-1 поликлональной μ-цепи F (ab ‘) ₂ против человека (Jackson Immunoresearch).
Анализ гомотипической агрегации
Ifitm3 ^{— / —} Клетки B-ALL, экспрессирующие C-концевой HA-меченный IFITM3 дикого типа, мутантный вектор IFITM3 (Y20E) или пустой вектор, инкубировали с 2.5 мкг мл ^-1 моноклональных (1D3) очищенных LEAF антимышиных CD19 (Biolegend) или 2,5 мкг мл ^-1 поликлональных анти-HA (Abcam) или изотипических контролей при 37 ° C и 5% CO ₂ . После культивирования в течение 24 ч гомотипическую агрегацию визуализировали с помощью световой микроскопии.
Анализ онкогенного праймирования in vivo с использованием
Mb1-cre; LSL -Bcr ^{+ / BCR-ABL1} Предшественники B-клеток
Для создания модели предлейкемических предшественников B-клеток, экспрессирующих BCR-ABL1, мышей с нокаутом BCR-ABL1 скрещивали со штаммом Mb1-Cre ( Mb1-cre × LSL -Bcr ^{+ / BCR-ABL1}) для удаления стоп-кассеты в ранних пре-В-клетках.Клетки костного мозга, собранные у мышей Mb1-cre × LSL -Bcr ^{+ / BCR-ABL1}, культивировали в присутствии 10 нг мл рекомбинантного мышиного IL-7 ^-1 (Peprotech). IL-7-зависимые предлейкемические В-клетки метили ретровирусной люциферазой светлячков и отбирали бластицидином в течение 7 дней. После отбора клетки дополнительно трансдуцировали MSCV-IFITM3-HA-IRES-Puro, MSCV-IFITM3 ^Y20E -HA-IRES-Puro или пустым вектором и отбирали пуромицином в течение 3 дней.Жизнеспособные клетки (1 × 10 ⁷) инъецировали через хвостовую вену сублетально облученным (200 сГр) мышам-реципиентам NSG. Распространение in vivo и бремя лейкемии контролировали с помощью люциферазной биовизуализации (система биолюминесценции и оптической визуализации IVIS 100; Xenogen) в указанные моменты времени. Вкратце, d-люциферин (Promega), растворенный в PBS, вводили внутрибрюшинно в дозе 2,5 мг на мышь за 15 мин до измерения люминесценции. Всех мышей анестезировали 5% изофлураном и продолжали во время обнаружения излучения света 2% изофлураном, введенным через носовой конус.Мышей умерщвляли, когда у них проявлялись признаки лейкемии, такие как сгорбленная спина, потеря веса и неспособность двигаться. Анализ выживаемости Каплана-Мейера был выполнен с использованием GraphPad Prism 7 (GraphPad Software) для сравнения общей выживаемости. Лог-ранговый критерий Мантела-Кокса использовался в качестве статистического анализа с использованием GraphPad Prism 7 (дополнительная таблица 4).
Анализ клеточной адгезии
Ifitm3 ^{+ / +} или Ifitm3 ^{— / —} BCR-ABL1 Клетки B-ALL были трансдуцированы с помощью MSCV-IK6-IRES-GFP или GSCV-IRES как отрицательный контроль.Клетки GFP ⁺ (1 × 10 ⁵), отсортированные с помощью FACS, культивировали на строме 1,5 × 10 ⁵ OP9 на 6-луночном планшете с IMDM-GlutaMAX, содержащим 20% FBS, 50 мкМ 2-меркаптоэтанол, 100 МЕ. ^-1 пенициллина и 100 мкг ^-1 стрептомицина. Для расчета соотношения прикрепленных и неприлипающих клеток неприлипающие клетки собирали и подсчитывали методом исключения трипанового синего с использованием автоматического счетчика клеток Countess II FL (Life Technologies). После двукратной промывки планшета PBS адгезивные клетки отделяли с помощью трипсинизации, а клетки GFP ⁺ B-ALL и подсчитывали методом исключения трипанового синего с использованием автоматического счетчика клеток Countess II FL (Life Technologies) и рассчитывали соотношения.
Адоптивный перенос очищенных В-клеток мышам μMT
Для адоптивного переноса В-клеток спленоциты от 7- до 10-недельного возраста Ifitm3 ^{+ / +} или Ifitm3 ^{— / —} мыши были отрицательно отобраны с помощью набора для выделения клеток Pan B мыши MojoSort II (Miltenyi Biotec) с использованием иммуномагнитных шариков против CD3, CD4, CD8a, CD11c, CD49b, Ly6G / Ly6C (GR1) и TER119. Десять миллионов отсортированных по потоку В-клеток селезенки внутривенно вводили мышам μMT (B6.129S2- Ighm ^tm1Cgn / J), которые лишены экзона Cμ и развития зрелых В-клеток в результате дефектной экспрессии поверхностного IgM. Восстановление донорских В-клеток определяли с помощью проточной цитометрии через 20 дней после инъекции. Мышей-реципиентов μMT иммунизировали гаптеном NP, связанным с белком-носителем (KLH) на день 0 и день 7, а селезенки собирали на день 12, а селезенки собирали на 12 день.
Иммунизация и иммуногистология
Ifitm3 ^{+ / +} и Ifitm3 ^{— / —} мышей из однопометника иммунизировали 0.5 мг NP – KLH (Biosearch Technologies) в квасцах (Sigma-Aldrich) внутрибрюшинно. Через семь дней мышей иммунизировали второй раз в течение пяти дней. Селезенки выделяли на 12 день после иммунизации. Селезенку заливали компаундом с оптимальной температурой резки, и для окрашивания использовали криосрезы толщиной 5 мкм. Срезы фиксировали ацетоном в течение 10 мин, а неспецифические антигены блокировали в DPBS, содержащем 2% FBS, в течение 15 мин. Срезы окрашивали разбавленными 1: 200 поликлональными (RA3-6B2) анти-CD45R (B220, BD Biosciences), моноклональными антителами против CD3 мыши (17A2, BioLegend) и биотинилированным агглютинином арахиса (B-1075, Vector Laboratories) в течение 45 мин. .Срезы промывали и дополнительно окрашивали антителом к стрептавидину Alexa Fluor 647 (BioLegend) в течение 45 мин. Все антитела разводили 1: 100 до их исходной концентрации в блокирующем буфере. После промывки блокирующим буфером срезы помещали в ProLong Diamond Antifade Mountant (ThermoFisher Scientific). Изображения были получены на конфокальном микроскопе ZEISS LSL 880 и проанализированы с помощью программного обеспечения ZEN 2.3 (Zeiss).
Измерения ELISA
Для определения концентраций изотипов иммуноглобулинов в сыворотке ELISA выполняли в соответствии с протоколом производителя (набор для мгновенного ELISA для определения иммуноглобулина мыши для IgG1, IgG2b и IgM) (дополнительная таблица 11).NP-специфические антитела измеряли с помощью ELISA с использованием 10 мкг / мл NP (24) –BSA (Biosearch Technologies) в качестве реагента для покрытия. NP-специфические IgM и IgG1 были обнаружены с использованием козьих антимышиных IgM и IgG1 Fc-специфических антител, конъюгированных с пероксидазой хрена и проявленных с тетраметилбензидином (Sigma). Оптическую плотность определяли с использованием ридера для ELISA при 450 нм (SpectraMax M3, Molecular Devices).
Анализ секвенирования РНК
Общая мРНК из Ifitm3 ^{+ / +} и Ifitm3 ^{— / —} BCR-ABL1 или NRAS ^{G12D ALL 910 клеток ALL 910 Комплект (Qiagen) согласно инструкции производителя.Секвенирование выполняли на приборе Illumina Hiseq 2500 (Illumina) с использованием набора TruSeq SR Cluster Kit v.4-cBot-HS (Illumina) с химией v.4. Контроль качества считываний РНК-секвенирования проводили с помощью FastQC. Для анализа считанные необработанные последовательности были сопоставлены с геномом мыши (mm10) с помощью STAR v.2.5.3 ³⁵, а частота генов подсчитывалась с помощью featureCounts v.1.5.1 ³⁶. Необработанные подсчеты затем нормализовали с использованием метода усеченного среднего значения M и сравнивали с использованием пакета Bioconductor ‘edgeR’ ³⁷.Чтения на килобазу на миллион (RPKM) сопоставленных чтений также рассчитывались из необработанных подсчетов. Для анализа дифференциальной экспрессии транскрипты были количественно определены с использованием Salmon v.1.1.0 против аннотаций транскриптов генкода GRCm38 v.M24; нормализация и статистический анализ были выполнены в R с использованием DESeq2 v.1.28.1. Дифференциально экспрессируемые гены были идентифицированы, если RPKM ≥ 1 по крайней мере в одном образце, кратное изменение ≥ 2 и P ≤ 0,05 (расширенные данные, рис. 3b). Данные RPKM позже были использованы в анализе обогащения набора генов (GSEA).GSEA выполняли с использованием пакета DOSE в R ³⁸; гены ранжировали по log ₂ -трансформированных кратных изменений; и наборы генов были получены из MSigDB или из внутренних данных, как указано.}
CRISPR-опосредованная делеция гена
Все лентивирусные конструкции, экспрессирующие нуклеазу Cas9 и направляющую РНК, были приобретены у Transomic Technologies. Для делеции гена клетки трансдуцировали pTOL-hCMV-Tet3G-Hygromycin. Затем устойчивые к гигромицину клетки трансдуцировали pCLIP-Tre3g-hCMV-Cas9-P2A-zsGreen.Экспрессию Cas9-P2A-zsGreen индуцировали при 1 мкг / мл ^-1 доксициклина в течение 16 часов, и клетки zsGreen ⁺ сортировали с помощью проточной цитометрии. Клетки промывали для удаления доксициклина, чтобы выключить экспрессию Cas9 (TetOff), а затем затем трансдуцировали pCLIP-gRNA-hCMV-RFP-gRNA. Отсортированные клетки RFP ⁺ подвергали дальнейшим экспериментам. Делецию гена инициировали обработкой 1 мкг / мл ^-1 доксициклина (TetOn). Ненаправляющая направляющая РНК использовалась в качестве контроля.
Делеция гена путем нацеливания на невирусный геном
Химически синтезированные РНК CRISPR (160 мкМ) и транс-активирующих РНК CRISPR (160 мкМ) смешивали 1: 1 по объему и отжигали инкубацией при 37 ° C в течение 30 мин. . Рекомбинантно продуцируемый Cas9 (40 мкМ) затем смешивали 1: 1 по объему с пРНК для получения комплексов РНК-рибонуклеопротеина (РНП). Перед электропорацией RNP образовывали свежие комплексы. Электропорацию проводили с использованием импульсного кода EH-115 на 96-луночной системе электропорации Lonza 4D.Предварительно сконструированные направляющие РНК Alt-R CRISPR-Cas9 были приобретены у IDT. Нецелевые контрольные направляющие РНК были приобретены у IDT.
Коиммунопреципитация
Коиммунопреципитацию проводили с помощью набора Pierce Crosslink Magnetic IP / Co-IP в соответствии с инструкциями производителя (Thermo Fisher Scientific). Вкратце, полученные от пациента Ph ⁺ ВСЕ клетки (PDX2) трансдуцировали MSCV Flag-IRES-Puro или MSCV Flag-IFITM3-IRES-Puro и отбирали в пуромицине в течение 3 дней.Жизнеспособные клетки (5 × 10 ⁷) собирали и промывали PBS перед лизисом с использованием буфера для лизиса / промывки IP (Thermo Fisher Scientific). Затем 5 мкг антитела M2 против Flag (F1804, Sigma-Aldrich) на образец связывали с магнитными шариками белка A / G и ковалентно сшивали с 20 мкМ дисукцинимидил-субератом. Сшитые антителами гранулы инкубировали с клеточным лизатом, промывали для удаления несвязавшегося материала и элюировали элюирующим буфером с низким pH, который диссоциирует связанный антиген от сшитых антителами гранул.Обогащенный антиген при низком pH немедленно нейтрализовали и подвергали вестерн-блоттингу. Клетки Jeko1, подвергнутые электропорации с помощью нецелевого RNP или IFITM3-целевого комплекса RNP, стимулировали 10 мкг мл ^-1 F (ab ‘) ₂ фрагмент козьей античеловеческой μ-цепи (Jackson Immunoresearch) в течение указанного времени. точки при 37 ° C и 5% CO ₂. Клетки немедленно промывали охлажденным PBS и подвергали совместной иммунопреципитации с антителом к CD19 (№
, CST).
PLA
Для PLA пре-BCR или BCR-IFITM3 клетки инкубировали с 10 мкг мл ^-1 F (ab ‘) ₂ фрагмент козьей античеловеческой μ-цепи (Jackson Immunoresearch) в течение 5 мин при 37 ° C и 5% CO ₂. Клетки немедленно промывали охлажденным PBS и затем фиксировали в буфере для фиксации (Biolegend), содержащем 4% параформальдегид, в течение 25 минут на льду, а затем промывали охлажденным PBS. Для окрашивания клеточной мембраны клетки метили 5 мкг мл ^-1 WGA, конъюгированного с Alexa Fluor 488 (Thermo Fisher Scientific), в течение 5 минут при комнатной температуре.Затем клетки подвергали проницаемости в буфере Perm / Wash (BD Biosciences) и затем блокировали в буфере Duolink Blocking в течение 30 минут при комнатной температуре. Клетки инкубировали с первичными антителами, разведенными 1: 150, перечисленными в дополнительной таблице 10, в течение ночи при 4 ° C. Для позднего окрашивания эндосом клетки инкубировали с анти-человеческим LAMP1, конъюгированным с Alexa Fluor 488 (R&D Systems) с первичными антителами. Клетки промывали и осаждали на покрытом Cell-Tak (Corning) одиночном цитозоле Shandon с цитоспином при 400 г в течение 5 мин.Реакции с PLA проводили согласно протоколу производителя (Duolink, Sigma). Вкратце, первичные антитела были связаны с зондами Duolink in situ PLA PLUS или MINUS (Sigma-Aldrich), а затем зонды были визуализированы с помощью Duolink Detection Reagent Red (Sigma-Aldrich). Клетки помещали в среду Duolink для монтажа in situ с DAPI (Sigma-Aldrich). Микроскопические изображения получали с использованием Olympus IX3-55 и анализировали с помощью программного обеспечения для визуализации CellSens (Olympus) и ImageJ. Для количественной оценки сигналов PLA одна точка была определена программным обеспечением BlobFinder как пиксель размером 5 × 5.Статистическая значимость была рассчитана с использованием непарного теста Стьюдента t в Excel и нанесена на график с помощью GraphPad Prism 7.
Фосфопротеомный анализ
Клетки B-ALL (PDX2), полученные от пациента, трансдуцированные HA-меченным IFITM3 (Y20E) или пустым векторным контролем. инкубировали с 2,5 мкг мл ^-1 поликлонального анти-HA (Abcam) в течение 5 минут при 37 ° C и 5% CO ₂. Клеточные экстракты готовили в буфере для лизиса мочевины, обрабатывали ультразвуком, центрифугировали, восстанавливали DTT и алкилировали йодацетамидом.Пятнадцать мг общего белка для каждого образца обрабатывали трипсином, и 500 мкг общего белка для каждого образца обрабатывали смесью LysC и трипсина для анализа IMAC. Образцы очищали на колонках C18 и сушили в лиофилизаторе. Высушенные образцы ресуспендировали и обогащали гранулами Fe-IMAC, очищали с помощью наконечников C18 STAGE (Rappsilber). Повторные инъекции каждого образца выполнялись на приборе непоследовательно. Пептиды элюировали с использованием 150-минутного (IMAC) линейного градиента ацетонитрила в 0.125% муравьиная кислота доставляется со скоростью 280 нл / мин. Тандемные масс-спектры (МС / МС) были собраны в зависимости от данных с помощью масс-спектрометра Thermo Orbitrap Fusion Lumos Tribrid с использованием метода МС / МС первой двадцатки, динамического подсчета повторов, равного единице, и продолжительности повтора, равной 30 с. Повторная калибровка погрешности массы в реальном времени была выполнена с использованием стопорной массы (Olsen) с однозарядным полисилоксановым ионом м / z = 371,101237. Спектры МС / МС оценивали с использованием SEQUEST и платформы Core Гарвардского университета (Дж.К. Энг, Э. Л. Хаттлин и Дж. Виллен). Поиск файлов проводился в базе данных SwissProt Homo sapiens FASTA. Погрешность измерения массы ± 5 ppm была использована для ионов-предшественников и 0,02 Да для ионов продуктов. Ферментная специфичность была ограничена трипсином, по крайней мере, с одним триптическим (K- или R-содержащим) концом на пептид и допускалось до четырех ошибочных расщеплений. Карбоксамидометилирование цистеина было определено как статическая модификация, а окисление метионина и фосфорилирование остатков серина, треонина и тирозина допускались как вариабельные модификации.Базы данных обратной ловушки были включены для всех поисков, чтобы оценить частоту ложного обнаружения, и отфильтрованы с использованием коэффициента ложного обнаружения 1% в линейном дискриминантном модуле Core. Пептиды также фильтровали вручную с использованием диапазона ошибок массы ± 5 м.д. и присутствия фосфорилированного остатка. Все количественные результаты были получены с использованием Skyline (MacLean) для извлечения интегрированной площади пика соответствующих назначений пептидов. Точность количественных данных обеспечивалась ручным просмотром в Skyline или в файлах ионных хроматограмм.
Протеомика Bio-ID
Клетки B-ALL PDX2, полученные от пациента, и клетки MCL Jeko1 трансдуцировали с помощью помеченных флагом IFITM3 (Y20E) или IFITM3 (K83A / K104A) мутантных конструкций с N-концевым Turbo-ID BirA (сконструированный биотин). лигаза) и селекция пуромицином в течение трех дней. Конструкцию, экспрессирующую Turbo-ID BirA, помеченную Flag, использовали в качестве отрицательного контроля. Чтобы вызвать биотинилирование белков, проксимальных к IFITM3, клетки обрабатывали 50 мкмоль 1 ^-1 биотина и антителом против НА для одновременной индукции перекрестного связывания IFITM3 в течение 10 мин.Клетки трижды промывали охлажденным PBS и лизировали в буфере IP / WASH (Thermo Fisher Scientific) с 1 × ингибитором протеазы HALT (Thermo Fisher Scientific). Лизаты инкубировали со стрептавидином C1 MyOne Dynabeads (Invitrogen) в течение 16 ч при 4 ° C. Несвязанные белки промывали 3 раза 2% SDS – PBS, 3 раза PBS и 3 раза чистой водой. Элюированные белки очищали в геле с последующим расщеплением в геле и подвергали масс-спектрометрии. Для анализа методом жидкостной хроматографии (ЖХ) и МС / МС пептиды анализировали с использованием системы ЖХ для быстрого разделения Dionex UltiMate 3000 и масс-спектрометра Orbitrap (ThermoFisher Scientific).Образцы пептида по 6 мкл загружали в колонку-ловушку, размер которой составлял 150 мкм × 3 см и которая была заполнена 3 мкм гранулами C18. Аналитическая колонка представляла собой колонку PicoChip 75 мкм × 10,5 см, заполненную гранулами C18 размером 3 мкм (New Objectives). Скорость потока поддерживалась на уровне 300 нл / мин. Растворитель A представлял собой 0,1% муравьиной кислоты (FA) в воде, а растворитель B представлял собой 0,1% FA в ACN. Пептид разделяли с помощью 120-минутного аналитического градиента от 5% ACN и 0,1% FA до 40% ACN и 0,1% FA. Масс-спектрометр работал в режиме зависимости от данных.Напряжение источника составляло 2,40 кВ, а температура капилляра составляла 275 ° C. Сканы MS1 были получены с 400–2000 м / z при разрешающей способности 60 000 и автоматической регулировке усиления (AGC), установленной на 1 × 10 ⁶. Для фрагментации были выбраны 15 наиболее распространенных ионов-предшественников в каждом сканировании MS1. Прекурсоры были отобраны с изоляцией шириной 1 Да и фрагментированы индуцированной столкновением диссоциацией при 35% нормированной энергии столкновения в ионной ловушке; ранее отобранные ионы динамически исключались из повторного выбора на 60 с.Для MS2 AGC было установлено значение 3 × 10 ⁵. Для анализа данных белки были идентифицированы из исходных файлов масс-спектрометрии с использованием поисковой системы Mascot (Matrix science). Спектры МС / МС анализировали по базе данных SwissProt по человеку. Все поиски включали карбамидометилцистеин как фиксированную модификацию и окисленный Met, деамидированный Asn и Gln и ацетилированный N-конец как вариабельные модификации. Допускались три пропущенных триптических расщепления. Допуск по массе предшественника MS1 был установлен на 10 ppm, а допуск MS2 был установлен на 0.6 Да. На уровне пептида было применено ограничение частоты ложных открытий в 1%. Для дальнейшего изучения рассматривались только белки с минимум двумя пептидами выше порогового значения. Для сравнения с пустым векторным контролем содержания фоновых пептидов для отсутствующих значений были рассчитаны из распределения Гаусса с центром вокруг минимального наблюдаемого содержания с использованием метода MinProb из пакета MSnbase в R.
Анализы протеома клеточной поверхности
Белки клеточной поверхности были помечены с биотином с использованием метода мечения биотином сайта N-связанного гликозилирования ³⁹.Вкратце, 40 миллионов Ifitm3 ^{+ / +} или Ifitm3 ^{— / —} B-ALL клеток дважды промывали и ресуспендировали в 1 мл ледяного PBS и обрабатывали 1,6 мМ метапериодата натрия (VWR). при 4 ° C в течение 20 мин для окисления вицинальных диолов остатков сахаров, связанных с поверхностными белками. Затем клетки дважды промывали PBS для удаления избытка метапериодата натрия. Клетки ресуспендировали в 1 мл ледяного PBS и обрабатывали 1 мМ гидразида биоцитина (Biotium) и 10 мМ анилина (Sigma-Aldrich) при 4 ° C в течение 90 минут с осторожным перемешиванием для получения свободных от биотинилирования альдегидов, экспонированных на остатках сахара.После маркировки клетки промывали 3 раза ледяным PBS для удаления избытка биотина, замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C до дальнейшей обработки для масс-спектрометрии. Все эксперименты проводили в трех биологических повторах с повторениями, собранными из последовательных пассажей. Осадки замороженных клеток размораживали на льду в 1 мл буфера RIPA (Millipore) с добавлением 1 × ингибиторов протеазы HALT (Pierce). После инкубации на льду в течение 10 минут клетки разрушали обработкой ультразвуком, а лизаты осветляли центрифугированием при 17000 rcf при 4 ° C в течение 10 минут.Осветленный лизат смешивали с 500 мкл нейтравидиновой агарозной смолы (Thermo Fisher Scientific) и инкубировали при 4 ° C в течение 2 часов с перемешиванием конец за концом. Гранулы нейтравидина с захваченными биотинилированными поверхностными белками были тщательно промыты гравитационным потоком для удаления несвязанных белков с использованием 50 мл 1 × RIPA + 1 мМ EDTA, затем 50 мл PBS + 1 M NaCl и, наконец, 50 мл 50 мМ ABC + 2 M буфер мочевины. Промытые шарики ресуспендировали в буфере для переваривания (50 мМ Трис pH 8,5, 10 мМ TCEP, 20 мМ 2-йодацетамид и 1.6 M мочевина) с 10 мкг добавленной трипсиновой протеазы (Pierce,
) для одновременного восстановления дисульфидов, алкилирования и расщепления пептидов на гранулах при комнатной температуре в течение ночи (16–20 ч). После переваривания pH понижали примерно до 2 с помощью чистой трифторуксусной кислоты (Sigma-Aldrich), и смесь пептидов обессоливали с использованием колонки SOLA-HRP (Thermo Fisher Scientific) на вакуумном коллекторе. Обессоленные пептиды элюировали 50% ацетонитрилом (Sigma-Aldrich) и 50% воды с 0,1% TFA и полностью сушили в быстродействующем вакууме.Высушенные пептиды ресуспендировали в воде для ЖХ-МС (Fisher) с 2% ACN и 0,1% FA. Концентрацию пептида измеряли с использованием поглощения 280 нм на Nanodrop, и концентрацию пептида доводили до 0,2 мкг мкл ^-1 для масс-спектрометрии.
ЖХ-МС и анализ данных для протеома клеточной поверхности
Для каждой реплики 1 мкг пептида вводили в прибор Dionex Ultimate 3000 NanoRSLC с 15-см обращенно-фазовым Acclaim PEPMAP C18 (Thermo Fisher Scientific, 164534) столбец.Образцы разделяли на 3,5-часовом нелинейном градиенте с использованием смеси буфера A (0,1% FA) и B (80% ACN / 0,1% FA) от 2,4% ACN до 32% ACN. Элюированные пептиды анализировали с помощью масс-спектрометра Thermo Q-Exactive Plus. Обзорное сканирование масс-спектрометрии было выполнено в диапазоне масс 350–1500 м / z с разрешением 70 000, с максимальным временем инжекции 100 мс. Мы выполнили зависящий от данных сбор данных MS2 с разрешением 17 500, AGC 5 × 10 ⁴ и временем впрыска 150 мс.15 наиболее интенсивных ионов-предшественников были фрагментированы в результате столкновительной диссоциации с более высокой энергией при нормированной энергии столкновения 27. Динамическое исключение было установлено на 20 с, чтобы избежать избыточной выборки высокоразвитых частиц. Файлы необработанных спектральных данных доступны в репозитории ProteomeXchange PRIDE (номер доступа PXD014691). Необработанные спектральные данные были проанализированы с использованием MaxQuant v.1.5.1.2 ⁴⁰ для идентификации и количественной оценки содержания пептидов и осуществлен поиск по аннотированному Swiss-Prot протеому человека от Uniprot (загружено с 20 303 записями).Вариант «совпадение между сериями» был выбран для увеличения идентификации пептидов, а вариант «быстрый LFQ» был выбран для расчета значений количественного определения идентифицированных белков без метки. Для всех остальных настроек оставлены значения MaxQuant по умолчанию. Выходные данные MaxQuant были проанализированы с помощью Perseus ⁴¹ и программы R (версия 3.4.0). Белки, помеченные как «обратные», «идентифицированные только по сайту» и «потенциальное загрязнение», были отфильтрованы, как и белки, которые были количественно определены менее чем в двух из трех биологических повторов, по крайней мере, в одной экспериментальной группе.Недостающие значения были рассчитаны на основе нормального распределения набора данных, реализованного Perseus. Графики вулканов были созданы с использованием выходных данных двухвыборочного теста t , сравнивающего log ₂-трансформированных количественных значений количественного содержания белка без метки из разных клеточных линий с коэффициентом ложного обнаружения, установленным на 0,01. Проверка была проведена с помощью проточной цитометрии (дополнительная таблица 1).
Измерение холестерина и липидного слоя
Для истощения холестерина клетки предварительно инкубировали с 5 мМ метил-β-циклодекстрина в течение 30 минут при 37 ° C перед окрашиванием на филиппин.Для окрашивания ганглиозида GM1 клетки метили холерным токсином B с использованием набора для маркировки липидных рафтов Vybrant (Molecular Probes) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, клетки метили единицей холерного токсина В, конъюгированной с Alexa Fluor 594 на льду в течение 15 мин, дважды промывали PBS. Липидные рафты, меченные холер-токсином-B, перекрестно сшивали антителом против холерного токсина-B на льду в течение 15 мин, дважды промывали PBS и анализировали проточной цитометрией.
Трансплантация лейкозных клеток in vivo
Мышиные клетки pre-B ALL, трансформированные BCR – ABL1 или NRAS (G12D), вводили сублетально облученным (200 сГр) мышам NOD- scid IL2Rg ^{нулевым} (NSG) мышам через хвостовая вена.Перед инъекцией случайным образом распределяли самок мышей NSG в возрасте восьми-десяти недель. Мышей умерщвляли, когда у них проявлялись признаки лейкемии, такие как сгорбленная спина, потеря веса и неспособность двигаться, а затем собирали костный мозг и / или селезенку для проверки инфильтрации лейкемии с помощью проточной цитометрии. Анализ выживаемости Каплана-Мейера был выполнен с использованием GraphPad Prism 7 (GraphPad Software) для сравнения общей выживаемости. Лог-ранговый критерий Мантела-Кокса использовался в качестве статистического анализа с помощью GraphPad Prism 7 (дополнительная таблица 3).Минимальное количество мышей в каждой группе рассчитывали с использованием функции «cpower» в пакете Hmisc R. Ослепление не применялось. Все эксперименты на мышах подлежали институциональному одобрению Комитетом по уходу и использованию животных Бекмана научно-исследовательского института города Надежды.
Количественное определение PIP3
Для рис. 4 60 миллионов жизнеспособных клеток ресуспендировали в охлажденной 0,5 М трихлоруксусной кислоте (TCA) в общем объеме 1 мл и инкубировали на льду в течение 5 мин. Клетки центрифугировали при 3000 об / мин в течение 7 минут при 4 ° C и ресуспендировали в 5% TCA и 1 мМ EDTA в общем объеме 1 мл.После встряхивания в течение 30 с клетки снова промывали 5% TCA и 1 мМ EDTA. Для извлечения нейтральных липидов клетки ресуспендировали в 1 мл MeOH: CHCl ₃ (2: 1), встряхивали в течение 10 мин при комнатной температуре и центрифугировали при 3000 об / мин в течение 5 мин. После еще одной экстракции нейтральных липидов кислотные липиды экстрагировали добавлением 750 мкл MeOH: CHCl ₃: 12 M HCl (80: 40: 1) при интенсивном встряхивании в течение 25 минут при комнатной температуре. После центрифугирования при 3000 об / мин в течение 5 минут супернатант переносили в центрифужную пробирку объемом 2 мл и смешивали с 250 мкл CHCl ₃ и 450 мкл 0.1 M HCl, встряхивают в течение 30 с и центрифугируют при 3000 об / мин в течение 5 мин для разделения органической и водной фаз. Пятьсот мкл нижних органических фаз собирали в чистый 1,5-миллилитровый флакон и сушили в вакуумной сушилке в течение 1 часа. Высушенный липид хранили при -20 ° C. В день анализа образцы липидов восстанавливали 200 мкл PBS, содержащего 0,25% стабилизатора белка; 20 мкл использовали для измерения PI (4,5) P ₂, а остальные (180 мкл) использовали для измерения PI (3,4,5) P ₃ с использованием набора ELISA (Echelon Biosciences) в соответствии с инструкции производителя.
Экзогенная доставка PIP3
Фосфатидилинозитол 3,4,5-трифосфат diC16 (Echelon Biosciences) был свежеприготовлен с помощью PBS в концентрации 2 мМ. Немеченый носитель 2 челночного PIP (гистон h2) был свежеприготовлен с использованием воды в концентрации 2 мМ. PIP ₃ в объеме 75 мкл смешивали с 25 мкл носителя PIP и инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин. Сто мкл комплекса PIP ₃ – носитель добавляли в клетки Ifitm3 ^{+ / +} или Ifitm3 ^{— / —} B-ALL в общем объеме 5 мл и инкубировали в течение 24 часов.PIP ₃-загруженные Ifitm3 ^{+ / +} или Ifitm3 ^{— / —} B-ALL клетки подвергали анализу образования колоний, как показано на рис. 8 с расширенными данными.
Анализ липидного связывания
Для оценки прямого связывания IFITM3 с липидами был проведен анализ связывания липидов с использованием мембранных липидных полосок (Echelon Biosciences) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, мембраны были заблокированы 5% -ным БСА без жирных кислот (Sigma-Aldrich) в TBST (50 мМ трис-HCl, 150 мМ NaCl и 0.1% Tween 20) в течение 1 ч при комнатной температуре в темноте с последующей инкубацией в течение ночи с 0,5 мкг / мл рекомбинантных белков в блокирующем буфере при 4 ° C при осторожном встряхивании. После промывки мембран 3 раза в течение 30 минут в TBST, мембраны инкубировали в течение 1 часа с поликлональными антителами против GST-метки (Thermo Fisher Scientific) или антителами к моноклональным антителам против биотина (Cell Signaling Technology), перечисленными в дополнительной таблице 10. Мембраны были инкубировали с вторичными антителами, конъюгированными с щелочной фосфатазой (Invitrogen) и хемилюминесцентным субстратом (Invitrogen), и затем детектировали с помощью системы визуализации UVP BioSpectrum 810 (Thermo Fisher Scientific).Рекомбинантный белок с GST-меткой был приобретен у Sigma-Aldrich. Рекомбинантный белок GST-IFITM3 человека был приобретен у Abnova. Рекомбинантные фрагменты IFITM3 человека, перечисленные в дополнительной таблице 5, были синтезированы в LifeTein.
Предпочтительное накопление PIP3 и связывание с IFITM3 с использованием многомасштабного молекулярно-динамического моделирования
Структура белка IFITM3 от остатков 58 до 128 была смоделирована методом крупнозернистой молекулярной динамики в GROMACS в явном двойном слое, имитирующем клеточную мембрану.Нет структуры, доступной для IFITM3 или для любого близкого гомолога. Мы рассчитали гидрофобность для каждого положения, используя индекс гидрофобности аминокислот ⁴² и усредненную гидрофобность по скользящему окну из семи аминокислот. Предыдущие структурные исследования структуры IFITM3 ⁴³ показали, что существует только один трансмембранный домен 2, который вставлен в мембрану. На основании этого доказательства мы использовали топологию, показанную на дополнительном рис. 9, в качестве начальной структуры.TM1 был создан в виде структуры α-спирали, а мотивы CRAC и линкерная область были построены в виде полностью вытянутой цепи. Линкерную область расслабляли с использованием 5000 шагов крупнозернистого моделирования с использованием программы GROMACS ⁴⁴ с силовым полем Мартини ⁴⁵ для снятия напряжения в системе. Затем мы добавили область TM2 в виде спирали и вставили TM2 в двойной слой ⁴⁶, имитирующий клеточную мембрану. Состав и соотношение липидов для смешанного бислоя POPC: DOPC: POPE: DOPE: CHOL: Sph: GM1 = 0.2: 0,2: 0,05: 0,05: 0,25: 0,15: 0,1 для внешней створки бислоя и 0,05: 0,05: 0,20: 0,2: 0,08: 0,08: 0,25: 0,03: 0,03: 0,03 POPC: DOPC: POPE: DOPE: POPS: DOPS: CHOL: PIP1: PIP2: PIP3 для внутренней листовки. Мы создали три возможных начальных настройки для смешанного липидного бислоя с водой в верхней и внутренней областях с помощью CHARMM-GUI ^47,48. Заряды в системе нейтрализовали 0,15 М NaCl. Мы использовали девять повторов структуры белка IFITM3 в боксе для моделирования (дополнительный рис.9а). Первоначальная конфигурация была минимизирована с использованием самого крутого приличного метода для 5000 шагов, а затем уравновешена в ансамбле NPT в течение 5 нс при температуре 303 К и давлении 1 бар. Температура контролировалась термостатом Берендсена ⁴⁹ с константой связи 1 пс, а давление регулировалось баростатом Берендсена ⁴⁹ полуизотропного типа с константой связи 5 пс и сжимаемостью 3 × 10 ^−4. бар ^-1. Кулон поля реакции ⁵⁰ был применен для описания электростатики с отсечкой на 1.1 нм. Предельное значение для ван-дер-ваальсовых взаимодействий также составляло 1,1 нм. Мы использовали интегратор Leap-frog и шаг по времени 20 фс для интегрирования. Все системы сольватировали в модели крупнозернистой воды, принятой в воде силового поля Мартини, нейтрализованной 0,15 М NaCl. Для каждой из трех исходных конформаций липидного бислоя было выполнено моделирование продукции в течение 10 мкс. Последние 1 мкс траектории от каждой из трех установок использовались для анализа складчатой структуры области CRAC1 – основной патч – CRAC2 модели IFITM3.Мы сгруппировали конформации IFITM3 по пороговому значению среднеквадратичного отклонения 0,3 нм в основных крупнозернистых частицах в крупнозернистом моделировании. Мы проанализировали паттерны связывания PIP2 и PIP3 в этом наиболее населенном конформационном кластере. Мы наблюдали, что и PIP2, и PIP3 конкурируют за «основной участок» остатков, показанный в аминокислотной последовательности на рис. 9 с расширенными данными. Мы извлекли три снимка из этого конформационного кластера, которые представляют самые разные паттерны связывания PIP2 и PIP3.
Подробная информация о моделировании молекулярной динамики всех атомов для связывания фосфолипидов
Чтобы лучше понять подробную конформацию связывания PIP2 и PIP3 с IFITM3 и рассчитать их энергии связывания с IFITM3, мы преобразовали три снимка, извлеченные из крупнозернистого моделирования к системе, полностью состоящей из атомов, с помощью инструментов Martini ⁵¹. Три выбранных снимка были вырезаны в прямоугольник ² размером 9 × 9 нм с центром в блоке IFITM3 из крупнозернистого моделирования, чтобы сохранить локальную оптимизированную липидную среду.Липид и белок были преобразованы в модель, полностью состоящую из атомов, и были преобразованы в симулятор ³ 9 × 9 × 9 нм, нейтрализованный 0,15 М NaCl. Расширенные данные На рис. 9 показано подробное взаимодействие между PIP2 или PIP3 с белком IFITM3 с разрешением всех атомов на этих снимках. Полностью атомное моделирование было выполнено с использованием пакета GROMACS ⁴⁴ и силового поля CHARMM36 ⁵² с моделью воды TIP3. Взаимодействия, не связанные с связями, были рассчитаны с отсечкой 12 Å, и для решения дальнодействующих ван-дер-ваальсовых взаимодействий применялся метод Эвальда ⁵¹ между частицами.Каждую систему постепенно нагревали до 310 К со случайными начальными скоростями, выбранными из распределения Больцмана. Процесс нагрева длился 1 нс, температура контролировалась термостатом Нозе – Гувера ⁵³, после чего следовало 30 нс уравновешивания в ансамбле NPT с ограничениями гармонического положения на тяжелых атомах белка. Давление поддерживали на уровне 1 бар в полуизотропной среде, контролируемом методом Парринелло – Рахмана. Сдерживающая сила постепенно снижалась с 5 ккал / моль до 0 ккал / моль с шагом -1 ккал / моль на окно в 5 нс.Заключительный кадр уравновешивания был взят для производственного цикла. Производственный цикл был выполнен дважды по 50 нс каждый, с двумя разными случайными начальными скоростями, назначенными уравновешенной конструкции. Был использован шаг интегрирования 2 фс. Энергия взаимодействия между PIP3 и белком IFITM3 рассчитывалась как сумма электростатической кулоновской энергии и потенциальной энергии Ван-дер-Ваальса, усредненных по двум траекториям продолжительностью 50 нс, всего 100 нс.
Взаимодействие PIP3 с двумя участками основных остатков
Анализы активации PIP3-связывания и AKT-сигнализации показали, что мутация участка K83 / K104 на K83A / K104A имела более высокий эффект, чем мутация участка R85 / R87 / K88 на R85A / R87A / K88A.Чтобы дополнительно проверить разницу в силе взаимодействия между PIP3 и двумя базовыми патчами, мы преобразовали все PIP1 и PIP2 в окне моделирования в PIP3. Далее мы выполнили моделирование на IFITM3 (K83A / K104A) и IFITM3 (R85A / R87A / K88A) в окне моделирования только для PIP3. Начиная с этой структуры, мы выполнили уравновешивание системы и 5 моделирования производства полностью атомной молекулярной динамики (каждое длительностью 200 нс), используя протокол для моделирования полностью атомной молекулярной динамики, описанный в разделе «Подробности моделирования полностью атомной молекулярной динамики. для связывания фосфолипидов ».Мы суммировали последние 100 нс траекторий моделирования из каждого из 5 прогонов, которые мы добавили к 500 нс траекторий моделирования молекулярной динамики для анализа. Мы рассчитали энергию взаимодействия как сумму электростатических кулоновских и ван-дер-ваальсовых потенциальных энергий между PIP3 и остатками, образующими только базовый участок (K83 / K104 или R85 / R87 / K88). Энергии взаимодействия усреднялись по 500 нс агрегированных траекторий молекулярно-динамического моделирования для каждой системы. Мы повторили эти расчеты энергии взаимодействия для IFITM3 дикого типа и для мутантных конструкций K83A / K104A и R85A / R87A / K88A.
Расчеты тепловой карты контактной частоты на основе моделирования молекулярной динамики
Важной информацией, которую можно извлечь из моделирования молекулярной динамики, является временная частота контактов PIP3 с двумя основными остаточными пятнами. Постоянство этих взаимодействий играет важную роль в накоплении PIP3 с помощью IFITM3. Мы рассчитали процент снимков молекулярной динамики, которые показывают контакты между каждым из остатков в основном пластыре. Это называется контактной частотой.Мы также рассчитали процент снимков молекулярной динамики, которые показывают одновременные контакты PIP3 с двумя или более остатками в двух участках основных остатков. Мы создали тепловую карту, используя частоты, рассчитанные для IFITM3 дикого типа и у мутантов аланина.
Количественная ПЦР в реальном времени
Костный мозг здорового донора окрашивали и сортировали, как описано ранее ⁵⁴. Тотальную РНК из клеток экстрагировали с помощью набора для выделения РНК от Macherey – Nagel.Комплементарная ДНК была создана с помощью qScript cDNA SuperMix (Quanta Biosciences). Количественную ПЦР в реальном времени проводили с использованием FAST SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems) и системы ПЦР в реальном времени Vii7 (Applied Biosystems) в соответствии со стандартными условиями ПЦР. COX6B использовали в качестве контрольного гена.
Измерения акустического рассеяния
Акустическое рассеяние, нормализованное по размеру одной ячейки (SNACS), было измерено с использованием ранее установленного микрофлюидного метода, который, как было показано, особенно чувствителен к жесткости клеточной поверхности ⁵⁵.Полную информацию об измерениях можно найти в предыдущей публикации ⁵⁵. Вкратце, клетки протекали через стоячую акустическую волну, генерируемую внутри вибрирующего подвешенного микроканального резонатора (SMR). SMR представляет собой консольный инструмент для измерения массы ⁵⁶, который также может обнаруживать акустическое рассеяние от клеток, когда клетки проходят через акустическую волну. Частота колебаний кантилевера отслеживалась, и ее смещение использовалось для количественной оценки акустического рассеяния от ячеек, а также плавучей массы ячеек.Перед проведением серии измерений SMR очищали 0,25% трипсином-ЭДТА в течение 20 минут, затем использовали 5% отбеливатель в течение 3 минут, а затем 5-минутное полоскание деионизированным H ₂ O для удаления стойкого биологического мусора. . После очистки SMR пассивировали 1 мг / мл PLL-g-PEG в H ₂ O в течение 10 минут при комнатной температуре с последующей 5-минутной промывкой нормальной средой для культивирования клеток. Во время измерения все образцы загружали в SMR через трубку из фторированного этиленпропилена с внутренним диаметром 0,005 дюйма.Поток жидкости через SMR управлялся тремя независимыми электронными регуляторами давления и тремя соленоидными клапанами. Постоянный перепад давления был приложен к SMR для поддержания постоянного сдвига и скорости передачи данных для измерения ячейки. Данные, отображаемые на рис. 8a в расширенных данных, были получены с использованием кантилевера длиной 350 мкм с размером канала 15 × 20 мкм внутри кантилевера и временем прохождения через кантилевер примерно 200 мс. Все регуляторы, клапаны и сбор данных контролировались специальным программным обеспечением, написанным в LabVIEW 2017 (National Instruments), как подробно описано в предыдущей публикации ⁵⁵.Параллельное измерение объема с использованием счетчика Коултера (Beckman Coulter) было выполнено для количественной оценки среднего объема клеток, которое использовалось вместе с измерениями плавучей массы отдельных клеток для расчета SNACS для каждой клетки, как сообщалось ранее ⁵⁵. Все измерения проводили в нормальной среде для культивирования клеток при комнатной температуре в течение 10 мин после извлечения клеток из инкубатора для культивирования клеток. После измерения необработанных клеток Jeko1 из инкубатора был получен новый участок таких же клеток, обработанный 10 мкг мл ^-1 F (ab ‘) ₂ фрагмент козьей античеловеческой μ-цепи (Jackson Immunoresearch) и клетки немедленно (в течение примерно 1 мин) загружали в SMR для измерения.Клетки Jeko1, обработанные антителами, измеряли в течение примерно 7 минут, чтобы убедиться, что изменения, стимулированные античеловеческой μ-цепью, не были обращены вспять во время эксперимента. SMR кратковременно промывали PBS между экспериментами. Клетки Jeko1 дикого типа также измеряли после фиксации для получения положительного контроля жесткости клеток. Для фиксации клетки дважды промывали PBS, смешивали с 8% PFA в течение 30 мин, дважды промывали PBS и хранили при 4 ° C перед измерениями акустического рассеяния.
Количественная оценка и статистический анализ
Данные представлены в виде среднего значения ± s.d. если не указано иное. Статистический анализ был выполнен с помощью GraphPad Prism 7 (GraphPad Software) с использованием непарного двустороннего теста t или как указано в подписях к рисункам. Значимость считалась P <0,05. Для экспериментов по трансплантации in vivo минимальное количество мышей в каждой группе было рассчитано с использованием функции «cpower» в пакете Hmisc Р. Каплана-Мейера. Анализ выживаемости был использован для оценки общей выживаемости с помощью GraphPad Prism 7. Mantel-Cox. Логранговый тест использовался для сравнения разницы между двумя группами.Мышей не исключали. Для анализа общей выживаемости пациентов пациенты в каждом наборе данных были разделены на две группы в зависимости от того, была ли их экспрессия выше или ниже среднего уровня IFITM3 , а для оценки общей выживаемости использовался анализ выживаемости Каплана-Мейера. Используемые наборы данных включают данные о результатах пациентов для B-ALL (Детская онкологическая группа (COG) P9906, n = 207; Восточная кооперативная онкологическая группа (ECOG) E2993, n = 83; и St Jude, n = 15), лимфому из клеток мантии (проект молекулярного профилирования лимфомы / лейкемии (LLMPP), n = 92) и острый миелоидный лейкоз (Атлас ракового генома (TCGA), n = 200).Для сравнения различий в выживаемости между группами пациентов использовался лог-ранговый тест.