Лайк на аву вк бесплатно: Likenaavu! Лайки на аву, фото и подписчики вконтакте!

Содержание

Как накрутить лайки в вконтакте. Как накрутить лайки на аву вконтакте бесплатно, для любой страницы

Если вы искали самую подробную информацию, касательно лайков вконтакте , то вы пришли по адресу. В этом большом руководстве я объясню вам, для чего люди их ставят, и как их можно накрутить. Что касается последнего пункта, то будут разобраны основные способы накручивания лайков — в онлайн режиме, бесплатные, платные и т.д. Будет интересно.

Что такое лайки

В социальной сети вконтакте, та и на многих других сайтах, уже давно реализована система оценки пользовательских материалов. Как это работает? Там где это возможно, вы оставляете свой голос или симпатию (см. ), просто кликая по иконке с сердечком. Это означает, что опубликованная фотка, ролик или запись, вам понравились. Или, проще говоря — вы поставили лайк!

Мы еще говорим: поставить лайк, поставить сердечко, нажать «Мне нравится» и т.д.

Как поставить лайк?

Вконтакте можно ставить сердечки практически к любому типу записей и материалов:

Если вы хотите отметить какой-то материал своей симпатией, просто щелкните левой кнопкой мыши по сердечку, расположенному под ним (или рядом с ним).

После того как вы нажмете на сердечко, счетчик лайков обновится — ваш голос будет учтен.

Накрутка лайков вконтакте

Это наверное самое интересное. Поскольку количество лайков показывает качество материала (косвенно), то чем их больше, тем лучше.

Очень многие пользователи хотят видеть большое количество сердечек на своих фотках, записях и т.д. Как быть?

Лайки можно накручивать. И для этого есть много способов. Сейчас я покажу вам самые распространенные.

Накрутка лайков вконтакте онлайн

Давайте начнем с самого просто варианта.

Получение лайков на классный материал

Здесь все предельно просто. Вам нужно публиковать интересные материалы, красивые фотографии и т.д. На первых порах, можно попросить своих друзей и знакомых сделать репост (см. ). Вам ведь нужно, чтобы как можно больше пользователей увидели вашу публикацию. Дальше все просто — если материал реально классный, люди будут сами отмечать его, ставя сердечки.

Согласен, банально. Но до сих пор работает, и работает отлично!

Быстрая накрутка лайков вконтакте

Если вам срочно нужно получить сердечки, то их необходимо купить. В сети есть большое количество бирж, на которых можно купить лайки. Что касается цены, то самые дешевые — это боты. Подороже — реальные люди. Но по сути, если вам нужно только большое число на счетчике сердечек, то нет необходимости переплачивать.

Давайте рассмотрим этот процесс на примере сервиса bosslike .

Заходите на него.

Https://bosslike.ru/login/

Открываем вкладку регистрация, и вводим свои учетные данные.

Когда закончите, нажмите кнопку «Зарегистрироваться» .

Теперь нам нужно купить баллы — на них мы закажем лайки. Щелкаем на кнопку «Купить баллы» .

Укажите сумму пополнения, а затем нажмите кнопку «Пополнить баланс» .

Вы будете перенаправлены на сайт платежной системы. Совершите платеж.

Теперь нам нужно купить лайки. Но предварительно, необходимо получить ссылку на запись или фотографию, которую мы будем продвигать. В качестве примера я опубликовал на своей стене фотографию. Вам необходимо щелкнуть на ссылку внутри поста, где указано, как давно он был опубликован.

Вы перейдете к просмотру полной версии записи. А в адресной строке браузера, будет отображена нужная нам ссылка. Скопируйте ее.

Возвращаемся в сервис. Нам нужно создать задание по накрутке лайков. Идем на вкладку «Накрутка» . Здесь заполняем все поля.

Выбираем социальную сеть Вконтакте
Тип — «Мне нравится»
Вставляем ссылку на материал
Указываем цену за один лайк, и количество, которое нам нужно

Когда все заполните, нажмите кнопку «Создать задание» .

Отлично, лайки будут получены в ближайшее время.

Программа для получения лайков

Называемся VKduty. Суть заключается во взаимной помощи. Пользователи добавляют свои страницы в программу, а также указывают ссылку на материалы, которые нужно раскрутить. Дальше программа в автоматическом режиме проводит между ними обмен лайками. Все получают сердечки, все счастливы.

Как накрутить лайки в вк быстро и бесплатно

Для этого я предлагаю вам воспользоваться помощью таких же пользователей, как и вы. А если точнее, тех людей, которым тоже нужны сердечки. Достаточно просто помочь друг другу, и лайкнуть ваши записи.

Как это реализовать? Идем в раздел группы, и пишем в поиске «Взаимные лайки» . Выбираем любую открытую группу.

Заходим в нее, и смотрим на стену. Здесь постоянно публикуют просьбы о взаимных лайках. Нам просто нужно выйти на связь с таким человеком, и получить свое сердечко.

На картинке выше подходящий пример. Девушка просит поставить ей лайк на аву, и обещает ответить взаимностью. Идем на ее страницу, ставим сердечко для ее аватарки. Пишем ей личное сообщение (см. ). Говорим, что лайк был поставлен, и просим сделать то же самое. Вот и весь процесс.

Как накрутить лайки в вк с телефона через приложение

Ищите группу, где люди обмениваются лайками. Выполняйте их просьбы, и в ответ скидывайте ссылки на свои материалы, чтобы они также поставили сердечки.

Как накрутить лайки в вк без программ

Способ основан на использовании все тех же сервисов. В том же Bosslike , вы можете выполнять простые задания, получать за них баллы, а на них покупать себе лайки.

Возвращаемся в сервис, и идем на вкладку «Заработать» . Здесь сразу нажмите на кнопку с баллами, напротив любого задания.

Появится всплывающее окно. В нем вам нужно привязать свой аккаунт вконтакте.

Теперь выполняйте простые задания — ставьте лайки, делайте репосты, вступайте в группы. Когда задание будет выполнено, нажимайте кнопку «Проверить» . Если все верно — на ваш счет поступят баллы. А их можно потратить на покупку лайков.

Способ простой, а получить можно много сердечек. И программы никакие не нужны.

Как посмотреть кому ставил лайки в контакте

Делается это с помощью закладок. Идем на свою страницу, и переходим в раздел «Закладки» . Затем открываем вкладку «Фотографии» .

Здесь будет отображен список всех фотографий, которые вы отметили сердечком.

Точно также можно посмотреть свои лайки для видео, записей, людей, ссылок и товаров. Просто переходите на нужную вкладку.

Как убрать или удалить лайк вконтакте

Предположим, что мы нашли в закладках фотографию, для которой мы ставили лайк. Как нам удалить его?

Очень просто. Открываем эту фотографию. И щелкаем один раз на счетчик «Мне нравится» .

Практически каждый пользователь Интернета имеет свою собственную страницу в социальной сети, где делится с друзьями личными фотографиями, записями и любой информацией, которую хочет донести до публики. Зачастую, круг ознакомившихся с этим материалом ограничивается лишь теми, кто состоит в друзьях у пользователя. Желание стать популярным естественно, и в социальных сетях эта самая популярность выражается в количестве «лайков» и «репостов».

К слову, запись рядового пользователя ВК набирает порядка 50 «лайков» от людей, которые состоят в друзьях. А что если есть желание увеличить количество заветных сердечек под новой «аватаркой»? Конечно, можно писать отдельно каждому с просьбой оценить фотографию, но это настолько неудобно и непродуктивно, что было придумано несколько более рациональных способов это сделать. О том, как накрутить лайки в социальных сетях, и пойдет речь в статье.

Что такое лайк?

Like с английского переводится как «нравится». Это средство было придумано с той целью, чтобы не было необходимости писать кому-либо о том, что его запись популярна, а достаточно было просто нажать на кнопку, представляющую из себя счетчик таких нажатий. Чем больше раз нажали на кнопку, тем больше лайков.

Как увеличить количество лайков?

Увеличение количества лайков путем искусственного стимулирования называется накруткой. Например, накрутить лайки ВКонтакте означает мотивировать других пользователей на то, чтобы они оценили вашу запись. Существует несколько способов это сделать. Сейчас практически каждый знает, как накрутить лайки, и многие пользуются этими инструментами, дабы стать популярнее среди друзей и знакомых.

Способы накрутки

Конечно, отметки «нравится» не являются такой большой ценностью среди сообщества ВКонтакте, и маловероятно, что кто-то будет платить за увеличение их количества. По этой причине, есть множество способов накрутить лайки бесплатно.

Вообще, процедуры накрутки можно разделить на три большие группы:

Автоматические — предполагают лишь настройку, далее будет работать программа.
Полуавтоматические — сочетают в себе и ручной, и автоматический способы накрутки.
Ручные — используют полностью ручной труд для «заработка» лайков.

Итак, рассмотрим все три способа по порядку.

Программы для накруток

Этот способ можно считать автоматизированным, так как участие человека в нем минимально и заключается лишь в настройке самой программы. Принцип работы заключается в следующем: программа от имени вашего аккаунта оценивает записи других пользователей, добавляет их в друзья, вступает в группы, взамен чего получает очки, которые можно потратить по своему усмотрению, например, на лайки. Наиболее популярной такой программой можно считать Vtope. Это один из самых первых комбайнов, помогающих в продвижении в социальных сетях.

Следует заметить, что программа безопасна в использовании, и аккаунт не будет подвержен блокировке, так как алгоритм работы построен таким образом, что имитирует действия реального человека. Поэтому, используя эту программу, вы получите «живых» пользователей, которые будут ставить «Мне нравится» под указанной записью. Помимо ВК, программа дает возможность накрутить лайки в Инстаграме, Твиттере и Фейсбуке. Как минус можно отметить низкую скорость накрутки — это плата за безопасное пользование.

Биржи накруток

Еще одним ответом на вопрос: «Как накрутить лайки?» можно считать появление многочисленных бирж накруток. Фактически, это те же самые программы, только выполненные в виде сайтов. Принцип работы у них точно такой же, как и у утилит, но способ заработка очков немного другой. Здесь необходимо самостоятельно переходить по ссылкам и зарабатывать «поинты» для собственной накрутки. Полуавтоматическим этот способ можно считать по той причине, что биржа сама регулирует начисление очков за действия и размещает задания на накрутку.

Тем не менее, одним из очевидных недостатков такого способ можно считать высокую вероятность блокировки. Связано это с тем, что выполняются однотипные действия с малыми промежутками времени, что может быть воспринято системой, как спам. Среди наиболее популярных бирж можно отметить Turboliker, Olike, VKTarget и многие другие. К слову, для Turboliker существует бот — программа для автоматической работы, что позволяет в короткие сроки набрать большое количество очков для накрутки.

Ручной способ

Этот вариант накрутки лайков состоит в том, чтобы в специальных группах, где проводят свое время такие же пользователи, размещать записи с просьбой оценить запись. К слову, этот способ достаточно трудоемкий, но эффект от него все-таки есть.

Заключение

Вообще, способов, как накрутить лайки, существует огромное множество. В статье были рассмотрены лишь основные и наиболее популярные варианты накруток. Тем не менее, их можно считать самыми надежными, ведь они основаны на самой сути социальных сетей, а это значит, что они будут жить до тех пор, пока существуют сотни миллионов аккаунтов в социальных медиа по всему миру.

Сегодня расскажу, как накрутить лайки на сайте бесплатно. Как это сделать, я сам узнал не так давно, но уже проверил на деле – работает. Лайки действительно ставят, и даже бесплатно. Таким образом, мы можем любые статьи на сайте.

Лайк – означает «нравится », от английского слова «like ». Лайки – это социальные кнопки, которые можно найти на любом сайте, в том числе и на моем. Без социальных кнопок теперь не обходится ни один сайт и ни одна веб-страница.

Если по какой-то причине у Вас не стоят социальные кнопочки на сайте, то советую это сделать прямо сейчас. Читайте (5 способов). В этой статье я рассказал достаточно подробно об установке социальных кнопок.

Так же хотел бы особое внимание уделить сервису Socprka.ru . При помощи данного сайта вы сможете быстро и в большом количестве накрутить лайки, репосты, подписчиков и фолловеров во всех соц сетях.

Оговорюсь, сервис платный, но цены не кусаются. А основное отличие от бесплатных программ и сервисов заключается в том, что все действия на socprka выполняет живой народ с России, которым будет интересен Ваш контент.

Накрутка лайков бесплатно

Расскажу немного, для тех, кто не знает, для чего нужна накрутка лайков на сайте. Чем больше люди ставят лайки, тем авторитетнее Ваш сайт для поисковиков. Клики по кнопке G+1 — это раскрутка в Google. Я на данный момент раскручиваю всего две статьи, и надеюсь, что в скором будущем они будут занимать первые позиции в . Эти статьи я раскручиваю еще и платно.

В этом уроке пойдет речь о накрутке не одной какой-то определенной социальной сети, а многих: Twitter, Facebook, Youtube и прочее. В Твиттере (читайте, ), Вы можете делать твиты и ретвиты своих постов. Смотрите скриншот, какие социальные сети участвуют в проекте:

Как видите, Вы можете получать не только лайки на своем сайте, но и раскручивать видео в youtube, а также получать комментарии к видео. Вы можете раскручивать группы в Контакте, получать подписчиков и многое другое. Давайте теперь разберемся, как это работает.

Для начала, Вам нужно перейти по этой ссылке http://liketweets.ru/ , чтобы зарегистрироваться на сервисе, по накрутке лайков . Щелкните вверху страницы, около кнопки «Войти » по ссылке «Регистрация ». Впишите все регистрационные данные, какие требуются. Поставьте галочку в чекбокс, что Вы согласны с правилами сервиса. Введите капчу и нажмите «Регистрация ».

На почту, которую Вы указали при регистрации, придет письмо для активации регистрации. Если письмо не придет, как это было в моем случае, жмите «

Повторная активация ».

После того, как я запросил повторную активацию, письмо пришло, но оно попало в папку «Спам ». Так что не забудьте проверить папку «Спам ». Все, регистрацию прошли. Как Вы, наверное, догадались, за просто так никто лайки Вам ставить не будет. На этом сервисе лайки ставят за поинты.

Поинты, Вы будете зарабатывать за выполнение разных заданий, например:

кликать по лайкам; писать комментарии к видео на youtube;
подписываться в группы;
делать твиты, ретвиты и прочее.

Я зарабатываю поинты только на лайках. Вступать в группы и писать комментарии нет никакого желания. Пока я писал этот урок, почти все мои поинты на сервисе закончились. Сервис хороший, поэтому рекомендую им пользоваться регулярно. Буду благодарен, если подскажите похожие сервисы по накрутке лайков.

Предлагаем Вам накрутить лайки ВКонтакте. Это одна из услуг, предоставляемых нашим сервисом. Давайте рассмотрим данную услугу подробнее.

Что значит накрутка лайков в ВК

Накрутка лайков ВКонтакте стала очень популярной в последнее время. Вы можете воспользоваться этой услугой, если хотите обрести популярность и произвести впечатление на своих друзей в социальных сетях. Напишите интересные записи, красивые фотографии, а потом закажите для них накрутку лайков ВКонтакте — и о них узнают тысячи пользователей! Пользователи будут ставить к Вашим записям бесплатные сердечки ВКонтакте , а Вы будете получать популярность и будете выделяться среди остальных своих друзей.

Как накрутить лайки ВКонтакте

Чтобы накрутить лайки, необходимо зарегистрироваться и подать задание на накрутку лайков. На этом все! Сердечки будут появляться на Вашей записи автоматически. Кто же будет ставить эти лайки? Точно такие же участники сайта, как и Вы! Сервис построен на добровольном обмене сердечек ВКонтакте между всеми пользователями сайта. Но мы предоставляем полный спектр услуг по продвижения в социальных сетях, в том числе и возможность накрутить подписчиков ВКонтакте .

Накрутить лайки ВКонтакте и выиграть конкурс

Последнее время довольно популярными стали конкурсы, где нужно выкладывать фотографии в определенных образах. И выигрывает конкурс тот, кто получит больше всего сердечек ВКонтакте. С нашим сервисом тебе выдается отличная возможность выграть этот конкурс! Тебе нужно всего лишь накрутить лайки ВКонтакте — и долгожданный приз твой! Кстати, если такой конкурс проходит в другой социальной сети — Инстаграм — то, чтобы выиграть, можно накрутить лайки в Instagram — это еще одна наша услуга!

Как сделать накрутку лайков в вконтакте?

скопируйте ссылку и вставьте в адресную строку, и уберите пробел между h и t:
h ttp://likeberi.com/users/sign_up?fee_ref=67573
h ttp://qcomment.ru/rsignup/42591
h ttp://v-like.ru/?p=872239
Думаю Вас заинтересует!
На крутка подписчиков, друзей, лайков… (живые офферного типа) по лучшим ценам!
По всем соц. сетям: Вконтакте, Twitter, Instagram, YouTube, Facebook, Одноклассники…
Первые руки! Полностью автоматический сайт! Личный кабинет, прямой мониторинг выполнения заказа, история финансов.
Качество! Скорость! Дешево!
Заходите на сайт, ознакамливайтесь с прайсом и функционалом.
копируйте и вставляйте в адресную строку
soc-raskrutka.com
Если возникнут вопросы обращайтесь по контактам указанным на сайте.
http://sarafanka.com/?r=ec8ee61
http://socpublic.com/?i=1135762
Вот супер сайт бесплатной накрутки
ссылка заблокирована по решению администрации проекта
Накручивай, рекламируй все что захочешь!!! классная штука…. https://vktarget.ru/?ref=3141265
Попробуй здесь, ссылка надежная, сам накручиваю там каждый день ссылка заблокирована по решению администрации проекта
Привет, дорогой друг! В этой статье я расскажу тебе, как накрутить лайки вконтакте бесплатно. Причем ты это сделаешь очень быстро. Если ты любишь знакомиться в контакте, но у тебя пока не совсем хорошо это получается, то читай статью внимательно и до конца.
Возможно, на первый взгляд тебе это покажется странным. Накручивать лайки зачем это нужно? Но на самом деле это очень полезная вещь. Каждый лайк это одобрение окружающих. И чем больше лайков у тебя будет на фото, тем лучше.
Например, человек заходит на страницу вконтакте, смотрит на фото, а оно не совсем хорошее, и лайков там нет. После этого складывается впечатления, что человек никому не нужен и его фото никому не нравится. Конечно, с ним никто не будет знакомиться. Кстати, советую тебе прочитать статью о том, как хорошо выглядеть на фото.
Возьмем другой пример. Девушка заходит на страницу и видит, что под фото много лайков. Она понимает, что если ему ставят лайки, значит, он нравится другим. А если он нравится другим, значит, в нем что-то есть. У такого парня уже намного больше шансов познакомиться с девушкой. То же самое касается и девушек.
Так как получить много лайков от друзей не всегда получается, то мы сейчас рассмотрим интересные способы, как накрутить лайки вконтакте бесплатно и платно. Бесплатно мы будем накручивать их при помощи приложения Лайкер. Обмен лайками!
Причем это даже не накрутка, а просто обмен. Ты ставишь лайк человеку и получаешь за это батарейки. Потом ты отдаешь эти батарейки за то, что другой человек поставит лайк на твое фото. Этот способ абсолютно безопасный и твою страницу никогда не заблокируют. Ну что же, приступим.
Как накрутить лайки в вк бесплатно
1) Установи приложение Лайкер. Обмен лайками! Для этого на своей странице зайди в раздел Приложения, в поиске введи слово Лайкер и нажми Enter.
как накрутить лайки вконтакте бесплатно
2) Потом установи приложение на свою страницу и запусти.
3) Теперь нужно заработать батарейки. Для этого нажми на кнопку Мне нравится и тебе откроется фото парня или девушки. Под ним нужно поставить лайк. Дальше закрываешь эту вкладку, переходишь назад в приложение Лайкер. Обмен лайками! и нажимаешь на кнопку Лайк поставлен. Чем больше батарей ты заработаешь, тем больше лайков потом накрутишь.
4) Теперь эти батарейки нужно использовать для накрутки лайков. Для этого открываешь фото, на которое хочешь накрутить лайки, и копируешь его адрес. Заходишь в приложение Лайкер. Обмен лайками! и нажимаешь кнопку Добавить цель Вставляешь туда ссылку на фото и нажимаешь Готово.
5) Вот и все! Смотришь, как быстро увеличивается количество лайков под фото.
Как накрутить лайки в вк платно
Если у тебя есть деньги, но нет времени сидеть в предложении, то ты можешь накрутить лайки в контакте платно. В интернете есть добрые люди, так называемые фрилансеры, которые за небольшие деньги могут сделать все, что тебе нужно. Накрутить лайки и комментарии, друзей увеличить, раскрутить группу и т. д. Причем не только в контакте, а и в любой другой социальной сети. Вот приведу несколько сайтов, где ты можешь найти себе фрилансеров.
отличный ресурс и для раскрутки и для небольшого заработка likesrockinfo.blogspot.com
https://vk.com/mnogolajkov тут куча лайков
А у вас много друзей ВК? Вы можете рассылать вашим друзьям, с помощью личных сообщений, просьбу, чтобы они поставили вам лайк на фотографию или запись. Многие люди откликнутся на вашу просьбу. Или можно публиковать свои фото в популярных пабликах ВК. Но тут стоит быть осторожным, если несколько людей пожалуются на вашу запись и отметят е как спам, то вашу страницу могут заблокировать. А можно сделать накрутку лайков с помощью DoctorSmm.com, быстро и безопасно. Чтобы найти сайт, скопируйте домен и вбейте в браузере, сразу же попадете на сайт.
//turbo-liker.ru/?ref=241659423,вот ссылка (допиши в начале http:),там все понятно, прочти 5 строчек пойми как работает сайт
BossLike представляет собой комплексный сервис для продвижения групп и аккаунтов в социальных сетях (Вконтакте, Instagram, Facebook, Twitter, Youtube)
Работающий по принципу взаимного обмена лайками, подписками и комментариями.
Баллы можно набирать, выполняя задания других пользователей (вступая в их группы и ставя им лайки). Таким образом, зарегистрировавшиеся в системе веб-мастера раскручивают сообщества друг друга.
За выполняемые действия сервис начисляет баллы, которые можно потратить на раскрутку своих пабликов или аккаунтов, или вывести.
Следовательно раскрутка групп производится на бесплатной основе.
Все что вам нужно это заригистрироватся в данном сервисе перейдя по ссылке
bosslike.ru/?ref=1039738
ввести почту, задать пороль и привязать аккаунт через который будете зарабатывать баллы.
Советую привязывать сервис youtube т. к. в нем нет ограничений на действия в отличие от вконтакте на котором существует ограничение в добавлении 50 групп или друзей в день и если переусердствовать аккаунт вконтакте могут заморозить на сутки
Всем удачной раскрутки!
Вот пожалуйста ссылка заблокирована по решению администрации проекта сам пользуюсь)))
Если нужна качественная накрутка, то рекомендую progressium.ru
попробуй сервис накрутки ссылка заблокирована по решению администрации проекта там можешь накрутить лайки на аву или другие фото, подписчиков вгруппу, друзей и тд.
smmka, seo и тд.
Можно купить) Если хочешь бесплатно то лучше этой проги не найдшь, возможности можешь тут почитать если интересно ссылка заблокирована по решению администрации проекта
Ненадо этого делать, а то страницу заблокируют

Бесплатные лайки вконтакте без заданий и регистрации

Лайки вконтакте – один из самых популярных инструментов для выделения пользователей. Большое количество лайков свидетельствует о популярности отдельной фотографии или пользователя, поэтому спрос на лайки велик. У Вас есть несколько способов получить лайки. Первый способ это заказать их за деньги. А второй способ – получить бесплатные лайки вконтакте. Бесплатные лайки более популярны, так как не требуют расходования денежных средств. Однако для их получения нужны знания. Ведь знания во все времена были силой.

В своей статье я хочу рассказать Вам о простых способах получения бесплатных лайков вконтакте. Я намеренно не буду писать про сервисы по накрутке (в том числе и бесплатные), чтобы Вы убедились, что накрутить лайки можно более легкими способами. Также, с помощью моих трюков, Вы избежите санкции за накрутку, которые может наложить социальная сеть за излишнюю активность. Мой способ предусматривает получении от 100 до 5000 лайков на фотографию и пост за 2-3 дня, что является хорошим результатом для бесплатных лайков.

Как получить бесплатные лайки вконтакте

Если Вы ранее уже читали мой блог, то наверняка видели статью про накрутку лайков вконтакте, которые можно получить с помощью сервисов. У этого способа есть свои плюсы и недостатки. Самый главный недостаток – лайки ставят не только реальные люди, но и боты. Второй недостаток – бесплатная версия приложения имеет ограниченный функционал, и, как правило, ограниченное число бесплатных лайков. Для большего количества придется подключать платную версию.

Прежде чем начать получение лайков, необходимо выбрать фотографию, на которую Вы хотите поставить оценки. Гораздо проще получить лайки вконтакте бесплатно на главную фотографию профиля, чем на второстепенное фото из альбома. Поэтому устанавливаем если надо лайки именно на фото, то устанавливаем необходимое, и переходим к получению лайков. Далее в поисковике вконтакте пишем в поиске «взаимные лайки» и Вам выдаться масса сообществ, где Вы можете получить лайк бесплатно. Теперь осталось просто вступить в группу, и осталось просто ждать лайков!

5 самых популярных групп по взаимным лайкам

Самый эффективный способ предусматривает вступление в 5 самых популярных групп вконтакте по получению лайков. Просто пишем на стену «Лайк на аву», и ждем результата. В среднем, за несколько часов, вы получите до 5000 лайков. Главное, писать сообщение в общей стене группы несколько раз, потому что таких объявлений много. После того, как Вы получили необходимое число бесплатных лайков, можете поставить оценки другим участникам сообщества, которые тоже ждут от Вас действий.

Просьба поставить лайк в сообществе

Второй способ получения бесплатных лайков более долгий. В среднем, на его выполнение уйдет от 2 до 5 дней. С помощью него Вы можете получить до 3000 лайков. Этот способ прекрасно совмещается с 1 способом получения лайков вконтакте бесплатно. Для него необходимо зайти в популярные сообщества вконтакте, которые открыли доступ к комментариям. При этом, выбрать надо не самые большие, а те, в тематике которых Вы разбирайетесь. Начинайте комментировать посты и публикации, после чего заметите, что Ваше фото начинают лайкать. Чем больше постов Вы оставите, тем больше бесплатных лайков получите.

тематические сообщества вконтакте

Получение бесплатных лайков с помощью обращений в сообществах

Еще один достаточно простой способ получить лайки вконаткте бесплатно – это публиковать посты с обращением к участникам групп. Самым эффективным будет публикации таких призывах в живых группах с количеством участников от 10000 до 500000 человек, которые имеют какую-то общую цель. Просьбу лучше всего публиковать не на стене группы (такая публикация не будет транслироваться в новостной ленте подписчиков), а в наиболее активных комментариях и обсуждениях.

Взаимный лайк на аватар

Идеальным будет публикация просьб в сообществах, в которых Вы имеете репутацию. В призыве поставить лайк на аватар, желательно включить общее обращение к участникам. Заметим, что такой способ получения бесплатных лайков более долгий, срок сбора может составить от 3 до 7 дней. Однако это тоже популярный способ, который используют как обычные пользователи, так и SMM менеджеры. После публикаций Вы можете поменять фото на аватарке, и начать собирать бесплатные лайки вконтакте на следующую фотографию.

Как получить лайки на посты и видео страницы

Для того, чтобы получить бесплатные лайки вконтакте на посты своей страница или опубликованное видео, необходимо воспользоваться вышеперечисленными способами, сделав небольшое изменение. Так, если Вы хотите получить беспалтыне лайки из сообщества взаимных лайков, то в своем посте Вам необходимо указать, чтобы оценили Ваш пост, и сделать его репост в группе. Если Вы хотите лайк на видео – то его надо опубликовать на стене в группе, вставив туда соответствующий код.

Наиболее эффективный способ получения лайков на пост (или видео)– это размещение его в тематической группе. Информация на стене, посвященная получению бесплатных сердечек, наиболее актуальна для групп по социальному продвижению, интернет-маркетингу и SMM. Перед публикацией поста или видео, надо списаться с администрацией группы и получить их одобрение. После этого можно публиковать пост и получать бесплатные лайки. Другой способ получения лайков – это публикация просьбы сделать оценку посту или видео в комментариях. Для этого, необходимо найти горячие посты (с большой активностью), и поставить там ссылку. Таким способ можно заработать от 100 до 500 лайков в день.

И наконец, третий способ получения бесплатных лайков на видео или публикацию вконтакте – это поиск конкурсов. Если Ваш контент соответствует определенным критериям, то Вы можете поискать для него сообщества, где проводится конкурс (вбив в поисковик фразу «конкурсы»). Вам выдаться список подобных сообществ, после чего необходимо найти нужное именно Вам. Найдя нужную группу, вступаем в нее, публикуем наш материал и ждем получения лайков. ЗА 2-3 дня можно поднять до 1000 лайков на публикацию.

Интересное видео про накрутку лайков вконтакте

Приложение лайк моя страница. Как накрутить подписчиков в вк не только бесплатно, но и без заданий

Накрутка подписчиков и лайков Вконтакте бесплатно и быстро онлайн позволяет владельцу страницы, группы или сообщества максимально быстро привлечь людей и создать свою аудиторию.

Последствия поимки при накрутке – блокировка на продолжительное время.

Чтобы вашу страницу не заблокировали, следует использовать сервисы, которые работают по новым методам, еще неизвестным технической поддержке сайта.

Цель накрутки лайков и подписчиков

Ни для кого не секрет, что владельцы крупных групп и сообществ в сети Вконтакте зарабатывают немалые деньги на своей аудитории, размещая рекламу на стенах.

Сегодня огромное количество пользователей проводят практически все свободное время в социальных сетях, просматривая различные группы и паблики.

Цена, как правило, зависит от продолжительности нахождения поста на стене группы.

Таким образом, накрутка подписчиков необходима для привлечения аудитории на страницу или в группу.

Чем больше активных пользователей просматривают страницу ежедневно, тем больше шансов у вас шансов стать владельцем масштабного сообщества.

Важно! Если вы владелец простой страницы, просмотреть детальную активность невозможно, она определяется только наличием лайков и комментариев под записями, а также количеством подписчиков. Если же вы владелец сообщества или группы, вам доступна детальная пользовательская статистика. Через нее можно отследить приток и отток пользователей, их основной возраст, пол, регион проживания, время активности и прочие данные.

Как правило, после правильной накрутки подписчиков и лайков, активность в статистике увеличивается в несколько раз.

Пример окна статистических данных группы указан на рисунке ниже:

Онлайн сервисы для накрутки

Онлайн сервисы позволяют быстро заказать услугу накрутки лайков или подписчиков. Услуги могут быть как платные, так и бесплатные.

Данный показатель зависит от параметров заказа и от количества привлеченных активных пользователей.

Рассмотрим подробнее самые популярные на сегодняшний день сервисы для накрутки в социальной сети Вконтакте:

Ad-social http://ad-social.org/ Данный сервис является наиболее популярным сайтом, который предоставляет услуги накрутки в социальной сети Вконтакте.
Ресурс также работает с большинством современных сервисов. Все, что вам необходимо – авторизоваться на сервисе и создать задание для его пользователей. Пример составления задания указан на рисунке ниже.
Если вы хотите осуществить бесплатную накрутку, нужно самому поработать в роли исполнителя, чтобы получить необходимое число балов для создания бесплатного заказа;

Likes . Официальная ссылка на сайт сервиса: likes.fm . Чтобы начать работу с данным ресурсом, пройдите авторизацию и выберите интересующую услугу.

Лучшая утилита для накрутки подписчиков и лайков

Vkduty . Официальная ссылка на сайт разработчика: http://vkduty.cc/ . Данная программа является самой популярной для накрутки в социальной сети VK.

В приложении доступно несколько режимов накрутки: для подписчиков, лайков, репостов и прочие.

Использовать программу бесплатно можно на протяжении 30 дней после момента установки.

Может еще это будет вам интересно:

Безопасное использование сервисов и программ

Важно выбрать сервис, который не нарушает пользовательскую политику безопасности Вконтакте.

Интересует быстрая накрутка лайков Вконтакте недорого? Хотите поднять рейтинг и обрести популярность в социальных сетях? Не знаете, как набрать «сердечки» онлайн за несколько минут? Сегодня данными вопросами задаются многие пользователи Вконтакте. Однако не все знают, как это сделать!

Накрутки «сердечек» в ВК или зачем нужна раскрутка?

Вконтакте – один из самых популярных сайтов в СНГ. Здесь общаются с друзьями или коллегами, слушают музыку, выкладывают фотографии, а также делятся актуальными новостями, получая взамен одобрение публики в виде клика по кнопке «Мне нравится». Давайте подробнее ознакомимся с преимуществами набора лайков Вконтакте, накрутка которых быстро обрела популярность.

Способы накручивать или получить «сердечки»

Получить лайки для Вконтакте – это всегда трудно, а самостоятельная накрутка обычно ведет к бану. Поэтому лучший вариант набрать лайки в социальных сетях при помощи профессионалов. Например, на нашем сайте сайт или на займет всего несколько минут даже без регистрации.

Обычно к нам приходят как продвинутые пользователи – постоянные клиенты, так и новички. Если уже опытные заказчики знают чего хотят, то начинающие этот путь, стараются заполучить лайк и раскрутить свою страницу разными способами зачастую рискованными. Давайте рассмотрим их:

Таким образом, накрутка лайков онлайн для Вконтакте пригодиться как для личных нужд (поднять самооценку или просто вызвать зависть у друзей и знакомых), так и для коммерческих решений (реклама на странице, предоставление услуг и другие способы монетизации). Отдельно стоит отметить возможность дешевой

Получить лайки на страничку в любой социальной сети, стало намного проще. Сейчас не нужно сидеть часами в интернете и писать всем пользователям с просьбой поставить отметку «мне нравится».. Но об этом немного позже поговорим, сейчас рассмотрим вопрос, как накрутка лайков влияет на популярность в соц. сетях.

Накрутка лайков в социальных сетях

Все знают, что социальные сети играют важную роль в жизни современного пользователя. Бывает, человек регистрируется во всех соц. сетях. Ресурсы помогают пользователю реализоваться, найти друзей или единомышленников. Разные соц. сети используются по-разному, например одна нужна для работы, вторая для развлечения, а третья для переписки. безусловно, играет значимую роль в жизни самой странички. Большое количество лайков поднимает ваш статус, вы становитесь узнаваемым человеком. Люди, видя огромное количество лайков, обязательно зайдут на страничку и так же оценят ваше фото, комментарии, записи, посты или видео.

Нельзя однозначно сказать, какая социальная сеть наиболее популярна, тут как говориться предпочтение каждого в отдельности. Кому-то нравиться проводить время в Фейсбуке, кто — то не может и дня прожить без Вконтакте. В любом случае быстрая накрутка лайков необходима каждому.

Социальные площадки отличный инструмент ведения собственного бизнеса. Многие заводят профили с целью коммерческой деятельности. Не важно, чем вы решили заниматься, продавать товар или предлагать людям инфопродукт, в любом случае накрутка лайков бесплатно позволит расширить круг заинтересованных в вашем продукте людей.

Какая накрутка лайков доступна на Bonuslike

Сервис позволяет максимально быстро накрутить лайки в таких социальных сетях как:

Вконтакте;
Фейсбуке;
Твиттере;
Инстаграме.

Позволяет чувствовать себя интересным. Ваши посты и фото оценят по достоинству. Имея лайки, вы сможете, привлечь интерес к своей странице, познакомиться с интересными людьми и познать эту жизнь.

Накрутка лайков в Фейсбуке позволяет пользователю набрать популярность выложенной в сеть информации. Запись на Фейсбуке с накруткой лайков поднимет популярность, повысит продажи и привлечет внимание многих пользователей.

Накрутка лайкову онлайн в Твиттере поможет увеличить просмотры ваших новостей и публикаций. Тысячи людей ежедневно проводят время в Твиттере, читают новости и полезную информацию. Почему бы им не заинтересоваться вашими твитами? Накрутка лайков в твиттере это популярность и перспективы для активных блогеров.

Быстрая лучший способ обратить на себя внимание. Люди просто сидят в интернете, смотрят интересные фото и лайкают их.

Сервис Bonuslike позволяет движением мышки накрутить лайки в любой социальной сети. Можно выбрать вариант постепенной накрутки лайков, например, сегодня вы накручивайте лайки Вк, завтра в Твиттере. Равномерно наполняя страничку необходимым содержимым.

Как создать задание на накрутку лайков

Накрутить лайки можно без особых усилий и навыков. Для этого нужно, ознакомиться с нашими рекомендациями и выполнить 4 простых шага:

Зарегистрироваться. Для этого нажмите кнопку «Вход»;
Привязать свои аккаунты социальных сетей;
Выполнить несколько заданий, чтобы баланс был пополнен. Если же не хочется тратить время, то пополнить его посредством платежной системы;
Разместить свое задание. Для этого перейдите в раздел «Накрутить», выберете ту социальную сеть, в которой хотите произвести накрутку и заполните все необходимые поля.

Безопасна ли бесплатная накрутка лайков?

Чтобы испытывать, не опасна ли накрутка лайков, необходимо испробовать ее. У нас, вы отыщите свою аудиторию. Стать пользующимся популярностью и обратить на себя внимание людей материалом просто, нужно всего лишь научиться правильно создавать задания. Результат преуспевания не заставит ждать. Как говорилось выше, мы не работаем с программами, весь процесс накрутки лайков происходит в онлайн режиме. А что может быть еще безопаснее?

Зачем нужна накрутка лайков

Накрутка лайков, зачем она нужна? Тут так же ответ будет неоднозначным. Нужна она в первую очередь для самоусовершенствования. Люди, имеющие большое количество лайков чувствуют себя увереннее, многие комплексы в реальной жизни отступают на задний план. Ведь как говориться в жизни ты можешь быть ни кем, а в соц. сети ты можешь стать звездой мирового масштаба.

Естественно, бизнесмену нет времени целый день сидеть и предлагать свои услуги вручную. Для этого и существуетнакрутка лайков онлайн бесплатно. Используя наш ресурс, можно в тысячи раз поднять рейтинг аккаунта, выйти в топ первых и заработать деньги.

Лайки на аву нравятся всем, приятно иметь на своей главной (да и не только) фотографии много лайков. А если фото еще и обсуждаемо, то это вообще фурор. Так в чем проблема? Не надо ждать, используя наш сайт для накрутки лайков, вы станете мега звездой интернета. Вас будут знать многие, а если вы еще и интересная личность, с вами будут мечтать познакомиться.

Для людей среднего возраста накрутка лайков бесплатно, может стать шансом и найти свою вторую половинку. Ведь многие люди специально заводят странички для знакомств.

Накрутка лайков онлайн прекрасная возможность показать себя миру, если говорить о фото, если говорить об информации которую вы выкладывайте в сеть, накрутка позволяет максимально быстро распространить ее по сети. Имея большое количество одобрительных лайков, вы можете изменить свою жизнь координально. Главное правильно и грамотно подойти к этому вопросу. Давайте дальше рассмотрим все варианты, по отдельности затрагивая каждую социальную сеть.

Популярность ваших фотографий, добавленных на страницу профиля Вконтакте, оценивается по количеству положительных комментариев (см. ), репостов (см. ) и лайков. Как правило, пользователи чаще всего ставят именно сердечки — тем самым выказывая свой интерес и одобрение вашей фотки. Многие даже ставят себе цель, получить как можно больше сердечек для своей аватарки.

Если у вас мало друзей, или фотография не очень хорошая, то естественным путем достичь цели вряд ли получится. Но можно воспользоваться специальными методами. Сейчас мы расскажем вам, как сделать лайки в вконтакте бесплатно .

Как получить действия на своей странице

Пользователи постоянно нуждаются в том, чтобы кто-то осуществил то или иное действие на их странице. Как мы уже отметили, это может быть комментарий к какой-то записи, репост красивой фотографии и тд. Можно выделить 3 варианта получения этого действия.

Бесплатная накрутка лайков на аву и фотки

Нам необходимо найти людей, которым также необходимо получить лайки. Проще всего это сделать, в соответствующих публичных страницах.

Воспользуемся поиском. Набирайте «Взаимные лайки» , и переходите в список сообществ.

Ориентируясь по названию сообщества, нам нужно выбрать то, где пользователи обмениваются лайками. Посмотрите, на картинке выше мы видим первые два варианта.

Группа «Взаимные лайки на аву» — то что нужно
Группа «Инстаграм взаимные лайки» — это уже другое дело, инстаграм нас пока не интересует (см. также )

Значит мы воспользуемся первым сообществом. Открывайте его.

Здесь все оставляют свои просьбы в режиме онлайн. Вы можете сначала выполнить просьбу любого участника, а затем написать ему о том, что вам тоже нужна взаимная услуга. Скажите ему, что хотели бы получить лайк на аватарку.

Идем к самой верхней записи, для которой разрешены комментарии. Здесь мы видим все просьбы.

Мы видим, что некая Василиса Юдинцева, просит поставить лайк на ее аву. И взамен, обещает сделать тоже самое для вас. Это именно то, что нам нужно. Она даже фотку прикрепила прямо к своей просьбе — не нужно далеко ходить. Просто откройте ее, и поставьте сердечко.

После этого стоит подождать несколько минут. Если она не сделает взаимного действия, то напишите ей сообщение о том, что вы поставили лайк на ее аву, и хотели бы получить от нее ответное действие. В том случае, если она снова проигнорирует, вы можете

Крутить лайки и подписчики вконтакте. Как накрутить подписчиков в вк не только бесплатно, но и без заданий

Накрутка лайков в социальных сетях

Какая накрутка лайков доступна на Bonuslike

Сервис позволяет максимально быстро накрутить лайки в таких социальных сетях как:

Вконтакте;
Фейсбуке;
Твиттере;
Инстаграме.

Как создать задание на накрутку лайков

Зарегистрироваться. Для этого нажмите кнопку «Вход»;
Привязать свои аккаунты социальных сетей;
Выполнить несколько заданий, чтобы баланс был пополнен. Если же не хочется тратить время, то пополнить его посредством платежной системы;
Разместить свое задание. Для этого перейдите в раздел «Накрутить», выберете ту социальную сеть, в которой хотите произвести накрутку и заполните все необходимые поля.

Безопасна ли бесплатная накрутка лайков?

Зачем нужна накрутка лайков

Сегодня администраторы сообществ ВКонтакте ищут бесплатные способы увеличения своей аудитории. Такие способы действительно есть, но почти все они предлагают накрутку за счет предварительного выполнения заданий, получения за это баллов, и только потом выставления своего задания. К счастью возможная накрутка подписчиков ВКонтакте бесплатно и без заданий. Звучит классно, тогда приступим.

К сожалению, не каждый человек может использовать платные сервисы по тем или иным причинам. Поэтому, в нашей статье мы расскажем о бесплатных способах накрутки, которые не требуют выполнения каких-либо заданий.

Бесплатная накрутка подписчиков ВК без заданий

Большинство людей, которые занимаются продвижением в социальных сетях, считают, что накрутка может быть либо платной, либо бесплатной, но требующая выполнения определенных заданий.

В сети существует довольно маленькое количество онлайн сервисов, которые предлагают бесплатную накрутку без выполнения заданий. И найти такие довольно не просто. Но о парочке мы знаем и сегодня расскажем о них.

Здесь нет никакого подвоха. С вас действительно не потребуют оплаты, выполнения каких-либо заданий и прочего. Просто заходите, делаете заказ и ждете его выполнения.

Сразу стоит отметить, так как сервисы являются бесплатными, то не стоит ожидать от них больших скоростей накрутки. Поэтому, если вы никуда не спешите, то материал ниже – для вас.

Сервисы для бесплатной накрутки подписчиков ВК без выполнения заданий

Итак, сегодня мы поговорим с вами о следующих двух сервисах:

Оба они предлагают бесплатную накрутку подписчиков и лайков без выполнения заданий.

Хроносток

Отличный онлайн сервис, позволяющий без труда накрутить подписчиков на свой профиль или в группу. Проект уже пользуется некоторой популярностью среди пользователей ВКонтакте. А помимо подписчиков он также может накручивать:

Лайки на фотографии профиля;
Лайки на записи постов в группе;
Друзей;
Удаление собачек из группы;
Покупка подписчиков/лайков.

Главное правило сайта – запрос можно сделать не чаще одного раза в 30 секунд. То есть, заказать один лайк и одного подписчика можно раз в пол минуты.

Также здесь есть своя очередь. После того, как вы сделали запрос, ваше задание попадет в начало очереди. Каждое новое задание (оставленное другими пользователями) будет опускать ваше на 1 позицию вниз. А чтобы снова поднять его в начало очереди вы можете нажать кнопку «В ТОП!» (один раз в 5 минут).

Как правило, новые подписки и лайки начинают поступать спустя 5-10 минут.

Итак, как пользоваться сервисом :

При нажатии на кнопку «Позиция в ТОПе» вы увидите, какое место в очереди занимает ваше задание. Чтобы повысить позицию, нажмите «В ТОП!».
Еще одним плюсом данного сервиса является наличие автобота, позволяющего осуществлять данную накрутку автоматически. Например, если у вас нет времени каждые пол минуты заходить на сайт. Чтобы активировать автобота, необходимо авторизоваться на сайте и нажать соответствующую кнопку в левом углу.

ЛайкНаАву

Второй онлайн проект называется ЛайкНаАву. Создан он с такой же целью, как и – набирать лайки и подписчиков бесплатно и без заданий.

Сервис имеет следующий функционал:

Лайки на фотографии;
Подписчики на страницу;
Купить лайки/подписчиков.

Принцип работы здесь такой же, как и у предыдущего. Вы просто указываете ссылку нужной страницы и нажимаете кнопку раз в 10-20 секунд, чтобы заказать подписку или лайк.

Задания здесь выполняются сразу и вам не приходиться ждать каких-либо очередей. Но здесь есть одно немаловажное ограничение – число подписок на 1 аккаунт в сутки. Достигнув определенного значения, кнопка станет неактивной и ее нельзя будет нажать. А чтобы продолжить накрутку, необходимо будет подождать до завтра.

Как пользоваться:

Как видите, подобные сервисы действительно существуют. Да, они обладают некоторыми ограничениями, но зато мы никому ничего не платим и не тратим свое время на выполнение каких-либо заданий. Зашли, нажали и получили нужный результат.

Плюсы и минусы накрутки подписчиков без заданий

Как и у любого другого способа накрутки здесь есть свои плюсы и минусы. Давайте о них и поговорим.

Главные преимущества такого продвижения отображены в названии:

Бесплатно – мы не платим ни единой копейки за использование вышеуказанных сервисов, при этом получаем желаемый результат.
Без заданий – мы не тратим свое время на выполнение тех или иных действий, чтобы получить вознаграждение, которое в дальнейшем тратим на раскрутку. Мы просто зашли на сайт, нажали кнопку и получили подписку.

Теперь недостатки:

Скорость – наверное, это самый большой минус. Используя только лишь описанные проекты, вы не сможете быстро набрать аудиторию в несколько тысяч людей. Одновременное использование Хроностока и ЛайкНаАву будут давать вам около 20-30 подписчиков в сутки.
Боты – все аккаунты, которые будут накручены таким образом, являются либо ботами, фейками, либо живыми, но не активными. В общем, здесь вы получите такую же аудиторию, как и в случае сервисов, где надо зарабатывать баллы. Поэтому, если вы желаете получить именно живых подписчиков, то такой способ вам не подойдет.
Различные ограничения – заказывать не чаще 1-го раза в 30 секунд, определенное количество подписок в сутки, очередь и т.д.;
Маленькое количество сервисов – пока нам удалось найти только два подобных проекта. Минусом это можно назвать потому, что одновременное использование множества проектов дало бы больший результат. Допустим, 5 таких сервисов давали бы до 100 подписок в день, а это уже рекомендуемая скорость, превышать которую не стоит, чтобы не вызвать подозрения со стороны администрации ВК.

Программы накрутки для ПК

Раз уж мы сегодня говорим о бесплатной накрутке без заданий, то нельзя не рассказать про еще один способ – пробные версии различного софта.

К сожалению, такие версии ограничены, либо в своем функционале, либо по времени. Все нижеуказанные программы необходимо скачивать и устанавливать на свой ПК. И уже с компьютера вы сможете осуществлять накрутку.

Ниже приведен список наиболее популярного софта:

VK10000Friends

Довольно простая и эффективная программа. Она автоматически накручивает друзей на вашу страницу. Все что требуется от вас – запустить ее.

Минус программы – здесь нельзя выбрать аудиторию. То есть, она накручивает всех подряд.

Пользоваться демо-версией можно постоянно, но только для одного аккаунта.

Friends

Еще один софт, автоматически накручивающий друзей на вашу страничку. Работает по принципу VK10000Friends.

Бесплатной версией можно пользоваться всего лишь 30 минут, но этого времени хватит, чтобы накрутить хоть какое-то количество людей. Также в демо-версии нельзя выбирать аудиторию по критериям (в платной можно).

Quick Sender

Использовать демо-версию можно постоянно, но ее функционал урезан (его вполне хватает для накрутки аудитории).

Данный софт не накручивает автоматически подписчиков, но помогает спарсить целевую аудиторию и в дальнейшем работать с ней (например, делать рассылку).

BroBot

Работает по принципу . Зато функционал никак не урезан. Ограничения демо-версии состоят в том, что накручивать можно только на 1 страницу.

Возможные проблемы

При грамотном подходе к раскрутке группы ВКонтакте с помощью бесплатных программ и сервисов, проблем возникнуть не должно. Если накручивать постепенно с постоянным добавлением хорошего контента, то в 80% случаев всё будет норм. Лучше накрутить нужное количество подписчиков за месяц, чем за день, конечно, если Вы собираетесь работать на результат.

Итог

Сегодня мы поговорили о довольно актуальной теме: бесплатная раскрутка ВК без заданий. Теперь вы знаете несколько способов и сервисов, позволяющих это сделать. Надеемся, статья была для вас полезной.

Что значит накрутка лайков в ВК

Как накрутить лайки ВКонтакте

Накрутить лайки ВКонтакте и выиграть конкурс

Как получить действия на своей странице

Бесплатная накрутка лайков на аву и фотки

Воспользуемся поиском. Набирайте «Взаимные лайки» , и переходите в список сообществ.

Группа «Взаимные лайки на аву» — то что нужно
Группа «Инстаграм взаимные лайки» — это уже другое дело, инстаграм нас пока не интересует (см. также )

Значит мы воспользуемся первым сообществом. Открывайте его.

Идем к самой верхней записи, для которой разрешены комментарии. Здесь мы видим все просьбы.

Заключение

Вот такой просто алгоритм действий, поможет вам бесплатно получить пользовательскую активность на своей странице. У вас легко получиться накрутить лайки на аватарку, комментарии и репосты (см. ). Единственный недостаток этого метода в том, что реальный интерес пользователей к вашей информации будет не так высок. Но для начала — и этого хватит.

Вопросы?

Вконтакте

Накрутки «сердечек» в ВК или зачем нужна раскрутка?

Способы накручивать или получить «сердечки»

Прикольные фото на аву для девочек (65 фото) 🔥 Прикольные картинки и юмор

Далее предлагаем посмотреть и бесплатно скачать прикольные картинки на аватарку для девочек.

Девушка в венке.

Веселое пирожное.

Мыльный пузырь.

Девочка с длинными волосами.

Девушка с чашкой.

Сердце из рук.

Девушка в бейсболке.

Девушка с зеленым бантом.

Нарисованная девочка.

Кекс

Девочка в очках.

Девочка с книгой.

Девочка с большими глазами.

Стильная девушка на аву.

Девочка с фотоаппаратом.

Девушка в шапке.

Девушка на велосипеде.

Нарисованная девушка карандашом.

Девушка в короне.

Красивые глаза

Нарисованная девочка в венке.

Без лица

Девушка на пляже.

Сердце из снега в руке.

Веселые пальчики.

Девушка в короне.

Девочка с большим сердцем.

Девушка с цветами.

Мальчик и девочка.

Девушка, кот, чашка кофе.

Девушка с хвостиком.

Заставка на аву.

Прикольная картинка на аватарку.

Девушка с фиолетовыми волосами.

На лестничной площадке

Девочка бобер

Удивленная малышка

Девушка и мишка

Девчонка

Красотка

На качелях

Крутая детка

В шляпе

Естественная красота

Королева

Яркое фото

На велосипеде

Красивая аватарка

С яркой доской

Тссс

Яркая блондинка

Лежа под солнышком

На качелях

С котом

Грусть

Красивые глаза

С шариком из жвачки

Яркая дорога

На траве

Симпатичная девушка

Мне нравится289Не нравится69

ВКонтакте поможет мгновенно запустить рекламу со смартфона

ВКонтакте теперь может продвигать бизнес-страницы со смартфонов. Чтобы начать рекламу, вам достаточно нажать «Продвигать» под любым постом или перейти в новый раздел «Продвижение сообщества». Даже не нужно что-то настраивать: система сама подскажет аудиторию и бюджет. Этот вариант идеален для тех, кто еще не имеет опыта раскрутки страниц. Однако вы также можете использовать расширенные настройки — они полезны для профессиональных маркетологов, которые хотят размещать рекламу на ходу, но с более точными параметрами.

Новые возможности появятся на бизнес-страницах постепенно. В сообществах с обновлением появится возможность запускать рекламу двумя способами:

Авто-продвижение в Инстаграм без блоков

Рекомендовано : Jesica — это приложение для продвижения в Instagram (от создателей Instaplus.me). Установите Jesica на свой телефон или компьютер с Android, и приложению понравится, подпишется и откажется от подписки, как если бы вы делали это сами:

Нет блоков. Пределы работают так, как если бы вы все это делали вручную.
Безопасно. Вам не нужно вводить пароль для своей учетной записи.
Высокая скорость. Вы можете ставить до 1000 лайков и 500 подписок в день.

Попробовать 5 дней бесплатно >>
Реклама

нажмите «Продвигать» под любой записью,
, используя раздел «Продвижение сообщества», который отображается под сообщениями.

В разделе «Продвижение сообщества» вы можете не только управлять рекламой и задавать вопросы в службу поддержки, но и читать бесплатные обучающие материалы от команды ВКонтакте для бизнеса.Научат, как эффективно развивать сообщество в ВК: от дизайна и сопровождения страницы до создания рекламы любого формата. Также в разделе представлены успешные кейсы по продвижению ВКонтакте: универсальные для всех сфер бизнеса, а также специализированные для салонов красоты и автосервисов. В будущем будет больше материалов с точечными советами по конкретным областям.

Дарья Костюк, руководитель отдела СМБ ВКонтакте:

«Мир стал максимально« мобильным »: теперь половина (50.2%) пользователей используют ВКонтакте только с мобильных устройств, а 37,8% чередуют мобильную и десктопную версии. Мы также видим высокую потребность малого и среднего бизнеса в продвижении своих услуг и продуктов «на ходу» и «в бегах» — в том ритме, в котором они живут каждый день. Теперь у них появилась такая возможность: благодаря управлению рекламой в мобильном приложении ВК они в пару нажатий смогут рассказать о себе потенциальным клиентам.

Наша миссия — не только упростить продвижение сообществ, но и обучить предпринимателей: мы хотим рассказать вам, как легко развивать свой бизнес в социальных сетях, и показать классные примеры тех, кто уже добился успеха »…

Ранее в рекламном аккаунте ВК появился автоматический контроль цен, а также появилась возможность прикреплять ссылки на видео.

Источник: Пресс-релиз ВКонтакте

Терапия холевой кислотой при расстройствах спектра Зеллвегера

J Inherit Metab Dis. 2016; 39 (6): 859–868.

, ^# ^1, ², ^# ^1, ², ^# ³, ⁴, ², ⁵, ⁶, ⁵ , ², ², ¹, ⁷, ² и ¹

Кевин Берендсе

¹ Отделение детской неврологии, Детская больница Эмма / Академический медицинский центр, Амстердамский университет , Meibergdreef 9, 1105 AZ Амстердам, Нидерланды

² Лаборатория генетических метаболических заболеваний, Академический медицинский центр, Амстердамский университет, Амстердам, Нидерланды

Femke C.C. Klouwer

¹ Отделение детской неврологии, Детская больница Эмма / Академический медицинский центр, Амстердамский университет, Meibergdreef 9, 1105 AZ Амстердам, Нидерланды

² Лаборатория генетических метаболических заболеваний, Академический медицинский центр, Университет Амстердам, Амстердам, Нидерланды

Bart GP Koot

³ Отделение детской гастроэнтерологии, Детская больница Эмма / Академический медицинский центр, Амстердамский университет, Амстердам, Нидерланды

Elles M.Кемпер

⁴ Фармацевтический факультет, Академический медицинский центр, Амстердамский университет, Амстердам, Нидерланды

Саша Фердинандуссе

Kiran VK Koelfat

⁵ Кафедра хирургии Маастрихтского университета, Амстердам, Нидерланды

Мартин Леничек

⁶ Кафедра медицинской биохимии и лабораторной диагностики 1-го медицинского факультета Карлова университета в Праге, Прага, Чешская Республика

Фрэнк Г.Schaap

⁵ Отделение хирургии Маастрихтского университета, Амстердам, Нидерланды

Ханс Р. Уотерхэм

Фредерик М. Vaz

Марк Энгелен

¹ Отделение детской неврологии, Детская больница Эмма / Академический медицинский центр, Амстердамский университет, Мейбергдриф 9, 1105 AZ Амстердам, Нидерланды

Peter L.M. Jansen

⁷ Отделение гастроэнтерологии и гепатологии, Академический медицинский центр, Амстердамский университет, Амстердам, Нидерланды

Рональд Дж. А. Вандерс

Bwee Tien Poll-The

¹ Отделение детской неврологии, Детская больница Эмма / Академический медицинский центр, Университет Амстердама, Meibergdreef 9, 1105 AZ Амстердам, Нидерланды

¹ Отделение детской неврологии , Детская больница Эммы / Академический медицинский центр, Амстердамский университет, Meibergdreef 9, 1105 AZ Амстердам, Нидерланды

³ Департамент детской гастроэнтерологии, Детская больница Эмма / Академ mic Медицинский центр Амстердамского университета, Амстердам, Нидерланды

⁴ Фармацевтический факультет Академического медицинского центра Амстердамского университета, Амстердам, Нидерланды

⁵ Хирургический факультет Маастрихтского университета, Амстердам, Нидерланды

⁶ Кафедра медицинской биохимии и лабораторной диагностики, 1-й медицинский факультет Карлова университета в Праге, Прага, Чешская Республика

⁷ Кафедра гастроэнтерологии и гепатологии, Академический медицинский центр, Амстердамский университет, Амстердам, Нидерланды

Автор, ответственный за переписку.

^# Внесено поровну.

Сообщено: Нэнси Браверман

Получено 6 мая 2016 г .; Пересмотрено 13 июня 2016 г .; Принято 29 июня 2016 г.

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями Международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии вы должным образом указываете первоначального автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Дополнительные материалы

ESM 1: (TIF 4878 кб)

GUID: 105A9784-2E74-480F-9BBA-F3B5E8D3F97D

ESM 2: (DOCX 16 kb) : (DOCX 16 kb) 4AE9-AA7E-330A202BDC64

Abstract

Введение

Расстройства спектра Зеллвегера (ZSD) характеризуются нарушением образования пероксисом, вызванным аутосомно-рецессивными мутациями в различных генах PEX .По крайней мере, некоторые из прогрессирующих и необратимых клинических отклонений у пациентов с ZSD, особенно дисфункция печени, вероятно, вызваны накоплением токсичных промежуточных продуктов желчных кислот. Мы исследовали, может ли добавка холевой кислоты подавить синтез желчной кислоты, уменьшить накопление токсичных промежуточных продуктов желчной кислоты и улучшить функцию печени у этих пациентов.

Методы

Было проведено открытое исследование с дизайном до и после тестирования с участием 19 пациентов с ZSD.За участниками наблюдали в течение 2,5 лет до начала вмешательства. Впоследствии все пациенты получали холевую кислоту перорально и наблюдались в течение 9 месяцев лечения. Желчные кислоты, пероксисомальные метаболиты, функцию печени и жесткость печени измеряли на исходном уровне и через 4, 12 и 36 недель после начала лечения холевой кислотой.

Результаты

Во время лечения холевой кислотой синтез желчной кислоты снизился у большинства пациентов. Было обнаружено снижение уровней промежуточных соединений желчных кислот в плазме и уменьшение выведения промежуточных соединений желчных кислот с мочой.У пациентов с прогрессирующим заболеванием печени ( n = 4) лечение холевой кислотой приводило к увеличению уровней трансаминаз в плазме, билирубина и холевой кислоты с лишь незначительным снижением промежуточных соединений желчных кислот.

Выводы

Пероральная терапия холевой кислотой может использоваться у большинства пациентов с ZSD, приводя, по крайней мере, к частичному подавлению синтеза желчной кислоты. Однако следует соблюдать осторожность у пациентов с запущенным заболеванием печени из-за возможных гепатотоксических эффектов.

Электронные дополнительные материалы

Онлайн-версия этой статьи (doi: 10.1007 / s10545-016-9962-9) содержит дополнительные материалы, которые доступны авторизованным пользователям.

Введение

Расстройства спектра Зеллвегера (ЗСД) составляют основную группу нарушений биогенеза пероксисом и характеризуются дефицитом функциональных пероксисом из-за мутаций в различных генах PEX . Клинический спектр очень неоднороден, но ключевыми симптомами являются заболевание печени, нарушение зрения и слуха и задержка развития (Gould et al 2001).У пациентов с более тяжелым фенотипом прогрессирующий фиброз и билиарный цирроз печени присутствуют уже вскоре после рождения (Wanders and Ferdinandusse 2012). Клинически часто наблюдаются гепатоспленомегалия, повышение уровня трансаминаз в плазме, холестаз и стеаторея. Из-за дефицита функциональных пероксисом у пациентов с ЗСД обычно обнаруживаются несколько нарушений метаболизма. Как правило, пациенты накапливают в плазме С ₂₇ -мобильных кислот, очень длинноцепочечные жирные кислоты, фитановую, пристановую и пипеколиновую кислоту и имеют низкие уровни плазмалогенов в эритроцитах (Wanders and Waterham 2006).Считается, что аномалии желчных кислот в ZSD вносят вклад в общий патогенез заболевания, но особенно в патологию заболеваний печени (Wanders and Ferdinandusse 2012). Более того, предполагается, что промежуточные соединения мобильной кислоты C ₂₇ проникают через гематоэнцефалический барьер и вызывают повреждение центральной нервной системы (Klouwer et al 2015).

Желчные кислоты представляют собой водорастворимые производные холестерина, которые играют важную роль в ряде метаболических процессов, таких как катаболизм холестерина и всасывание пищевых липидов (включая жирорастворимые витамины).Кроме того, они являются сигнальными молекулами во многих метаболических путях (Hofmann 2007). Первичные желчные кислоты, холевая кислота (CA) и хенодезоксихолевая кислота (CDCA) синтезируются в печени из холестерина посредством множества ферментативных стадий в различных субклеточных компартментах (например, митохондриях, цитозоле, эндоплазматическом ретикулуме и пероксисоме) (Russell 2003; Zollner et al 2006) . Заключительная стадия первичного синтеза желчных кислот происходит в пероксисомах: C ₂₇ -мобильные кислоты 3α, 7α-дигидроксихолестановая кислота (DHCA) и 3α, 7α, 12α-тригидроксихолестановая кислота (THCA) проходят один цикл пероксисомальной β- окисление с образованием первичных C ₂₄ -мобильных кислот CDCA и CA.У пациентов с ZSD накопление этих промежуточных соединений мобильной кислоты C ₂₇ происходит вместе с недостаточными концентрациями мобильных кислот C ₂₄ у пациентов с тяжелым фенотипом (Ferdinandusse and Houten 2006; Van Eldere et al 1987). Накапливающиеся желчные кислоты гепатотоксичны (Fischer et al 1996). Более того, исследования in vitro показали, что C ₂₇ -мобильные кислоты более цитотоксичны, чем C ₂₄ -мобильные кислоты (Ferdinandusse et al 2009). Первичные желчные кислоты обычно конъюгированы либо с таурином, либо с глицином для повышения их растворимости в воде через пероксисомальный фермент желчная кислота-кофермент A: N-ацилтрансфераза аминокислоты (BAAT) (Pircher et al 2003).Пациенты с ZSD имеют пониженную способность к конъюгированию из-за дефицита пероксисомальной BAAT (Solaas et al, 2000). У людей промежуточные соединения С ₂₇ -мобильных кислот менее хорошо конъюгированы по сравнению с С ₂₄ -мобильных кислот, плохо секретируются и не способны генерировать достаточный отток желчи, способствуя холестазу. После секреции они менее способны образовывать смешанные мицеллы в просвете кишечника, что приводит к нарушению всасывания жира и жирорастворимых витаминов (Van Eldere et al 1987; Stieger et al 1997).

Желчные кислоты регулируют свой собственный биосинтез через цепь отрицательной обратной связи. Они были идентифицированы как эндогенные лиганды рецептора фарнезоида X (FXR) (обзор см. В Schaap et al 2014). Активация FXR в печени приводит к снижению экспрессии гена холестерин-7α-гидроксилазы (CYP7A1), фермента, ограничивающего скорость синтеза желчных кислот de novo (Brendel et al 2002; Goodwin et al 2000; Kerr et al 2002). Кроме того, FXR активируется в кишечнике после реабсорбции желчных кислот, что индуцирует выработку фактора роста фибробластов 19 (FGF19).Этот эндокринный фактор действует на печень, подавляя активность CYP7A1 . Большинство желчных кислот реабсорбируются в подвздошной кишке и возвращаются в печень через портальную кровь (т.е. энтерогепатическое кровообращение), тогда как лишь небольшое количество выводится с калом. Чтобы поддерживать постоянный пул желчных кислот, их потеря компенсируется синтезом de novo в печени (Chiang 2009). В ZSD синтез желчных кислот активируется как вероятное следствие пониженных уровней C ₂₄-мобильных кислот и сопутствующего нарушения регуляции отрицательной обратной связи посредством передачи сигналов FXR / FGF19.Это приводит к увеличению производства и последующему накоплению промежуточных продуктов желчных кислот C ₂₇ (Keane et al 2007).

В настоящее время не существует лечебной терапии для пациентов с ZSD (Klouwer et al, 2015). Предполагается, что добавление CA является потенциальной терапией для пациентов с ZSD (Setchell et al 1992), поскольку CA подавляет первый этап биосинтеза желчных кислот, что, возможно, приводит к снижению уровней промежуточных продуктов желчных кислот. Кроме того, терапия СА, вероятно, восстановит пониженные уровни СА, тем самым улучшив отток желчи и увеличив солюбилизацию пищевых жиров и жирорастворимых витаминов.CA-терапия была недавно одобрена в США Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) в качестве лечения пациентов с ZSD. До сих пор сообщалось об эффекте первичного приема добавок желчных кислот у трех пациентов с ZSD с противоречивыми результатами (Setchell et al 1992; Maeda et al 2002), и его эффект никогда не изучался систематически в большой когорте. В этом исследовании мы исследовали эффект 9-месячной пероральной терапии КА у 19 пациентов с ЗСД.

Методы

Дизайн исследования

Исследование было одобрено этическим комитетом Академического медицинского центра (AMC), Амстердам, Нидерланды, и проводилось в период с 2011 по 2014 гг. (Регистр испытаний: www.isrctn.com/ISRCTN96480891). Индивидуальное письменное информированное согласие было получено от пациентов и / или родителей пациентов. В связи с широким спектром тяжести заболевания и сиротским характером заболевания использовался предварительный-посттестовый дизайн. Фаза предварительного лечения была определена как 2,5 года до начала лечения, в течение этого периода пациенты находились под стандартным уходом и наблюдением. Пациенты были обследованы во время фазы лечения во время трех исследовательских визитов; 4, 12 и 36 недель после начала лечения КА.Во время этих посещений проводился физический осмотр и измерение жесткости печени. Кроме того, были собраны кровь и моча для биохимических анализов.

Первичные цели исследования состояли в том, чтобы определить: 1) степень подавления синтеза желчной кислоты (определяемую изменением уровней в плазме промежуточных соединений C ₂₇ -бильных кислот DHCA и THCA, FGF19 и 7α-гидрокси-4- холестен-3-он [C4]) и появление промежуточных соединений желчных кислот в моче, и 2) изменение в плазме C ₂₄ уровней мобильной кислоты.Концентрация C4, стабильного промежуточного соединения желчной кислоты, является сывороточным маркером активности CYP7A1 (Axelson et al, 1988). Вторичные цели исследования включали: изменение эластичности печени, уровни жирорастворимых витаминов, синтез белка в печени, маркеры пероксисомальной функции и мониторинг возможных побочных эффектов лечения CA, включая: изменение трансаминаз в плазме (аспартаттрансаминаза [AST], аланинтрансаминаза [ALT]). ]) и конъюгированный билирубин.

Пациенты

Критерии включения включали: генетически подтвержденный ZSD и по крайней мере один из следующих признаков: повышенные трансаминазы, задержка роста или неврологические симптомы.Критерием исключения была ожидаемая продолжительность жизни менее 1 года (т.е. пациенты с классическим фенотипом синдрома Зеллвегера или пациенты, получающие паллиативную помощь), но поскольку ни один из пациентов в нашей когорте не соответствовал этому критерию исключения на момент включения в исследование, пациенты не были исключены. . Для этого исследования было набрано девятнадцать пациентов. Все пациенты посещали амбулаторную клинику AMC для ознакомительных визитов и были осмотрены детским неврологом. Добавки витаминов оставались неизменными у всех пациентов на протяжении всего исследования.

CA

Активный фармацевтический ингредиент (API) CA был предоставлен Asklepion Pharmaceuticals (с 2015 года Retrophin, Inc., Нью-Йорк, США) и проанализирован, среди прочего, на идентичность, чистоту и родственные вещества методом ВЭЖХ. Капсулы были разработаны и изготовлены в соответствии с руководящими принципами надлежащей производственной практики по заказу AMC, в результате чего были получены две лекарственные формы; желтые капсулы по 50 мг и непрозрачные капсулы по 250 мг. Капсулы СА по 50 и / или 250 мг вводились дважды в день перорально во время или до еды с общей дозой 15 мг / кг / день.Дозировка была увеличена до 20 мг / кг / день в случае, если C ₂₇ — промежуточные соединения мобильной кислоты DHCA и / или THCA все еще обнаруживались в плазме. Эффект от повышения дозы проверяли через 4 недели. В случае клинических побочных эффектов, в частности диареи, рвоты или биохимических побочных эффектов, определяемых как двукратное увеличение трансаминаз в плазме или конъюгированного билирубина, дозу снижали до 10 мг / кг / день. Плацебо не применялось.

Биохимический анализ, измерения жесткости печени и физикальное обследование

Желчные кислоты в плазме и моче (Bootsma et al 1999; Blau et al 2003), очень длинноцепочечные жирные кислоты плазмы, фитановая кислота, пристановая кислота (Vreken et al 1998), пипеколиновую кислоту (Rashed et al 2001) и плазмалогены в эритроцитах (Dacremont and Vincent 1995) измеряли в Лаборатории генетических метаболических заболеваний AMC.Анализируемые желчные кислоты в моче включают, среди прочего, первичные желчные кислоты (конъюгаты), желчные спирты и промежуточные соединения C ₂₇-мобильных кислот, как описано ранее (Ferdinandusse and Houten 2006). Предел обнаружения промежуточных соединений желчных кислот в этом анализе составляет 0,05 мкмоль / л. FGF19 в плазме определяли, как описано ранее (Schreuder et al, 2010), а C4 в плазме измеряли с помощью LC-MS на основе оригинального метода (Lenicek et al, 2008) с пределом обнаружения 1 нг / мл. Подробные условия ЖХ-МС см. В дополнительных методах.Стандартные диагностические анализы использовались для измерения липопротеинов низкой плотности, липопротеинов высокой плотности и общего холестерина, альбумина и факторов свертывания крови (т.е. протромбина, частичного тромбопластинового времени, факторов V и VII). Анализ жесткости печени выполнял один обученный наблюдатель с использованием транзиторной эластографии Fibroscan® в соответствии со стандартными инструкциями производителя (Echosens, Париж, Франция). Этот основанный на ультразвуке метод измеряет скорость распространения поперечной волны в ткани печени, которая хорошо проверена для измерения жесткости печени и считается наиболее точным неинвазивным методом диагностики цирроза печени (de Lédinghen et al 2007; Chang et al 2016 ).Поскольку значения Fibroscan® не были подтверждены по гистологии печени у пациентов с ZSD, была использована шкала фиброза METAVIR для хронической холестатической болезни печени. Значение Fibroscan® ≥15,5 кПа было определено как тяжелый фиброз или цирроз. Все пациенты проходили стандартные физические и неврологические обследования при каждом визите. Вес измерялся с помощью калиброванных весов, показатели стандартного отклонения (SD) относительно общей популяции рассчитывались в соответствии с действующими голландскими стандартами (Talma et al 2010).

Статистический анализ

Для оценки эффектов (исходный уровень по сравнению с отдельными временными точками наблюдения) добавок СА с использованием статистического пакета IBM для программного обеспечения социальных наук (SPSS) использовался критерий суммы подписанных рангов согласованных пар Уилкоксона. версия 22 (IBM, США). Значение p <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Характеристики пациентов представлены в таблице. За время наблюдения ни один пациент не погиб. Все пациенты, кроме пациента 16, получали добавку СА в течение 9 месяцев с начальной дозой 15 мг / кг / день.Добавки СА в целом хорошо переносились, и ни один из пациентов не прекратил прием лекарств. У трех пациентов (1, 18, 19) КА была введена через гастростому. Доза СА была увеличена до 20 мг / кг / день у пяти пациентов в разные моменты времени из-за постоянно повышенных уровней C ₂₇ -мобильных промежуточных соединений в плазме (пациенты 12-15, 19). Доза была снижена до 10 мг / кг / день у четырех пациентов из-за диареи (пациент 2, 3), двукратного увеличения трансаминаз в плазме (пациент 1) или повышения уровня конъюгированного билирубина (пациент 16).Этот последний пациент (16) выбыл из исследования из-за постоянно повышенного уровня конъюгированного билирубина после снижения дозы и был исключен из анализа исследования после 36 недель лечения (таблица). После прекращения приема добавок СА у этого пациента уровни конъюгированного билирубина, трансаминаз и СА в плазме вернулись к уровням до лечения (данные не показаны).

Таблица 1

Клинические и генетические характеристики 19 пациентов с ZSD, получавших CA

90. 2528G> A86 PEX1 c, E, K 90. 2528G> A E , K86 PEX1 c

Мутация
Пациент №	Пол	Возраст на момент начала лечения в годах	Аллель 1	Аллель	Доза CA через 36 недель лечения в мг / кг / день	Витаминные добавки	Прочие
1	F	7	PEX1 c.1007T> C, c.1663T> C	PEX1 c.2845C> T	10	K	ПЭГ, эпилепсия
2	M	23	PEX1	PEX1 c.25728G c.2528G> A	10	D, E, K
3	F	15	PEX1 c.2528G> A	PEX1 c.2528G> A	10	D , E, K
4 ^a	F	35	PEX1 c.2528G> A	PEX1 c. 2528G> A	15	A, E, K
5 ^a	M	30	PEX1 c.2528G> A	15	A, E, K
6 ^b	F	17	PEX1 c.2528G> A	PEX1 c.2528G> A	D, E, K
7	F	17	PEX1 c.2528G> A	PEX1 c. 2528G> A	15	D, E, K
8	M	8	PEX1 c.2528G> A
15	A, D, E, K
9	F	18	PEX6 c.1801C> T	PEX1 c.1992G> C	15
10	F	20	PEX1 c.1777G> A	PEX1 c.2071 + 1G> T	15	E, K
11 ^c	M	9	PEX1 c.2528G> A	15	A, D, K
12	M	16	PEX26 c.292C> T	PEX26 c.292C> T	20
13	F	8	PEX10 c.1A> G	PEX1 c.199C> T	20	E, K
14 ^b	M	12	PEX1 c.2528G> A	PEX> A	20	A, D, E, K
15 ^c	F	2	PEX1 c.2528G> A	PEX1 c.2528G> A	20 D, E, K
16	M	4	PEX1 c.2528G> A	PEX1 c.2614C> T	выпал	A, K
17	F	7	PEX1 c.252837G> A
15	E, K
18	F	8	PEX1 c.2528G> A	PEX1 c.2528G> A	15	A, D, E, K ПЭГ, эпилепсия
19	F	10	PEX1 c.2097lnsT	PEX1 c.2528G> A	20	A, E, K	ПЭГ, эпилепсия

Таблица 2

Биохимические анализы в плазме и моче пациентов с ZSD, получавших CA (группа 1: пациенты 1–15, группа 2: пациенты 16–19)

9035 CA 9035 CA 9035 CA 9035 CA 9035 CA0 9037 кислотный анализ 900
Подробные биохимические данные отдельных пациентов представлены в таблице, причем желчные кислоты представлены как сумма неконъюгированных и конъюгированных желчных кислот. Как показано на фиг., Уровни CA в плазме значительно увеличиваются во время приема добавок CA.Уровни DHCA и THCA значительно снизились после 4, 12 и 36 недель лечения CA по сравнению с исходным уровнем. Уровни в плазме FGF19, отрицательного регулятора экспрессии CYP7A1 , и C4, маркера активности фермента CYP7A1, соответственно повышались и снижались после 12 и 36 недель лечения СА. Как видно из таблицы, у некоторых пациентов (16–19) наблюдалось сильное повышение СА (100–250 мкмоль / л) в плазме после приема добавок СА. Кроме того, уровни DHCA и THCA у этих пациентов оставались заметно повышенными во время лечения CA.Уровни C ₂₉ -дикарбоновой кислоты оставались стабильными во время лечения у всех пациентов (данные не показаны).
a Коробчатые диаграммы Tuckey, показывающие влияние пероральной терапии холевой кислотой (CA) на концентрации CA в плазме, 3α, 7α, 12α-тригидроксихолестаноевую кислоту (THCA), 3α, 7α-дигидроксихолестаноевую кислоту (DHCA), фактор роста фибробластов 19 (FGF19) и 7α-гидрокси-4-холестен-3-он (C4) во всей когорте пациентов с ZSD ( n = 19). Обкатка была определена как 2,5 и 2 года до лечения.Нормативный диапазон CA составляет 0,1–4,7 мкмоль / л, а THCA <0,05–0,1 мкмоль / л. Уровни DHCA не определяются (<0,05 мкмоль / л) в контроле. Референсного диапазона для FGF19 и C4 у детей не существует. Статистический анализ проводился с помощью критерия суммы знаковых рангов согласованных пар Уилкоксона. * P <0,05; *** P <0,005; **** P <0,001. Сокращение: ns не имеет значения. b Коробчатые диаграммы Tuckey, показывающие влияние пероральной терапии холевой кислотой (CA) на концентрации CA в плазме, 3α, 7α, 12α-тригидроксихолестаноевую кислоту (THCA), 3α, 7α-дигидроксихолестаноевую кислоту (DHCA), фактор роста фибробластов 19 (FGF19) и 7α-гидрокси-4-холестен-3-он (C4) в подгруппах, определяемых исходными значениями жесткости печени.Обкатка была определена как 2,5 и 2 года до лечения. Нормативный диапазон CA составляет 0,1–4,7 мкмоль / л, а THCA <0,05–0,1 мкмоль / л. Уровни DHCA не определяются (<0,05 мкмоль / л) в контроле. Референсного диапазона для FGF19 и C4 у детей не существует. Статистический анализ проводился с помощью критерия суммы знаковых рангов согласованных пар Уилкоксона. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,005. Аббревиатура : нс не имеет значения
У четырех пациентов с высокими уровнями СА в плазме и постоянно повышенными уровнями C ₂₇-мобильных кислотных промежуточных звеньев показатели Фиброскана были ≥15.5 кПа, тогда как у всех остальных пациентов значения были ниже 15,5 кПа. Таким образом, мы разделили группу на две подгруппы в зависимости от степени жесткости печени, определенной с помощью анализа Fibroscan® до терапии (группа 1 Fibroscan <15,5 [ n = 15] и группа 2 Fibroscan ≥15,5 кПа [ n = 4] ) и выполнил апостериорный анализ. Как показано на рис. 4, повышение CA в плазме, а также снижение DHCA и THCA после добавления CA было значительным в группе 1, но не в группе 2.Также вызванные терапией изменения уровней FGF19 и C4 были значительными только в группе 1. Следует отметить, что уровни C4 в группе 2 уже были заметно низкими на исходном уровне. Высокие уровни общих КА в плазме, особенно во 2-й группе, состояли в основном из конъюгированных КА.
Выделение с мочой C ₂₇ -мобильных кислот, производных и желчных спиртов было замечено на исходном уровне у пациентов 6, 12, 14, 16-17 и 19. Сбор мочи у пациента 18 был невозможен. После 36 недель лечения. эти последние метаболиты не обнаруживались в моче всех исследованных пациентов.
Функциональные тесты печени
Медианные уровни АСТ, АЛТ и конъюгированного билирубина были нормальными в начале терапии и оставались неизменными во время приема добавок СА. При этом индивидуальные уровни у пациентов 1-й группы оставались стабильными (рис.). Хотя уровни трансаминаз в плазме и / или конъюгированного билирубина были увеличены до лечения у большинства пациентов в группе 2, все эти параметры дополнительно увеличились, хотя и незначительно, во время приема добавок СА (рис.).
Коробчатые диаграммы Tuckey, показывающие влияние пероральной терапии холевой кислотой (CA) на уровни аспартаттрансаминазы (AST), аланинтрансаминазы (ALT) и конъюгированного билирубина в плазме в подгруппах, определяемых исходными значениями жесткости печени. Обкатка была определена как 2,5 и 2 года до лечения. Референсный диапазон (обозначенный пунктирной линией на каждом графике) для AST составляет 0–45 Ед / л, АЛТ 0–40 Ед / л и конъюгированного билирубина 0–5 мкмоль / л. Статистический анализ проводился с помощью критерия суммы знаковых рангов согласованных пар Уилкоксона.Добавка CA не оказывала значительного влияния на эти параметры ни в одной из исследуемых временных точек после начала терапии.
Измерения Fibroscan
Значения жесткости печени Fibroscan® существенно не изменились ни в одной из групп в течение 36 недель лечения CA. Среднее значение до начала терапии составляло 7,9 кПа (диапазон 4,8–39,7) по сравнению со средним значением 6,6 кПа (диапазон 3,25–44,4) после 9 месяцев лечения (дополнительная таблица 1).
Дополнительные меры
Никаких изменений по сравнению с исходным уровнем не наблюдалось в концентрациях жирорастворимых витаминов (A, E и D), параметрах свертывания, уровнях холестерина и альбумина после 36 недель лечения КА.Уровни других пероксисомальных параметров, таких как очень длинноцепочечные жирные кислоты, пристановая, фитановая и пипеколиновая кислоты в плазме и плазмалогены в эритроцитах, не изменились. Никакой разницы в средней шкале SD для веса не наблюдалось (данные не показаны).
Обсуждение
CA, продаваемый как Cholbam® в Соединенных Штатах, был недавно одобрен FDA для лечения пациентов с ZSD в соответствии с «ваучером на приоритетное рассмотрение редких педиатрических заболеваний» (FDA 2015). До настоящего времени терапия КА не изучалась на большой группе пациентов с ЗСД.В этом исследовании мы сообщаем о результатах 9-месячного приема добавок СА в группе из 19 пациентов с ZSD и показываем, что CA можно использовать в подгруппе пациентов с ZSD без тяжелого заболевания печени. Однако следует отметить, что у пациентов с запущенным заболеванием печени пероральное лечение КА может быть вредным, так как наше исследование показало повышенные уровни трансаминаз в плазме, конъюгированного билирубина и заметно повышенные уровни СА в плазме без заметного влияния на синтез желчных кислот у этих пациентов. пациенты.
Поскольку подгруппа пациентов с ZSD с прогрессирующим заболеванием печени, по-видимому, по-разному реагировала на лечение CA, мы разделили когорту на две группы в зависимости от степени жесткости печени, измеренной с помощью Fibroscan®.Пациенты в группе 1 (пациенты 1–15) имели значения <15,5 кПа, а пациенты в группе 2 (пациенты 16–19) набрали ≥15 баллов. 5 кПа (15,5 кПа, как известно, коррелирует с мостовидным фиброзом и циррозом). В целом, пациенты в группе 1 хорошо ответили на лечение CA, со значительным снижением уровней промежуточных соединений C ₂₇-подвижной кислоты в плазме и моче и подавлением уровней C4 в плазме, хотя у некоторых пациентов DHCA и THCA оставались обнаруживаемыми в плазме. (пациенты 12, 13, 15). У четырех из 13 пациентов (31%) с повышенными уровнями DHCA / THCA на исходном уровне эти промежуточные соединения желчных кислот не определялись после 9 месяцев лечения CA.У пациентов с неопределяемыми промежуточными соединениями желчных кислот в плазме на исходном уровне о подавлении синтеза желчных кислот можно было судить только на основании уровней C4, которые показали усиление подавления в ходе вмешательства у двух из четырех пациентов (пациенты 2, 6). ).
Пациенты с циррозом печени (т.е. группа 2) показали заметное повышение уровней CA в плазме после лечения (до 250 мкмоль / л у пациента 17) и только небольшое снижение уровней C ₂₇ -bile в плазме. кислотные промежуточные продукты.Кроме того, повысились уровни ферментов печени и конъюгированного билирубина, что свидетельствует о повреждении печени. Следует отметить, что все пациенты в этой группе уже имели низкий уровень C4 на исходном уровне, что указывает на снижение синтеза желчной кислоты. Вероятно, это связано с высокими уровнями промежуточных соединений желчных кислот DHCA и THCA, которые, как известно, действуют как низкоаффинные лиганды FXR, вызывая подавление активности CYP7A1 и, соответственно, снижение синтеза желчных кислот (Nishimaki-Mogami et al 2004). Следует понимать, что в этих условиях Na + таурохолат, котранспортный полипептид (NTCP), переносчик желчных кислот, опосредующий захват желчных кислот в печени, также подавляется.Это способствует отсутствию ответа на КА у пациентов с циррозом печени. Поскольку уровни FGF19 у этих пациентов были нормальными, промежуточные соединения желчных кислот могут активировать FXR непосредственно в печени, а не обычным путем, активацией FGF19 в терминальной части подвздошной кишки. Это может быть связано с низким сродством DHCA и THCA. Концентрации, достигаемые в подвздошной кишке, могут быть слишком низкими для активации FXR (Nishimaki-Mogami et al 2004). После приема CA уровень C4 еще больше снизился до или ниже 1.0 нг / мл, параллельно со значительным увеличением концентрации FGF19. Это дополнительное подавление синтеза желчных кислот, вероятно, с участием передачи сигналов FGF19, отражается в наблюдаемом снижении промежуточных соединений C ₂₇-мобильной кислоты, хотя и незначительного. Несмотря на подавленный биосинтез желчных кислот у этих пациентов, как следует из низких уровней C4, промежуточные соединения желчных кислот DHCA и THCA все еще обнаруживались в плазме. Вероятно, это связано с циррозом печени у этих пациентов, что приводит к неадекватному оттоку желчи, утечке желчи и обратному транспорту желчных кислот и промежуточных продуктов из печени в плазму с помощью индуцированных холестазом мембранных транспортеров MRP3, MRP4 и OSTα / β в базолатеральная плазматическая мембрана гепатоцитов (Halilbasic et al, 2013).Эта гипотеза подтверждается заметным увеличением в плазме преимущественно конъюгированных желчных кислот, так как желчные кислоты конъюгированы в печени. Кроме того, следует отметить, что пациенты с низким уровнем промежуточных соединений желчных кислот имели высокие уровни C4 и низкие уровни FGF19 в плазме в отличие от пациентов с высокими уровнями DHCA и THCA (таблица).
Ранее сообщалось, что лечение комбинацией CA и CDCA снижает содержание промежуточных желчных кислот в моче и плазме у одного пациента с ZSD с тяжелым фенотипом.Кроме того, уровни ферментов печени в плазме снизились, скорость роста улучшилась, а степень стеатореи снизилась (Setchell et al 1992). Еще два пациента с ZSD получали лечение CDCA и / или урсодезоксихолевой кислотой (UDCA) с разными результатами по биохимическому исходу. Только лечение CDCA привело к снижению уровней THCA и DHCA в моче и плазме, но с увеличением общего уровня билирубина в сыворотке. Аналогичные результаты были получены при лечении УДХК, хотя и без увеличения трансаминаз в плазме и билирубина.Второй пациент лечился УДХК в сочетании с CDCA, что привело к снижению содержания промежуточных желчных кислот в плазме. Короткое однократное лечение CDCA привело к увеличению ALT, которое восстановилось после начала приема урсодезоксихолевой кислоты (Maeda et al, 2002). Кроме того, сообщалось, что уровни ферментов печени в плазме улучшались у пациентов с дефектом синтеза желчных кислот (Gonzales et al 2009). В нашем исследовании мы также наблюдали снижение уровней DHCA и THCA в моче и плазме, но не наблюдалось положительного влияния на ферменты печени.Следует отметить, что некоторые пациенты, особенно в группе 1, уже имели нормальные уровни AST, ALT и конъюгированного билирубина на исходном уровне. У пациентов с повышенным уровнем АСТ и / или АЛТ на исходном уровне (пациенты 1, 11, 13-19) эти уровни оставались неизменными или повышались после лечения КА, особенно у пациентов с запущенным заболеванием печени.
Ограничения нашего исследования заключаются в том, что степень стеатореи и влияние терапии КА на этот параметр не измерялось, небольшой размер когорты, особенно количество пациентов в группе 2, и отсутствие группы плацебо в этой группе. испытание.Несмотря на небольшое количество пациентов в группе 2, корреляция между прогрессирующим заболеванием печени и повышением уровней АЛТ, АСТ и конъюгированного билирубина в плазме после лечения холевой кислотой у этих пациентов явно прослеживается. Это подтверждается выводом о том, что уровни конъюгированного билирубина, АЛТ и АСТ вернулись к исходному уровню после прекращения приема холевой кислоты у одного из этих четырех пациентов (пациент 16). Кроме того, измерение жесткости печени Fibroscan® — это точный метод диагностики цирроза печени, который мы использовали для определения наших групп пациентов, но, вероятно, он менее полезен для различения различных стадий фиброза печени и, следовательно, для оценки терапевтического эффекта CA (Chang et al. 2016).
В заключение, наши результаты показывают, что пероральные добавки СА можно назначать пациентам с ZSD без прогрессирующего заболевания печени, что приводит, по крайней мере, к частичному подавлению синтеза желчных кислот у большинства пациентов. Поскольку наше исследование показывает, что КА может быть потенциально опасным для пациентов с запущенным заболеванием печени, мы не рекомендуем лечить эту подгруппу пациентов с ЗСД с КА. Наличие запущенного заболевания печени, такого как цирроз, можно определить с помощью измерений Fibroscan®, но также можно диагностировать пациентов с помощью стандартного ультразвукового исследования или путем выполнения биопсии печени.У пациентов с более мягким фенотипом печени период лечения в 9 месяцев был слишком коротким, чтобы можно было сделать вывод о том, влияет ли CA на клиническое прогрессирование у пациентов с ZSD, поскольку это медленно прогрессирующее заболевание. В этом исследовании мы выбрали лечение CA, а не UDCA, потому что CA является лучшим лигандом FXR, чем UDCA и CA. Добавка CA может помочь уменьшить дефицит питательных веществ у пациентов с ZSD за счет детергентного воздействия на кишечник. Тем не менее, наше исследование показывает, что лечение пациентов с ZSD с помощью КА является сложным, и его эффекты могут быть не только полезными.У холестатических пациентов токсические эффекты лечения КА преобладают над возможными благоприятными эффектами. У таких пациентов лечение УДХК может быть лучшим выбором. Необходимы дополнительные долгосрочные исследования для оценки преимуществ терапии КА в отношении соответствующих клинических конечных точек (например, влияние на рост, заболевания печени, неврологические нарушения) и долгосрочной безопасности у пациентов с ZSD.
Дополнительные электронные материалы
Ниже приводится ссылка на дополнительные электронные материалы.
ESM 1 ^{(4.7M, tif)}
(TIF 4878 kb)
ESM 2 ^{(16K, docx)}
(DOCX 16 kb)
Благодарности
Авторы благодарят пациентов и их семьи за сотрудничество. Работа поддержана грантом Metakids, Hersenstichting, Axel Foundation и Stichting Steun Emma Kinderziekenhuis AMC, Нидерланды. Кроме того, мы благодарим проф. доктор А.К. Гроен из Академического медицинского центра в Амстердаме за полезные обсуждения.
Аббревиатуры

Лечение CA	0 недель						4 недели			12 недель						36 недель
Пациент №	CA	DHCA	FGF19	C4	Моча #	CA	DHCA	THCA	CA	DHCA	THCA	FGF19	THCA 9035 CA 9035 CA	FGF19	9035 CA	C4	Моча #
1	0.5	0,2	0,6	0,999	30,6	присутствует	3,0	<0,05	0,1	3,5	0,3	0,1	0,545	<1,0	-й	2,2	0,3	0,1	0,444	4.3	-й
2	0,5	<0,05	<0,05	0,413	24,3	nd	6,2	<0,05	<0,05	1,0	<0,05	<0,05	0,193	11,6	-й	2,6	<0.05	<0,05	0,507	12,7	-й
3	2,8	0,2	0,4	0,242	12,3	nd	10,0	0,1	0,2	2,2	<0,05	<0,05			-й	1.6	0,1	<0,05	0,286	7,2	-й
4	0,8	1,6	0,9	0,055	19,1	nd	7,7	0,4	<0,05	3,7	0,5	6 0,1	0,5	6 0,1	0,5	6 0,1	0,5 nd	2,7	<0.05	0,1	1,166	<1,0	nd
5	0,1	0,3	0,1	0,186	27,4		3,4	<0,0800 0,4	<0,05	<0,05	0,601	<1,9	nd	0,2	<0,05	<0,05	0,387	4,4	nd
3	<0,05	<0,05	0,134	23,5	присутствует	3,5	<0,05	<0,05	4,0	<0,05	<0,05	1,284	1,0	0,8	<0,05	<0,05	0,356	<1,0	nd
7	0,6	<0,05	<0,05	0,449	28.7	и	2,4	<0,05	<0,05	1,0	<0,05	<0,05	0,248	10,0		1,0	<0,05	<0,05	<0,0	17,5	nd
8	1,0	0,2	0,4	0,475	18,9	nd	2,4	<0,05	<0,05	9.1	<0,05	0,3	0,799	1,6	nd	2,6	0,2	0,1	0,885	<1,0	nd
9	0,4 0,1	0,100	12,1	nd	8,3	<0,05	<0,05	5,5	<0,05	<0,05	0,914	1,2	nd	1.9	<0,05	0,1	0,453	1,4	nd
10	0,1	<0,05	<0,05			nd	0,05	1,1	<0,05	<0,05	0,847	11,7	nd	1,3	<0,05	<0,05	0,208	7,7	11	11	0,2	<0,05	0,406	29,2	nd	1,6	<0,05	<0,05	4,0	<0,05	0,1	0,686	14,2	<0,05	0,1	0,328	15,2	nd
12	1,4	2,8	7,2	0,181	11,3	присутствует	15.1	1,0	2,4	21,6	1,3	1,4	0,319	1,7	nd	39,9	1,3	2,5	0,573	1,2	nd
13	0,6	0,5	2.0	0,142	<1,0	nd	7,2	0,4	0,1	10,1	0,4	<0,05	0,328	<1,0	nd	13,3	0,3	0,4	0,353	<1,0	nd
14	0.5	4,1	0,4	0,114	34,3	присутствует	11,3	0,5	0,2	15,1	<0,05	<0,05	0,817	<1,0	nd	9,9	<0,05	0,1	0,422	<1.0	nd
15	3,3	4,4	1,7	0,177	8,4	nd	12,2	1,1	0,7	9,6	1,2	0,6	0,2	13,0	0,8	0,8	0,240	3,6	nd
16	3.3	6,0	10,6	0,359	2,4	присутствует	174,8	3,3	10,0	69,4	3,2	16,7	0,516	<1,0	настоящее время				исключено
17	47,4	6.0	18,5	0,254	1,7	присутствует	116,6	1,0	1,5	123,2	1,6	1,7	0,483	<1,0	nd	251,8	0,815	<1,0	nd
18	11,0	10,8	32,4	0,423	1,8	без мочи	92.4	3,8	8,9	175,8	3,9	9,0	1,053	<1,0	без мочи	154,2	4,9	10,1	1,083	6 нет	19	2,4	15,5	12,0	0,094	1,1	присутствует	60,0	9,3	6,2	20,6	8.3	3,6	0,460	<1,0	настоящее время	100,2	10,5	11,5	0,374	<1,0	nd
Медиана	0,8	0,3	0,4	0,2	15,6		7.7	0,1	0,1	5,5	0,0	0,1	0,6	1,1		2,7	0,1	0,1	0,4	1,3

16 Холевая кислота
71
Холевая кислота 67
5A гидроксилаза
FDA
UDK

ALT	Аланинтрансаминаза
AST	Аспартаттрансаминаза
CA	CA
C4	7α-гидрокси-4-холестен-3-он
DHCA	3α, 7α-дигидроксихолестановая кислота
FDA	Пищевые продукты и лекарственные средства	Фактор роста фибробластов 19
FXR	Фарнезоидный X рецептор
SD	Стандартное отклонение
THCA	3α, 7α, 12α, 12α-тригидроксихолестановая кислота
ZSD	Zellweger Spectrum di sorder

Соответствие этическим нормам

Исследование было одобрено этическим комитетом Академического медицинского центра (AMC), Амстердам, Нидерланды, и проводилось в период с 2011 по 2014 год.Все процедуры соответствовали этическим стандартам ответственного комитета по экспериментам на людях (институциональному и национальному) и Хельсинкской декларации 1975 года, пересмотренной в 2000 году.

Конфликт интересов

Кевин Берендсе, Femke CC Klouwer, Bart GP Кут, Эллес М. Кемпер, Саша Фердинандусс, Киран В.К. Келфат, Мартин Леничек, Франк Г. Шаап, Ханс Р. Уотерхэм, Фредерик Ваз, Марк Энгелен, Питер Л.М. Янсен, Рональд Дж. А. Wanders и Bwee Tien Poll-The заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Финансирование

Эта работа была поддержана грантами Metakids, Hersenstichting, Axel Foundation и Stichting Steun Emma Kinderziekenhuis AMC, Нидерланды

Информированное согласие

Индивидуальное письменное информированное согласие было получено от пациентов и / или родителей пациентов.

Сноски

Кевин Берендсе, Фемке К. К. Клоуэр и Барт Г. П. Кут внесли равный вклад в эту работу.

Каталожные номера

Axelson M, Aly A, Sjövall J.Уровни 7α-гидрокси-4-холестен-3-она в плазме отражают скорость синтеза желчной кислоты у человека. FEBS Lett. 1988. 239: 324–328. DOI: 10.1016 / 0014-5793 (88) 80944-X. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Блау Н., Дюран М., Бласковикс М., Гибсон К. Руководство для врача по лабораторной диагностике метаболических заболеваний. 2. Берлин: Спрингер; 2003. [Google Scholar]
Bootsma AH, Overmars H, van Rooij A, et al. Быстрый анализ конъюгированных желчных кислот в плазме с использованием тандемной масс-спектрометрии с электрораспылением: приложение для селективного скрининга пероксисомальных нарушений.J Inherit Metab Dis. 1999; 22: 307–310. DOI: 10.1023 / А: 1005543802724. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Брендель К., Шунджанс К., Ботругно О.А. и др. Небольшой гетеродимерный партнер взаимодействует с альфа-рецептором X печени и подавляет его транскрипционную активность. Мол Эндокринол. 2002; 16: 2065–76. DOI: 10.1210 / me.2001-0194. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Chang PE, Goh GB-B, Ngu JH, et al. Клинические применения, ограничения и будущая роль транзиторной эластографии в лечении заболеваний печени.Мир J Gastrointest Pharmacol Ther. 2016; 7: 91–106. DOI: 10.4292 / wjgpt.v7.i1.91. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Chiang JYL. Желчные кислоты: регуляция синтеза. J Lipid Res. 2009; 50: 1955–1966. DOI: 10.1194 / мл. R0-JLR200. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Dacremont G, Vincent G. Анализ плазмалогенов и полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) в эритроцитах и фибробластах. J Inherit Metab Dis. 1995; 18: 84–89. DOI: 10.1007 / BF00711431.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Де Лединген В., Ле Бейл Б., Ребуису Л. и др. Измерение жесткости печени у детей с помощью FibroScan: технико-экономическое обоснование и сравнение с Fibrotest, индекс соотношения аспартаттрансаминазы и тромбоцитов и биопсия печени. J Педиатр Гастроэнтерол Нутр. 2007. 45: 443–450. DOI: 10.1097 / MPG.0b013e31812e56ff. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
FDA (2015) FDA одобрило использование препарата Cholbam для лечения редких нарушений синтеза желчных кислот. http://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm438572.htm (дата обращения: 1 февраля 2016 г.)
Ferdinandusse S, Houten SM. Биосинтез пероксисом и желчных кислот. Biochim Biophys Acta. 2006; 1763: 1427–40. DOI: 10.1016 / j.bbamcr.2006.09.001. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Ferdinandusse S, Denis S, Dacremont G, Wanders RJA. Токсичность промежуточных продуктов пероксисомальной С27-желчной кислоты. Mol Genet Metab. 2009; 96: 121–8. DOI: 10.1016 / j.ymgme.2008.11.165. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Fischer S, Beuers U, Spengler U, et al. Уровни желчных кислот в печени при терминальной стадии хронической холестатической болезни печени.Clin Chim Acta. 1996. 251: 173–186. DOI: 10.1016 / 0009-8981 (96) 06305-X. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Гонсалес Э., Герхардт М.Ф., Фабр М. и др. Пероральная холевая кислота при наследственных дефектах первичного синтеза желчных кислот: безопасная и эффективная долгосрочная терапия. Гастроэнтерология. 2009; 137: 1310–1320.e1–3. DOI: 10.1053 / j.gastro.2009.07.043. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Гудвин Б., Джонс С.А., Прайс Р.Р. и др. Регуляторный каскад ядерных рецепторов FXR, SHP-1 и LRH-1 подавляет биосинтез желчных кислот.Mol Cell. 2000. 6: 517–526. DOI: 10.1016 / S1097-2765 (00) 00051-4. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Gould S, Raymond G, Valle D (2001) Диосорды биогенеза пероксисом. В кн .: Метаболические и молекулярные основы наследственных заболеваний, 8 изд. McGraw-Hill, pp 3181–218
Halilbasic E, Claudel T, Trauner M. Транспортеры желчных кислот и регуляторные ядерные рецепторы в печени и за ее пределами. J Hepatol. 2013. 58: 155–68. DOI: 10.1016 / j.jhep.2012.08.002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Hofmann AF.Желчная секреция и экскреция при здоровье и болезни: современные концепции. Ann Hepatol. 2007; 6: 15–27. [PubMed] [Google Scholar]
Кин М.Х., Овермарс Х., Викандер TM и др. Лечение желчной кислотой изменяет заболевание печени и транспорт желчных кислот у мышей Zellweger с дефицитом пероксисом PEX2. Гепатология. 2007. 45: 982–97. DOI: 10.1002 / hep.21532. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Керр Т.А., Саеки С., Шнайдер М. и др. Потеря ядерного рецептора SHP нарушает, но не устраняет регуляцию синтеза желчных кислот с отрицательной обратной связью.Dev Cell. 2002; 2: 713–720. DOI: 10.1016 / S1534-5807 (02) 00154-5. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Klouwer FCC, Berendse K, Ferdinandusse S, et al. Расстройства спектра Зеллвегера: клинический обзор и подход к лечению. Orphanet J Rare Dis. 2015; 10: 151. DOI: 10.1186 / s13023-015-0368-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Леничек М., Юклова М., Зеленка Ю. и др. Улучшенный анализ ВЭЖХ сывороточного 7альфа-гидроксихолест-4-ен-3-она, маркера мальабсорбции желчных кислот.Clin Chem. 2008; 54: 1087–8. DOI: 10.1373 / Clinchem.2007.100107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Маеда К., Кимура А., Ямато Й. и др. (2002) Пероральное лечение желчными кислотами у двух японских пациентов с синдромом Зеллвегера. J Pediatr Gastroenterol Nutr 227–230 [PubMed]
Nishimaki-Mogami T, Une M, Fujino T, et al. Идентификация промежуточных продуктов пути синтеза желчных кислот в качестве лигандов для рецептора фарнезоида X. J Lipid Res. 2004; 45: 1538–1545. DOI: 10.1194 / мл. M400102-JLR200.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Pircher PC, Kitto JL, Petrowski ML, et al. Рецептор фарнезоида X регулирует конъюгацию желчных кислот и аминокислот. J Biol Chem. 2003. 278: 27703–11. DOI: 10.1074 / jbc.M302128200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Rashed MS, Al-Ahaidib LY, Aboul-Enein HY, et al. Определение L-пипеколиновой кислоты в плазме с использованием тандемной масс-спектрометрии с хиральной жидкостной хроматографией и электрораспылением. Clin Chem. 2001; 47: 2124–2130. [PubMed] [Google Scholar]
Russell DW.Регуляция ферментов и генетика синтеза желчных кислот. Анну Рев Биохим. 2003. 72: 137–174. DOI: 10.1146 / annurev.biochem.72.121801.161712. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Шаап Ф.Г., Траунер М., Янсен PLM. Рецепторы желчных кислот как мишени для разработки лекарств. Нат Рев Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 11: 55–67. DOI: 10.1038 / nrgastro.2013.151. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Schreuder TCMA, Marsman HA, Lenicek M, et al. Печеночный ответ на FGF19 нарушен у пациентов с неалкогольной жировой болезнью печени и инсулинорезистентностью.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2010; 298: G440–5. DOI: 10.1152 / ajpgi.00322.2009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Setchell KDR, Bragetti P, Zimmer-Nechemias L et al (1992) Пероральное лечение желчной кислотой и пациент с синдромом Зеллвегера. Гепатология 198–207 [PubMed]
Solaas K, Ulvestad A, Soreide O, Kase BF. Субклеточная организация амидирования желчных кислот в печени человека: ключевой вопрос в регуляции биосинтеза солей желчных кислот. J Lipid Res. 2000; 41: 1154–1162. [PubMed] [Google Scholar]
Стигер Б., Чжан Дж., О’Нил Б. и др.Дифференциальное взаимодействие желчных кислот пациентов с врожденными нарушениями синтеза желчных кислот с гепатоцеллюлярными переносчиками желчных кислот. Eur J Biochem. 1997. 244: 39–44. DOI: 10.1111 / j.1432-1033.1997.00039.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Talma H, Schonbeck Y, Bakker B et al (2010) Groeidiagrammen 2010, TNO Leiden. http://www.tno.nl/nl/aandachtsgebieden/gezond-leven/prevention-work-health/gezond-en-veilig-opgroeien/groeidiagrammen-in-pdf-formaat/ (дата обращения: 1 февраля 2016 г.)
Van Элдере Дж. Р., Парментье Г. Г., Эйссен Г. Дж. И др.Желчные кислоты при пероксисомальных расстройствах. Eur J Clin Invest. 1987. 17: 386–390. DOI: 10.1111 / j.1365-2362.1987.tb01131.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Врекен П., ван Линт А.Е., Бутсма А. и др. Быстрый анализ разбавления стабильными изотопами жирных кислот с очень длинной цепью, пристановой кислоты и фитановой кислоты с использованием газовой хроматографии и масс-спектрометрии с электронным ударом. J Chromatogr B Biomed Sci Appl. 1998; 713: 281–287. DOI: 10.1016 / S0378-4347 (98) 00186-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Wanders RJA, Ferdinandusse S.Пероксисомы, пероксисомальные заболевания и гепатотоксичность, вызванная пероксисомальными метаболитами. Curr Drug Metab. 2012; 13 (10): 1401–11. DOI: 10,2174 / 138
2803762747. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Wanders RJA, Waterham HR. Возвращение к биохимии пероксисом млекопитающих. Анну Рев Биохим. 2006. 75: 295–332. DOI: 10.1146 / annurev.biochem.74.082803.133329. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Цолльнер Г., Вагнер М., Мустафа Т. и др. Скоординированная индукция детоксикации желчных кислот и альтернативная элиминация у мышей: роль регулируемого FXR транспортера органических растворенных веществ альфа / бета в адаптивном ответе на желчные кислоты.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2006; 290: G923–32. DOI: 10.1152 / ajpgi.00490.2005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

(PDF) Касторовое масло как вторичный источник углерода для производства софоролипидов с использованием Starmerella Bombicola NRRLY-17069

Производство софоролипидов с использованием касторового масла

J. Oleo Sci. 64, (3) 315-323 (2015)

317

2 ℃ и 200 об / мин без корректировки pH для получения SL.

Та же процедура и среда использовались в 5.Бак с мешалкой 0 л

биореактор, BIOSTAT Bplus (Sartorius, Германия), с рабочим объемом 2,0

л. Ферментер был оборудован датчиком pH

(тип InPro 3030; Mettler Toledo и датчик DO

(Гамильтон, Швейцария) и ферментер (UniVes-

sels), имеющий отношение высоты к диаметру 2: 1, с четырьмя перегородками

с шестью плоскими лопастными рабочими колесами (Два) диаметром 64

мм, на расстоянии 9,0 см друг от друга для правильного перемешивания

.Во время ферментации pH, DO и аэрация

(газовый поток) контролировались в режиме онлайн, а софоролипид и вторичный глицерин повторно

анализировались в автономном режиме.

2.4 Выделение SL

Процедура выделения олеиновой кислоты была подробно объяснена в

Bajaj et al, нашей последней опубликованной статье14）

. Чтобы удалить излишки касторового масла

, использовался гексан: хлороформ (1: 1)

для (2-3 раза), потому что касторовое масло нерастворимо в гексане.

в отдельности, отличается от удаления олеиновой кислоты.Оставшаяся сумма составила

в пересчете на количество SL. Остаточное масло было проанализировано

на состав жирных кислот согласно A.O.C.S. Метод Ce-1-

6215）

. Неочищенную смесь софоролипидов первоначально анализировали антроновым методом на основе количественного высвобождения

глюкозы кислотным гидролизом софорозной составляющей

софоролипидов16）

2.5 Оценка биомассы и глицерина

Ферментационный бульон экстрагировали этилацетатом

для удаления остаточного масла и SL через 192 часа ферментации.Для определения биомассы водную фазу

центрифугировали при 6600 g при 25 ± 2 ℃ для отделения клеток от среды

. Супернатант после центрифугирования использовали для определения содержания глицерина

в оставшейся среде с использованием колориметрического метода

ric, описанного в 17）

. Масса сухих клеток была определена

после повторного суспендирования клеток в небольшом количестве воды и сушки

до постоянной массы при 65 ° С.

2.6 Оценка, идентификация и характеристика SL

Оценка SL проводилась экстракцией ферментированного бульона

этилацетатом.Этот экстракт сушили в вакууме

при 40 ° С для удаления растворителя. Остаток был

, затем дважды промыт гексаном для удаления остаточного масла

. Общий выход этих частично очищенных SL составил

, измеренный гравиметрическим методом14）

, антроном и методом ВЭЖХ

2.6.1 Тонкослойная хроматография (ТСХ)

Образование различных компонентов исследовали методом ТСХ

на силикагеле (Производитель: Merck, Дармштадт, Германия; кремнезем

толщиной слоя 2 мм） в качестве неподвижной фазы.Перемещение софоролипидов

происходило от базовой линии растворителя к фронту растворителя

с использованием хлороформа / метанола / воды (65: 15: 2, об. /

об. / Об.) В качестве подвижной фазы. Смещения софоролипидов

визуализировали путем распыления или погружения пластинки для ТСХ в

метанол / h3SO4

(50:50, об. / Об.) Реагента и нагревания при 100 ℃

в течение 20 минут в печи.

2.6.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

Неочищенные софоролипиды, полученные на касторовом масле и олеиновой кислоте

, были разделены и количественно определены с помощью ВЭЖХ (модель

HITACHI L-2350) с использованием УФ-детектора с переменной длиной волны

207 нм .Колонка — Zorbax SB C18, 2 × 100 мм, 1,8 мкм,

Подвижная фаза （A） h3O 0,1 муравьиная кислота, （B） 90 ACN ＋

10 h3O ＋ 0,1 ％ муравьиная кислота. Первоначально A — 90 ％ и B —

10 пропускали через колонку в течение 5 минут, а затем состав подвижной фазы

был изменен на A — 10 и B —

90 ％ через 60 минут и выдерживался в течение 5 минут.

2.6.3 Инфракрасное преобразование Фурье (FTIR) и 1H и 13C

Ядерно-магнитно-резонансная спектроскопия (1H и

13C ЯМР)

Структурное распознавание и характеризация ролипидов sopho-

в инфракрасном диапазоне были выполнены с помощью спектроскопии с преобразованием Фурье. —

копия (FTIR) с фотометром Perkin-Elmer Spectrum-One spectro-

, США, работала в режиме диффузного отражения

при разрешении 4 см.Кроме того, структура софоролип-

ids была подтверждена с помощью ЯМР 1H и 13C, полученного с помощью спектрометра

Varian Inova 500 (модель 500 МГц,

Varian, США), зарегистрированного по химическим сдвигам относительно тетраметилсилана

(ТМС) в виде внутренний стандарт

в CDCl3 в качестве растворителя. Анализ ЯМР 1H и 13C был завершен в Национальном центре высокопольного ЯМР, TIFR, Мумбаи,

, Индия.

2.6.4 Жидкостная хроматография – масс-спектрометр (ЖХ –

,
MS)
Структуры софоролипидов также были идентифицированы с помощью тандемных масс-спектров положительного ESI
(MS Q-TOF LC – MS Agilent
6550 A), предоставленных Sophisticated Analytical Instrument
Объект (SAIF), ИИТ Бомбей, Мумбаи, Индия.
2.6.5 Газовая хроматография (ГХ)
Присутствие рицинолевых жирных кислот в софоролипидах
было подтверждено ГХ-анализом, и результаты были сравнены
с метиловым эфиром касторового масла методом ГХ.Образцы подвергали гидролизу и этерификации
путем добавления 0,4 мл 20 мМ моногидрата ацетата меди
в метаноле и 2 мл 0,5 N HCl в
Hydranal. Реакционной смеси давали постоять в течение
указанное время (2-3 часа) при 37 ± 2 ° C для превращения жирных кислот
в метиловые эфиры жирных кислот (FAME). Реакцию
останавливали добавлением 3-4 мл воды. Экстракцию смеси
FAME проводили трижды с использованием 2 мл гексана и
гексановый слой использовали для газовой хроматографии (ГХ) анализ
sis18
.Все соединения были идентифицированы путем сравнения времени удерживания
,
и известных стандартов с использованием
Agilent GC, оборудованного капиллярной колонкой DB-23 (60 м ×
, внутренний диаметр 0,25 мм × 0,25 мкфут, Agilent). Инжектор и устройство FID
поддерживали при 260 ℃, а термостат колонки был
, запрограммированным на повышение от 140 до 240 ℃ при 4 ℃ / мин.
Коэффициент разделения был доведен до 5: 1.