Выбиратель вк: Как выбрать победителя ВКонтакте по репостам, провести розыгрыш, конкурс репостов

Программа для розыгрыша призов ВКонтакте, поиска людей и т.д.

Розыгрыши ВК стали наиболее актуальным методом раскрутки групп. Владельцы создают разнообразные конкурсы и предлагают всевозможные призы. Чтобы выбор счастливчика был честным и доступным всем, стоит воспользоваться особыми онлайн-сервисами. То есть, всю работу за тебя сделает программа для конкурсов и розыгрышей призов ВКонтакте, пи этом все результаты будут настоящими. Гарантии очень важны при проведении конкурса с большими призами.

Розыгрыши – оригинальный и продуктивный метод продвижения группы. Чаще всего владельцы проводят их лишь ради повышения количества подписчиков. Каждый пользователь может принять участие в акции, он обязан подписаться и сделать репост определенной публикации, в которой рассказано о конкурсе и разъясняются критерии того, когда и как будет выбран победитель. Поскольку задача эта – простая, люди охотно подписываются и делятся постом, не нарушая правил, иначе можно получить бан.

Еще одна цель организаторов таких мероприятий – повышение интереса к группе и своеобразное «оживление» оного. Вовлеченность подписчиков в жизнь паблика – очень важный критерий раскрутки. Каждый администратор желает иметь не только огромную, но и заинтересованную, активную и живую аудиторию.

Программы для ВК

Чтобы упростить задачи при пользовании ВК, стоит воспользоваться дополнительными сервисами и программами. ВКонтакте существует множество приложений, позволяющих определить виннера по нужному критерию.

Lucky You

Благодаря Лаки Ю удастся определить счастливчика среди людей, которые поделились записью или оставили лайк. Это одно из самых лучших и удобных приложений, оно отсеивает людей без аватарки, хотя иногда может быть недоступно, поэтому важно иметь поблизости и другой вариант.

Random App

Приложение позволит определить рандомного пользователя, который является подписчиком нужной группы, лайкнул необходимую запись или поделился публикацией с друзьями.

Выбиратель

Приложение Выбиратель – удобный и простой инструмент при проведении акций и конкурсов в ВК. Он выбирает установленное число случайных аккаунтов среди поделившихся указанной записью и отсеивает авторегов. Все что тебе понадобится сделать – вставить ссылку на пост с конкурсом и вписать число нужных победителей.

Программы для трансляций

Рассмотрим вспомогательные программы для проведения трансляций в группе в ВК.

OBS Studio

Одно из наиболее известных приложений для потоковых вещаний, не зря люди часто спрашивают: «Как стримить с помощью OBS?». Транслировать через него достаточно просто, главное – указать источник сигнала и указать конечный адрес для вещания.

В отличие от многих аналогов, приложение фривольно. ОБС Студия имеет внедренный рекордер. Благодаря ему можно провести сканирование видео и сохранить его в популярных расширениях: FLV, MP4, MOV и прочих. Поддерживается возможность управления задачи посредством «горячих клавиш». Функция будет по достоинству оценена геймерами, ведь из-за нее не нужно будет отвлекаться от игры. Программа может значительно расширить функционал за счет дополнений. Недостаток приложения – нельзя одновременно транслировать на разных веб-ресурсах.

А  том, как начать стримить на Ютубе с нуля, читайте в соответствующей статье.

XSplit Broadcaster

Еще один любимый пользователями продукт. Имеет качественно оформление, контейнер спецэффектов, поддержку внутри-игрового диалога и множество дополнительных плагинов – это позволяет программе быть одним из лучших решений для стрима. Оно позволяет использовать разные источники трансляции и можно раздавать видеозаписи на несколько ресурсов одновременно.

В бесплатной версии имеются ограничения, например, водяной знак на передаваемом изображении и отсутствие чата в Twitch. Цена лицензии – около 200 долларов. У разработчиков имеется аналог – XSplit Gamecaster. В ней нет редактора сцен, локальных записей и некоторых других функций, но она отлично подходит для игрового стрима.

FFSplit

Как и в ОБС Студия, данная программа – абсолютно бесплатная. Функционал подобных утилит тоже схож, тем не менее в ФФСплит по стандарту содержатся неоптимальные параметры (к примеру, видеозаписи записываются в не очень удобном формате FLV, а «горячие клавиши» поначалу не привязаны к кнопкам на клавиатуре). Но зато важно отметить отличную визуализацию видеоинформации о реальном статусе трансляции.

В роли финального источника передачи выступает локальный диск, ибо в таком случае видеоролик будет сразу сохраняться в файл на устройстве. Но при таком сценарии использовании нельзя стримить изображение.

Поиск людей

Из известных способов по поиску людей в ВКонтакте можно выделить два способа.

FindFace

Позволяет искать профили ВК по изображению человека. Достаточно установить любое фото пользователя на сайте Findface.ru и отыскать его профиль в ВК. Начать поиск можно как с ПК, так и с мобильной системы Андроид или iOS.

Использование поиска по картинке от Гугл и Яндекс

Популярные поисковые машины предоставляют отличную возможность использовать функцию поиска по фото как шанс отыскать человека в интернете. Достаточно перейти к одному из этих поисковиков, открыть раздел «Картинки» и ввести ссылку на изображение ли добавить его напрямую с устройства для поиска. Через пару секунд все похожие фотографии или люди на фотографиях окажутся в выдаче, останется лишь проверить их.

Основные проблемы при работе с данными программами и сервисами

Поскольку используемых для работы проектов немало, и все они не являются официальными, то проблемы и методы их решения могут быть следующими:

• Сервис попросил меня ввести данные от страницы перед началом работы (поиска человека или стриминга), через некоторое время моя страница была заморожена. Решение: серьезные проекты никогда не просят данные от страниц пользователей либо они должны быть проверены большим числом пользователей и не быть фейком. Прежде чем оставлять персональные данные, нужно досконально изучить отзывы о программе или сервисе, после чего принять решение о работе с ней или отказе от нее.
• В момент использования софта или приложения, оно перестает работать и ничего не отображает. Решение: возможно, отсутствует подключение к интернету, стоит это проверить. Либо это временные технические неполадки на стороне проекта. Если так продолжается и дальше, стоит написать в техническую поддержку сервиса или программы либо воспользоваться другим проектом.

Большинство популярных программ для ВК – бесплатны, они зарабатывают на рекламе. Смотрите о бесплатных программах для ВК по ссылке.

Заключение

Софт для ВК очень разнообразен, но создан он для экономии времени пользователей и упрощения его действий при больших объемах работ.

Читайте далее:

Click to rate this post!

[Total: 1 Average: 5]

Бесплатные инструменты нужные любому владельцу паблика

http://borgi. ru— Borgi
Простой сервис просмотра статистики по сообществам. Есть раздел с логами, в котором отображаются последние изменения в названий, аватарок и поисковой индексации сообществ.

http://people4u.ru/— Найди своих
Новый профессиональный инструмент для поиска площадок с целевой аудиторией. В отличие от других сервисов, ориентируется не на количество участников сообщества, а на его реальную посещаемость/охват. Сортирует по выгодности размещения рекламы.

http://allsocial.ru/communities/— Allsocial
Небольшой сервис для аналитики по пабликам. Выдает данные об охвате, посетителях, приросте аудитории и цене размещения рекламы. Умеет анализировать группы, которые нельзя найти с помощью поиска.

==Таргет и ретаргет ==

http://vk.barkov.net/— Скрипты для сбора баз ретаргетинга
Бесплатный сервис по сбору баз для ретаргетинга: пересечения подписчиков, активность на стене, в обсуждениях и др. Скрипты выполняются в вашем браузере, потому скорость их выполнения ограничена в основном мощностью вашего компьютера.

http://retarget.target-training.ru/— Target Training
Находит нужных пользователей «ВКонтакте» по упоминаниям и записям на стенах. Также есть функция экспорта базы пользователей.

http://manitu.me/— Просмотр базы рекламных объявлений ВК
Парсер объявлений из соц. сетей. Поиск осуществляется по ключевым словам. Можно выбрать соц. сеть — ВКонтакте, Одноклассники, Facebook.

== Автопостинг ==

http://feedman.ru— Feedman
Сервис для автоматизированного постинга записей в указанное время в каждой группе. Бесплатная версия умеет работать с «Вконтакте», Facebook и Twitter. В премиум-аккаунте вы получаете доступ к «Одноклассникам» и Instagram. Кроме того, ваши посты начинают сохраняться в «облаке».

http://antposter.com/— AntPoster
Публикация сообщений во все популярные в России социальные сети, постинг по расписанию, загрузка сообщений из RSS в группы и профили.

http://buzzlike.ru/— Buzzlike
Один из первых сервисов для автопостинга. Визуально похож на ВКонтакте, поэтому разобраться с ним будет не сложно. Так же поддерживается многопользовательский режим, так что можно назначать на работу даже фрилансеров. Базовая версия бесплатна.

https://time2post.ru/— Time2post
Сервис отложенного постинга в Вконтакте, Facebook, Twitter и LinkedIn.

http://ecotime.me— Ecotime
Работает только с Вконтакте. Этот сервис для автопостинга самый простой из представленных, никаких супер наворотов в нем нет, но удобный и интуитивно понятный.

== Работа с контентом ==

http://ratingi.com/posts.php— Ratingi
Собирает посты-чемпионы по лайкам за час/день/неделю. Можно проанализировать свою группу и узнать ее рейтинг, ориентировочную стоимость рекламы.

http://dcpu.ru/vk_repost_tree.php— Дерево репостов.
Маленький сервис для моментального анализа того, как репостили ту или иную запись. Маркетологам поможет отслеживать ход и эффективности вирусных кампаний. Простым смертным будет любопытно посмотреть, как распространяется информация внутри главной российской соцсети.

http://vk.com/app3429542— LikeChecker.
Поможет устроителям конкурсов узнать количество накрученных лайков и отсечь таким образом «призоловов» и мошенников.

http://vk.com/talk_to_friends— Вирусоанализатор.
Считает, сколько повторных (виральных) репостов и лайков набрали пользователи, сделавшие репост записи. Полезно и для аналитики, и при проведении конкурсов.

== Анализ собственных площадок (или площадок конкурентов) ==

http://socialstats.ru/— SocialStats
Сбор статистики по своей группе в ВК. Бесплатный сервис с очень подробной статистикой, можно использовать для оценки администратора вашей группы на выполнение KPI. Статистика стены, Статистика фотоальбомов, Статистика интересных групп и Популярность пабликов, Статистика друзей, Статистика личной переписки

http://feedspy.net/— Feedspy
Сервис для аналитики активности в социальных медиа. Сравни свою ленту с лентой конкурента или партнёра. Получи полный отчёт по количеству лайков, комментариев и репостов

http://ru. zebraboss.com/— ZebraBoss
Ежедневная бесплатная информация о добавившихся/удалившихся подписчиках. Анализирует аккаунты пользователей, паблики. Отправляет отчеты на почту.

https://vk.com/compare_groups— Сравнение аудиторий групп
Небольшое приложение, которое позволяет сравнить аудитории двух сообществ и выявить общих участников. Поможет маркетологам оценивать целесообразность размещения рекламы в нескольких группах.

http://vk.com/app2732533— Поиск «мертвых» участников и подписчиков
Помогает найти всех неактивных или заблокированных администрацией участников группы (или подписчиков страницы)

https://memedia.ru/spec/antidogs.php— Antidogs
Еще один сервис для проверки сообществ «Вконтакте» на наличие «собачек» (мертвых пользователей). Проверяет бесплатно, удаляет платно.

http://vk.com/app3046467— Дезертир
Простой апп, который позволяет выяснить, кто и когда покинул сообщество.

https://vk.com/app4353239_162298533— Пользователи в порядке вступления
Приложение служит для сортировки подписчиков группы по дате вступления. Можно получить тысячу первых и тысячу последних вступивших. Работает ТОЛЬКО для сообществ, где Вы админ.

https://vk.com/app4469510_162298533— Комментарии по дате добавления
Сортирует комментарии в группе по дате добавления.

https://vk.com/app4340484_162298533— Усредненный пользователь
Анализ сообщества по ссылке. Возможность посмотреть статистику по полу, возрасту, городам, странам.

https://vk.com/app3876642_162298533— Посты
Анализ постов — Вы получите ТОП 20 постов за выбранный период. Результаты ранжируются на выбор по: кол-ву лайков, репостов, комментариев.

https://vk.com/app2999999— VK scan
Собирает статистику по лайкам, репостам и комментариям у сообществ и профилей. Только для страниц с подписчиками количеством 100 и более.

== Другое ==

http://assistor.ru— Assistor
База проверенных администраторов групп. Создатели сервиса размещают резюме не всех желающих, а только тех администраторов групп, кого обучили сами и проверили «в бою».

http://vkmaster.zf-projects.ru/— Vk master
Cборник полезных утилит, которые могут Вам понадобиться при использовании «ВКонтакте». В том числе есть функция по выявлению админа сообщества.

https://vk.com/cc— Официальный сокращатель ссылок
Если вы еще не пользуетесь – сокращатель ссылок. Удобен для маскировки реферальных ссылок.

https://vk.com/wikicode— Исходный код вики-страниц
Можно быстро посмотреть код любой вики страницы ВКонтакте

https://vk.com/app3287003_162298533— Выбиратель
Приложение для проведения конкурсов. Выбирает указанное число случайных профилей среди поделившихся указанной записью.

https://vk.com/randomapp— Random App
Приложение помогает проводить розыгрыши призов. Отличие от других приложений в том, что Вы можете сделать розыгрыш среди всех пользователей группы.

https://vk.com/app3804704— Топ хештегов ВКонтакте
«Топ хештегов ВКонтакте» собирает все публичные публикации, оставленные ВКонтакте, и вычисляет самые популярные хештеги за последние 15 минут. Тренды обновляются раз в минуту.

Шкала яркости светодиодных ламп и таблицы цветов

Как купить светодиодные лампы для дома

Освещение вашего дома или офиса составляет около 15% ваших общих счетов за электроэнергию. В среднем на освещение вашего дома тратится 200 долларов в год. Эти цифры могут показаться не такими уж большими, но подумайте вот о чем: вы можете сократить эти расходы вдвое с небольшими затратами и почти без усилий с вашей стороны. Просто заменив лампы накаливания на светодиоды, вы можете значительно снизить затраты на электроэнергию в своем доме и уменьшить свой углеродный след 9.0003

 

Сравнение лампочек

Почему я больше не могу получить КЛЛ?

Когда-то компактные люминесцентные лампы были передовыми технологиями энергоэффективности. Так куда они пошли? Короткий ответ: светодиоды пришли и сделали их устаревшими. Светодиоды более эффективны, долговечны и безопасны, чем любые другие лампы на рынке.

 

Яркость (люмены) и температура (Кельвины) светодиодов

Мы обычно думаем о яркости лампочки в мощности. Однако мощность просто представляет собой количество энергии, необходимое для использования лампы. Шкала люменов указывает яркость лампы и должна использоваться при выборе нового светодиода. Чтобы максимально сэкономить на счетах за электричество, замените лампочки наименьшей мощностью для желаемого люмена (яркости). Мы облегчаем вам задачу, указывая сравнимую мощность ламп накаливания на странице каждой лампочки.

Готовы переключиться? EnergyEarth здесь, чтобы облегчить вам задачу. Приведенная ниже таблица люменов лампочки и мощности в ваттах поможет вам понять, какая светодиодная лампа сравнима с вашей текущей лампой накаливания. Просто возьмите текущую мощность лампы накаливания и выберите соответствующий эквивалент светодиодной лампы по шкале яркости в люменах. Обратите особое внимание на люмены, так как это число указывает на яркость или светоотдачу лампы. Для максимальной экономии энергии выбирайте лампочку с наименьшей мощностью, подходящей для ее использования.

1
45 15

Потребляемая электрическая мощность в ваттах		Минимальная светоотдача в люменах
Лампа накаливания	Светодиод	2 — 3	0 — 200
25	3 — 5	200 — 300
40	5 — 7	300 — 500
60	7 — 9	500 — 700
75	10 — 14	700 — 1250
100	14 — 18	1 250 — 2300

 

Шкала Кельвина

Цвет света или цветовая температура измеряется по шкале Кельвина. Светодиоды доступны в теплых тонах (низкий k), чтобы соответствовать желтоватому свету ламп накаливания, но вы также можете выбрать более холодные цвета (высокий k) с более белым или голубым светом. Вот таблица цветовой температуры для справки:

Светодиод какой формы выбрать?

Светодиоды бывают самых разных размеров и с разным типом крепления. Наиболее распространенными являются:

• А-образная форма : Сохраняет тот же внешний вид, что и лампы накаливания, и часто используется в светильниках, где лампа видна.
• Глобус
  : Такие же глобусы, которые у вас уже есть, но более эффективные. Для использования в туалетных столиках, подвесных светильниках и других местах, где лампочка видна.
• Semi Globe : Может использоваться в любом приспособлении, которое вы бы поместили в глобус. Они устраняют потери света, направляя свет вперед от светильника.
• Отражатель : Идеально подходит для потолочных вентиляторов, утопленных банок и следящего освещения, поскольку они обеспечивают направленное освещение области.
• Candelabra/Flame Tip : идеально подходит для настенных бра, некоторых потолочных вентиляторов и закрытых наружных светильников, где требуется свечное освещение.
• Наружная : Влагостойкие, что означает, что их можно использовать снаружи в открытых светильниках без повреждения лампы или светильника. Большинство из них имеют форму рефлектора, что делает их идеальными для наружных прожекторов.
• 3-ходовой : Точно так же, как лампы накаливания с 3-ходовыми лампами. Они могут переключаться между 3 уровнями освещенности, что делает их идеальными для многих настольных и напольных ламп. Используйте только светодиоды, специально предназначенные для использования в 3-контактных разъемах для оптимальной экономии. (Отличается от диммируемых ламп)
• Диммируемый : Сделано специально для использования в диммерных переключателях. Избегайте использования недиммируемых светодиодов с диммерным выключателем, так как срок их службы сократится.

 

Нажмите «Внутреннее освещение» или «Наружное освещение» и воспользуйтесь нашей таблицей, чтобы определить, какой тип лампы вам нужен.

Чтобы правильно выбрать лампочку для своего дома, необходимо учитывать конкретное применение и тип светильника.

А-образный  Рефлектор Декоративный

Отражатель Влагостойкий рейтинг Солнечная

Как еще я могу сэкономить деньги и энергию?

Помимо замены старой лампы накаливания на светодиоды, вы можете внести множество изменений, которые сэкономят вам деньги и энергию в долгосрочной перспективе.

• Установите диммеры, чтобы ваши новые лампочки служили еще дольше и увеличивали ваши сбережения.
• Добавьте таймеры, интеллектуальные светодиоды или интеллектуальные розетки к внутреннему и наружному освещению, чтобы гарантировать, что вы используете энергию и тратите деньги только тогда и там, где они вам нужны.
• Установите программируемый или интеллектуальный термостат, чтобы регулировать температуру нагрева и охлаждения в часы пиковой нагрузки.

 

Компания EnergyEarth создала это руководство по покупке лампочек, чтобы помочь вам принять взвешенное решение, когда дело доходит до замены лампочек в вашем доме. Не можете найти интересующую вас информацию? Свяжитесь с нами, если у вас возникнут вопросы о светодиодах или других энергоэффективных продуктах для вашего дома.

Двойной режим самонаведения CRISPR-ассоциированного транспозона

. 2021 29 апреля; 184(9):2441-2453.e18.

doi: 10.1016/j.cell.2021.03.006. Epub 2021 25 марта.

Макото Сайто ¹ , Алим Ладха ¹ , Джонатан Стрекер ¹ , Гильем Фор ¹ , Эдвин Нойманн ¹

, Хан Алтаэ-Тран ¹ , Рианнон К. Макрэй ¹ , Фэн Чжан ²

Принадлежности

• ¹ Медицинский институт Говарда Хьюза, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Широкий институт Массачусетского технологического института и Гарварда, Кембридж, Массачусетс 02142, США; Институт исследований мозга Макговерна при Массачусетском технологическом институте, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Департамент мозга и когнитивных наук, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Департамент биологической инженерии, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США.
• ² Медицинский институт Говарда Хьюза, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Широкий институт Массачусетского технологического института и Гарварда, Кембридж, Массачусетс 02142, США; Институт исследований мозга Макговерна при Массачусетском технологическом институте, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Департамент мозга и когнитивных наук, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Департамент биологической инженерии, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США. Электронный адрес: [email protected].

• PMID:
  33770501
• PMCID: PMC8276595
• DOI: 10.1016/j.cell.2021.03.006

Бесплатная статья ЧВК

Макото Сайто и др. Клетка. 2021 .

Бесплатная статья ЧВК

. 2021 29 апреля; 184(9):2441-2453.e18.

doi: 10.1016/j.cell.2021.03.006. Epub 2021 25 марта.

Авторы

Макото Сайто ¹ , Алим Ладха ¹ , Джонатан Стрекер ¹ , Гильем Фор ¹ , Эдвин Нойманн ¹ , Хань Алтаэ-Тран ¹ , Рианнон К. Макрэй ¹ , Фэн Чжан ²

Принадлежности

• ¹ Медицинский институт Говарда Хьюза, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Широкий институт Массачусетского технологического института и Гарварда, Кембридж, Массачусетс 02142, США; Институт исследований мозга Макговерна при Массачусетском технологическом институте, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Департамент мозга и когнитивных наук, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Департамент биологической инженерии, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США.
• ² Медицинский институт Говарда Хьюза, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Широкий институт Массачусетского технологического института и Гарварда, Кембридж, Массачусетс 02142, США; Институт исследований мозга Макговерна при Массачусетском технологическом институте, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Департамент мозга и когнитивных наук, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США; Департамент биологической инженерии, Массачусетский технологический институт, Кембридж, Массачусетс 02139, США. Электронный адрес: [email protected].

• PMID: 33770501
• PMCID: PMC8276595
• DOI: 10. 1016/j.cell.2021.03.006

Абстрактный

Tn7-подобные транспозоны имеют кооптированные системы CRISPR, включая класс 1 типа IF, I-B и класс 2 типа V-K. Интересно, что, хотя эти CRISPR-ассоциированные транспозазы (CAST) подвергаются надежной транспозиции, управляемой CRISPR РНК (crRNA), они почти никогда не обнаруживаются в сайтах, на которые нацелены crRNAs, кодируемые родственным массивом CRISPR. Чтобы понять этот парадокс, мы исследовали системы CAST V-K и IB и обнаружили два различных режима транспозиции: (1) транспозиция, управляемая crRNA, и (2) независимое от матрицы CRISPR самонаведение. Мы показываем, что разные системы CAST используют разные молекулярные механизмы для нацеливания на свой сайт самонаведения. Системы CAST типа V-K используют короткую делокализованную crRNA для РНК-управляемого хоуминга, тогда как системы CAST типа I-B, которые содержат два разных белка-селектора мишени, используют TniQ для РНК-управляемой транспозиции ДНК и TnsD для хоуминга к сайту прикрепления. Эти наблюдения освещают ключевой этап в жизненном цикле CAST-систем и подчеркивают разнообразие молекулярных механизмов, обеспечивающих самонаведение транспозонов.

Ключевые слова: CRISPR, CRISPR-ассоциированные транспозазы, CAST, РНК-управляемая транспозиция ДНК, самонаводящаяся транспозиция, эффектор Cas12k типа V-K, каскадный эффектор типа I-B, Tn7, TnsD/TniQ, селекторы мишеней для транспозонов.

Copyright © 2021 Elsevier Inc. Все права защищены.

Заявление о конфликте интересов

Заявление об интересах Институт Броуда подал патентные заявки, связанные с этой работой. Ф.З. является научным консультантом и соучредителем компаний Editas Medicine, Beam Therapeutics, Pairwise Plants, Arbor Biotechnologies и Sherlock Biosciences.

Цифры

Рисунок 1|. Самонаведение типа В-К ШКАСТ…

Рисунок 1|. Хоминг типа V-K ShCAST управляется короткой делокализованной crРНК.

(А)…

Рисунок 1|. Хоминг типа V-K ShCAST управляется короткой делокализованной crРНК.

(A) Репрезентативные системы CAST из 57 проанализированных локусов с соответствующими хоуминг-сайтами, выделенными желтым цветом. (B) Схема совпадения делокализованной crРНК и соответствующего спейсера в нижестоящей тРНК-Leu из S. hofmannii CAST. (C) ShCAST самонаведение на целевую плазмиду тРНК в E. coli . Схема природной делокализованной crРНК и инсерционной активности вариантов crРНК; промоторы и терминаторы обозначены стрелкой и шпилькой соответственно. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. (D) Глубокое секвенирование самонаводящегося продукта ShCAST. (E) Схематическое изображение tracrRNA ShCAST, взаимодействующей с прямым повтором из канонического массива CRISPR.

Рисунок 2|. Разнообразие делокализованных crРНК в…

Рисунок 2|. Разнообразие делокализованной crРНК в системах CAST типа V-K.

(А) Биоинформатический анализ…

Рисунок 2|. Разнообразие делокализованной crРНК в системах CAST типа V-K.

(A) Биоинформационный анализ последовательности и расстояния от типичного массива CRISPR делокализованной crРНК в пяти системах CAST (полный список см. в дополнительной таблице 1). (B) Системы CAST двух типов V-K ( Halothece sp. PCC 7418 и Cyanobacterium sp. HL-69), которые содержат короткую crРНК, нацеленную на соседнюю тРНК, но не обнаруживают массив CRISPR. (C) Положение самонаводящейся мишени PAM и соответствующего левого конца (LE) для систем CAST с самонаведением тРНК. (D) Секвенирование РНК из S. hofmannii , совмещенное с делокализованным локусом crРНК. (E) Секвенирование РНК из A. cylindrica , совмещенное с делокализованным локусом crРНК.

Рисунок 3|. Архитектура локусов CAST I-B и…

Рисунок 3|. Архитектура локусов CAST I-B и сравнение целевых селекторов TniQ/TnsD.

(А) Схема…

Рисунок 3|. Архитектура локусов CAST I-B и сравнение целевых селекторов TniQ/TnsD.

(A) Схема Anabaena variabilis ATCC 29413 локус CAST I-B подтипа 1 (I-B1) и « Peltigera membranacea cyanobiont» 210A локус CAST I-B подтипа 2 (I-B2), содержащий оба белка Cascade, Tn7-подобные белки, включая селекторы мишеней TnsD и TniQ (рис. S3a, S3b). , S3с). (B) Дендрограмма, показывающая сходство белков TniQ/TnsD систем Tn7 и CAST I-B1 и I-B2, CAST I-F и CAST V-K (рис. S3b, S3d). Темно-фиолетовый цвет указывает на аналогичную N-концевую область (ядро TniQ/TnsD). Светло-фиолетовый цвет указывает на сходство между С-концевыми областями Tn7-TnsD, CAST I-B1 TnsD и отдаленное сходство с CAST I-B2 TnsD (см. рис. S4, S12). Пунктирные линии указывают границы ядра TniQ/TnsD. Светлые и темно-желтые цвета обозначают белковые домены, аннотированные из структуры CAST I-F TniQ (см. Рисунок S3d). (C) Филогенетическое дерево, построенное с помощью FastTree (модель WAG) (Price et al., 2009) из центральной области (рис. S3d) белков TniQ/TnsD из CAST I-B (TniQ выделен красным, TnsD фиолетовым), Tn7- TnsD (зеленый), CAST V-K TniQ (желтый) и CAST I-F TniQ (голубой). Дерево указывает на близость между CAST I-B1 TnsD и Tn7-TnsD и различие между CAST I-B1 и CAST I-B2 (рис. S3b, S3d).

Рисунок 4|. Характеристика подтипа типа I-B 1…

Рисунок 4|. Характеристика AvCAST подтипа 1 типа I-B.

(A) Схема эксперимента по определению вставки…

Рисунок 4|. Характеристика AvCAST подтипа 1 типа I-B.

(A) Схема эксперимента по определению направления вставки, PAM и положения вставки с помощью AvCAST в E.coli . (B) Сопоставление считывания последовательности РНК с минимальной матрицей CRISPR для выявления последовательности зрелой crРНК AvCAST. (C) Анализ направленности вставки с помощью диагностической ПЦР pInsert на плазмиде библиотеки 6N PAM с различными парами праймеров в условиях ΔTniQ или ΔTnsD. (D) Количественная оценка частоты вставок в обоих направлениях с помощью ddPCR. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. (E) Верх. PAM для вставок, управляемых РНК AvCAST. Нижний. Положения вставки, управляемые РНК AvCAST, идентифицированы с помощью глубокого секвенирования. (F) Секвенирование нанопор с длительным считыванием для характеристики структуры pInsert. (G) Хроматограммы секвенирования по Сэнгеру репрезентативного pInsert. PAM, AvPSP1, TSD и концы транспозонов аннотированы.

Рисунок 5|. Самонаведение AvCAST опосредовано…

Рисунок 5|. Самонаведение AvCAST опосредовано консервативным attTn7 распознаванием TnsD.

(A) РНК-управляемый…

Рисунок 5|. Самонаведение AvCAST опосредовано консервативным attTn7 распознаванием TnsD.

(A) Частота встраивания AvCAST в pTarget с РНК-контролем с помощью гена AvPSP1 и glmS при каждом состоянии ΔTniQ/ΔTnsD. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. (B) Частота инсерций, опосредованных Tn7-подобным механизмом, в pTarget с геном AvPSP1 и glmS при каждом состоянии ΔTniQ или ΔTnsD. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. (C) Опосредованная AvCAST одиночная заметная вставка в glmS Сайт прикрепления Tn7 на плазмиде, идентифицированный с помощью глубокого секвенирования. Фиолетовая полоса указывает положение Tn7-подобного оборудования ( tnsA , tnsB , tnsC и tnsD ). Синяя полоса указывает положение всех белковых компонентов AvCAST (Tn7-подобный механизм + TniQ + Cascade). Светло-голубая полоса указывает положение вставки на плазмиде, содержащей дополнительную последовательность из 9 нуклеотидов ниже по течению длиной 65 п.н.0363 A. variabilis glmS. (D) Tn7-подобная машинно-опосредованная частота вставки AvCAST в плазмиду, несущую ген glmS A.variabilis , плазмиду, несущую мутации в консервативном сайте attTn7 , и плазмиду, несущую glmS E. coli ген. Показаны 30 п.н. С-конца glmS , части attTn7 , идентифицированной в предыдущем исследовании (Mitra et al.). Базовый формат нумерации соответствует формату исследования (конец glmS = +23), а сообщения об основных позициях для распознавания TnsD показаны красным. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. (E) Схема реакций транспозиции in vitro с очищенными Tn7-подобными компонентами AvCAST. (F) Tn7-подобный аппарат и требования к донорам для транспозиции in vitro на сайт прикрепления E. coli glmS Tn7. pInsert был обнаружен с помощью ПЦР для LE- и RE-соединений. (G) Потребность в белке Tns для in vitro транспозиция в сайт прикрепления E.coli glmS Tn7. Все реакции содержали pDonor и pTarget.

Рисунок 6|. Тип I-B подтип 2 PmcCAST…

Рисунок 6|. Система PmcCAST подтипа 2 типа I-B является домом для тРНК-val.

(А) Верх. PAM для…

Рисунок 6|. Система PmcCAST подтипа 2 типа I-B является домом для тРНК-val.

(А) Верх. PAM для вставок, управляемых РНК PmcCAST. Нижний. Положения вставки, управляемые РНК AvCAST, идентифицированы с помощью глубокого секвенирования. (B) Секвенирование нанопор с длительным считыванием для характеристики структуры pInsert. (C) Схема эксперимента по сравнению РНК-управляемой транспозиции и хоминга на тРНК-val с помощью PmcCAST в E.coli . (D) Частота встраивания PmcCAST в pTarget с PmcPSP1 и геном тРНК-val при каждом состоянии ΔTniQ или ΔTnsD. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. (E) Опосредованная Tn7-подобным механизмом частота вставки PmcCAST в pTarget при каждом состоянии ΔTniQ или ΔTnsD. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. (F) PmcCAST-опосредованная заметная вставка в гене тРНК-val на плазмиде-мишени, идентифицированная с помощью глубокого секвенирования. Фиолетовая полоса указывает положение всех белков Tns (TnsAB, TnsC, TniQ и TnsD). Синяя полоса указывает положение в состоянии ΔTniQ. Светло-голубая полоса указывает положение в состоянии ΔTnsD. Белая полоса указывает положение в условиях ΔTniQΔTnsD. (G) Tn7-подобный механизм и потребности в донорах для транспозиции in vitro на ген тРНК-val. pInsert был обнаружен с помощью ПЦР для LE- и RE-соединений. (H) Требования к белку Tns для транспозиции in vitro на ген тРНК-val. Все реакции содержали pDonor и pTarget.

Рисунок 7|. Модели механизмов перемещения…

Рисунок 7|. Модели механизмов транспозиции систем CAST I-B и CAST V-K.

(А) Прототип…

Рисунок 7|. Модели механизмов транспозиции систем CAST I-B и CAST V-K.

(A) Прототип организации локусов систем CAST I-B и CAST V-K. Локусы ограничены концами транспозонов (концы Tn, обозначены светлым вертикальным прямоугольником). Основные компоненты транспозона ( tnsA , tnsB и tnsC в CAST I-B; tnsB и tnsC в CAST V-K) окрашены в светло-голубой цвет, а tniQ обозначены фиолетовым, а tnsD — в более светлый фиолетовый цвет. Компоненты Cas (Cascade и cas12k ) показаны серым цветом. Консервативные факторы транскрипции (TF) показаны розовым цветом. Расположение грузовых генов обозначено темно-серыми кружками. Массивы CRISPR показаны серыми треугольниками для повторов и красными ромбами для спейсеров. Делокализованная crРНК обозначена более светлым треугольником (частичный повтор) и усеченным красным ромбом (короткий разделитель). Самонаводящиеся целевые сайты окрашены в желтый цвет. Горизонтальный светло-серый треугольник указывает на tracrRNA в локусе CAST V-K. Консервативные факторы транскрипции (TF) показаны светло-розовым цветом. (B) Модели транспозиции CAST в мобильный элемент (донорская клетка синего цвета) и самонаводящейся транспозиции CAST в бактериальную хромосому (клетка-реципиент выделена зеленым цветом). Транспозиция CAST в мобильные генетические элементы опосредуется эффекторным механизмом Cas (каскад IB и crРНК или Cas12k, tracrRNA и кРНК; белки Cas показаны серым), который распознает целевой сайт (красный) с нацеливанием под управлением РНК для вставки транспозона. с использованием компонентов Tn. TniQ может функционировать как адаптер между механизмом Cas и транспозосомой (механизм ядра Tn, связанный с транспозоном ДНК). Мобильный генетический элемент (MGE), в который вставлен транспозон, может быть горизонтально передан (через HGT) другому хозяину, где может произойти самонаводящаяся транспозиция. Самонаводящаяся транспозиция CAST I-B опосредуется TnsD (без компонентов Cas), который нацелен на сайт самонаведения (светло-оранжевый), расположенный в бактериальной хромосоме (зеленый). CAST V-K использует специальную crРНК для нацеливания на сайт самонаведения.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

• Метагеномное открытие CRISPR-ассоциированных транспозонов.

  Рыбарски Дж.Р., Ху К., Хилл А.М., Уилке К.О., Финкельштейн И.Дж. Рыбарски Дж. Р. и соавт. Proc Natl Acad Sci U S A. 2021 Dec 7;118(49):e2112279118. doi: 10.1073/pnas.2112279118. Proc Natl Acad Sci U S A. 2021. PMID: 34845024 Бесплатная статья ЧВК.

• Эволюционное и механистическое разнообразие CRISPR-ассоциированных транспозонов типа I-F.

  Кломпе С.Е., Джабер Н., Бех Л.И., Мохабир Дж.Т., Бернхейм А., Штернберг С.Х. Кломпе С.Э. и др. Мол Ячейка. 2022 3 февраля; 82(3):616-628.e5. doi: 10.1016/j.molcel.2021.12.021. Epub 2022 19 января. Мол Ячейка. 2022. PMID: 35051352 Бесплатная статья ЧВК.

• Рекрутирование систем CRISPR-Cas Tn7-подобными транспозонами.

  Петерс Ю.Е., Макарова К.С., Шмаков С., Кунин Е.В. Питерс Дж. Э. и соавт. Proc Natl Acad Sci U S A. 29 августа 2017 г.; 114 (35): E7358-E7366. doi: 10.1073/pnas.170

  14. Epub 2017 15 августа. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017. PMID: 28811374 Бесплатная статья ЧВК.

• Системы CRISPR-Cas, кодируемые транспозонами, направляют интеграцию ДНК под управлением РНК.

  Klompe SE, Vo PLH, Halpin-Healy TS, Sternberg SH. Кломпе С.Э. и др. Природа. 2019 июль; 571 (7764): 219-225. doi: 10.1038/s41586-019-1323-z. Epub 2019 12 июня. Природа. 2019. PMID: 31189177

• Транспозоны CRISPR в движении.

  Mougiakos I, Beisel CL. Мугиакос I и др. Клеточный микроб-хозяин. 2021 12 мая; 29 (5): 675-677. doi: 10.1016/j.chom.2021.04.012. Клеточный микроб-хозяин. 2021. PMID: 33984272

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

• Бактериальная инженерия генома с использованием транспозаз, управляемых РНК CRISPR.

  Gelsinger DR, Vo PLH, Klompe SE, Ronda C, Wang H, Sternberg SH. Гелсингер Д.Р. и соавт. bioRxiv. 2023 21 марта: 2023.03.18.533263. дои: 10.1101/2023.03.18.533263. Препринт. bioRxiv. 2023. PMID: 36993567 Бесплатная статья ЧВК.

• Целенаправленная интеграция ДНК в клетки человека без двухцепочечных разрывов с использованием CRISPR-ассоциированных транспозаз.

  Lampe GD, King RT, Halpin-Healy TS, Klompe SE, Hogan MI, Vo PLH, Tang S, Chavez A, Sternberg SH. Лампе Г.Д. и соавт. Нац биотехнолог. 2023 г., 29 марта. doi: 10.1038/s41587-023-01748-1. Онлайн перед печатью. Нац биотехнолог. 2023. PMID: 36991112

• Последние достижения в технологии редактирования генома на основе CRISPR и ее применение в исследованиях сердечно-сосудистой системы.

  Ли Чж. , Ван Дж., Сюй Дж. П., Ван Дж., Ян С. Ли Чж и др. Мил Медицинская Рез. 2023 10 марта; 10(1):12. doi: 10.1186/s40779-023-00447-x. Мил Медицинская Рез. 2023. PMID: 36895064 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

• Исправление врожденных ошибок иммунитета: от опосредованного вирусом добавления генов до редактирования генов.

  Castiello MC, Ferrari S, Villa A. Кастьелло М.С. и др. Семин Иммунол. 2023 март;66:101731. doi: 10.1016/j.smim.2023.101731. Epub 2023 28 февраля. Семин Иммунол. 2023. PMID: 36863140 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

• CvkR представляет собой репрессор транскрипции MerR-типа транспозазных систем типа V-K класса 2, связанных с CRISPR.

  Циманн М.