Мл ком: Комплект простыня и наволочки Sofi de marko Ком-Мл-160х200х30, 200×160 см, сатин

Содержание

Би-Ком 6 ампул по 2 мл — Русская Аптека в Египте

Торговое название:

Би-Ком (B-Com)

Состав:

Каждая ампула 2 мл содержит:

Вспомогательные компоненты:

Фенол, натрия хлорид, вода для инъекций.

Свойства:

Комбинированный поливитаминный препарат. Действие препарата определяется свойствами витаминов, входящих в его состав. Нейротропные витамины группы В оказывают благоприятное воздействие при воспалительных и дегенеративных заболеваниях нервной системы и опорно-двигательного аппарата.Тиамин (витамин B1) играет ключевую роль в процессах углеводного обмена, имеющих решающее значение в обменных процессах нервной ткани (участвует в проведении нервного импульса), а также в цикле Кребса с последующим участием в синтезе тиаминпирофосфата (ТПФ) и аденозинтрифосфата (АТФ).Пиридоксин (витамин В6) обладает жизненно важным влиянием на обмен белков, углеводов и жиров, необходим для нормального кроветворения, функционирования центральной и периферической нервной системы.

Обеспечивает синаптическую передачу, процессы торможения в ЦНС, участвует в транспорте сфингозина, входящего в состав оболочки нерва, участвует в синтезе катехоламинов. Физиологической функцией обоих витаминов (В1 и В6) является потенцирование действия друг друга, проявляющееся в положительном влиянии на нервную, нейромышечную и сердечно-сосудистую системы.

Показания:

В составе комплексной терапии:

-моно- и полиневропатий различного генеза;

-дорсалгии;

-плексопатий;

-люмбоишиалгии;

-корешкового синдрома, вызванного дегенеративными изменениями позвоночника;

-гипо- и авитаминоз B2, гемералопия, конъюнктивит, кератит, ирит, язва роговицы, катаракта, длительно незаживающие раны и язвы, общие нарушения питания, лучевая болезнь, астения, нарушения функции кишечника, гепатит;

— в комплексной терапии кожных заболеваний (при зудящих дерматозах, нейродермитах, хронической экземе, фотодерматозах).

Способ применения и дозы:

При выраженном болевом синдроме лечение целесообразно начинать с в/м введения (глубоко) по 2 мл ежедневно в течение 5-10 дней с переходом в дальнейшем либо на прием препарата внутрь, либо на более редкие инъекции (2-3 раза/нед. в течение 2-3 нед.) с возможным продолжением терапии лекарственной формой для приема внутрь. Необходим еженедельный контроль терапии со стороны врача. Продолжительность лечения определяется врачом индивидуально в зависимости от выраженности симптомов заболевания.

Противопоказания:

-повышенная чувствительность к компонентам препарата;

-острая сердечная недостаточность;-хроническая сердечная недостаточность в стадии декомпенсации;

-беременность;

-период грудного вскармливания;

-возраст до 18 лет (эффективность и безопасность не установлены).

Меры предосторожности:

Препарат необходимо вводить только в/м, не допуская его попадания в сосудистое русло. При случайном в/в введении пациент должен находиться под наблюдением врача или госпитализирован в зависимости от тяжести симптомов. Препарат может вызывать невропатии при длительности применения свыше 6 месяцев.

Побочные эффекты:

Со стороны нервной системы: частота неизвестна — головокружение, спутанность сознания.

Со стороны сердечно-сосудистой системы: очень редко — тахикардия; частота неизвестна — брадикардия, аритмия.

Со стороны ЖКТ: частота неизвестна — рвота.

Со стороны кожи и подкожных тканей: очень редко — повышенное потоотделение, акне, зуд, крапивница.

Со стороны костно-мышечной системы: частота неизвестна — судороги.

Прочие: частота неизвестна — может возникнуть раздражение в месте введения препарата; системные реакции возможны при быстром введении или при передозировке.

Способ хранения:

Хранить при температуре не выше 25 градусов.

Упаковка:

Картонная коробка содержит 6 ампул по 2 мл, бумажную инструкцию.

GTA 26 Аккумуляторный сучкорез в ком.AS 2, AL 1, Multioil 50 мл, сумка для транспортировки в Хабаровске | Интертул

Код товара:
136071

Артикул производителя:
GA01-011-6918

15 990,00 pуб.

Добавить в корзину

Хотите приобрести дешевле?

Предварительная дата выдачи: сб. — 13 нояб.

←
Ноябрь 2021
→
Пн Вт Ср Чт Пт Сб Вс
1234567
891011121314
15161718192021
22232425262728
293012345

Добавить к сравнениюУдалить из сравнения

Добавить в закладкиУдалить из закладок

Группа компаний STIHL является разработчиком, производителем и продавцом моторизованных инструментов для лесного, сельского хозяйства и строительства. Компания STIHL была основана в 1926 году в городе Вайблинген-Нойштадт (Германия). 

 

Внимание! Оплата товаров торговой марки STIHL заказанные в интернет-магазине возможна только в пункте выдачи.

  • Описание

    STIHL GTA 26 маленькая универсальная ручная пила для сада или дома. Очень практично для резки веток и досок. Прорезиненная ручка безопасности, индикатор заряда. Скорость цепи 8 м/с. Длина шины 10 см, регулировка цепи без использования инструментов также имеется индикатор заряда аккумулятора. Очень тихая работа. В практичной сумке вы найдете резак, аккумулятор, зарядное устройство и масло для смазки цепи.

    Аккумуляторный резак STIHL GTA 26, очень практичен для домашнего хозяйства. Пильная цепь 1/3 «PM3 обеспечивает высокую производительность. В стандартный комплект входят: пила GTA 26 с гибким защитным кожухом, литий-ионный аккумулятор AS 2, стандартное зарядное устройство AL 1, пильная цепь 1/4 «-PM3, масло Multioil Bio 50 мл, транспортная сумка с петельками для настенного монтажа.

    Комплект:

    1 х литий-ионный аккумулятор AS 2, 28 Втч, 10,8 в
    1 х стандартное зарядное устройство AL 1, Время зарядки аккумулятора 55 мин/70 мин (80% / 100 %)
    1 х Light шина направляющая 10 см
    1 х 1/4 » Pm3 пильная цепь 10 см
    1 х Multioil био, 50 мл
    1 х сумка для переноски черно / оранжевая, подходит для настенного монтажа.

    Технические данные:

    Номинальное напряжение11 V
    Вес 1)1,2 kg
    Уровень звукового давления 2)77 dB(A)
    Значение вибрации справа 3)2,8 m/s²
    Значение вибрации слева 3)2,9 m/s²
    Длина рельса10 cm
    Разделение Цепи1/4″ P
    Мощность резания в ломтики 4)40

    1) без батареи, с режущим набором
    2) значение K в соответствии с RL 2006/42 / EC = 2,0 дБ (A)
    3) значение K в соответствии с RL 2006/42 / EC = 2 м / с2
    4) ель 10x10cm, с AS2

    Оснащение:

    • Эффективная пильная цепь. Прочная пильная цепь STIHL Picco Micro 3 и высокая скорость цепи 8 м / с гарантируют быстрое выполнение работ и чистую резку.
    • Светодиодный индикатор уровня заряда. Благодаря легко читаемому светодиодному индикатору уровня заряда, пользователь всегда информируется одним нажатием кнопки об оставшейся емкости батареи.
    • Литий-ионный аккумулятор AS 2. Легкая и мощная батарея AS 2 10,8 В обеспечивает длительный срок службы батареи и максимальную производительность.
    • Замена цепи без инструмента. Благодаря крышке звездочки с барашковой гайкой замена цепи совершенно не вызывает затруднений. Инструмент не нужен. Ручное натяжение цепи не требуется.
    • Гибкая защитная крышка. В целях безопасности цепь закрыта асимметричной защитной крышкой, которую можно повернуть на 90 °
    • Практичная сумка для транспортировки. Для удобства переноски и безопасного хранения в комплект входит настенная сумка для переноски. Аккумулятор и зарядное устройство входят в комплект.
    Питание от аккумулятора
  • Отзывы

    Пока нет ни одного отзыва.

    + Добавить отзыв

  • Доставка

Внимание! Фирма-производитель может по своему усмотрению изменять комплектацию, конструкцию и дизайн товара. Поэтому, чтобы не возникло недоразумений, перед покупкой советуем уточнять у менеджера нашей компании информацию о комплектации и технических характеристиках конкретной модели.

Цена на сайте действует только при оформлении заказа через интернет-магазин и может отличаться от цены в магазинах.

3XA Diesel 325 мл присадка в дизельное топливо ком WYNNS W76459

 

Информация для покупателей

ВНИМАНИЕ!Обязательно ношение масок! Минимальная сумма заказа для соблюдения срока поставки 24 часа и заказ 3 часа 1000руб Аналоги и замены на сайте используются только в виде справочной информации! Просьба перепроверять их с помощью оригинальных программ. При самостоятельном подборе детали Вы несете ответственность за ее применяемость к вашему автомобилю.

Информация для покупателей

Минимальная сумма заказа для соблюдения срока поставки 24 часа и заказ 3 часа 1000руб В связи с обострившейся ситуацией с COVID-19 ,возможна задержка поставки деталей в срок указанный на сайте! Просим вас отнестись с пониманием!

Почему WYNNS W76459 с номером W76459 фирмы WYNNS покупают в магазине Автозапчасти52.рф :

  • Только надежные поставщики 

Наш магазин запчастей является поставщиком WYNNS (артикул W76459) на территории Нижнего Новгорода и региона, поэтому у нас лучшие цена на 3XA Diesel 325 мл присадка в дизельное топливо ком производства WYNNS.

  • Гарантия качества

На все запчасти бренда WYNNS предоставляется гаратния.

  • Важно перед заказом знать

Каждый номер W76459 имеет свою применимость, поэтому перед заказом убедитесь что данная деталь 3XA Diesel 325 мл присадка в дизельное топливо ком  подходит на Ваш автомобиль.

  • Удобный on-line сервис

Так же можете купить аналоги WYNNS (артикул W76459) или позвоните нам, и мы вам поможем. Телефон: +7 (831) 291-58-99

Срок доставки указан в рабочих днях, и рассчитывается со следующего дня после оплаты заказа до прихода детали в выбранный филиал

Пожалуйста, учитывайте возможные изменения сроков доставки при планировании ремонтных работ.

  • Цена на  WYNNS (артикул W76459)

Отличная стоимость товара  достигается  исходя из прямых поставок со складов дистрьеютеров данного бренда WYNNS.

Обращаем внимание, указание ТОВАРНЫХ ЗНАКОВ (наименований марок автомобилей) направлено на информирование покупателей о применимости запасной части к той или иной марке автомобиля, то есть на потребительские свойства товара. Данная информация не вводит потребителя в заблуждение относительно предлагаемых к продаже запасных частей для автомобилей и его производителей, не нарушает права правообладателей указанных товарных знаков. Требование предоставлять покупателю необходимую и достоверную информацию о товаре, предлагаемом к продаже, обеспечивающую возможность их правильного выбора возложено на продавца (изготовителя) Законом «О защите прав потребителей», ст. 495 ГК РФ.

Индикатор контроля ПСО Винар ЭомиТест Судан 3 комплект порошок на 200 мл

{{#each tradingPlatforms}} {{/each}} {{/if}}

Запросите оферту через форму обратной связи

{{#if tradingPlatforms.length}} {{/if}}

Арт. 52293

• В наличии

Характеристики:

  • Торговая марка: Винар
  • Вид пробы: азопирамовая
  • Срок годности: 6мес
Цена интернет-магазина. Указана с НДС.

Наличие в магазинах «Комус» товара с артикулом N {{productId}}
{{region}}, состояние на {{currentTime}}

{{> pageNumberTemplate pages}} {{#if availableStocks.length}} {{#if subwayNeed }} {{/if}} {{#each availableStocks}} {{/each}} {{/if}} {{> pageNumberTemplate pages}}

В розничных магазинах «Комус» цена на данный товар может отличаться от цены Интернет-магазина.

Подробную информацию о цене и количестве товара вы можете получить,
позвонив по телефону ближайшего к Вам магазина «Комус».

Адреса всех магазинов Комус

Закрыть

Закрыть

{{/if}} {{#each products}} {{#each this}} {{/each}} {{/each}} {{#each products}} {{/each}} {{#each products}} {{/each}}

Сравнение товаров

{{> breadcrumbTemplate breadcrumbs=breadcrumbs }} {{#if (gt products.length 0)}}

Закрыть

{{else}}

Нечего сравнивать

{{/if}} {{#if (gt products.length 1)}} {{/if}} {{#each products}} {{#each fields}} {{#each this}} {{/each}} {{/each}} {{#each products}} {{/each}} {{#each products}} {{/each}}
{{#if (eqw this.forbidden true)}} {{> productAddToCartForbiddenTemplate}} {{else}} {{#if (and (neqw this.stock null) (neqw (uppercase this.stock.stockLevelStatus.code) «OUTOFSTOCK») (neqw this.price null))}} {{else}} Товар недоступен {{/if}} {{/if}}

Арт. {{this.code}} {{#if this.stock}} {{#if (neqw this.stock.stockStatusText null)}} {{{ this.stock.stockStatusText }}} {{else}} {{#if (eqw (uppercase this.stock.stockLevelStatus.code) «ONREQUEST»)}} Под заказ {{else}} {{#if (neqw (uppercase this.stock.stockLevelStatus.code) «OUTOFSTOCK»)}} В наличии {{else}} Нет в наличии {{/if}} {{/if}} {{/if}} {{/if}}

{{/each}} {{#each fields}}
{{@key}} {{this}}
Торговая марка {{#if (neqw this.trademark null)}} {{this.trademark.name}} {{/if}}
Рейтинг {{#if (eqw this.ratingWidth null)}}

{{this.averageRating}}{{#if (eqw this.averageRating null)}}0{{/if}}

{{#unless eaistPopup}} Отсутствующий товар: {{/unless}} Выберите товары для замены:
{{#if (gt @index 0)}} {{/if}} {{#if (eqw this.forbidden true)}} {{> productAddToCartForbiddenTemplate}} {{else}} {{#if (and (neqw this.stock null) (neqw (uppercase this.stock.stockLevelStatus.code) «OUTOFSTOCK») (neqw this.price null))}} {{else}} Товар недоступен {{/if}} {{/if}}

Арт. {{this.code}} {{#if this.stock}} {{#if (neqw this.stock.stockStatusText null)}} {{{ this.stock.stockStatusText }}} {{else}} {{#if (eqw (uppercase this.stock.stockLevelStatus.code) «ONREQUEST»)}} Под заказ {{else}} {{#if (neqw (uppercase this.stock.stockLevelStatus.code) «OUTOFSTOCK»)}} В наличии {{else}} Нет в наличии {{/if}} {{/if}} {{/if}} {{/if}}

{{/each}}
{{@key}} {{this}}
Торговая марка {{#if (neqw this.trademark null)}} {{this.trademark.name}} {{/if}}
Рейтинг {{#if (eqw this.ratingWidth null)}}

{{this.averageRating}}{{#if (eqw this.averageRating null)}}0{{/if}}

Крем АС-КОМ Сибирский с барсучьим и медвежьим жиром 75 мл

Общие характеристики
Тип препаратакосметика
Типкрем
Назначениедля проблемной кожи, лечение аллергии на коже, лечение гриппа и простуды, лечение кашля, лечение псориаза, лечение суставов, лечение ушибов и растяжений, заживление ран и травм, разогревающее средство
Минимальный возраст примененияот 5 лет
Объем75 мл
Упаковкатуба
Составвода очищенная, барсучий жир, медвежий жир, пентоп, эмульсионный воск, эмульгатор ПГ-5, стеарин, глицерин, триэтаноламин, масло пихтовое, неомеккин-М16, агидол-1
Дополнительно
Показания к применениюомолаживающий косметический эффект: разглаживает морщины, придает коже упругость и эластичность, предупреждает преждевременное старение кожи; эффективен в комплексном уходе за шелушащейся или раздраженной кожей; нормализует водно-жировой баланс; активизирует обмен веществ, улучшает кровообращение; незаменим при простуде, гриппе, бронхите; применяется при ранах, порезах, гнойничках и свищах; при ожогах и обморожениях; при радикулите, ревматизме, подагре и других заболеваниях суставов; при укусах насекомых
Противопоказаниявысокая активность пихтового масла в креме может вызвать покраснение кожи у детей до 5 лет
Способ применения и дозы1) для косметического эффекта наносить на кожу лица, области декольте, рук; 2) при укусе насекомых, ожогах или гнойниках наносить непосредственно на поврежденную область; 3) раны, порезы и свищи следует лечить нанесением крема вокруг поврежденной области; 4) при радикулите, подагре, артрите тонизирующий крем наносится на болезненный участок тела круговыми движениями до полного впитывания; в первое время использовать крем до 5 раз в день
Условия храненияхранить в прохладном месте при температуре от +5 до + 25 градусов
Особые указаниятолько для наружного применения
Фармакологическое действиебарсучий жир имеет ярко выраженное косметическое воздействие на кожу: насыщает клетки кожи витамином а (ретинолом), оказывает выраженное влияние на мембраны клеток кожи, активизируя обмен веществ, улучшая кровообращение, что и приводит к замедлению старения кожи; за счет поступающих в клетки ненасыщенных и полиненасыщенных жирных кислот, кожа «оживает», подтягивается, делается упругой, улучшается цвет лица; повышает местный иммунитет кожи и ее барьерную функцию – способность «не пропускать» внутрь организма возбудителей инфекции, обладает противовоспалительными и легкими антибактериальными свойствами, образует на коже тонкую плёнку, препятствующую потере влаги, защищающую от обветривания и обморожения; лечебные свойства: при ранах, ссадинах, порезах, дерматитах, ожогах, пролежнях и язвах способствует заживлению поврежденных тканей, оказывает бактерицидное действие и предотвращает процессы гниения тканей, улучшает кровообращение; медвежий жир при применении в косметических целях: благодаря омега-кислотам, незаменим для сухой, загрубевшей, потрескавшейся, шелушащейся кожи; витамин е, содержащийся в жире в избытке, активно смягчает кожу, она омолаживается, морщинки разглаживаются, цвет лица улучшается; лечебное воздействие: подавляет гнойные процессы на коже, имеет ранозаживляющие свойства, настоящее спасение при ожогах, ранах, укусах животных, насекомых; выраженные лечебные свойства при остеохондрозе, радикулите, артрите, ревматизме, спортивных травмах (растяжение мышц, сухожилий и связок), способствует устранению боли в мышцах, позвоночнике и суставах; используется как лечебное средство при хронических бронхитах, кашле и других простудных заболеваниях; оказывает бактерицидное и противовоспалительное действие при псориазе, экземе, дерматите, трофических язвах; пихтовое масло большое содержание каротиноидов максимально защищает эпидермис от воздействия свободных радикалов, стимулирует образование новых, более сильных и здоровых клеток; высокий процент токоферола стимулирует образование коллагена, быстро снимает отеки и оказывает эффект экспресс-лифтинга для кожи; действие аскорбиновой кислоты, которой очень много в составе масла, играет огромную роль в полном омоложении кожи на структурном, клеточном уровне, также улучшает цвет дермы; прекрасный лекарь для жирной кожи, имеющей склонность к воспалениям, образованию угревой сыпи, акне; обладая противовоспалительными свойствами, отлично снимает любые раздражения, стабилизирует активную работу сальных желез, глубоко очищает эпидермис, прекрасно подходит для лечения фурункулеза: оказывает антисептический и дезодорирующий эффект на кожу всего тела, который будет особо уместен во время путешествий и купания в неизвестных по чистоте водоемах
ИсточникСправочник лекарственных препаратов Видаль
Номер документа о соответствииТС N RU Д-RU.ПК05.В.10860
Дата документа о соответствии24.02.2015

Размер и стадия опухоли груди

M-0 Образец лимфоузлов был удален хирургическим путем и протестирован на наличие рака.
М-1 Узлы содержат раковые клетки или микрометастазы. Опухоль распространила клетки за пределы своего первоначального местоположения, и рак может быть в других частях тела.

Собираем все вместе

Вся информация TNM будет объединена дважды: хирургом и патологом.Каждый эксперт выскажет свое мнение о вашем деле с точки зрения его TNM-стадии. Чтобы официально определить стадию рака груди, вашей команде может потребоваться дополнительная информация о:

Все эти факторы влияют на ваш диагноз и будут серьезно приняты во внимание, когда вы и ваш лечащий врач будете рассматривать варианты лечения.

Варианты лечения рака груди

Стадии рака груди

Рак груди имеет четыре стадии, и, если включены предраковые состояния, пятую.Ваша стадия зависит от TNM-рейтинга опухоли.

Стадия 0 (предрак)

Стадия 0 используется при предраковых заболеваниях или карциномах in situ. На этом этапе нет никаких доказательств того, что аномальные клетки вырвались из области, где они возникли, или вторгаются в соседние ткани.

1 этап

Стадия 1 означает, что это инвазивный рак (клетки перемещаются в окружающие ткани). Есть две подкатегории:

Этап 1A:

  • Размер опухоли до 2 см.
    И
  • Раковые клетки не распространились из груди в лимфатические узлы.

Этап 1B:

  • В лимфатических узлах обнаружена небольшая группа раковых клеток размером от 0,2 до 2 мм.
  • Опухоль стадии 1А может существовать, а может и не существовать.

2 этап

Стадия 2 — рак, который стал инвазивным. Этот этап также разделен на подкатегории A и B.

Стадия 2А:

  • В груди опухоли нет, но опухоль размером более 2 мм присутствует в лимфатических узлах, подмышечных (под рукой) или около грудины.
    OR
  • Опухоль меньше 2 см распространилась на лимфатические узлы.
    OR
  • Опухоль размером от 2 до 5 см не распространилась на лимфатические узлы.

При определенных условиях опухоли такого размера могут быть классифицированы как стадия 1.

Этап 2B:

  • Размер опухоли составляет от 2 до 5 см, а небольшие группы клеток (от 0,2 до 2 мм) существуют в подмышечных лимфатических узлах.
    OR
  • Размер опухоли составляет от 2 до 5 см. Рак поражает до трех подмышечных лимфатических узлов.
    OR
  • Размер опухоли превышает 5 см, но не в подмышечных лимфатических узлах.

3 этап

Раковые образования стадии 3 инвазивны. Этот этап разделен на три подкатегории.

Этап 3A:

  • Присутствует опухоль молочной железы любого размера (или нет опухоли), рак обнаружен в 4–9 лимфатических узлах.
    OR
  • Опухоль больше 5 см и небольшие группы раковых клеток (от 0,2 мм до 2 мм) находятся в лимфатических узлах.
    OR
  • Опухоль больше 5 см, и рак распространился на три лимфатических узла.

При определенных условиях опухоли такого размера могут быть классифицированы как 1B.

Этап 3B:

  • Опухоль любого размера распространилась на грудную стенку и / или кожу и вызвала отек или язву.
    И
  • Рак мог распространиться на девять подмышечных лимфатических узлов или на лимфатические узлы около грудины.
    ИЛИ
  • Случай соответствует критериям воспалительного рака груди (кожа груди красная, может ощущаться тепло или опухоль, рак распространился на лимфатические узлы и, возможно, на кожу).

При определенных обстоятельствах опухоли, отвечающие первым двум критериям, могут быть классифицированы как стадия 2А.

Стадия 3C:

  • Опухоль любого размера распространилась на грудную стенку и / или кожу.
    И
  • Рак распространился на 10 или более подмышечных лимфатических узлов.
    OR
  • Рак распространился на лимфатические узлы выше или ниже ключицы.
    OR
  • Рак распространился на лимфатические узлы около грудины.

При определенных обстоятельствах опухоли, отвечающие указанным выше критериям, могут быть классифицированы как стадия 3А.

Этап 4

Стадия 4 также называется метастатическим раком груди. Она не ограничивается грудью и близлежащими лимфатическими узлами, а перемещается в другие органы. Общие места метастазов включают легкие, кожу, кости, печень, мозг или отдаленные лимфатические узлы.

Это также может быть рецидив рака груди, который распространился на другие области.

Размер опухоли и дальнейшие действия

Биопсия и визуализация дают приблизительное измерение вашей опухоли, но вам нужен фактический размер опухоли , чтобы принять оптимальное решение о лечении.

После лампэктомии или мастэктомии иссеченная ткань груди будет объединена с тканью биопсии, и патолог изучит истинный размер новообразования. Патологическое измерение вашей опухоли — золотой стандарт размера опухоли. Ваш отчет о послеоперационной патологии резюмирует ваш комплексный диагноз рака груди.

Имея это в виду, может показаться нелогичным полагаться на оценки размера опухоли, используемые для определения стадии TNM. Но для этого есть веская причина: визуализация позволяет вам и вашему хирургу сделать наиболее консервативный выбор, когда дело доходит до операции на груди.Ваш хирург будет использовать информацию из предыдущих тестов в качестве руководства при удалении опухоли.

Если лампэктомия удалит ваш рак, вам удастся избежать мастэктомии. Если неоадъювантная химиотерапия может уменьшить опухоль перед операцией, вам может потребоваться меньше ткани, удаляемой при лампэктомии. Однако в некоторых случаях, таких как широко распространенный инвазивный рак груди, мастэктомия может быть единственным хирургическим вариантом.

Получение максимальной информации и понимание последствий ваших тестов поможет вам принимать информированные и разумные решения о лечении.

Руководство по обсуждению для поставщика медицинских услуг по лечению рака молочной железы

Получите наше распечатанное руководство к следующему приему к врачу, которое поможет вам задать правильные вопросы.

Отправить руководство по электронной почте

Отправить себе или любимому человеку.

Зарегистрироваться

Это руководство для обсуждения с доктором отправлено на адрес {{form.email}}.

Произошла ошибка. Пожалуйста, попробуйте еще раз.

Слово Verywell

Когда вы планируете посещение врача и знаете, что будете обсуждать свой диагноз, результаты лабораторных исследований или планы лечения, вы можете попросить кого-нибудь пойти с вами и сделать записи.Если это невозможно, вы можете записать встречу на свой телефон или небольшой магнитофон, если это разрешено. Новости о любом диагнозе часто содержат много информации, медицинской терминологии и эмоций. Наличие чего-то, к чему вы можете обратиться, может помочь, если вы уйдете со своего визита, а детали нечеткие.

Менингиома Опухоль головного мозга

Что такое менингиома?

В этом разделе: Определение | Симптомы | Диагностика | Лечение | Прогноз

Изображение МРТ, показывающее типичную опухоль менингиомы

Менингиома — это опухоль, которая возникает из слоя ткани (мозговых оболочек), покрывающего мозг и позвоночник.

Менингиомы растут на поверхности головного (или спинного) мозга и поэтому отталкивают мозг, а не растут изнутри. Большинство из них считаются «доброкачественными», потому что они медленно растут с низким потенциалом распространения.

Опухоли менингиомы могут стать довольно большими. Диаметр 2 дюйма (5 см) не редкость. Менингиомы, которые быстро растут и проявляют сходное с раком поведение, называются атипичными менингиомами или анапластическими менингиомами и, к счастью, встречаются редко.

Менингиомы составляют около 20 процентов всех опухолей головы и 10 процентов опухолей позвоночника.

Ежегодно в Соединенных Штатах Америки менингиомы диагностируются у 6 500 человек. Этот тип опухоли чаще встречается у людей с наследственным заболеванием, называемым нейрофиброматозом 2 типа (NF-2).

Лекция 31: Внутричерепная менингиома из системы здравоохранения
UCLA на Vimeo.

Молекулярная генетика и опухолевый патогенез менингиом и будущие направления лечения менингиомы . Просмотреть статью о менингиомах (PDF)>

вернуться к началу

Возможные симптомы, вызванные менингиомой

  • Наиболее частыми симптомами являются боль (головная боль) в течение нескольких недель или месяцев, слабость или паралич, уменьшение поля зрения и речь проблемы.
  • Конкретные симптомы зависят от местоположения опухоли. См. Таблицу ниже:

Наиболее частые места и симптомы менингиомы головы:

Местоположение — Выпуклость (на поверхности мозга от средней линии)
Общие симптомы
— Судороги, головная боль, слабость в конечностях, затрудненная речь, дефицит поля зрения.

Местоположение — Парафальцин (образующийся в менингеальном слое между полушариями головного мозга)
Общие симптомы
— Судороги, слабость нижних конечностей, головная боль, изменения личности, слабоумие, нарастающая апатия, сглаживание аффекта, шаткость, тремор.

Местоположение — Клиновидный хребет
Общие симптомы
— Выпуклость глаз, снижение зрения, паралич движения глаз, судороги, нарушение памяти, изменение личности, головная боль.

Местоположение — Задняя ямка (область, где находится мозжечок)
Общие симптомы
— Шаткость и нарушение координации движений, гидроцефалия (повышенное давление в головном мозге), трудности с голосом и глотанием.

Местоположение — Мозжечаточный угол (на стороне ствола мозга)
Общие симптомы
— Потеря слуха.Слабость лицевых мышц. Головокружение. Шаткость и нарушение координации движений, гидроцефалия (повышенное давление в головном мозге), нарушение голоса и глотания.

Местоположение — Обонятельная борозда и турецкое седло (костное пространство, где расположен гипофиз)
Общие симптомы
— Потеря обоняния (аносмия), незначительные изменения личности, легкие проблемы с памятью, эйфория, снижение концентрации внимания, недержание мочи, нарушение зрения.

Оболочка зрительного нерва — Снижение зрения на один глаз.| Другое — зависит от местоположения.

наверх

Диагностика

  • Магнитно-резонансная томография (МРТ) эффективно обнаруживает большинство менингиом и лучше всего отображает детали головного мозга.
  • Иногда проводят компьютерную томографию, чтобы оценить, есть ли поражение кости (черепа) или опухоль кальцинирована.

Лечение

Решение о том, лечить ли менингиому и как лучше всего, зависит от множества факторов, включая размер и расположение опухоли, симптомы, скорость роста и возраст пациента (среди прочего).В общем, есть три основных варианта: наблюдение, хирургическое удаление и облучение.

  • Наблюдение: Менингиомы часто растут медленно, увеличиваясь всего на 1-2 мм в год. Ежегодное повторное сканирование МРТ может быть целесообразным в следующих ситуациях:
    • Пациенты с небольшими опухолями и легкими или минимальными симптомами, не влияющими на качество жизни и небольшими или отсутствующими отеками в прилегающих областях мозга.
    • Пожилые пациенты с очень медленно прогрессирующими симптомами.Связанные припадки можно контролировать с помощью лекарств.
  • Хирургия: Хирургия менингиомы варьируется от относительно простой до очень сложной, иногда требуя нескольких хирургов разных специальностей.
    • Легкость удаления зависит как от их доступности, так и от квалификации нейрохирурга. Нейрохирурги UCLA, специализирующиеся на опухолях головного мозга, имеют большой опыт удаления всех типов менингиом.
    • Цели операции:
      • получить ткань для подтверждения диагноза
        • менингиомы классифицируются патологами на три типа:
          • 1 степень — доброкачественные: эти очень медленно растущие опухоли составляют 75 процентов всех менингиом.
          • Сорт 2 — Атипичный: обычно медленнорастущий, но может повторяться.
          • 3 класс — Анапластический: более злокачественный, быстрорастущий.
        • 15 процентов рецидивов менингиом часто прогрессируют до более высокой степени. Опухоли 2-й и 3-й степени рецидивируют чаще, чем опухоли 1-й степени
      • Удалите достаточно опухоли, чтобы уменьшить давление или деформацию нормальной ткани головного мозга
        • Когда полное удаление опухоли несет значительный риск заболеваемости (любой побочный эффект, который может уменьшиться качество жизни) лучше оставить немного опухолевой ткани на месте
        • Если опухоль проникает в какую-либо из крупных дренажных вен, крупных артерий на поверхности мозга или если она находится на нижней стороне мозга, есть вероятность полной резекции уменьшается и увеличивается риск осложнений.
      • сохранить и / или улучшить неврологическую функцию
      • Если возможно и безопасно, удалить всю опухоль, чтобы она не вырастала снова.
        • Опухоли менингиомы, которые расположены близко к поверхности и не проникли в глубокие структуры или крупные кровеносные сосуды, с большей вероятностью будут полностью безопасно удалены.

наверх

Минимально инвазивные хирургические варианты доступны в UCLA

Эндоскопическое удаление менингиом через нос

  • менингиомы обонятельной борозды
  • менингиомы туберкулеза

    50 Микрохирургическое удаление замочной скважины с помощью надреза брови

    • Менингиомы обонятельной борозды
    • Менингиомы крыла клиновидной кости

    Удаление эндопорта

    • внутрижелудочковые менингиомы

    назад вверх

      • Эмболизация опухоли перед операцией В некоторых случаях ваш хирург может решить уменьшить кровоснабжение опухоли, заказав процедуру эмболизации.
      • Эмболизация включает продевание тонкой трубки (катетера) по венам или артериям ног непосредственно в кровеносные сосуды, питающие опухоль. Затем вводится клейкое свертывающееся вещество, чтобы подавить и уменьшить опухоль.
    • Радиация
        • Для тех, кто не подходит для хирургического вмешательства или с неполным хирургическим удалением, обычное облучение или фракционная стереотаксическая радиохирургия (лучевая терапия) может замедлить или остановить рост менингиомы.
        • Лучевая терапия часто применяется при глубоких, хирургически недоступных опухолях или опухолях у пожилых пациентов.
          • Более молодые пациенты (<50 лет) должны быть проинформированы о риске развития радиационно-индуцированного рака через 10 и более лет после лучевой терапии. К счастью, шансы на это очень малы.
        • Менингиомы имеют острые края и редко проникают в соседние ткани, поэтому они являются идеальными опухолями для сфокусированных, сформированных полей излучения с использованием хирургии Novalis Shaped-Beam Surgery.
      • Этот метод не требует фактического хирургического вмешательства, но вместо этого использует передовые методы визуализации и компьютерные технологии для доставки высокой дозы радиации к опухоли при одновременном ограничении радиационного воздействия на окружающие структуры мозга.
      • Для многих опухолей менингиомы поле излучения должно соответствовать форме опухоли. Кроме того, облучение в меньших дозах в течение нескольких недель снизит риск повреждения критических структур мозга рядом с опухолью (что может вызвать слепоту, глухоту, паралич).Некоторые методы лечения, такие как гамма-нож, не могут обеспечить такой вид лечения.
      • Нейрохирурги Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе помогли разработать стереотаксическую систему Novalis Shaped-Beam Stereotactic System, одну из самых передовых конформных стереотаксических систем доставки излучения в мире.

    наверх

    Прогноз

    • Хирургия
      • При опухолях в благоприятных местах до 85% менингиом излечимы хирургическим путем.
      • Местоположение, размер опухоли, оставшейся после операции, и навыки нейрохирурга являются важными элементами в прогнозировании успешного результата.
    • Радиация
      • Стереотаксическая радиохирургия останавливает рост менингиом почти в 80% случаев.

    Neuro-ICU заботится о пациентах со всеми типами нейрохирургических и неврологических травм, включая инсульт, кровоизлияние в мозг, травмы и опухоли. Мы работаем в тесном сотрудничестве с вашим хирургом или врачом, с которым у вас был первоначальный контакт. Вместе с хирургом или врачом лечащий врач Neuro-ICU и члены бригады руководят уходом за членом вашей семьи в отделении интенсивной терапии.Команда Neuro-ICU состоит из прикроватных медсестер, практикующих медсестер, врачей, прошедших специальную подготовку (стипендиатов), и лечащих врачей. Семейное руководство UCLA Neuro ICU

    наверх

    Синдром лизиса опухоли при мелкоклеточной карциноме и других солидных опухолях

    Задача: Обзор факторов риска и клинических данных, связанных с синдромом лизиса опухоли (TLS) у пациентов с мелкоклеточными карциномами и другими солидными опухолями.

    Методы: Сообщения о TLS в англоязычной литературе были найдены путем поиска в MEDLINE и библиографий соответствующих историй болезни, журнальных статей и глав книг. Все отчеты, выявленные в ходе этих поисков, включая выдержки из национальных встреч, были рассмотрены и включены в этот анализ. Данные, касающиеся клинических и биохимических параметров, относящихся к возникновению TLS, были извлечены из каждого отчета.

    Полученные результаты: Из 25 пациентов с солидной опухолью, у которых развился TLS, у 7 была мелкоклеточная карцинома, у 5 — рак груди и у 4 — нейробластома. TLS был связан с различными схемами лечения, включая химиотерапию, иммунотерапию, гормональную терапию, лучевую терапию и хирургическое вмешательство. Общие факторы риска TLS в этой популяции включали почечную недостаточность до лечения, повышенный уровень лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в сыворотке крови и гиперурикемию.Среди типичных биохимических признаков TLS острая почечная недостаточность и гиперурикемия были выявлены почти у всех пациентов, а гиперкалиемия, гиперфосфатемия, гипокальциемия и повышение уровня ЛДГ в сыворотке были зарегистрированы более чем у 75% пациентов. Кроме того, у семи пациентов, в том числе у текущего пациента, был глубокий метаболический ацидоз. Девять из 25 пациентов умерли во время острого эпизода TLS.

    Выводы: Хотя TLS нечасто встречается у пациентов с солидными опухолями, необходимо распознать факторы риска и биохимические аномалии, связанные с этим потенциально смертельным осложнением терапии, чтобы обеспечить адекватный мониторинг и раннее начало соответствующих терапевтических мер.

    узлов щитовидной железы | Сидарс-Синай

    Не то, что вы ищете?

    Что такое узелки щитовидной железы?

    Щитовидная железа расположена в нижней части шеи, ниже голосовой связки (гортани) и выше ключиц.

    Узелок щитовидной железы — это уплотнение в щитовидной железе или на ней. Узлы щитовидной железы обнаруживаются примерно у 6 процентов женщин и 1-2 процентов мужчин; они возникают в 10 раз чаще у пожилых людей, но обычно не диагностируются.

    Каждый раз, когда в ткани щитовидной железы обнаруживается уплотнение, необходимо учитывать возможность злокачественного новообразования (рака). Более 95 процентов узлов щитовидной железы доброкачественные (доброкачественные), но необходимы анализы, чтобы определить, является ли узелок злокачественным.

    К доброкачественным узелкам относятся:

    • Многоузловой зоб, также называемый нетоксическим зобом. Слово зоб означает, что щитовидная железа стала слишком большой. Обычно это происходит, когда гипофиз в головном мозге вырабатывает слишком много гормона, стимулирующего щитовидную железу.Если зоб небольшой, проблему можно лечить с помощью таблеток гормона щитовидной железы. Операция необходима, если зоб большой или не перестает расти после приема гормонов щитовидной железы. Большая щитовидная железа может давить на трахею (дыхательное горло) или пищевод (пищевод) и вызывать затрудненное дыхание или прием пищи.
    • Доброкачественные фолликулярные аденомы. Слово фолликулярный означает, что клетки выглядят как группа маленьких кружков под микроскопом. Если фолликулярные клетки содержатся внутри узелка, состояние называется доброкачественным.Если клетки проникли в окружающие ткани, диагноз — рак.
    • Кисты щитовидной железы — это узелки, заполненные жидкостью. Если узелок имеет как жидкую, так и твердую части, он называется сложным узлом. Их необходимо удалить хирургическим путем, если они вызывают боль в шее или затруднение глотания.

    Что вызывает узелки щитовидной железы?

    Узелки могут быть вызваны простым разрастанием нормальной ткани щитовидной железы, кистами, заполненными жидкостью, воспалением (тиреоидит) или опухолью (доброкачественной или злокачественной).Большинство узелков удаляли хирургическим путем до 1980-х годов. Оглядываясь назад, можно сказать, что этот подход привел к множеству ненужных операций, поскольку менее 10 процентов удаленных узелков оказались злокачественными. Большинство удаленных узелков можно было просто наблюдать или лечить медикаментами.

    Хронический тиреоидит (болезнь Хашимото) — это медленно развивающееся воспаление щитовидной железы. Это часто приводит к снижению функции щитовидной железы (гипотиреоз). Тиреоидит возникает, когда иммунная система организма разрушает клетки щитовидной железы.Хронический тиреоидит чаще всего встречается у женщин и людей с семейным анамнезом заболеваний щитовидной железы.

    Каковы симптомы узелков щитовидной железы?

    Многие пациенты с узлами щитовидной железы не имеют никаких симптомов и случайно обнаруживают уплотнение в щитовидной железе во время обычного медицинского осмотра или визуального исследования, проводимого по не связанным с этим причинам. У небольшой части пациентов может появиться постепенно увеличивающаяся шишка в передней части шеи, или они могут испытывать нечеткое ощущение давления или дискомфорт при глотании.О шишке на шее следует сообщить врачу даже при отсутствии симптомов.

    Как диагностируются узлы щитовидной железы?

    Биопсия тонкой иглой

    Тонкоигольная биопсия щитовидной железы — это простая процедура, которую можно выполнить в кабинете врача. Некоторые врачи обезболивают кожу над узелком перед биопсией, но нет необходимости усыплять, и пациенты обычно могут вернуться на работу или домой после этого без каких-либо побочных эффектов.

    Этот тест предоставляет информацию, которую не может предложить никакой другой тест, кроме хирургического вмешательства. Игольная биопсия щитовидной железы предоставит достаточно информации для принятия решения о лечении более чем в 85 процентах случаев, если используется ультразвук.

    Использование тонкоигольной биопсии резко сократило количество пациентов, перенесших ненужные операции по поводу доброкачественных узелков. Однако около 10-20 процентов биоптатов интерпретируются как неубедительные или неадекватные, то есть патолог не может быть уверен, является ли узел злокачественным или доброкачественным.

    В таких случаях врач, имеющий опыт лечения заболеваний щитовидной железы, может использовать другие критерии, чтобы принять решение об операции.

    Сканирование щитовидной железы

    Сканирование щитовидной железы — это снимок щитовидной железы, сделанный после инъекции или проглатывания небольшой дозы радиоактивного изотопа, обычно концентрируемого клетками щитовидной железы. Сканирование показывает, является ли узелок гиперфункцией («горячий» узелок). Поскольку рак редко обнаруживается в горячих узелках, сканирование, показывающее горячий узелок, устраняет необходимость в тонкоигольной биопсии.Если горячий узел вызывает гипертиреоз, его можно лечить радиоактивным йодом или хирургическим путем.

    Ни сканирование щитовидной железы, ни лечение радиоактивным йодом нельзя проводить беременной женщине. Небольшое количество радиоактивного йода выделяется с грудным молоком. Поскольку радиойод может необратимо повредить щитовидную железу младенца, кормление грудью не разрешается женщинам, проходящим курс лечения радиойодом.

    УЗИ

    В УЗИ щитовидной железы высокочастотные звуковые волны проходят через кожу и отражаются обратно в аппарат, создавая подробные изображения щитовидной железы.Он может визуализировать узелки размером до 2-3 миллиметров. Ультразвук позволяет отличить кисты щитовидной железы (узелки, заполненные жидкостью) от твердых узелков. Последние достижения в области ультразвукового исследования помогают врачам определять узелки, которые с большей вероятностью могут быть злокачественными.

    Ультрасонография щитовидной железы также используется для наведения тонкой иглы при аспирации узлов щитовидной железы. Ультразвуковой контроль позволяет врачам провести биопсию узелка, чтобы получить достаточное количество материала для интерпретации.

    Даже если образец биопсии щитовидной железы признан доброкачественным, следует контролировать размер узелка.Ультразвуковое исследование щитовидной железы дает объективный и точный метод определения изменения размера узелка. Узелок с доброкачественной биопсией, стабильный или уменьшающийся в размерах, вряд ли является злокачественным или требует хирургического лечения.

    Как лечат узлы щитовидной железы?

    Большинство пациентов с доброкачественными узелками не нуждаются в специальном лечении. Некоторые врачи назначают гормон левотироксин в надежде предотвратить рост узелков или уменьшить размер холодных узелков.Радиойод можно использовать для лечения горячих узелков.

    У пациента с известным узлом щитовидной железы первым шагом является определение риска рака. К факторам высокого риска относятся:

    Если поражение доброкачественное, за пациентом наблюдают с помощью ультразвука на предмет роста узелка или развития новых узелков. Если есть рост, может быть выполнена повторная биопсия. Если поражение злокачественное, пациента направляют к одному из хирургов программы по лечению рака щитовидной железы для удаления щитовидной железы.

    Примерно в 10% случаев патологоанатом не может поставить диагноз из-за отсутствия образца из аспирации.Это предполагает повышенный риск злокачественного новообразования, которое может потребовать хирургического вмешательства или наблюдения.

    В большинстве операций щитовидная железа удаляется полностью (полная тиреоидэктомия). Лимфатические узлы также могут быть удалены, чтобы определить, распространилась ли опухоль за пределы щитовидной железы. Последующая терапия зависит от результатов, полученных во время операции. Некоторым пациентам может быть назначен гормон щитовидной железы с последующим проведением анализов крови и ультразвуковых исследований, в то время как другим будет введен радиоактивный йод для разрушения остаточной ткани щитовидной железы, а затем будут проводиться анализы крови и ультразвук.

    Используя этот тип терапии, большинство раковых заболеваний можно вылечить или взять под контроль, и менее 20 процентов будут рецидивировать. В случае агрессивного заболевания пациент может претендовать на участие в клинических испытаниях с новыми методами лечения, такими как таргетная химиотерапия.

    Ключевые моменты

    • Узелок щитовидной железы — это уплотнение в щитовидной железе или на ней. Узлы щитовидной железы обнаруживаются примерно у 6 процентов женщин и 1-2 процентов мужчин; они возникают в 10 раз чаще у пожилых людей, но обычно не диагностируются.
    • Каждый раз, когда в ткани щитовидной железы обнаруживается уплотнение, необходимо учитывать возможность рака.
    • Более 95 процентов узлов щитовидной железы доброкачественные.

    Следующие шаги

    Советы, которые помогут вам получить максимальную пользу от посещения врача:

    • Знайте причину вашего визита и то, что вы хотите.
    • Перед визитом запишите вопросы, на которые хотите получить ответы.
    • Возьмите с собой кого-нибудь, кто поможет вам задать вопросы и запомнить, что вам говорит поставщик.
    • Во время посещения запишите название нового диагноза и любые новые лекарства, методы лечения или тесты. Также запишите все новые инструкции, которые дает вам ваш провайдер.
    • Узнайте, почему прописано новое лекарство или лечение и как они вам помогут. Также знайте, какие бывают побочные эффекты.
    • Спросите, можно ли вылечить ваше состояние другими способами.
    • Знайте, почему рекомендуется тест или процедура и что могут означать результаты.
    • Знайте, чего ожидать, если вы не примете лекарство, не пройдете тест или процедуру.
    • Если вам назначена повторная встреча, запишите дату, время и цель этого визита.
    • Узнайте, как можно связаться с вашим поставщиком медицинских услуг, если у вас возникнут вопросы.

    © 2000-2021 Компания StayWell, LLC. Все права защищены. Эта информация не предназначена для замены профессиональной медицинской помощи. Всегда следуйте инструкциям лечащего врача.

    Не то, что вы ищете?

    Что делать с шишками и шишками у собак и кошек

    Видите что-нибудь? Сделай что-нибудь.Следуйте этим рекомендациям, чтобы заранее выявлять потенциально злокачественные опухоли у собак и кошек.

    Сью ЭттингерDVM, DACVIM (онкология)

    Сью Эттингер, DVM, DACVIM (онкология), является руководителем отделения онкологии в специализированном и неотложном центре ветеринарной медицины в Уаппингер-Фоллс, в долине реки Гудзон в Нью-Йорке. Также известная как доктор Сью, ветеринар по борьбе с раком, она является соавтором второго издания «Руководства по выживанию при раке у собак», соавтором подкаста «Ветеринар по борьбе с раком домашних животных» (radiopetlady.com) и международным докладчиком.Доктор Эттингер разработал «Видеть что-нибудь, что-то делать, зачем ждать»? Aspirate — инициатива по повышению осведомленности о раке кожи и поверхностных опухолях у собак и кошек. Она получила степень DVM в Корнельском университете и закончила резидентуру по онкологии в Медицинском центре для животных в Нью-Йорке. Д-ра Эттингера можно найти в Facebook (facebook.com/DrSueCancerVet) и Twitter (@DrSueCancerVet).

    Когда у собаки или кошки появляется кожное или подкожное новообразование, владельцу часто говорят: «Следи за ним.» Но что это значит? Как долго следить за этим? Насколько должна вырасти масса, чтобы ее исследовать? Как ветеринарный онколог, я слишком часто слышу, что образование не «выглядит» и не «ощущается» злокачественным. Дело в том, что даже опытный онколог (вроде меня) не может смотреть или чувствовать массу и знать, что это такое.

    Текущие рекомендации по работе с опухолью включают те же общие слова, которые слышат наши клиенты: «Рекомендовать, если опухоль изменяется в размере или внешнем виде или беспокоит пациента. 1 И снова, что это значит? Какие изменения клинически значимы — какие? Все? Что составляет «беспокойство» пациента? Таких мер недостаточно. Стандартный уход необходим для кожи и подкожных масс у собак и кошек.

    Честно говоря, легко успокоиться. У моей онкологической медсестры был питбуль Смоки, в медицинской карте которого были результаты аспирации более 10 липом. Я исполнил и задокументировал все эти стремления. Когда мы обнаружили еще одну массу, мы ждали, чтобы получить аспират, потому что — исходя из внешнего вида и истории Смоки — мы предположили, что это доброкачественная инфекция.Когда мы, наконец, проверили его, 7-сантиметровая опухоль на его боку оказалась саркомой мягких тканей низкой степени злокачественности.

    Упреждающее обнаружение опухолей у собак и кошек

    Несмотря на то, что опухоль Смоки была успешно удалена с широкими и чистыми краями, это подчеркнуло для меня необходимость в более точных рекомендациях для содействия раннему выявлению рака у собак и кошек ( Box 1 ).

    Вставка 1. Что-нибудь увидишь, что-нибудь сделай. Зачем ждать? Aspirate®

    Я разработал рекомендации, которые рекомендую в этой статье, при участии коллег-специалистов и VCA Animal Hospitals, Inc.Зачем ждать? Кампания Aspirate®. Я надеюсь, что они повысят осведомленность клиентов, будут способствовать раннему выявлению и диагностике рака и будут способствовать раннему хирургическому вмешательству. Мы все должны добиться большего. Мы должны обнаруживать опухоли раньше, когда они маленькие, и быстрее их аспирировать.

    Хорошо задокументировано, что цитологические и гистологические исследования являются важными диагностическими инструментами в ветеринарной онкологии и что получение предварительного диагноза оптимизирует планирование лечения. В рекомендациях AAHA по онкологии для собак и кошек от 2016 г. обобщены инструменты, используемые для диагностики, определения стадии и лечения распространенных типов опухолей. 2 Также рекомендуется оценить опухоли, которые увеличиваются, меняют внешний вид или вызывают раздражение у пациента. 1 Однако в настоящее время не существует конкретных рекомендаций по определению, когда проводить аспирацию, биопсию или мониторинг кожи и подкожных масс у собак и кошек.

    Без руководящих принципов, направленных на повышение осведомленности общественности и профессионалов, поверхностные массы могут находиться под слишком долгим наблюдением. Если позволить опухоли вырасти, это может превратить то, что могло быть простым хирургическим удалением, в гораздо более сложное.Хирургическое удаление больших образований может привести к менее адекватным хирургическим границам (узким или неполным), что приведет к рецидиву и дополнительной дорогостоящей терапии (более агрессивная местная хирургия, лучевая терапия и / или химиотерапия).

    Что еще хуже, опухоль может стать слишком большой или развитой, чтобы ее можно было удалить или лечить. Я все время это вижу. Часто это самые печальные и душераздирающие случаи. В ветеринарии большинство кожных и подкожных опухолей можно вылечить одним хирургическим вмешательством, если они диагностированы на ранней стадии, когда они еще небольшие.

    Я узнал три вещи от Смоки и за время работы в качестве онколога:

    • Будьте активны с шишками и неровностями.
    • Узнайте, что такое масса, прежде чем ее снимать.
    • Сделайте первую операцию единственной операцией.

    Руководство по обнаружению и диагностике опухолей

    1. Будьте активны с неровностями и неровностями

    Что-нибудь увидеть: Если у собаки или кошки масса размером с горошину (1 см) и пробыла там 1 месяц, то

    Сделайте что-нибудь: Сделайте аспирацию или биопсию и лечите соответствующим образом!

    Получение окончательного диагноза с помощью цитологии или биопсии на ранней стадии и до удаления приведет к улучшению результатов лечения поверхностных новообразований.Когда небольшие поверхностные опухоли обнаруживаются на ранней стадии, хирургическое вмешательство, вероятно, излечивает, особенно при доброкачественных новообразованиях и опухолях, которые являются только местно-инвазивными с низкой вероятностью метастазирования. Если опухоль удалена с полным хирургическим краем, прогноз часто благоприятный и не требует дополнительного лечения.

    Хотя в рекомендациях «Видеть что-нибудь, делать что-то» указывается масса в 1 см, меньшие массы также могут быть аспирированы или биопсированы. Однако нельзя допускать, чтобы они вырастали более чем на 1 см без исследования.Практикующие должны измерить и задокументировать размер начальной массы для сравнения, чтобы увидеть рост, и рассказать клиентам о требованиях к размеру «горошины», чтобы побудить их к оценке массы.

    2. Узнайте, что такое масса, прежде чем ее снимать

    Диагностика многих кожных и подкожных новообразований может быть достигнута с помощью тонкоигольной аспирации (FNA) и цитологического исследования. 1

    Аспирация и цитология

    FNA и цитология позволяют диагностировать многие кожные и подкожные образования, особенно те, которые хорошо отшелушиваются.FNA помогает отличить неоплазию от воспаления и доброкачественных образований, включая липомы и аденомы сальных желез. Морфология клетки также может позволить определить доброкачественный или злокачественный фенотип. В отношении злокачественных опухолей цитология предоставляет информацию, которая помогает в составлении планов диагностики и лечения.

    Преимущества цитологии включают минимально инвазивный подход, низкий риск, низкую стоимость и результаты, которые доступны быстрее, чем результаты биопсии. Недостатки заключаются в том, что результаты могут быть недиагностическими или двусмысленными из-за небольшого количества клеток в образце, плохого отслоения клеток или плохого качества образца.В этих случаях для окончательного диагноза может потребоваться гистопатологическое подтверждение. 3

    FNA может выполняться с использованием одного из двух методов: аспирации или фенестрации. Во время аспирации игла и шприц присоединяются, и поддерживается вакуум. При фенестрации только игла вводится в массу чрескожно. Фенестрация проводится без аспирации, часто дает больше клеточного материала и вызывает меньшее кровотечение. 3 Лично я предпочитаю и начинаю с фенестрации, так как я считаю, что это проще и постоянно получать диагностические образцы.Аспирация более полезна для масс, наполненных жидкостью.

    Если образец не состоит исключительно из жира, прозрачной кистозной жидкости или бесклеточного мусора, его следует передать обученному цитопатологу. Если есть сомнения, отправьте его. Включение адекватного анамнеза помогает патологу поставить точный диагноз.

    Биопсия

    Если цитология не позволяет установить диагноз, перед полным удалением опухоли рекомендуется провести предварительную биопсию. Эта биопсия поможет определить оптимальный план лечения.Практическая рекомендация в этих случаях — если поражение умещается в 8-миллиметровом биопсийном перфораторе, вырежьте его. Если новообразование больше 8-миллиметрового биопсийного перфоратора, перед удалением опухоли для подтверждения диагноза требуется инцизионная биопсия (клин, Tru-cut, перфорация).

    Стадия диагностики также часто показана перед лечебной операцией. Для принятия этих диагностических решений рекомендуется консультация ветеринарного онколога.

    3. Сделайте первую операцию единственной операцией

    Заманчиво удалить массу сразу, и владельцы часто говорят, что хотят удалить ее как можно скорее.Эксцизионная биопсия устанавливает диагноз и одновременно удаляет опухоль. Однако этот подход не рекомендуется для недиагностированной кожи и поверхностных образований, поскольку хирургические подходы зависят от типа опухоли. При доброкачественных новообразованиях краевое иссечение может быть адекватным для долгосрочного контроля. Напротив, злокачественные опухоли часто требуют границ от 2 до 3 см. 1,4–6 Когда эксцизионная биопсия (или операция по удалению опухоли) приводит к неполным границам злокачественных опухолей, это требует большего лечения, большей заболеваемости и больших затрат.Таким образом, полное удаление новообразования не рекомендуется без клеточной диагностики перед окончательным удалением. Исследования подтверждают, что первая операция — лучший шанс на излечение. 2

    Что мы найдем?

    Первичные кожные и подкожные опухоли часто встречаются у собак и кошек. Хотя общую заболеваемость трудно определить, примерно от 25% до 43% представленных образцов биопсии собак и кошек относятся к коже. Сообщается, что от 20% до 40% представленных образцов являются злокачественными. 7

    Наиболее распространенными злокачественными опухолями кожи у собак являются тучноклеточные опухоли, саркомы мягких тканей и плоскоклеточный рак. Наиболее распространенные доброкачественные опухоли кожи и подкожные доброкачественные опухоли у собак включают липомы, гистиоцитомы и аденомы перианальных желез. 7

    У кошек наиболее распространенными поверхностными опухолями являются опухоли базальных клеток, опухоли тучных клеток, плоскоклеточные карциномы и фибросаркомы. Эти 4 типа опухолей составляют около 70% всех опухолей кожи у кошек.Аденомы сальных желез встречаются гораздо реже. Если исключить базально-клеточные опухоли, процент злокачественных новообразований кожи у кошек выше, чем у собак, а исследования сообщают от 70% до 80%. 7

    СВОДКА

    Визуального мониторинга поверхностных масс недостаточно. Рак — это клеточный диагноз. Всегда рекомендуется оценивать опухоли, которые увеличиваются, меняются по внешнему виду или вызывают раздражение у пациента, но этих рекомендаций недостаточно. Все кожные и подкожные образования размером> 1 см, присутствующие в течение 1 месяца, должны быть аспирированы для цитологического исследования.Биопсия показана, если цитология не позволяет поставить диагноз.

    Ветеринары и владельцы домашних животных должны активно выступать за раннее обнаружение рака. Если опухоли обнаруживаются и удаляются раньше — когда они маленькие и с чистыми краями — прогноз часто хороший, и пациенту может не потребоваться дополнительная терапия. Что-нибудь увидишь, сделай что-нибудь!

    Список литературы

    1. Нортруп Н., Гейгер Т. Опухоли кожи, подкожной клетчатки и других мягких тканей. В: Генри С., Хиггинботэм М.Л., ред. Лечение рака у мелких животных . Сондерс; 2010: 299-313.
    2. Биллер Б., Берг Дж., Гарретт Л. и др. Руководство AAHA по онкологии для собак и кошек, 2016 г. Доступно по адресу: aaha.org/graphics/original/professional/resources/guidelines
      /2016_aaha_oncology_guidelines_for_dogs_and_cats.pdf. По состоянию на апрель 2017 г.
    3. Генри CJ, Папа ЕР. Методы диагностики опухолей: тонкоигольная аспирационная биопсия. В: Генри С., Хиггинботэм М.Л., ред. Лечение рака у мелких животных .Сондерс; 2010: 41-58.
    4. Selting KA. Саркомы мягких тканей. В: Генри С., Хиггинботэм М.Л., ред. Лечение рака у мелких животных . Сондерс; 2010: 321-324.
    5. Лондон, Калифорния, Тамм, DH. Опухоли тучных клеток. В: Уитроу С.Дж., Вейл Д.М., Пейдж Р., ред. Клиническая онкология мелких животных . 5-е изд. Сент-Луис, Миссури: Эльзевьер Сондерс; 2013: 333-355.
    6. Liptak JM, Forrest LJ. Саркомы мягких тканей. In: In: Withrow SJ, Vail DM, Page R, ред. Клиническая онкология мелких животных .5-е изд. Сент-Луис, Миссури: Эльзевьер Сондерс; 2013: 356-380.
    7. Hauck ML. Опухоли кожи и подкожных тканей. In: In: Withrow SJ, Vail DM, Page R, ред. Клиническая онкология мелких животных . 5-е изд. Сент-Луис, Миссури: Эльзевьер Сондерс; 2013: 305-320.

    Тест на онкомаркеры AFP: цель и объяснение результатов

    Обычно в вашем организме очень небольшое количество альфа-фетопротеина (AFP). Но когда у вас заболевание печени, некоторые виды рака или вы беременны, у вас обычно его больше в крови.Тест на онкомаркер AFP проверяет уровень этого белка.

    Более высокий уровень AFP не всегда означает, что у вас проблемы со здоровьем. У некоторых людей просто больше АФП, чем обычно.

    Почему вы проходите тестирование

    Ваш врач может попросить вас пройти анализ крови на онкомаркер на AFP:

    • Определите причину образования опухоли в печени, яичках или яичниках
    • Помогите выбрать лучшее лечение рака
    • Посмотрите, насколько эффективно работает лечение рака.
    • Убедитесь, что рак не вернулся после лечения.

    Тесты на AFP также позволяют выявить врожденные дефекты у будущего ребенка.Врачи также могут проверить спинномозговую жидкость на АФП, в зависимости от того, что они ищут.

    Как это делается

    Вы можете сдать анализ крови на АФП в кабинете врача или в больнице. Техник воспользуется иглой, чтобы взять образец из вены на руке или руке. Вы можете почувствовать небольшой укол и небольшое кровотечение или синяк в месте введения иглы.

    Затем они отправят вашу кровь в лабораторию.

    Что означают результаты

    Врачи измеряют АФП в вашей крови в нанограммах на миллилитр (нг / мл).Нормальный уровень для большинства здоровых взрослых составляет от 0 до 8 нг / мл.

    Многие вещи, в том числе рак, заболевания печени, такие как гепатит и цирроз, а также заживающая травма печени, могут увеличить это число. Скорее всего, вам понадобится больше тестов, чтобы поставить правильный диагноз.

    Очень высокие уровни — от 500 до 1000 нг / мл или более — часто являются признаком определенных видов рака. Другие типы рака могут не выявиться при тестировании на АФП.

    Если у вас уже есть заболевание печени, уровень АФП более 200 нг / мл обычно означает, что у вас рак печени.

    Тест AFP-L3%

    Людям с повышенным уровнем АФП, но менее 200 нг / мл врач может провести тест AFP-L3% (также называемый L3AFP). Это позволяет сравнить количество определенного вида AFP (AFP-L3) с общим количеством AFP в вашей крови. Это помогает врачам понять, что происходит, особенно если у вас хроническое заболевание печени, например, цирроз.

    Результат AFP-L3%, равный 10% или более, предполагает, что у вас более высокие шансы заболеть раком печени, и вашему врачу следует внимательно следить за его признаками.

    После постановки диагноза

    Эти тесты также могут помочь вашему врачу проверить, насколько эффективно ваше лечение рака. В идеале вы хотите вернуться на нормальный уровень.

    Регулярные анализы на АФП также могут помочь в раннем выявлении рецидива. Если рак, который у вас был ранее, вернется, ваш уровень АФП повысится, иногда до того, как у вас появятся какие-либо симптомы.

    Модель экстравазации опухолевых клеток in vitro

    Abstract

    Опухолевые клетки, которые распространяются из первичной опухоли и выживают в сосудистой системе, могут в конечном итоге экстравазировать через эндотелий и метастазировать во вторичный участок.В этом исследовании мы разработали микрофлюидную систему для имитации экстравазации опухолевых клеток, при которой раковые клетки могут трансмигрировать через эндотелиальный монослой в гидрогель, моделирующий внеклеточное пространство. Протокол эксперимента оптимизирован для обеспечения образования неповрежденного эндотелия перед введением опухолевых клеток, а также для наблюдения за экстравазацией опухолевых клеток за счет наличия подходящей плотности засева опухоли. Экстравазация наблюдается у 38,8% опухолевых клеток, контактирующих с эндотелием, в течение 1 суток после их введения.Проницаемость монослоя ЭК, измеренная по диффузии флуоресцентно меченного декстрана через монослой, увеличилась в 3,8 раза через 24 часа после введения опухолевых клеток, что позволяет предположить, что присутствие опухолевых клеток увеличивает проницаемость эндотелия. Процент экстравазированных опухолевых клеток оставался почти постоянным от 1 до 3 дней после посева опухоли, что указывает на то, что экстравазация в нашей системе обычно происходит в течение первых 24 часов после контакта опухолевых клеток с эндотелием.

    Образец цитирования: Jeon JS, Zervantonakis IK, Chung S, Kamm RD, Charest JL (2013) Модель экстравазации опухолевых клеток in vitro .PLoS ONE 8 (2): e56910. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0056910

    Редактор: Сотириос Куцопулос, Массачусетский технологический институт, Соединенные Штаты Америки

    Поступила: 14.11.2012; Одобрена: 15 января 2013 г .; Опубликовано: 20 февраля 2013 г.

    Авторские права: © 2013 Jeon et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

    Финансирование: Исследование было поддержано грантом № R21CA140096 от Национального института рака и Draper Laboratories Inc. (грант IR&D). J. Jeon был поддержан стипендией Repligen Fellowship в исследованиях рака, а S. Chung — Программой фундаментальных научных исследований (грант № 2012-022481) и Программой развития человеческих ресурсов (грант № 20124010203250). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

    Конкурирующие интересы: Джозеф Л. Чарест работает в лаборатории Чарльза Старка Дрейпера, которая является одним из спонсоров этого исследования. Нет никаких патентов, продуктов в разработке или продаваемых продуктов, которые можно было бы декларировать. Это не влияет на соблюдение авторами всех политик PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами.

    Введение

    Метастазы опухоли — признак злокачественного рака и причина 90% смертей от рака у людей [1], [2]. Таким образом, реальная угроза рака заключается в том, что злокачественные опухолевые клетки способны ускользать из первичного очага и образовывать метастатические колонии во вторичных очагах.Во время метастазирования эпителиальные раковые клетки претерпевают эпителиально-мезенхимальный переход (EMT), рассеиваются из первичной опухоли и проникают в сосуды. Раковые клетки, попав в кровоток, транспортируются в удаленное место, где они могут экстравазироваться из сосудистой системы в окружающие ткани, чтобы колонизировать удаленные участки, завершая процесс распространения [3], [4]. Хотя существует огромное количество литературы по онкогенной трансформации и возникновению первичной опухоли, гораздо меньше исследований посвящено вопросам, связанным с метастазированием [5].Нет сомнений в том, что более глубокое понимание метастазирования рака может привести к новым терапевтическим стратегиям, направленным на пути инвазии и повышению выживаемости при раке [6].

    Экстравазация — жизненно важный этап распространения раковых клеток, позволяющий успешно создать вторичный метастаз. Процесс экстравазации состоит из: 1) транспорта через кровообращение, 2) остановки рядом со стенкой сосуда и 3) трансмиграции через эндотелиальный монослой во вторичный сайт [7].Для остановки опухолевых клеток на стенке сосуда были предложены два возможных режима. Одна из них, предложенная Пэджетом в качестве гипотезы «семян и почвы», заключается в том, что опухоли различных органов демонстрируют уникальные паттерны метастатической колонизации в определенные органы посредством сайт-селективной адгезии [8]. Во втором режиме опухолевые клетки застревают в мелких сосудах из-за ограничения размера, поскольку опухолевые клетки, как правило, больше, чем другие циркулирующие клетки, а также могут агрегировать с тромбоцитами [9], [10], [11]. Хотя оба режима наблюдались во время экстравазации [3], [12], [13], [14], до сих пор неясно, какой из них является доминирующим, или же различные типы опухолей предпочтительно демонстрируют определенный тип остановки перед трансмиграцией.Кроме того, инвазивное поведение опухолевых клеток зависит от перекрестного взаимодействия между опухолью и клетками-хозяевами в сложном трехмерном (3D) микроокружении [15]. Прямое наблюдение остановки опухолевых клеток на эндотелии в контролируемых условиях микросреды может дать полезную информацию об этом решающем этапе экстравазации. Кроме того, образование вторичных метастазов в отдаленном органе после трансмиграции требует взаимодействия опухолевых клеток с разнообразным набором компонентов внеклеточного матрикса (ЕСМ), такими как коллаген, ламинин и фибронектин [16].Однако роль сигналов микроокружения и градиентов цитокинов в ткани во время процесса экстравазации до конца не изучена.

    Традиционные исследования экстравазации основаны в первую очередь на инъекции опухолевых клеток в хвостовую вену с последующим визуализацией и анализом in vivo [17], [18]. Хотя эти эксперименты in vivo обеспечивают наиболее физиологически репрезентативные условия для экстравазации, они имеют ограничения при изучении взаимодействий опухоли и сосудов, поскольку видеомикроскопия обеспечивает лишь ограниченную визуализацию события, а строго регулируемые параметрические исследования невозможны. In vitro модели предлагают решения этих проблем, которые привели к широкому использованию камеры Бойдена для моделирования инвазии или миграции раковых клеток [19], [20]. Относительная простота работы является преимуществом этой системы, но есть ограничения в ее использовании для изучения сложных взаимодействий между раковыми клетками и эндотелием. Камера Бойдена имеет ограниченный контроль над местной микросредой и менее чем оптимальные возможности визуализации. В попытке удовлетворить эти потребности наблюдается растущий интерес к использованию микрофлюидных технологий, поскольку они обеспечивают простые, но эффективные средства для исследования этих явлений под строгим контролем биохимической и биофизической среды [21], [22], [23], [24].

    Ранее мы сообщали о микрожидкостной платформе in vitro , которая предлагает возможность более реалистично имитировать ситуацию 3D in vivo в контролируемой среде, одновременно предоставляя возможности визуализации in situ для визуализации, тем самым обеспечивая количественную оценку клетка-клетка и межклеточные взаимодействия [25], [26], [27], [28]. Более того, система позволяет параметрическое изучение множества факторов в контролируемых и повторяемых условиях, а также изучение множества типов клеток с эндотелиальным барьером [26], [29], [30].В то время как никакая система in vitro не может полностью воспроизвести ситуацию in vivo , микрофлюидика предлагает возможность создавать специфичные для органов микроокружения для изучения различных метастатических паттернов различных типов рака в регулируемой и легко визуализируемой модели.

    Микрожидкостные платформы различной конструкции ранее использовались для изучения миграции клеток и интравазации опухолевых клеток [24], [31]. В этой статье мы использовали устоявшуюся микрофлюидную систему для исследования критических этапов экстравазации рака — адгезии опухолевых клеток к эндотелию, трансмиграции через эндотелиальный монослой, пролиферации в удаленных тканях — и ее последствий.Наша экспериментальная платформа имитирует микросреду опухоли, позволяет получать изображения экстравазации опухолевых клеток и ранних этапов колонизации с высоким разрешением, что позволяет лучше количественно определять критические показатели инвазивности раковых клеток.

    Материалы и методы

    Микрожидкостная система

    В этих исследованиях мы использовали ранее разработанную микрофлюидную систему, состоящую из трех независимо адресуемых медиа-каналов, разделенных камерами, в которые может быть введен гель, имитирующий ECM (рис.1а). Детали конструкции и шаги, необходимые для изготовления систем в PDMS, были описаны ранее [25], [28], [30]. Вкратце, микрофлюидная система состоит из формованного ПДМС (полидиметилсилоксан; Silgard 184; Dow Chemical, MI), через который отверстия для доступа просверливаются и прикрепляются к покровному стеклу для образования микрофлюидных каналов. Размеры поперечного сечения канала — 1 мм (ширина) на 120 мкм (высота). Слой PDMS формируется из фоторезиста SU8 с рисунком на кремниевой пластине с использованием мягкой литографии.Для усиления адгезии матрикса каналы PDMS покрывают раствором PDL (поли-D-лизин гидробромид; 1 мг / мл; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури). Затем раствор коллагена I типа (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США) (2,0 мг / мл) с фосфатно-солевым буфером (PBS; Gibco) и NaOH вводится в области геля устройства через 4 отдельных порта наполнения с использованием пипетку на 10 мкл и инкубируют в течение 30 мин для образования гидрогеля, выбранного для представления ЕСМ в трехмерном пространстве. Когда гель полимеризуется, среда эндотелиальных клеток немедленно вносится в каналы для предотвращения обезвоживания геля.После аспирации среды разбавленный раствор Matrigel ™ (BD science) (3,0 мг / мл) вводится в канал клеток, а избыток раствора Matrigel ™ смывается через 1 минуту с использованием холодной среды. Двухмерные виды устройства сверху и спереди показаны на рис. 1b – c, чтобы показать, как эта микрофлюидная система используется для моделирования экстравазации. Сначала вводятся эндотелиальные клетки, чтобы покрыть весь средний канал, а затем вводятся раковые клетки, так что они прикрепляются к уже сформированному эндотелию и мигрируют через него в область геля.Средний канал действует как клеточный канал, куда вводятся как эндотелиальные, так и раковые клетки с образованием монослоя и трансмиграцией соответственно.

    Рисунок 1. Общая схема устройства.

    Микрожидкостная система, состоящая из трех независимо адресуемых медиа-каналов, разделенных камерами, в которые может быть введен гель, имитирующий ECM (a). На рисунке 1b показан вид устройства изнутри с эндотелиальным монослоем (синий), покрывающим центральный канал. Этот канал действует как клеточный канал, куда вводятся эндотелиальные и раковые клетки с образованием монослоя и трансмиграцией соответственно (b).Зеленая область указывает на трехмерное пространство, заполненное коллагеновым гелем, а розовые области указывают на канал, заполненный средой. Раковые клетки, которые прикрепляются к эндотелиальному монослою, могут экстравазироваться в область геля коллагена, как показано на (c).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0056910.g001

    Культура клеток и отбор клеток

    Эндотелиальные клетки микрососудов человека (hMVEC) были коммерчески получены (Lonza) и культивированы в среде для роста эндотелия (EGM-2MV, Lonza).Клетки культивировали в стандартных культуральных колбах, и среду меняли каждые два дня до посева. Во время процесса посева 40 мкл суспензии hMVEC при 2 × 10 6 клеток / мл вводили в подготовленное микрофлюидное устройство. Клетки выдерживали в инкубаторе при 37 ° C в течение 1 часа, чтобы обеспечить адгезию клеток к стенке коллагенового каркаса. Все эксперименты проводились с использованием hMVEC 8-го пассажа или ниже. Клетки аденокарциномы молочной железы человека (MDA-MB-231) были выбраны из-за их инвазивности и способности метастазировать in vivo [32], [33].GFP-экспрессирующая версия клеточной линии MDA-MB-231 (предоставленная F. Gertler, MIT) позволила визуализировать живые клетки с помощью флуоресцентной микроскопии. Линии раковых клеток культивировали в стандартной среде DMEM (Sigma) с 10% фетальной бычьей сывороткой (Invitrogen) и антибиотиками. Линия эпителиальных клеток молочной железы человека MCF-10A (предоставленная лабораторией Брюгге, Гарвардская медицинская школа) культивировали, как описано ранее [34]. Через два дня после посева эндотелиальных клеток опухолевые клетки вводили в тот же канал, где эндотелиальные клетки сформировали полный монослой.Колбы для культивирования, содержащие опухолевые клетки, сначала промывали PBS, а затем клетки обрабатывали трипсином в течение 5 минут, чтобы получить суспензию клеток в среде для раковых клеток. Для посева 40 мкл 50000 клеток / мл суспензионной среды опухолевых клеток помещали в одну сторону резервуара канала и оставляли для уравновешивания. Среду для суспензии опухолевых клеток из канала удалили через 1 час, и все каналы в устройстве были заполнены средой для культивирования эндотелиальных клеток. Контрольный эксперимент с MCF-10A проводили в соответствии с точным протоколом посева опухолевых клеток.Все культуры хранили в увлажненном инкубаторе, который поддерживали при 37 ° C и 5% CO 2 .

    Проницаемость эндотелиального монослоя

    После образования полного эндотелиального монослоя на 2 день, диффузионную проницаемость измеряли с флуоресцентно меченными декстранами в культуральной среде, как показано на фиг. S1 (каскадный синий 10 кДа и техасский красный 70 кДа, Invitrogen). Эндотелиальные монослои, выращенные в нашей микрофлюидной системе, показали более низкие значения диффузионной проницаемости для декстрана с меньшей молекулярной массой, что подтверждает наличие избирательного по размеру эндотелиального барьера.Чтобы охарактеризовать изменения проницаемости при экстравазации, мы использовали декстран 70 кДа. Перед введением декстрана в устройство эндотелий сначала исследовали с помощью фазово-контрастного микроскопа (Nikon, Токио, Япония), чтобы подтвердить образование монослоя как в верхней, так и в нижней части канала путем фокусировки на разной высоте. Всю среду в резервуарах устройства сначала аспирировали, а затем повторно заполняли контрольной средой в боковых каналах, тогда как средний канал засеянный клетками был заполнен флуоресцентным раствором декстрана (10 мкг / мл) в среде в засеянном клетками среднем канале.В каждый канал сразу же добавляли ровно 110 мкл, чтобы поддерживать равное давление и тем самым избегать конвективного потока через гидрогель. Затем устройства помещали в инкубатор на 3 часа для достижения устойчивого состояния, получали флуоресцентные изображения распределения декстрана с использованием эпифлуоресцентного микроскопа (Nikon TE300, камера Hamamatsu ORCA-ER) и обрабатывали с помощью программного обеспечения OPENLAB 4.0.4. Позже изображения были проанализированы с использованием MATLAB для расчета интенсивности флуоресценции в монослое. Для определения диффузионной проницаемости рассчитывали распределение изменения интенсивности флуоресценции в зависимости от расстояния, перпендикулярного плоскости эндотелиального слоя.Подробная процедура измерения проницаемости была описана ранее [24], [35], [36], [37]. Вкратце, мы использовали уравнение P = D [dC / dx] / ΔC ec , где P — диффузионная проницаемость (см / с), dC / dx — градиент концентрации декстрана, ΔC ec — разность концентраций поперек монослоя, а D — коэффициент диффузии декстрана.

    Иммунофлуоресцентное окрашивание и получение изображений

    Все клетки в устройстве промывали фосфатно-солевым буфером (PBS), а затем фиксировали 4% параформальдегидом в течение 15 мин.После двукратной промывки PBS клетки подвергали проницаемости 0,1% -ному раствору Triton-X 100 в течение 5 минут и блокировали 5% -ным раствором BSA в течение 5 часов. VE-кадгерин метили кроличьим поликлональным антителом (поликлональным; Alexis Biochemical) при разведении 1-100 и затем наносили флуоресцентно-меченное вторичное антитело. Ядра клеток окрашивали DAPI (Invitrogen) при разведении 1-1000. Все изображения были получены с помощью конфокального микроскопа (Leica) и обработаны с помощью программного обеспечения IMARIS.

    Метрики экстравазации

    Количественный подсчет клеток проводили после иммунофлуоресцентного окрашивания.Конфокальные данные были проанализированы с использованием IMARIS и его алгоритмов отслеживания для выбора и подсчета ядер в конкретной области интереса (ROI). ROI представляла собой область трехмерного геля между штифтом PDMS и стенкой, как видно на обведенной рамкой области на фиг. 1b, которая была выбрана во время конфокальной визуализации и содержала как область канала эндотелиальной выстилки, так и коллагеновый гель. Области интереса были выбраны таким образом, чтобы избежать краевых эффектов, связанных со стенами и столбами PDMS. Размеры ROI составляли 250 мкм × 250 мкм × 120 мкм (высота), и каждое микрофлюидное устройство содержало всего восемь ROI.Хотя каждая область интереса анализировалась индивидуально, процент экстравазации измерялся для каждого устройства. Поскольку опухолевые клетки экспрессируют GFP, подсчитывали клетки с зеленым и синим сигналом, чтобы отслеживать количество опухолевых клеток.

    Статистика

    Все указанные значения являются средними значениями измерений минимум 4 устройств, каждое из которых имеет минимум 2 и максимум 8 областей интереса со стандартными ошибками. Сравнения между непарными группами оценивались с использованием непарного t-критерия Стьюдента и непараметрической U-статистики Манна-Уитни, тогда как парные измерения проницаемости оценивались с использованием парного t-критерия.Статистические данные о плотности посева опухолей получали с использованием однофакторного дисперсионного анализа. Статистическая значимость была принята для p <0,05. Все тесты проводились с SigmaPlot v.12.

    Результаты и обсуждение

    Моделирование процесса экстравазации

    Хотя остается значительная неопределенность в отношении критического, ограничивающего скорость шага в образовании метастатических опухолей, способность циркулирующих опухолевых клеток (ЦКО) прилипать и переселяться через эндотелий в удаленном месте, безусловно, имеет важное значение.Многочисленные исследования рассматривали эту проблему, но проблемы создания значимой платформы для тестирования in vitro были серьезным препятствием для лучшего понимания и, что важно, создали барьер для идентификации лекарств, которые могут ингибировать экстравазацию. Недавние исследования начали решать эту проблему с использованием передовой микрофлюидики [21], [22], [23], но у каждого из них есть свои ограничения. В текущей модели мы демонстрируем возможность мониторинга всего процесса экстравазации.Наши предыдущие исследования в подобной системе продемонстрировали, что изменения проницаемости эндотелия тесно связаны с интравазацией [24], поэтому мы стремились изучить аналогичные изменения, которые могут произойти во время экстравазации. Кроме того, отслеживая клетки во времени, мы смогли изучить поведение, зависящее от времени, важный фактор, который влияет как на выживаемость ЦКО до экстравазации, так и на их способность реконфигурировать непосредственное микросредство до трансмиграции.

    Подтверждение целостности эндотелиального слоя

    Микрожидкостная система была разработана для моделирования экстравазации опухолевых клеток, когда опухолевые клетки вводятся в канал, выстланный сливным эндотелиальным монослоем. Используя фазово-контрастную микроскопию, наблюдали, что hMVECs образуют конфлюэнтный монослой на поверхности микроканалов и на границе раздела ECM-эндотелиальный канал через два дня после посева эндотелиальных клеток. Целостность эндотелиального монослоя подтверждали как флуоресцентной визуализацией распределения декстрана, так и конфокальной микроскопией фиксированных и меченых клеток.Неповрежденный эндотелиальный монослой вызывает резкое падение интенсивности между каналом и областью геля после введения флуоресцентно меченного декстрана и сохраняется со временем, поскольку декстран медленно диффундирует через монослой в гель (Рис. 2a-b). Образцы, фиксированные на третий день после посева клеток и окрашенные на VE-кадгерин и ядра (DAPI-синий), демонстрируют четко определенные соединения без видимых разрывов в сливном монослое (рис. 2c). Количественная оценка и анализ интенсивности флуоресценции дает значения проницаемости эндотелия для декстрана 70 кДа (3.70 ± 0,59) ⋅10 −6 см / с, что примерно на порядок выше опубликованных значений in vivo , но согласуется с ранее сообщенными значениями в системах in vitro [35], [38]. Более высокие значения проницаемости могут быть обусловлены множеством факторов, присутствующих in vivo , но отсутствующих в модели in vitro . Например, хорошо известно, что наличие перицитов помогает установить низкую проницаемость сосудов 90–159 in vivo 90–160 [38].Ввиду нашей предыдущей работы, демонстрирующей, что повышенная проницаемость коррелирует с увеличением скорости интравазации [24], в той степени, в которой клетки используют аналогичные механизмы экстравазации, как и интравазация, текущая частота экстравазации может рассматриваться как смещенная в сторону более высоких значений, чем физиологические.

    Рисунок 2. Подтверждение целостности эндотелиального монослоя.

    Целостность эндотелиального монослоя была подтверждена как флуоресцентной визуализацией распределения декстрана, так и конфокальной микроскопией фиксированных и меченых клеток.Неповрежденный эндотелиальный монослой вызывает резкое падение интенсивности между каналом и областью геля после введения флуоресцентно меченного декстрана. Через три часа после инъекции декстрана в эндотелиальном слое наблюдается резкое падение интенсивности флуоресценции, демонстрирующее его функцию барьера для макромолекул (а). Интенсивность флуоресценции количественно определяют с помощью Matlab (b). Пунктирная стрелка на (а) — местоположение и направление количественного определения. Значение интенсивности падает до 15% от пикового значения из-за барьерного эффекта.Эндотелиальный монослой расположен около точки 400 мкм на графике (показано пунктирной линией). Образцы, фиксированные на третий день после посева клеток и окрашенные на VE-кадгерин и ядра (DAPI-blue), демонстрируют четко определенные соединения без видимых разрывов в сливном монослое (c). Конфокальное изображение показывает вид микрофлюидного устройства спереди.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0056910.g002

    Оптимизация посева опухолевых клеток

    По клиническим данным, количество опухолевых клеток, которые проникли в сосуды и перемещаются в кровотоке, составляет менее ∼100 из 7.В среднем 5 мл крови [39], [40]. Для целей этих экспериментов мы решили использовать плотность посева, которая не была ни такой низкой, что мы не могли наблюдать значительное количество случаев экстравазации в разумном количестве экспериментов, ни такой высокой, чтобы опухолевые клетки были плотно упакованы на эндотелиальной поверхности. . Эта последняя ситуация может привести к взаимодействиям с опухолевыми клетками, которые плохо отражают ситуацию in vivo . Следовательно, в этом эксперименте плотность посева опухолевых клеток была оптимизирована, чтобы иметь только ограниченное количество опухолевых клеток в области интереса при сохранении максимально возможного количества экспериментальных областей интереса, которые содержат по крайней мере одну опухолевую клетку, чтобы облегчить наблюдение за событием экстравазации.Гистограммы общего количества опухолевых клеток, присутствующих в каждой области интереса, показывают разные тенденции в распределении опухолевых клеток для трех различных плотностей посева опухолей: 20000 клеток / мл, 50000 клеток / мл и 200000 клеток / мл (рис. 3a). Хотя наименьшая плотность засева опухоли приводит к наименьшему среднему количеству опухолевых клеток в каждой области интереса, как показано на рис. 3b, это связано с наличием областей интереса без каких-либо опухолевых клеток в 55% случаев. Среднее значение и гистограмма могут использоваться для выбора оптимальных условий посева опухоли, и плотность посева 50000 клеток / мл была выбрана как компромисс между имитацией низкого количества опухолевых клеток in vivo в условиях экстравазации и увеличением шанс получить хотя бы одну опухолевую клетку для анализа в любой области интереса.

    Рисунок 3. Оптимизация плотности посева опухолевых клеток.

    Плотность засева опухолевых клеток была оптимизирована для того, чтобы иметь только ограниченное количество опухолевых клеток в области интереса при сохранении максимально возможного количества экспериментальных областей интереса, содержащих по крайней мере одну опухолевую клетку, чтобы можно было наблюдать события опухолевых клеток. Гистограммы общего количества опухолевых клеток, присутствующих в каждой области интереса (250 мкм × 250 мкм × 120 мкм), показывают разные тенденции в распределении опухолевых клеток для трех различных плотностей посева опухолей: 20000 клеток / мл, 50000 клеток / мл и 200000 клеток / мл (а).Среднее значение и гистограмма могут использоваться для выбора оптимального условия засева опухоли (б). Плотность посева 50000 клеток / мл была выбрана в качестве компромисса между имитацией небольшого количества опухолевых клеток in vivo в условиях экстравазации и увеличением шансов иметь хотя бы одну опухолевую клетку для анализа в любой данной области интереса. Статистическая значимость была проверена с помощью однофакторного дисперсионного анализа (p <0,05).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0056910.g003

    Экстравазация

    Опухолевые клетки, которые распространяются из первичной опухоли и выживают в сосудистой системе, в конечном итоге могут мигрировать через эндотелий, чтобы колонизировать вторичную опухоль. Разработав микрофлюидную систему, мы можем имитировать стадию экстравазации, когда опухолевые клетки могут трансмигрировать через эндотелиальный монослой в гидрогель, который моделирует внеклеточное пространство вторичного опухолевого участка. Событие экстравазации наблюдается в устройствах, которые фиксируются через 1 день после введения опухолевых клеток, и прямая количественная оценка количества экстравазированных клеток обеспечивает показатель экстравазации.Интересующая область (ROI) фиксируется в одном конфокальном сканировании изображения и показывает одну раковую клетку, помеченную зеленым, которая пересекла эндотелий, обозначенная окрашиванием VE-кадгерином красным цветом, и экстравазировалась в область геля (рис. 4a). . На изображениях поверхности конфокального сканирования других образцов показано три различных возможных местоположения опухолевых клеток через 1 день после посева: 1) экстравазированные и в геле, 2) прикрепленные и расположенные на эндотелии, прилегающем к области геля, и 3) в канале, не близком к области геля. гель (рис.4б). Поверхность и виды в разрезе устройства показаны на фиг. 4b. Здесь наблюдаются все три сценария того, где могут быть опухолевые клетки. Есть случаи, когда все опухолевые клетки, присутствующие в ROI, экстравазировались, а также случаи, когда ни одна из опухолевых клеток не пересекала эндотелий. Однако чаще встречаются области, которые содержат как экстравазированные, так и не экстравазированные клетки, как на рис. 4b. Количественно это видно на фиг. 4c, где в 51% ROI обнаружены опухолевые клетки с противоположной судьбой. График показывает, сколько опухолевых клеток экстравазировалось, как показано точками, среди общего количества опухолевых клеток, присутствующих в каждой интересующей области.Опухолевые клетки классифицируются как экстравазированные только тогда, когда они четко прошли эндотелиальный монослой в область геля.

    Рисунок 4. Наблюдение за экстравазией и проницаемостью эндотелия.

    Событие экстравазации наблюдается в образце, который фиксируют через 1 день после введения опухолевых клеток. Интересующая область захватывается одним сканированием конфокального изображения и показывает одну раковую клетку (зеленую), которая пересекла эндотелий (обозначена окрашиванием VE-кадгерином красным цветом) и экстравазировалась в область геля (а).Вид поверхности конфокального сканирования показывает три различных возможных местоположения опухолевых клеток: 1) экстравазированные и в геле, 2) прилипшие и на эндотелии, прилегающем к области геля, и 3) в канале не рядом с гелем. Вид в разрезе того же конфокального сканирования подтверждает различное расположение опухолевых клеток (b). График показывает, сколько опухолевых клеток экстравазировало (точка) среди общего количества присутствующих опухолевых клеток (столбик) для каждой анализируемой области интереса (c). Опухолевые клетки классифицируются как экстравазированные только тогда, когда опухолевые клетки четко прошли эндотелиальный монослой в область геля.Проницаемость эндотелиального монослоя значительно изменяется при добавлении опухолевых клеток (d). Флуоресцентно меченый декстран вводили на 3 день после посева эндотелия для измерения проницаемости до опухоли и снова в те же образцы на 4 день, чтобы увидеть эффекты после посева опухоли. Опухолевые клетки вводят на 3-й день после измерения проницаемости на 3-й день. Статистическая значимость проверялась парным t-критерием (p <0,05).

    https://doi.org/10.1371 / journal.pone.0056910.g004

    Измерение проницаемости эндотелия — это один из методов количественной оценки качества эндотелиального монослоя. Кроме того, проницаемость служит показателем для количественной оценки изменения эндотелия, когда опухолевые клетки добавляются в систему и взаимодействуют посредством физического прикрепления к эндотелиальной поверхности. Негерметичность сосуда с опухолевыми клетками или без них обеспечивает возможное объяснение событий, ведущих к экстравазации рака, поскольку передача сигналов опухолевыми ЦКО может нарушать барьерную функцию.Альтернативно, увеличение проницаемости может быть результатом трансмиграции опухолевых клеток. В настоящих экспериментах невозможно отличить эти два сценария. В этом эксперименте проницаемость значительно изменилась при добавлении опухолевых клеток по сравнению с изменением проницаемости, происходящим в течение того же 24-часового периода, когда опухолевые клетки не добавлялись (фиг. 4d). Флуоресцентно меченый декстран вводили на 3 день после посева эндотелиальных клеток для измерения проницаемости перед введением опухолевых клеток.Изображения были сделаны через 3 часа после введения декстрана для достижения квазистационарного состояния. Опухолевые клетки вводятся сразу после измерения проницаемости. Через 24 часа снова вводили флуоресцентно меченый декстран для измерения проницаемости после взаимодействий опухолевые клетки и эндотелиальные клетки. Начальное значение проницаемости составляло (3,70 ± 0,59) 10 −6 см / с, а засев опухоли увеличивал проницаемость эндотелия до (14,2 ± 2,6) 10 −6 см / с (p <0,05), тогда как не было. существенное изменение контроля ((6.0 ± 1,1) ⋅10 −6 до (6,4 ± 1,9) ⋅10 −6 см / с) за тот же 24-часовой период.

    В качестве контроля мы измерили изменение проницаемости эндотелия и скорость экстравазации нормальной линии эпителиальных клеток, MCF-10A, в нашей микрофлюидной системе. В то время как экстравазация наблюдалась для 38,8 ± 7,9% опухолевых клеток, контактировавших с эндотелием через 1 день после посева, соответствующая скорость экстравазации MCF-10A через эндотелий была ниже, 23,8 ± 4,7%, хотя существенно не различалась.Добавление MCF-10A также индуцировало 2-кратное увеличение проницаемости эндотелия с (5,78 ± 0,47) 10 −6 до (11,88 ± 2,15) 10 −6 см / с (p <0,05), как показано на рис. S2. Это увеличение меньше, чем увеличение проницаемости, полученное после добавления MDA-MB-231 (в 3,8 раза). Следовательно, клетки MDA-MB-231 демонстрируют повышенную тенденцию к экстравазации и нарушению функции эндотелиального барьера по сравнению с нормальными эпителиальными клетками. Эти результаты показывают, что наша микрофлюидная система способна выявлять различия между различными линиями эпителиальных клеток, и наши результаты согласуются с исследованиями экстравазации в анализе трансвелл [41].

    Изменение проницаемости эндотелия регулируется экспрессией VE-cadherin посредством пути Src, и исследования in vivo моделей показали, что нарушение функции эндотелиального барьера увеличивает эффективность экстравазации [42]. Существует несколько механизмов, которые могут объяснить изменения проницаемости из-за взаимодействий с опухолевыми клетками; увеличение проницаемости также может быть связано с тем, что опухолевые клетки локально разрушают эндотелиальный монослой путем контакта [43], [44], [45] или через секрецию химических факторов, которые затем ставят под угрозу функцию эндотелиального барьера [46], но необходимы дополнительные исследования для четкое определение причины увеличения проницаемости.

    За пределами экстравазации

    Опухолевые клетки наблюдаются в течение 3 дней после посева опухолевых клеток и сравниваются с опухолевыми клетками в первый день. Среднее общее количество опухолевых клеток, присутствующих в ROI, значительно увеличивается с 7,9 ± 1,6 клеток в день 1 до 13,4 ± 1,5 клеток в день. 3, в то время как все экспериментальные условия, включая плотность посева опухоли, оставались прежними (рис. 5а). Это значительное увеличение количества опухолевых клеток демонстрирует пролиферацию с 1 по 3 день в целом. Общее количество опухолевых клеток далее подразделяется на рис.5b на 2 подгруппы в зависимости от их расположения: либо 1) экстравазированные и в геле, либо 2) прикрепленные к эндотелию, прилегающему к гелю. Количество опухолевых клеток на ROI в геле увеличилось с 1,9 ± 0,4 клеток в день 1 до 6,1 ± 1,7 клеток на 3 день, в то время как количество клеток эндотелия изменилось с 4 клеток в день 1 до 7 клеток в день 3. Это увеличение опухоли количество клеток с 1 по 3 день для экстравазированных клеток может быть связано либо с экстравазией большего количества клеток в течение дополнительного двухдневного периода, либо с пролиферацией, либо с тем и другим.Отмечая, однако, что процентное соотношение ROI, содержащих экстравазированные клетки, событие не показало значительного изменения для дня 1 и дня 3 (72% ROI показали, по крайней мере, 1 экстравазированную раковую клетку на 1 день после введения опухолевых клеток, и 79% ROIs включил событие экстравазации к дню 3) (рис. 5c), и если предположить, что скорости пролиферации аналогичны для обеих популяций, это предполагает, что большинство случаев экстравазации происходит в течение первого дня внедрения опухолевых клеток. Это наблюдение аналогично с точки зрения временной шкалы для экстравазации, наблюдаемой in vivo [17], [47].

    Рис. 5. За пределами экстравазации.

    Экстравазация опухолевых клеток наблюдается в течение 3 дней после посева опухолевых клеток и сравнивается с зафиксированными и проанализированными на 1 день. Общее количество опухолевых клеток, присутствующих в области интереса (ROI), значительно увеличивается по сравнению с 8 клетками в день. От 1 до 13,5 клеток на 3-й день, в то время как плотность посева опухоли, а также другие экспериментальные условия оставались неизменными между устройствами (а). Общее количество опухолевых клеток далее подразделяется на 2 группы в зависимости от их расположения: либо 1) экстравазированные и в геле, либо 2) прикрепленные к эндотелию, прилегающему к гелю (b).72% областей интереса показали, по крайней мере, 1 экстравазацию раковой клетки (обозначен% возникновения экстравазации) к 1 дню после введения опухолевых клеток, а 79% областей интереса включали событие экстравазации к дню 3, что различие несущественно (c). На изображениях показано увеличение количества опухолевых клеток (d). Фазово-контрастное изображение показывает вид сверху интересующей области на 1-й день после посева опухоли. Опухолевые клетки (зеленые) пролиферировали с 1 по 3 день (показаны стрелками). Конфокальное изображение показывает как опухолевые клетки, так и выстилку эндотелия.Все изображения взяты из одной области интереса (VE-кадгерин: красный, ядро: DAPI-синий, опухолевые клетки: GFP-зеленый).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0056910.g005

    Выводы

    Опухолевые клетки, которые распространяются из первичной опухоли и проникают в кровеносную систему, переносятся по всему телу. Путем адгезии к эндотелиальной стенке или закупоривания небольшого капилляра выжившие клетки могут пересекать эндотелиальный барьер, обеспечивая тем самым потенциальное место зарождения метастазов.Наша микрофлюидная платформа была применена для изучения экстравазации клеточной линии рака груди (MDA-MB-231) и их последующей пролиферации в коллагеновом геле, который имитирует трехмерную природу внеклеточного пространства. Хотя микрофлюидика имеет ограничения в воспроизведении истинного состояния in vivo , представленная здесь система позволяет проводить строго регулируемое и хорошо визуализированное исследование экстравазации раковых клеток. Используя этот анализ, мы культивировали и поддерживали эндотелиальный монослой, охватывающий всю поверхность микроканала и поверхность гидрогеля, и вводили опухолевые клетки, чтобы наблюдать экстравазацию.Мы также количественно оценили проницаемость эндотелиального монослоя и показали, что целостность эндотелиального барьера нарушена опухолевыми клетками. Среднее количество опухолевых клеток в ROI увеличивалось между 1-м и 3-м днем ​​после посева опухолевых клеток, в то время как процент ROI с экстравазированными клетками существенно не изменился. Эти результаты предполагают, что экстравазация в нашей системе происходит преимущественно в течение первых 24 часов после введения опухолевых клеток и что пролиферация может продолжаться как до, так и после экстравазации.

    Вклад авторов

    Задумал и спроектировал эксперименты: JSJ IKZ SC RDK JLC. Проведены эксперименты: JSJ IKZ. Проанализированы данные: JSJ IKZ SC RDK JLC. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: JSJ IKZ SC RDK. Написал статью: JSJ RDK JCL.

    Ссылки

    1. 1. Sporn MB (1996) Война с раком. Ланцет 347: 1377–1381.
    2. 2. Ханахан Д., Вайнберг Р.А. (2000) Признаки рака. Ячейка 100: 57–70.
    3. 3. Chambers AF, Groom AC, MacDonald IC (2002) Распространение и рост раковых клеток в местах метастазирования. Обзоры природы Рак 2: 563–572.
    4. 4. Джойс Дж. А., Поллард Дж. В. (2009) Регуляция метастазов в микросреде. Обзоры природы Рак 9: 239–252.
    5. 5. Гупта Г.П., Массагу Дж. (2006) Метастазирование рака: создание основы. Cell 127: 679–695.
    6. 6. Roussos ET, Condeelis JS, Patsialou A (2011) Хемотаксис при раке.Обзоры природы Рак 11: 573–587.
    7. 7. Wirtz D, Konstantopoulos K, Searson PC (2011) Физика рака: роль физических взаимодействий и механических сил в метастазировании. Обзоры природы Рак 11: 512–522.
    8. 8. Фидлер И. Дж. (2003) Патогенез метастазирования рака: пересмотр гипотезы «семян и почвы». Обзоры природы Рак 3: 453–458.
    9. 9. Криссман Дж. Д., Хатфилд Дж. С., Ментер Д. Г., Слоан Б., Хонн К. В. (1988) Морфологическое исследование взаимодействия внутрисосудистых опухолевых клеток с эндотелиальными клетками и субэндотелиальным матриксом.Исследования рака 48: 4065–4072.
    10. 10. Куп S, Khokha R, Schmidt EE, MacDonald IC, Morris VL, et al. (1994) Сверхэкспрессия ингибитора металлопротеиназы в клетках B16F10 не влияет на экстравазацию, но снижает рост опухоли. Исследования рака 54: 4791–4797.
    11. 11. Юинг Дж. (1928) Неопластическая болезнь: Трактат о опухолях. Филадельфия: В. Б. Сондерс.
    12. 12. Schluter K, Gassmann P, Enns A, Korb T., Hemping-Bovenkerk A, et al. (2006) Орган-специфическая адгезия метастатических опухолевых клеток и экстравазация клеток карциномы толстой кишки с различным метастатическим потенциалом.Американский журнал патологии 169: 1064–1073.
    13. 13. Наумов Г.Н., Уилсон С.М., Макдональд И.К., Шмидт Э.Е., Моррис В.Л. и др. (1999) Клеточная экспрессия зеленого флуоресцентного белка в сочетании с видеомикроскопией in vivo с высоким разрешением для мониторинга этапов метастазирования опухоли. Журнал клеточной науки 112 (Pt 12): 1835–1842.
    14. 14. Gassmann P, Hemping-Bovenkerk A, Mees ST, Haier J (2009) Метастатическая остановка опухолевых клеток в окклюзии просвета печени и специфическая адгезия не являются исключительными.Международный журнал колоректальных заболеваний 24: 851–858.
    15. 15. Mareel M, Leroy A (2003) Клинические, клеточные и молекулярные аспекты инвазии рака. Физиологические обзоры 83: 337–376.
    16. 16. Псайла Б., Лайден Д. (2009) Метастатическая ниша: адаптация чужой почвы. Обзоры природы Рак 9: 285–293.
    17. 17. Аль-Мехди А.Б., Тозава К., Фишер А.Б., Шиентаг Л., Ли А. и др. (2000) Внутрисосудистое происхождение метастазов от пролиферации прикрепленных к эндотелию опухолевых клеток: новая модель метастазов.Природная медицина 6: 100–102.
    18. 18. Варго-Гогола Т., Розен Дж. М. (2007) Моделирование рака груди: один размер не подходит всем. Обзоры природы Рак 7: 659–672.
    19. 19. Hendrix MJC, Seftor EA, Seftor REB, Fidler IJ (1987) Простой количественный анализ для изучения инвазивного потенциала вариантов с высоким и низким уровнем метастазов у ​​человека. Письма о раке 38: 137–147.
    20. 20. Dimilla PA, Quinn JA, Albelda SM, Lauffenburger DA (1992) Измерение индивидуальных параметров миграции клеток для тканевых клеток человека.Aiche Journal 38: 1092–1104.
    21. 21. Song JW, Cavnar SP, Walker AC, Luker KE, Gupta M и др. (2009) Микрожидкостный эндотелий для изучения внутрисосудистой адгезии метастатических клеток рака молочной железы. Плос Один 4: e5756.
    22. 22. Shin MK, Kim SK, Jung H (2011) Интеграция интра- и экстравазации в одном микрожидкостном чипе на основе клеток для исследования метастазов рака. Лаборатория на чипе 11: 3880–3887.
    23. 23. Zhang Q, Liu T, Qin J (2012) Микрожидкостное устройство для изучения трансэндотелиальной инвазии опухолевых агрегатов в реальном времени.Лаборатория на чипе 12: 2837–2842.
    24. 24. Зервантонакис И.К., Хьюз-Алфорд С.К., Чарест Дж.Л., Кондилис Дж. С., Гертлер Ф. Б. и др. (2012) Трехмерная микрофлюидная модель интравазации опухолевых клеток и функции эндотелиального барьера. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 109: 13515–13520.
    25. 25. Викерман В., Блундо Дж., Чанг С., Камм Р. (2008) Разработка, изготовление и реализация новой мультипараметрической управляющей микрожидкостной платформы для трехмерной клеточной культуры и визуализации в реальном времени.Лаборатория на чипе 8: 1468–1477.
    26. 26. Судо Р., Чунг С., Зервантонакис И.К., Викерман В., Тошимицу Ю. и др. (2009) Транспорт-опосредованный ангиогенез в трехмерной эпителиальной сокультуре. Faseb Journal 23: 2155–2164.
    27. 27. Shin Y, Jeon JS, Han S, Jung GS, Shin S и др. (2011) In vitro 3D ангиогенез коллективного разрастания под действием согласованных градиентов ANG-1 и VEGF. Лаборатория на чипе 11: 2175–2181.
    28. 28. Чанг С., Судо Р., Мак П.Дж., Ван Ч.Р., Викерман В. и др.(2009) Миграция клеток в каркасы в условиях совместного культивирования на микрофлюидной платформе. Лаборатория на чипе 9: 269–275.
    29. 29. Чунг С., Судо Р., Зервантонакис И.К., Римчала Т., Камм Р.Д. (2009) Трехмерный капиллярный морфогенез, вызванный обработкой поверхности в микрофлюидной платформе. Дополнительные материалы 21: 4863– +.
    30. 30. Шин И, Хан С., Чон Дж. С., Ямамото К., Зервантонакис И. К. и др. (2012) Микрожидкостный анализ для одновременного культивирования нескольких типов клеток на поверхностях или внутри гидрогелей.Протоколы природы 7: 1247–1259.
    31. 31. Polacheck WJ, Charest JL, Kamm RD (2011) Интерстициальный поток влияет на направление миграции опухолевых клеток через конкурирующие механизмы. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 108: 11115–11120.
    32. 32. Минн А.Дж., Гупта Г.П., Сигель П.М., Бос П.Д., Шу В. и др. (2005) Гены, которые опосредуют метастазирование рака груди в легкие. Природа 436: 518–524.
    33. 33. Bos PD, Zhang XH, Nadal C, Shu W., Gomis RR, et al.(2009) Гены, которые опосредуют метастазирование рака груди в мозг. Природа 459: 1005–1009.
    34. 34. Muthuswamy SK, Li D, Lelievre S, Bissell MJ, Brugge JS (2001) ErbB2, но не ErbB1, повторно инициирует пролиферацию и индуцирует репопуляцию просвета в эпителиальных ацинусах. Природа клеточной биологии 3: 785–792.
    35. 35. Альбельда С.М., Сэмпсон П.М., Хазелтон Ф.Р., Макнифф Дж.М., Мюллер С.Н. и др. (1988) Характеристики проницаемости культивируемых монослоев эндотелиальных клеток. Журнал прикладной физиологии 64: 308–322.
    36. 36. Викерман В., Камм Р.Д. (2012) Механизм переключения ангиогенеза с контролем потока: ранние сигнальные события в соединениях клетка-матрица и клетка-клетка. Интегративная биология: количественные биологические науки от нано до макро 4: 863–874.
    37. 37. Han S, Yan JJ, Shin Y, Jeon JJ, Won J и др .. (2012) Универсальный анализ для мониторинга трансэндотелиальной миграции нейтрофилов, подобной in vivo. Лаборатория на микросхеме.
    38. 38. Michel CC, Curry FE (1999) Микрососудистая проницаемость.Физиологические обзоры 79: 703–761.
    39. 39. Награт С., Секвист Л. В., Махесваран С., Белл Д. В., Иримиа Д. и др. (2007) Выделение редких циркулирующих опухолевых клеток у онкологических больных с помощью микрочиповой технологии. Природа 450: 1235 – U1210.
    40. 40. Hayes DF, Cristofanilli M, Budd GT, Ellis MJ, Stopeck A, et al. (2006) Циркулирующие опухолевые клетки в каждый момент наблюдения во время лечения пациентов с метастатическим раком молочной железы позволяют прогнозировать общую выживаемость без прогрессирования заболевания. Клинические исследования рака 12: 4218–4224.
    41. 41. Sahni A, Arevalo MT, Sahni SK, Simpson-Haidaris PJ (2009) Связывающий домен фибриногена VE-кадгерин индуцирует проницаемость эндотелиального барьера и усиливает трансэндотелиальную миграцию злокачественных эпителиальных клеток молочной железы. Международный журнал рака. Международный журнал рака 125: 577–584.
    42. 42. Weis S, Cui JH, Barnes L, Cheresh D (2004) Нарушение эндотелиального барьера за счет VEGF-опосредованной активности Src потенцирует экстравазацию опухолевых клеток и метастазирование.Журнал клеточной биологии 167: 223–229.
    43. 43. Mierke CT (2011) Раковые клетки регулируют биомеханические свойства эндотелиальных клеток микрососудов человека. Журнал биологической химии 286: 40025–40037.
    44. 44. Li YH, Zhu C (1999) Модифицированный анализ камеры Бойдена для трансэндотелиальной миграции опухолевых клеток in vitro. Клинические и экспериментальные метастазы 17: 423–429.
    45. 45. Кумар С., Уивер В.М. (2009) Механика, злокачественные новообразования и метастазы: силовое путешествие опухолевой клетки.Обзоры метастазов рака 28: 113–127.
    46. 46. Вейс С.М., Череш Д.А. (2005) Патофизиологические последствия VEGF-индуцированной проницаемости сосудов. Природа 437: 497–504.
    47. 47. Цянь Б., Дэн Й., Им Дж. Х., Мушель Р. Дж., Цзоу Й и др. (2009) Отдельная популяция макрофагов опосредует экстравазацию, становление и рост метастатических клеток рака молочной железы. Plos One 4: e6562.
    .

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *