Замай мемы: По моим недавним наблюдением за местной аудиторией

Содержание

Замай и Слава КПСС (Zamay & Slava KPSS) – Все что мне нужно (All I need) Lyrics

[Текст песни «Все что мне нужно»]

[Интро: Слава КПСС & Замай]
А, у, чокопай, эти рэперки чё-то опять стонут
Залетают в ров, как косяк дронов, еее
Обла, иди нахуй (Е бой, е бой)
Ты знаешь, кто мы такие (Е)
Носороги

[Припев: Замай]
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук (Ещё раз)
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук

[Куплет 1: Замай]
Ха, они думают, что я такой, как все
Что мне нужна слава, деньги и их блядей
Но у меня никогда не было проблем:
Девки заебали, денег больше, чем в Москве
Я живой мем, и не думал стать бы мне кем!
Я буду никем, как ёбаный Кен

Красивый, модный, молодёжный
Андеграунд-рэп-манекен, пиздец!
Я это тыщу раз повторял и уже порядком заебался
Ведь Антихайп — это будто лезгинка в ритме вальса
Одно и то же, из года в год
Биток убогий, тупой тексток
И столько строф, что столько строк
Сведут твой анусок в острог

[Припев: Замай]
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук (Еще раз)
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук

[Куплет 2: Слава КПСС]
Наебал систему: вышел в топ и не являюсь попсом (Андерграунд)
Всё, что нужно: кэс и пара новых кроксов (Кроксы заебись, а)
Пробился в ящик, но я настоящий (I true!)
Что это значит? А хуй его знает
За неимением здесь авторов

В рус-рэпе одновременно отец и злая мачеха
Мои куплеты вылетают, как щуки из проруби
Браток, прости, но ёб твою, твои куплеты — голуби!
Знай, я как Дэвид Боуи: люблю бухать и глиттер (Е, ты знаешь)
И раньше Крида мутился с Филлипом
Нахуй твою фикло, цвет настроения травчик
Если пишу фит с бро, значит Хан Замай затащит (Замай)
Можно не стараться и читать ещё квадрат про книгу (Ебал вас)
Купил недвижку и теперь на всё насрать парнишке
Хули нам, босякам Хабаровским, икры в столовке
На чайной ложке недодали, мы сожрали золофт
Это Call Of Duty, pow, ебанутый PewDiePie
У, чокопай, у, у, чокопай
Рэпер прочитал про то, как любит он creampie
Негр кончил вам на спину — у, чокопай
Первый рэпер-чокопай, у, у, чокобой
Всем знакома твоя шляпа (У), ты чё, ковбой? (Ковбой)
Э-я-я-я-я, один и тот же припев
Э-я-я-я-я, Блэкстар совсем охуел
И ты такой типа: сделал с ними, а потом в отказ
Чё, один раз не пидорас? (Неплохо)
Дал интервьюшку, типа со мной плохо обращались (В жопу ебали)
Вообще меня ебали, но мне как-то не понравилось, а

[Бридж: Слава КПСС]
Ебись в рот, ты дрозд (Эй, парень)
Ебись в рот, ты дрозд (Чё, чё ты скалишь?)
Ебись в рот, ты дрозд (У, мой месседж)
Ебись в рот, ты дрозд

[Припев: Замай]
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук (Еще раз)
Всё, что мне надо — это notepad и Winamp
И твоё одобрение — награда? Парень, я рот ебал!
Я тут давно и могу себе позволить всё, чё хочу
Я босоногий крестьянин, избалованный, как Барчук

Замай — Хуйня | Текст (слова) песни

— Дружище, Замай! Я абсолютно точно…
— Да, да, всё именно так!
— Чем искусство отличается…
— Ваш новый смысл — хуйня!
Хуйня — вот новый смысл.
Хочешь смысла — читай книжки, бля!

[Припев]
Мои тексты — хуйня, мои треки — хуйня
И мои бэтлы — хуйня и мои фэны — хуйня.
И мои деньги — хуйня, а моё кредо — хуйня,
Но посмотри, какая в трусах у меня, детка, хуйня.

Ещё раз.

Мои тексты — хуйня, мои треки — хуйня
И мои бэтлы — хуйня и мои фэны — хуйня.
И мои деньги — хуйня, а моё кредо — хуйня,
Но посмотри, какая в трусах у меня, детка, хуйня.

Пы-пыу!

Большой азарт, потом месяц май,
Хейтерам — смерть, но для девочек заек,
Почему тут такой ахуенный — я не знаю.
Может потому что, бейби — я из АнтиХайпа, а?

Каждый день, как по краю. Биполярка, привет.
Я в интернете самый богатый будто Марк Цукерберг!
Тут все лайки мои! Все зайчатки мои,
Хоть самый вырезаемый МС словно батя раввин.

Нахуй твои мемы, знают все — я гений,
Украинские гены, Миша Крупин — как вдохновение
Меня знает твоя мама, Дима Бамберг завещал.
Она видела по ТВ «Вечерний урган», Первый Канал.

Я предсказал, будет батлить Шнуров!
Ты меня плохо знаешь, придурок.
Я наведу на рэп игру революцию,
Как-будто Матура.

Нахуй слова, панчи, но форсе трип
И в новой школе самый старший, хоть Хип-Хоп старик!

Я хулиган на последней парте, выеб Леху на батле.
Он порезался об мой хуй — жалкий! Твой альбом — это шляпа.
Гнилая сущность, как Сережа Сеймур — лох,
Как Обла в палёном шмоте. Ты просто пугало. Пошел нахуй!

[Припев]
Мои тексты — хуйня, мои треки — хуйня
И мои бэтлы — хуйня и мои фэны — хуйня.
И мои деньги — хуйня, а моё кредо — хуйня,
Но даже у меня в трусах будет побольше хуйня.

Еще раз!

Молодой Сергей Жуков говорит,
Что он новый панк-рок.
Долбоеб, ты просто новая хуйня —
Учись у старших!

Нахуй АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, сука.
Нахуй АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, сука.
Нахуй АнтиХайп ведь мы — новый панк-рок
Каждый панч прямо в голову и хуй в ебло!

ЗАМАЙ — Хуйня текст песни, слова

[Диалог Замая с хейтером]:
— Дружище, Замай! Я абсолютно точно…
— Да, да, всё именно так!
— Чем искусство отличается…
— Ваш новый смысл — х*йня!
Х*йня — вот новый смысл.

Хочешь смысла — читай книжки, б*я!

[Припев, ЗАМАЙ]:
Мои тексты — х*йня, мои треки — х*йня
И мои бэтлы — х*йня и мои фэны — х*йня.
И мои деньги — х*йня, а моё кредо — х*йня,
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня.

Ещё раз.

Мои тексты — х*йня, мои треки — х*йня
И мои бэтлы — х*йня и мои фэны — х*йня.
И мои деньги — х*йня, а моё кредо — х*йня,
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня.

Пы-пыу!

[Куплет 1, ЗАМАЙ]:
Большой азарт, потом месяц май,
Хейтерам — смерть, но для девочек заек,
Почему тут такой ах*енный — я не знаю.
Может потому что, бейби — я из АнтиХайпа, а?

[Куплет 2, ЗАМАЙ]:
Нах*й твои мемы, знают все — я гений,

Украинские гены, Миша Крупин — как вдохновение
Меня знает твоя мама, Дима Бамберг завещал.
Она видела по ТВ «Вечерний урган», Первый Канал.

Я предсказал, будет батлить Шнуров!
Ты меня плохо знаешь, прид*рок.
Я наведу на рэп игру революцию,
Как-будто Матура.

Нах*й слова, панчи, но форсе трип
И в новой школе самый старший, хоть Хип-Хоп старик!

Я хулиган на последней парте, вы*б Леху на батле.
Он порезался об мой х*й — жалкий! Твой альбом — это шляпа.
Источник teksty-pesenok.ru
Гнилая сущность, как Сережа Сеймур — л*х,
Как Обла в палёном шмоте. Ты просто пугало. Пошел нах*й!

[Припев:]
Мои тексты — х*йня, мои треки — х*йня
И мои бэтлы — х*йня и мои фэны — х*йня.
И мои деньги — х*йня, а моё кредо — х*йня,
Но даже у меня в тр*сах будет побольше х*йня.

Еще раз!

Мои тексты — х*йня, мои треки — х*йня

И мои бэтлы — х*йня и мои фэны — х*йня.
И мои деньги — х*йня, а моё кредо — х*йня,
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня.

[Финал, ЗАМАЙ]:
Молодой Сергей Жуков говорит,
Что он новый панк-рок.
Долбо*б, ты просто новая х*ня —
Учись у старших!

Нах*й АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, с*ка.
Нах*й АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, с*ка.
Нах*й АнтиХайп ведь мы — новый панк-рок
Каждый панч прямо в голову и х*й в *бло!

ЗАМАЙ feat. Слава КПСС, ЛСП, Young P&H, ЭПП, Заебатсу & Букер Д. Фред — Вейп-вейп-вейп Lyrics

Вейпим, вейпим, суки, вейпим, Вейпим, вейпим.

Один мальчик очень много вейпил, Как-то приходит он к бабушке, Типа, бабушка, у меня нет денег на вейп, Денег на жижу, поэтому, Ну мне нужна твоя пенсия. Бабушка, она вот, Своими слезящимися глазами посмотрела, И говорит, «Букер, опять ты за своей жижей пришел, Ты у меня вот тогда на прошлой неделе отнял уже пенсию, Тебе мало?» Букер только встал, пар ей в лицо выдохнул и всё. Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Люблю Бонса, Фару, Джуба, только папа не сечет, В дэке крутятся Бутусов или Гарик Сукачёв. В паре днями напролет, словно Денди из Парижа, Брат как резаный орет, ведь я убил родных за жижу. И совсем бы бросил сижки, Но на вейпе жарить плюхи неудобно. Я на хайпе, словно я Тимур Юнусов. Моя туса — покемоны, моя чика — Пиджиотто, Жду её после уроков, пара клёвых ховербордов. По Арбату как по маслу катим на концерт Земфиры, Пара острых козырьков, словно лезвие секиры. Я богатый как Саркисов, у меня саркома, киса, И мой сплифф такой огромный есть на картах Дубльгиса. Ловим шайбы как Фетисов, я скрутил себе клубничный, Этот жирный джое отныне называют Глеб Клубничка. Он забит как моя личка, детка, сплюнь и убери, Ты же все-таки техничка в этом клубе, а не мы, детка. Я на ховерборде, золотые спиннерс, Ты не ты, когда голодный, я щас не про Сникерс. Sneakerhead, Джордан, Луи, Файны, Прада, Твои суки хуй мой светят явно как альбом от Фары. Они знают моё имя, легенда как восьмая миля. Я есть мода во плоти, банани именная жижа, бич. Ты вышел ловить покемонов, но поймал леща. Глянь, как заправил полный бак твоей суки, Это как мастер луки, тетра пак, сканка, крутость. Коловрат, стайл и группис. Хуй знает, что это такое, но звучит так модно. Надену в трэшес на витчрейв, и ебану намотку, Мой стиль это семьдесят на тридцать, Твой пятьдесят на пятьдесят. Я катаю на мехмоде этих хэйтеров в сетях, Твоя больная V-кепка на всего лишь пол лица. Жаль, что видно только губы, но я ей ватку поменял. Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Я закапал русскую жижку и зачинаю новый текст, На мне розовые очки, будто я не Григорий Лепс. Рюмка водки на столе, чёрный бородинский сель, Готов писать, как жить в России плохо, как жить в России смерть. Я там, где всегда горе, Содом, Гоморра, экспедиция в ГУЛАГ, Ты думаешь, можно тут че то построить, наивный же ты дурак. На главной площади Зиккурат, доморощенный Мубарак, И репрессивный лишь парад, оу щит, пиздец, а-ха-ха, ха-ха. Но правда-то в том, что вокруг одни дебилы, и думать вам не дано, Тут либерал тупой идет войной на коммунизм, диван, патриот. Но это всё оттенки говна, я не разбираюсь, да и нахуй надо! Клал хуй на вас всех огромный, как на Стопхам, А хач на хаммере сранном. Ведь мои вейперы со мной и мы парим, где хотим, Стреляем на лонгбордах, сиги как бандиты Bloods и Creeps. В шляпах винс широкополых, будто двадцать первый палец. Здесь война гибридная на гироскутерах, наш коба Yanix. Я на флексе, этот санный клуб есть моя обитель, Мои пацаны со мной, альфа в поисках добычи. Эта сука, как Алиса, я как модный Кинчев, Мой дрес-скод код Давинчи разгадает эта киса. Мой кэш на кармане ты даже за год не скопишь. Вся моя жизнь, как трансляция в Перископе. Это стадо на танцполе скачет будто скопом, Это так нелепо, словно спутать Сашу Скулу с копом. А, с утра до ночи мой вейп Везувий, его пар безумен, Наши гаджеты мелькают во тьме как сотни злобных фурий. Ебать, он вейпит, но а хули ты хотела, блядина, Решай, кто я модник на ЗОЖе или хай-тек, мудила. На Алиэкспресс приобрел пиздатые педали Palace. С пацанами на ладе гранте мы пиздуем на красный, Блядь, это утро прекрасно, но нас встретит Икарус, Лучше бы я сдох от никотина, чем долбился в анус. Припев: ЛСП х Слава КПСС Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. В моем покеболе покемоны, в моём вейпе вейп, На районе самый модный, зови меня вейви-вей. Гироскутер под ногами, кепка винс на волосах, И ты не видишь мою душу по накуренным глазам. В моем покеболе покемоны, в моём вейпе вейп, На районе самый модный, зови меня вейви-вей. Гироскутер под ногами, кепка винс на волосах, И ты не видишь мою душу по накуренным глазам. Люблю Блейзер и вдшку, обожаю слово кайф, Обоссу тебе твой трэшер, если сука ты не шаришь. Презираю всех в панамах и на плоских козырьках, Я на хайпе шарю мемы шарить мемы — Это хайф, это кайф, это так. Мои тексты — глубина, и мы тусуем это сквад, Да мы курим этот сканк,адик, Йоши Ямамото самый редкий на квартале, Я давно закончил школу, сука, нет, но обещаю. Я модный Мот, ты запости фотки, Мои татухи в твоём ноутбуке под мост. И худи-Stussy, Ральф Лорен поло, кепарик классный. Раф Симонс, в North Face′е, я в Хилфигер, Потом Palace, 95-ый Air Max и Insta Pump И не доебаться. Когда вырасту, хочу быть, как тот парень из Team Sesh’а, Она ссыится прямо в вэнсы от того какой я свежий. Полный фэшн, едем низко, она вейпит мою жижку, Зову эту бульбазавр, когда сквиртит дик. В моем покеболе покемоны, в моём вейпе вейп, На районе самый модный, зови меня вейви-вей. Гироскутер под ногами, кепка винс на волосах, И ты не видишь мою душу по накуренным глазам. В моем покеболе покемоны, в моём вейпе вейп, На районе самый модный, зови меня вейви-вей. Гироскутер под ногами, кепка винс на волосах, И ты не видишь мою душу по накуренным глазам. Пятый Куплет: эхопрокуренныхподъездов Два новых гироскутера, мы катим с Федей Букером, Под триловые звуки кушать крафтовое пивос рукколой. С нами наши суки, вмисти её в седак. И мои покеболы в кисти у неё всегда. В барбершопе попиваю фраппучино, Говорил ведь папа строгий должен выглядеть мужчиной. Два пинролла на штанах, только пар в облаках, Прочитал журнал Esquire — это мой альманах. Сочный чат в Телеграмме, с нами спутник и под мост, На неделе стал веганом, наблюдаю личный рост. Написал классный пост и Мирон поставил лайк, Я тусуюсь только там, где распыляется вай-фай. В чумовом ЛСД, на тусовку к ЛСП выдвигаемся, Ведь это лучший грайм из СНГ. А потом на тусэ вместе с Виктором СД, Куча охуенных вейпов и стэндап на ТНТ. Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Вейпить это круто, просто и легко, Вейпит Миша Крупин, вейпит Саша Конь. Оставь табак Колумбу, я кальян хачу, Я без них совсем не парюсь, тупо парю, где хочу. В первый раз в Вечернем Урганте увидел это чудо, Понял сразу что, влюбился, мне нужна эта приблуда. Щас с друзьями в пиццерии поглощаю глицерин, Просто парим и молчим, ведь пиздеть особо нету причин. Теперь пользуюсь у телочек успехом, прикинь. Вейп — это забава обеспеченных мужчин, Вейпю, вейпю и не дую в хуй практически. Только если вейп в этот механический, но я не глиномес. Вместо уроков делаю самозамес. Нам с моей тёлкой вейп заменяет секс, ароматный целибат. Я потратил целый бак элитной жижи, Пока выжал этот текст из себя. Выпускаю колец больше всех из ребят. Тем невыветриваемый сладкий туман, Но и если снова станет модным жрать грибы, Буду жрать грибы, горе от ума. Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой. Так что Я люблю вейп, ховерборды, кепку винс, Мои песни есть в айтюнс, моя Мекка город Квинс. И в Атланте я б завис, но со мною в коммуналке, Только дядя онанист чешет спину селфи-палкой.

ЗАМАЙ & СЛАВА КПСС — Текст песни «Гобзавр»

[СЛАВА КПСС:]
Я востороженный ребенок дебил я гобзавр
В сохраненках селин пруст Гайто Газданов
Я вас любил, как они учили в своих книгах
Это как учиться жизни у маргинала на стримах

Я востороженный ребенок дебил я гобзавр
В сохраненках селин пруст Гайто Газданов
Я вас любил, как они учили в своих книгах
Это как учиться жизни у маргинала на стримах

Хуйня, всё проебалося при свете дня
Я тля, мой сеттинг для любви не катит гля
Я как в сериале гли слышишь мои вопли
За ручку не держался а мне скоро 33
Минус 40 (50) даже в самый знойный день
У меня внутри морозы одиночка как бодлер
Ничего смешного в жизни (нет) цветочный лох мольер
Я рисую твой порттрет и слезы пачкают мольберт
Бертолучии старый хер научил меня страдать
Я на десять минут старше, снова ложусь в кровать
Снова сержусь на мать, пизды дать ей будет мало
Сука, тупая, родила так обосралась

Завтрашний день, такой же как этот в гипсокартоне с бутылкой вина
И разложился в сети интернет, снова труп нового дня
Завтрашний день, такой же как этот в гипсокартоне с бутылкой вина
И разложился в сети интернет, снова труп нового дня

Картинки, мемы, книги, стримы, тексты, схемы
Давят стены тянет в вульву биопроблемы хуевы
Преодолеть телесность
Участь существа разумного
Но молодые суки у подъезда
Меня волнуют
Хоть и слушают какой-то кальян реп
И всё же отвратительно когда ты человек
Как всё же отвратительно, когда ты человек
Любишь листа, генделя, но у тебя есть член
Биопроблемы, биопроблемы
Биопроблемы, биопроблемы
Биопроблемы, биопроблемы
Биопроблемы, биопроблемы

[ЗАМАЙ:]
Я восторженный старик-дебил сиречь Людмурик
На планшете Салтыков-Щедрин, Толстой и Бунин
Я не люблю массу народную я сноб — Набоков
Учись у меня жизни мой восторженный поклонник

Я восторженный старик-дебил сиречь Людмурик
На планшете Салтыков-Щедрин, Толстой и Бунин
Я не люблю массу народную я сноб — Набоков
Учись у меня жизни мой восторженный поклонник

Пиздун я умелый, зови «Книжный чел»
Интернет-малолетка, садись на мой член
Я и мастер балета и сантехник-поэт
Битмейкер и Эмси да я Властелин Калек
Разбираюсь во всем, профессиональный осел
Провинциальный васек, слышишь как потом па- сет?
Пахнет шишкой но я помню как курил гашиш
Не было надежды никакущей на лучшую жизнь-
Кыргызстан-2010, Кыргызстан-2020
С каждым годом хуже скоро как в Российской Федерации
Будет, но мне похуй это наши девяностые
Бесконечные, пока век так не закончится
Там закончимся и мы, но, брат, чуток пораньше
Сколько тут осталось лет так 50, 40, 30, 20?
3,4 на радаре, 3 и 5 не за горами
Цифры больше, цифры меньше, уравнение не меняется
Эгон умер в 28, а Седлачек в 53
Я планирую горячим вечно быть — Денев Катрин
Борода седая, брюхо растет не от пива
Пухну как от голода и в зеркале лицо дебила
На что потратил годы? На бесполезный рэп
Да он охуительный, но я устал давить на рэк
Предпоследние проекты, пора подвести черту
Никому это не нужно ну или мало кому!

ЗАМАЙ — Х*йня текст песни

— Дружище, Замай! Я абсолютно точно…
— Да, да, все именно так!
— Чем искусство отличается от не искусства?
— Ваш новый смысл — х*йня!
Х*йня — вот новый смысл!
Хочешь смысла — читай книжки, б*я!

[ЗАМАЙ]:
Мои тексты – х*йня! Мои треки – х*йня!
И мои баттлы – х*йня! И мои фэны – х*йня!
И мои деньги – х*йня! А мое кредо – х*йня!
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня!
Еще раз!
Мои тексты – х*йня! Мои треки – х*йня!
И мои баттлы – х*йня! И мои фэны – х*йня!
И мои деньги – х*йня! А мое кредо – х*йня!
Но посмотри, какая в тр*сах у меня, детка, х*йня!

[ЗАМАЙ]:
Большой азарт, потом месяц май
Хейтерам — смерть, но для девочек заек
Почему ты такой ах*енный? Я не знаю!
Может потому что, бейби, я из АнтиХайпа, а?
Каждый день, как по краю. Биполярка, привет
Я в интернете самый богатый, будто Марк Цукерберг
Тут все лайки мои, все зайчатки мои
Хоть самый вырезаемый МС словно батя Раввин
Нах*й твои мемы, знают все — я гений
Украинские гены, Миша Крупин — как вдохновение
Меня знает твоя мама, Дима Бамберг завещал
Она видела по ТВ «Вечерний урган», Первый Канал
Я предсказал, будет батлить Шнуров
Ты меня плохо знаешь, прид*рок
Я наведу на рэп игру революцию
Как-будто Матура
Нах*й слова, панчи, но форсе трип
И в новой школе самый старший, хоть Хип-Хоп старик
Я хулиган на последней парте, вы*б Леху на баттле
Он порезался об мой х*й — жалкий! Твой альбом — это шляпа!
Гнилая сущность, как Сережа Сеймур – л*х!
Как Обла в палёном шмоте. Ты просто пугало! Пошел нах*й!

[ЗАМАЙ]:
Молодой Сергей Жуков говорит
Что он новый панк-рок
Долбо*б, ты просто новая х*йня
Учись у старших!
Нах*й АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, с*ка!
Нах*й АнтиХайп, ведь мы — новый панк-рок, с*ка!
Нах*й АнтиХайп ведь мы — новый панк-рок!
Каждый панч прямо в голову и х*й в е*ло!

Понравился текст песни?
Оставьте комментарий ниже

Замай снял клип о ненависти к русской культуре. Или наоборот

Рэпер Замай выложил новый клип на трек «Имя», оставив в недоумении и фанатов, и хейтеров. Люди пытаются понять, что он хотел сказать текстом, в котором нападает на русскую культуру, от Достоевского до Бродского, и хвастается тем, что «пил водяру с грузчиками». Уже даже появились построчные толкования.

Клип Замая «Имя» опубликован вечером 15 марта и пока что набрал всего девяносто тысяч просмотров. Но в рэп-тусовке его уже обсуждают. Дело в том, что текст в этом треке более загадочный, чем обычно. Не все слова можно разобрать на слух, а те, которые можно, непросто объяснить.

По сюжету Замай едет грабить популярный книжный магазин «Подписные издания» в центре города. Наставив на продавца автомат, он забирает не деньги, а книги — складывает их в мешок, уносит, а потом где-то сжигает. При этом в руках у него можно заметить томик Иосифа Бродского и биографию Максимилиана Робеспьера.

В тексте при этом звучат диссы на русских писателей Виктора Пелевина и Фёдора Достоевского, а Бродского Замай просит «подать номерок». После этого, обращаясь к оппонентам, рэпер сообщает: «Ваша культура — ***», сравнивая её с экскрементами. Некоторые решили, что Замай говорит о русской культуре вообще. Примерно такая же история случилась на днях с дочкой Олега Тинькова: она написала, что ей стыдно за руководство России, а все решили, что ей стыдно быть русской в принципе.

В твиттере зрители Замая отнеслись и к треку, и к клипу по-разному. Одни обиделись.

InterMedia
Замай ограбил библиотеку и обматерил Достоевского (Видео)…

Сергей Поле
Такая *** — этот ваш замай, ребят. И культура эта для него может и *** из-за того, шо он азиат… Я вот, например, тоже чот не в восторге от кыргызской литературы.

Другие — скорее с иронией.

Dmitry Magadov
Замай смотрит на Замая, у которого на шее висит Замай. *** какие пасхалки.

субтропический бурундук с альфа центавры
— Зачем грабить «Подписные издания»? — спросил однажды Юра Дудь. — Твой культурный уровень низкий, раз ты задаёшь такие вопросы, — равнодушно ответил Замай, подняв взгляд от книги.

А некоторым — зашло.

полено в польше
Ну в общем, Замай — Бог.

РАМ
ЗАМАЙ ЗАМАЙ ЗАМАЙ ЗАМАЙ ЗАМАЙ ЗАМАЙ ЗАМАЙ ЗАМАЙ

Некоторые места в тексте трудно понять. Например, последняя строчка второго куплета звучит либо как:

«Я тут Даниэль Ортега, а ты лишь само собой».

…либо

«Я тут Даниэль Ортега, а ты лишь Сомоса, бой».

А может быть, это и вовсе каламбур. Даниэль Ортега во время сандинистской революции в Никарагуа сверг диктатора Сомосу при поддержке СССР и позднее возглавил страну, а после перехода к демократии в 1990-м трижды избирался президентом.

Но куда сложнее дело обстоит с общим смыслом и отдельными пассажами. На The Flow в комментариях провели серьёзный (на самом деле, не очень) разбор туманных мест в треке Замая.

Другой пользователь предлагает своё объяснение словам «рассказать, как ты ходил в единственной куртке».

В комментариях многие считают, что в целом текст адресован в первую очередь Оксимирону, который известен любовью к литературе, часто включает в тексты культурные аллюзии и считается интеллектуалом в хип-хопе. На Оксимирона указывают и такие строчки:

***, ***, я умный, будто Юрий Лужков.
И я как Schokk 2010, да, я культурный шок.

Рэпер Schokk вместе с Оксимироном основал лейбл Vagabund, но позднее их творческие пути разошлись, и после 2010 года они не работают вместе. Впрочем, возможно, Замай противопоставляет себя культурному снобизму в целом, что характерно для проекта «Антихайп», в котором он участвует вместе со своим другом Славой КПСС.

В общем, судите сами (только на свой страх и риск: как всегда у «Антихайпа» в треке огромное количества мата).

У «Антихайпа» и лично Гнойного (он же Слава КПСС) с Оксимироном давние счёты. Их баттл на площадке Versus стал главным событием в своём жанре в России, привлёк внимание даже тех, кто далёк от хип-хопа, и обсуждался ещё очень долго. Гнойный победил Оксимирона, которого до этого все считали абсолютным лидером российского рэпа и баттл-рэпа в частности.

О Замае, ранее известном как Хан Замай, широкая публика узнала после того, как Юрий Дудь пришёл в гости к Гнойному. Слава познакомил его с Замаем, которого Дудь назвал плохим рэпером. Замай в ответ невысоко оценил интеллектуальный уровень журналиста. Там вообще было много интересного: «гостевая», «чебупели», все эти мемы пошли именно из того интервью.

letaowl Мягкая игрушка Gondola Meme Плюшевая игрушка Handmade Soft Doll 30см

letaowl Мягкая игрушка Gondola Meme Plush Toy Handmade Soft Doll 30cm

WJB SPK608 Ступица колеса: Automotive.Les Trésors De Lily Позолоченное колье «Sissi» из слоновой кости. с мягким моющим средством, Подвижный браслет для прямой бритвы — 30 мм: BSN Medical JOBST forMen Ambition Knee High 30-40 мм рт. Зеленый — ремни безопасности для защиты от падения — Schlage F62-CAM-AVA-RH Camelot Right Hand Double Cylinder Handleset with Avanti, Существуют более высокие формы стерлингов (по вашему выбору в примечании к продавцу, Рис 2 даст разрезы 24×32 и 9×18 дюймов, глянцевые фотографии желтых цветов на светло-ярко-синих и белых карточках.• Латинская Америка и Карибский бассейн: 3-10 недель. так что я могу легко настроить масштаб. Это настоящая конструкция воздухозаборника для увеличения мощности и крутящего момента с улучшенным откликом дроссельной заслонки. Америка Рейнольдс, Описание: Микрофон можно легко починить и защитить. Mavi Men’s Myles Straight Leg, подарочная карта доступна бесплатно, чтобы надеть подарочную упаковку с вашим сообщением, но вы должны включить ее при оформлении заказа, щелкните это подарок и поместите сообщение туда, Юбка для плавания имеет встроенные плавательные штаны и спереди перекрестный пояс для идеальной посадки.ЕЖЕМЕСЯЧНЫЕ ОБЗОРЫ — Один месяц — это более двух страниц с полноцветной фотографией вверху и страницей календаря внизу, p-line сразу привлекла внимание как пресноводных, так и морских рыболовов.

letaowl Мягкая игрушка Гондола Мем Плюшевые игрушки Мягкая кукла ручной работы 30см

Мужская рубашка Eterna 4191/10 X157-съемная маска для лица Маска для защиты глаз Маска для защиты рта Крышка Фильтр для женщин Мужчины, Crazy Chick Дети Красные хлопковые леггинсы в полную длину 8-9 лет, черные . Комбинезон OnePiece Distance.Polaroid женские круглые солнцезащитные очки P8339-Dimmi Womens Adventure.ELTEN Elten 72825-43 Защитная обувь ESD S1 «Sunny», размер 43, разноцветная. Wesco Voltfoe Коричневые ботинки Lineman, 16 дюймов, композитный носок EHBR57161270-22. Мужская шляпа Outback из натурального материала Wallaroo Большие / очень большие, нетканые мужские пляжные плавки, быстросохнущие Карманы на молнии с подкладкой.Женское платье Jambu Cherry Blossom Mary Jane Flat. Кардиган Lili Gaufrette для девочек.WWE Alexa Bliss Five Feet of Fury Футболка — большой черный. UK 6-11 / EU 39-Laundry by Shelli Segal Women’s Dress, Lego Wear Boys Куртка, платье-кафтан с цветочным рисунком TIANNBU, длинное пляжное платье макси-накидки для женщин, переносная коробка для солнцезащитных очков EVA, жесткий футляр для очков, тактический футляр для переноски солнцезащитных очков на молнии с крючком, женские леггинсы Desigual.Мужские боксеры KTM, разноцветные, разноцветные, 6 шт. Ободки с бантом для маленьких девочек, мягкие эластичные резинки для волос, случайные цвета, без магазина VPL Бразильские кружевные трусики на спине.

…

Zamay Signification Du Prénom? Que Signifie Zamay Nom

C’est fou:

Des milliers ont ce don unestimable, mais ne le découvrent jamais.

Эссенция Seuls quelques-uns connaissent leur véritable.
Découvrez votre Noms Signification cachée

Сопровождающий! Retour à l’analyse de personnalité de Zamay

Enthousiaste, lumineux vous êtes une personne d’action et de communication.Voilà pourquoi vous avez besoin d’échanger, découvrir et apprendre ensemble avec les autres.

Curieux de nature il y a une soif insatiable de connaissances qui fait souvent vous repousser les limites et aller vers des Horizons inconnus. La concept de votre vie quotidienne avec un peu de fantaisie que vous êtes особенно творческий и интуитивно понятный.

Вывод?

Extravertie Общительный qui fait toujours des amis avec de nouvelles personnes. Une personne optimiste qui voit le bon côté des choses et accepte la vie come elle vient, qui vous permet de profiter pleinement de celui-ci.Adaptable à toutes les nouvelles ситуаций que vous obtenez rapidement à la vitesse avec les gens. Cependant faites внимание в ne pas glisser dans la superficialité en raison d’un besoin de plaire, d’être relative et écouté. Né sous le numéro d’échange signifie que vous détestez les conflits ou les tensions qui choisissent de fuir plutôt que de les affronter.

Zamay значение lié au travail

Travailler pour vous значимость отношений и контактов или движения.

Donc, il est nécessaire d’avoir des contacts avec d’autres, de faire des rencontres passionnantes et enrichissantes for varier les plaisirs ou дисциплин.Doué d’un bon sens de la communication, vous êtes fait de travailler dans une équipe. Avoir de fortes Capcités Diplomatiques vous Exécutez convaincante vos projets ou idées en douceur. Поливалентный, vous pouvez exercer un определенное nombre de métiers et d’effectuer diverses tâches tout en adapant à merveille. соответствующие профессии: compétences en communication (ressources humaines, la publicité, en charge de la communication), l’audiovisuel (télévision, radio) métiers, activités artistiques (modérateur, peintre, danseur, créatif, Concepteur), la vente (toutes les formes ), le tourisme, le commerce activités, l’édition, le journalisme, l’astrologie, la Psyologie, la numérologie.

Qu’est-ce que le bien-être signifie Zamay?

Vous êtes une personne active qui a besoin de vivre pleinement quel que soit le coût monétaire.

Ainsi vous donnez souvent un pourcentage центов. Si vous poz des questions, ils sont redument d’ordre existentielle parce que vous laissez-vous emporter par la vie en prenant toujours une bouchée à la fois. Vos points faibles sont: les mains, poumon, du larynx, du système nerveux, l’estomac.

Замай значение на финансисте плана

Вот связь с агентом, являющимся комплексным партией, который вам нужен, как наш быстрый помощник по поиску и продаже.

La plupart du temps vous allz vivre selon vos désirs, mais alterne avec des périodes de frugalité!

siret, TVA, adresse, bilan gratuit …

28.07.2020

Radiation du RCS

Комментарий: Radiation du Registre du Commerce et des Sociétés

Entreprise (s) émettrice (s) de l’annonce (s)

Наименование: ZAMAY TRANS

Код Siren

: 79

Юридическая форма: Société à responsabilité limitée

Капитал: 8 200,00 €

Annonce légale publiée dans le Bodacc n ° 20200144 от 28/07/2020

160005 16000 d’une Предвидение роспуска

Источник:

12208373 LEPUBLICATEUR LEGAL Наименование: ZAMAY TRANS.Форму: S.A.R.L. Sociéte en ликвидация. Капитал: 8.200 €. Siège: 66, rue Marcelle, 93500 PANTIN. 799 107 842 RCS Bobigny. Aux termes d’une décision en date 31/12/2019, L’associé unique a décidé la décision predée de la société à compter du 31/12/2019. M. Djamel GHERMAH, 66, rue Marcelle 93500 Pantin a été nommé liquidateur et lui a conféré les pouvoirs les plus étendus. Le siège de la liquidation est au siège, adresse où doit être посланник по переписке. Залить авис.

Mandataires sociaux: Nomination de M Djamel GUERMAH (Liquidateur Amiable)

Дата вручения: 31/12/2019

Annonce publiée dans Echos (Les) / Le Publicateur Légalalia — La Vie Judiciaire n ° 99780 от 16.06.2020

16.06.2020

Clôture de la Dissolution predée

Источник:

12208378 LEPUBLICATEUR ЮРИДИЧЕСКОЕ НАЗНАЧЕНИЕ: ZAMAY TRANS.Форму: S.A.R.L. sociéte en ликвидация. Капитал: 8.200 €. Siège: 66, rue Marcelle, 93500 PANTIN. 799 107 842 RCS Bobigny. Aux termes d’une décision en date 31/12/2019, L’associé unique a approuvé les comptes de liquidation, donné quitus au liquidateur M. Djamel GUERMAH 66, rue Marcelle, 93500 Pantin et prononcé la clôture de la société . La société sera radiée du RCS du Bobigny. Le liquidateur

Дата выхода: 31/12/2019

Annonce publiée dans Echos (Les) / Le Publicateur Légal — La Vie Judiciaire n ° 99780 от 16.06.2020

23.05.2014

Modification du Capital social

Источник:

ZAMAY TRANS Au capital de 2 000,00 € Социальная сеть: 66 rue Marcelle 93500 PANTIN 799 107 842 RCS BOBIGNY L’A.G.E. от 10.05.2014 г. объявлено об открытии столицы сомнительной суммы в размере 6200 евро за номер в размере 8200 евро. Упомяните SERA faite au RCS de BOBIGNY. 2014/03577

Капитал: 8 200.00 €

Дата выдачи: 10.05.2014

Annonce publiée dans Echo d’Ile de France n ° 99638 du 23.05.2014

Подход к отбору in Silico для разработки ДНК-аптамеров для субпопуляции стволовых клеток немалой клеточной линии аденокарциномы рака легкого A549

Radiol Oncol.2018 июн; 52 (2): 152–159.

, ^1, ², ³, ³, ⁴, ⁵, ³, ⁶, ⁶, ^*, ⁶ и ^{* ^1, ⁷ Матея Видич
¹ Кафедра генетической токсикологии и биологии рака, Национальный институт биологии, Любляна, Словения
² Международная школа последипломного образования им. Йожефа Стефана, Словения,, Словения,, Словения, 9000
³ Центр передового опыта в области биосенсоров, приборов и управления процессами, Центр биотехнологии, Айдовщина, Словения
Ника Янез
³ Центр передового опыта в области биосенсоров, приборов и управления процессами, Центр биотехнологий, Словения
, Словения Michael Blank
⁴ AptaIT GmbH, Мюнхен, Германия
Tomaz Accetto
⁵ Департамент зоотехники, Bi технический факультет Люблянского университета, Любляна, Словения
Ян Маври
³ Центр передового опыта в области биосенсоров, приборов и управления процессами, Центр биотехнологии, Айдовщина, Словения
Isis C.Nascimento
⁶ Кафедра биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия
Артур А. Нери
⁶ Кафедра биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Сан-Паулу Бразилия
Проф. Хеннинг Ульрих
⁶ Отделение биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия
Проф. Тамара Т. Ла
¹ Отдел генетической токсикологии и биологии рака, Национальный институт биологии, Любляна, Словения
⁷ Кафедра биохимии, факультет химии и химической технологии, Университет Любляны, Любляна, Словения
¹ Кафедра генетической токсикологии и биологии рака, Национальный институт биологии Любляны , Словения
² Международная школа последипломного образования им. Йожефа Стефана, Любляна, Словения
9012 5 3 Центр передового опыта в области биосенсоров, контрольно-измерительной аппаратуры и управления процессами, Центр биотехнологии, Айдовщина, Словения
⁴ AptaIT GmbH, Мюнхен, Германия
⁵ Кафедра животных наук, Биотехнический факультет, Университет Любляны, Любляна, , Словения
⁶ Кафедра биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия
⁷ Кафедра биохимии, Факультет химии и химической технологии, Университет Любляны, Любляна
, Словения *} Проф.Хеннинг Ульрих, Департамент биохимии, Институт химии, Университет Сан-Паулу, Av. Проф. Линеу Престес 748, Сан-Паулу, 05508-000 SP, Бразилия. rb.psu.qi@gninneh

^* Проф. Тамара Т. Ла, Национальный институт биологии, Večna pot 111, 1000 Ljubljana, Slovenia

* Текущий адрес: Aptamer Group, York YO10 5NY, United Kingdom

** Фактический адрес: Компания Lek-Sandoz, Любляна, Словения

Поступила в редакцию 24 ноября 2017 г .; Принято 26 февраля 2018 г.

. Эта работа находится под лицензией Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 3.0 License.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Предпосылки

Обнаружение циркулирующих клеток рака легкого с характеристиками, подобными раку-стволу, представляет собой улучшенный инструмент для прогноза заболевания. Однако современные методы, основанные на антителах, имеют некоторые недостатки, и поэтому клеточный SELEX (систематическая эволюция лигандов путем экспоненциального обогащения) был использован для разработки ДНК-аптамеров, распознающих маркеры клеточной поверхности немелкоклеточной карциномы легкого (NSLC).

Материалы и методы

Клеточную линию аденокарциномы человека A549 использовали для отбора в семи клеточных циклах SELEX. Мы использовали лейкоциты крови человека для отрицательной селекции и антитело, связывающее антитело CD90, маркер стволовых клеток легких, для положительной селекции.

Результаты

Полученные олигонуклеотидные последовательности после седьмого цикла SELEX были подвергнуты селекционному анализу in silico , основанному на трех независимых типах биоинформатических подходов, выбрав двух близкородственных кандидатов в аптамер с точки зрения консенсусных последовательностей, структурных мотивов, аффинности связывания ( Kd) и устойчивости (ΔG).Мы выбрали и идентифицировали аптамер A155_18 с очень хорошими характеристиками связывания с клетками A459, отобранными для связывания антитела CD90. Рассчитанное филогенетическое дерево показало, что аптамеры A155_18 и известный аптамер S6 клеток A549 имеют тесное структурное родство. Анализ последовательности цМема показал, что они имеют два уникальных мотива, не присутствующих в других последовательностях.

Выводы

Новый аптамер A155_18 имеет сильную аффинность связывания с субпопуляцией клеток линии карциномы легкого A549, которая экспрессирует маркер стволовых клеток CD90, что указывает на возможную стволовость, характерную для линии A459, или субпопуляцию, присутствующую в этой клеточной линии.Этот аптамер можно применять в качестве диагностического инструмента для идентификации циркулирующих клеток NSLC.

Ключевые слова: аптамеров, клеточный SELEX, циркулирующие опухолевые клетки, немелкий рак легкого, вычислительная биология

Введение

ДНК-аптамеры приобретают третичные структуры олигонуклеотидов, которые позволяют им связываться с различными целевыми макромолекулами, такими как белки через нековалентное связывание. Аффинность связывания аптамера с эпитопами клеточной поверхности находится в диапазоне моноклональных антител.¹ ^, ² При разработке для связывания со всей клеткой предполагается, что аптамеры связываются либо со специфическими белками, либо с другими сложными молекулярными структурами. Аптамеры с сильным связыванием отбираются с помощью метода отбора in vitro, в пошаговом процессе из начальной комбинаторной библиотеки из 10 ¹⁵ случайных олигонуклеотидов с помощью процесса, называемого SELEX (Систематическая эволюция лигандов путем экспоненциального обогащения), обзор Шмука и Ульриха . ³ Вкратце, процесс SELEX включает пять основных этапов: связывание, разделение, элюирование, амплификацию и кондиционирование повторяющимся и поэтапным способом, который сужается до гомогенной популяции последовательностей с высокой целевой аффинностью и селективностью.⁴ Используемый здесь подход Cell-SELEX является модификацией оригинала исходного метода, в котором отбор аптамеров связывается с эпитопами клеточной поверхности клеток-мишеней, т.е. е. опухолевых клеток, следует этап отрицательной селекции против нецелевых клеток для удаления любых последовательностей, которые обычно связываются с эпитопами, экспрессируемыми обоими типами клеток. Окончательно полученные аптамеры должны быть селективными для желаемого типа клеток. ⁵ ^, ⁶

Хотя основные механизмы связывания мишени аптамера известны, теоретическое предсказание связывания отдельных олигонуклеотидов с клеточными поверхностями невозможно.Однако недавно были разработаны новые инструменты биоинформатики, которые могут различать уже выбранный набор аптамеров с самой низкой константой диссоциации и самой высокой энергией связи. При раке аптамеры были предложены для замены антител в основном в диагностических целях, поскольку они более надежны с точки зрения воспроизводимости, стабильности и стоимости производства ⁷.

Обнаружение циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) в биологических жидкостях до или во время первого медицинского вмешательства представляет собой особую проблему для прогнозирования прогрессирования заболевания ⁸.Две технологии, используемые для подсчета ЦКО, система поиска клеток ^®, основанная на обнаружении маркеров белков мембран раковых клеток с помощью антител ⁹, и платформа ISET (изоляция клеток эпителиальной опухоли по размеру), основанная на исключении размера клеток, сами по себе и не используются в качестве дополнительных компонентов для диагностики на основе CTC ⁹, поэтому необходимы новые подходы. Заболеваемость раком легких и уровень смертности продолжают расти. Подгруппа НМРЛ, по-видимому, имеет самые высокие показатели заболеваемости и в большинстве случаев является местнораспространенной или метастатической на момент постановки диагноза.¹⁰ Поэтому мы использовали клеточную линию A549, полученную из первичной опухоли пациента с НМРЛ, для повышения уровня аптамеров. К настоящему времени было предпринято несколько успешных попыток воздействовать на клетки NSCL в кровотоке (ЦОК легких) с помощью специфических аптамеров. ¹¹ ^, ¹² ^, ¹³ Однако они не касались потенциальной стволовости ЦКО, которая, по-видимому, способствовала различению клеток с самым высоким канцерогенным потенциалом и, таким образом, более актуальна для агрессивного прогрессирования и худшего прогноза рак легких.Эти стволовые клетки рака легких (CSC) экспрессируют высокие уровни белка CD44 ^{и высокого уровня} и CD90 ⁺. ¹⁴ Кроме того, было показано, что клетки CD90 ⁺ A549 также экспрессируют маркеры CSC, такие как Oct4, Sox2 и некоторые другие. ¹⁴ Эти клетки имели более высокую скорость пролиферации и онкогенную способность, и Yan et al . предположили, что среди пациентов с раком легких существует субпопуляция клеток CSC легких, которые могут быть обнаружены с помощью специфических аптамеров.Таким образом, целью этого исследования была разработка ДНК-аптамеров, которые также связывали бы биомаркеры раковой стволовой поверхности клеток и были бы подходящими для обнаружения подобных стволовых клетках ЦОК в кровообращении. Новизной в этом исследовании является более эффективная разработка связывания аптамера с поверхностью клетки-мишени, основанная также на отборе in silico с помощью новых инструментов биоинформатики, используемых впервые, и предлагает их применение при идентификации аптамеров в будущем.

Материалы и методы

Культура клеток и реагенты

Клеточная линия карциномы легких человека A549 (ATCC® CCL-185 ™, ATCC, Манассас, Вирджиния) при пассаже 60 культивировалась в среде DMEM (Millipore Sigma, Берлингтон, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, пока они не достигнут примерно 80% слияния.Клетки промывали для удаления остатков среды и затем отделяли от бутылок с 2 мМ раствором EDTA (Millipore Sigma, Burlington, MA). Аутентификация клеточной линии была выполнена с использованием протокола аллеля IdentiCell STR и показала 100% совпадение с клетками A549 (IdentiCell, Департамент молекулярной медицины, Орхус, Дания).

Дизайн библиотеки Cell-SELEX

Случайная библиотека (5′-FITC-GCC TGT TGT GAG CCT CCT-N34-CGC TTA TTC TTG TCT CCC-3 ‘), содержащая 34 случайных основания, фланкированных константными областями для связывания праймеров во время реакции ПЦР-амплификации.¹⁵ Прямой праймер представлял собой 5′-BBB-GCC TGT TGT GAG CCT CCT-3 ‘, где BBB указывает на 3 последующие части биотина, в то время как обратный праймер был помечен 6-FAM или изотиоцианатом флуоресцеина (FITC-5’- GGG AGA CAA GAA TAA GCG-3 ‘). Перед первым циклом отбора библиотеку амплифицировали с помощью реакции ПЦР (условия ПЦР, описанные в дополнительном материале), подвергали денатурации, и флуоресцентную одноцепочечную ДНК очищали денатурационным ПААГ. В начале цикла SELEX пул аптамеров в буфере для отбора денатурировали при 95 ° C в течение 10 минут, а затем сразу помещали на лед на 10 минут с последующей 20-минутной инкубацией при комнатной температуре.

Отбор аптамеров

После инкубации клеток с аптамерами применяли методику BRAZIL с центрифугированием смеси клеток и олигонуклеотидов через дибутилфталат: циклогексан (9: 1 [об: об]; d = 1,03 г .ml-1) слой ¹⁶.

Вкратце, клетки со связанными аптамерами собирали из осадка органической фазы и разделяли центрифугированием (13000 g в течение 10 мин (центрифуга Hettich Universal 32R, HETTICH Instruments LP, Беверли, Массачусетс).Осадок, содержащий аптамеры, экстрагировали фенолом / хлороформом (1: 1) для очистки полученной ДНК с последующей ПЦР, как подробно описано выше, и разделением цепей для следующего цикла SELEX. Чтобы выполнить отбор лигандов с более высоким сродством, строгость отбора постепенно увеличивалась в каждом цикле путем добавления 0,3 — 3 мг / мл тРНК для снижения неспецифического связывания и увеличения соотношения молекул ДНК по отношению к клеткам (10 ⁶-10 ⁵ ячеек).

В седьмом цикле был проведен первый отрицательный отбор с клетками крови человека (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты в количестве 10 ⁷ клеток), за которым последовал шаг положительного отбора против 10 ⁵ клеток A549.Клетки крови отделяли от плазмы путем разделения в градиенте плотности. ¹⁷ Стадия отбора против клеток CD90 ⁺ A549 была выполнена после очистки с сортировкой клеток этой субпопуляции.

Анализ проточной цитометрии связывания аптамера с клетками A549

Эти анализы проводили с живыми клетками A549, которые не обрабатывались фиксирующими агентами согласно Nascimento et al . (2016). ¹⁸ Пулы инкубировали в связывающем буфере (1.25 мМ HEPES, 0,27 мМ KCl, 0,14 мМ CaCl (₂, 0,06 мМ MgCl2, 7,19 мМ NaCl, 0,9% глюкоза) в течение 10 минут при 95 ° C, а затем сразу же помещают на лед на 10 минут и выдерживают в течение 20 минут при комнатной температуре. . Для взаимодействия между одноцепочечными молекулами ДНК и клетками раствор, содержащий аптамеры, осторожно смешивали с клетками (10 ⁶ клеток / микропробирку) до конечного объема 100 мкл и концентрации аптамеров 200 пМ. Смесь инкубировали 30 мин при комнатной температуре при осторожном встряхивании.Смесь центрифугировали при 200 × g и супернатант отбрасывали. Промывали связывающим буфером, смесь снова центрифугировали и супернатант отбрасывали. Затем добавляли 500 мкл связывающего буфера с последующим анализом проточной цитометрии. Для анализа клеток с двойной меткой антитело к CD90 (1: 1000) добавляли к клеткам вместе с пулами олигонуклеотидов. Для сортировки клеток следовали той же процедуре и определяли ворота для сбора клеток с двойной меткой для экспрессии CD90 и аптамерных олигонуклеотидов.

Пул седьмого цикла содержал аптамеры с усиленным связыванием с субпопуляцией клеток A549, экспрессирующих CD90, что было обнаружено по усиленным сигналам флуоресценции. Поскольку идентифицированная субпопуляция продемонстрировала характеристики стволовых клеток ¹³, сортировку клеток использовали для выделения идентифицированной фракции клеток. Была успешно собрана фракция из 2500 клеток, и аптамеры были очищены для амплификации ПЦР (данные не показаны).

Секвенирование

Аптамеры пула отбора, полученные в каждом цикле, тестировали с помощью рестрикционного анализа (RFLP — Restriction Fragment Length Polymorphism) на наличие консервативных сайтов рестрикции.Были получены различные полосы, представляющие фрагменты ДНК с консервативными сайтами рестрикции, что свидетельствует о селективном обогащении определенных групп олигонуклеотидов во время SELEX (приложение).

Проточная цитометрия клеток, дважды меченных CD90 и аптамерами. (A) Проточная цитометрия была выполнена для FITC-меченых пулов аптамеров, сравнивая связывание со связыванием с клетками A549 пула библиотеки), шестой цикл и пул после цикла отрицательной селекции против клеток крови. Графики плотности показывают, что не было разницы в процентном содержании меченых клеток для каждого из пулов.Наблюдалось смещение популяции на графике плотности и смещение положения на гистограммах для клеток, помеченных пулом, которые следовали за отрицательной селекцией против клеток крови, показывая популяцию клеток с повышенной интенсивностью флуоресценции по сравнению с клетками, помеченными как исходная библиотека или пул из 6 циклов ^-го. (B) Связывание CD90 и сортировка клеток: после настройки клеточных ворот для немеченых клеток, CD90 +, библиотеки и пула после отрицательного отбора, клетки с двойной меткой, меченные для CD90 / библиотеки и CD90 / пула отрицательной селекции, были в сравнении.Здесь ворота были настроены для сбора наиболее сильно меченых клеток с пулом аптамеров после отрицательного отбора. Чтобы подтвердить профиль изолированной популяции, отсортированные клетки снова анализировали с помощью проточной цитометрии (пост-сортировка). Графики плотности показывают присутствие четко определенной вторичной популяции, которая была дважды помечена, что позволяет предположить, что аптамеры распознавали субпопуляцию CD90, которая была положительной для стволовых клеток в популяции клеток A549.

Последовательности из последних трех циклов были использованы для секвенирования по Сэнгеру и следующему поколению (дополнительный материал).Выбранные последовательности были дополнительно проанализированы с использованием различных биоинформатических подходов.

Биоинформатический анализ

Для обработки выбранных последовательностей использовались три различных процедуры отбора in silico : программное обеспечение CLC Genomics Workbench, сценарий Shell в сочетании с конвейерными программами использования для обработки нуклеотидных последовательностей — MEME ¹⁹, MEGA6 ²⁰ и UnaFold ²¹ и программное обеспечение COMPAS (AptalT GbmH, Planneg, Германия). ²²

Мы сравнили молекулярные эволюционные отношения (с программой MEGA6 ²⁰) и сходство мотивов (с набором MEME ¹⁹) выбранных четырех лучших кандидатов связывания (A155_18, A452_3, A373_4, A218_12) и уже опубликованного аптамера S6. связывание с клетками A549 (5′-GTG GCC AGT CAC TCA ATT GGG TGT AGG GGT GGG GAT TGT GGG TTG-3 ‘).¹¹

Проверка выбранных кандидатов

in vitro

Приготовление аптамеров

Аптамеры растворяли до конечной концентрации 0,5 мкМ в связывающем буфере, содержащем 25 мМ HEPES (Millipore Sigma) 5,4 мМ KCl, 2,8 мМ CaCl _{2 _{2 _{3,2 мМ MgCl ₂ и 144 мМ NaCl в ddH ₂ O, денатурировали при 95 ° C и ренатурировали при комнатной температуре, каждый по 20 мин. Далее клетки инкубировали в течение 20 мин при 25 ° C с 0,5 мкМ раствора аптамера, меченного 6-карбоксифлуоресцеином (6-FAM), в 200 мкл буфера для связывания при осторожном встряхивании.Затем клетки дважды промывали буфером для связывания перед анализом связывания клеткой A459 с аптамером проточной цитометрией. Для определения неспецифического связывания мы использовали олигонуклеотид 6’-FAM со случайной областью из 34 нуклеотидов. Чтобы определить, будет ли связывание между аптамером и клетками-мишенями зависеть от температуры, анализы связывания также проводили при 4 ° C и 37 ° C.}}}

Связывание антитела CD90 с клетками A549

Для определения экспрессии белка CD90 в клетках A549 их инкубировали с антителом против CD90 / Thy1 (PE / Cy5) (ab95698) и для анализов отрицательного контроля с изотипическим контролем мышиного IgG1, каппа моноклональный (PE / Cy5) (ab67435), полученный от AbCam (Кембридж, Великобритания).Клетки отделяли 0,02% EDTA и фильтровали через сито 70 мкм, чтобы избежать дублетов. Клетки — 300 000 на анализ трижды промывали ледяным фосфатно-солевым буфером (PBS) и инкубировали в течение 30 минут при 4 ° C, а затем повторно суспендировали в 500 мкл ледяного PBS перед анализом проточной цитометрии.

Подготовка клеток крови для отрицательного контроля

Поскольку целью разработки аптамеров было обнаружение клеток NSCL в крови в виде ЦОК, клетки крови были выделены от здорового донора (мужчина, 40 лет), лизированного буфером, содержащим 150 мМ NH ₄ Cl, 10 мМ NaHCO ₃ и 0.1 мМ ЭДТА и центрифугировали при 300 × g в течение 5 мин при комнатной температуре. Клетки крови ресуспендировали в связывающем буфере и использовали в качестве мишени для связывания на этапе отрицательной селекции с предварительно элюированной ДНК пула SELEX для разделения аптамеров, обладающих сродством к мишени опухолевых клеток, и для отбрасывания последовательностей, также связывающихся с контрольными клетками крови. Остальные последовательности, специфичные для клеток-мишеней, были дополнительно амплифицированы с помощью ПЦР, чтобы сформировать исходный пул для последнего раунда положительного отбора.

Проточная цитометрия

Мы измерили 30 000 событий на образец, используя прибор проточной цитометрии MACSQuant Analyzer 10 (Miltenyi Biotec GmbH, Бергиш-Гладбах, Германия) или проточный цитометр Attune (Thermo Fisher Scientific Inc., Уолтем, Массачусетс). Для установки ворот мы использовали немаркированные ячейки A459.

Для определения констант равновесной диссоциации (K _d) связывания аптамера с клетками A549 рассчитывали средние выбросы флуоресценции для каждой из семи различных концентраций (50, 100, 300, 500, 800, 1000 и 1200 нМ). Константы диссоциации рассчитывали с использованием неконкурентного связывания с одним сайтом; Регрессию нелинейной кривой выполняли с использованием GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., Сан-Диего, Калифорния).Сортировку клеток выполняли на оборудовании FACSAria I / II (Becton & Dickinson, Franklin Lakes, NJ).

Результаты

Приготовление пула аптамеров для линии клеток A549 с помощью Cell-SELEX

Здесь мы стремились разработать аптамерные зонды, нацеленные на циркулирующие опухолевые клетки NSCLC, благодаря их потенциальной диагностической, прогностической и прогностической способности. Для разработки аптамеров, специфичных для NSCLC, мы выбрали наиболее часто используемые клетки аденокарциномы легкого человека A549 в качестве мишени для клеточного SELEX.Клетки крови человека были приняты в качестве отрицательного контроля для клеточного SELEX для повышения селективности генерируемых аптамеров к клеткам A459.

В процессе отбора культивированные клетки A549 сначала инкубировали с библиотекой синтетической одноцепочечной ДНК из 70 оснований. Последовательности ДНК, которые связывались с клетками A549, затем элюировали и разделяли с помощью метода BRAZIL, как описано в разделе «Материалы и методы».

Мы сравнили пулы аптамеров из исходной библиотеки, шестого цикла и отрицательной селекции.Что касается процентного содержания меченых клеток для каждого пула, существенной разницы не наблюдалось. Мы наблюдали, что популяция клеток, которые были положительны для пула аптамеров от отрицательного отбора, имела более высокую флуоресценцию, как показано сдвигом вправо на графике плотности и перекрытием гистограмм (). Кроме того, мы выполнили проточную цитометрию с использованием антител для обнаружения CD90 в клетках A549 и наблюдали четко определенную популяцию, которая была положительной по CD90 и аптамерам (). Эту популяцию клеток отсортировывали, связанные аптамеры элюировали и амплифицировали с помощью ПЦР.сообщает об увеличении мечения клеток шестого пула отбора после отрицательного отбора против клеток крови.

Полученный пул аптамеров после отрицательной селекции против клеток крови и сортировки аптамеров, связывающихся с субпопуляцией CD90 ⁺, использовали для дальнейшего секвенирования с целью идентификации кандидатов в аптамеры с консервативными структурными мотивами.

Биоинформатический анализ

Секвенирование пула седьмого цикла с помощью технологии секвенирования нового поколения Ion Torrent PGM привело к 239 713 считываний, из которых 151 814 считываний были уникальными. In silico Выбор аптамеров из данных NGS был выполнен с использованием трех различных процедур, как описано в дополнительном материале (таблица S1).

Используя программное обеспечение CLC Genomics Workbench, начальный пул из 239 713 считываний был сужен до 16 репрезентативных последовательностей, имеющих наибольшее количество членов последовательности, в диапазоне от 1 080 до 142 копий на репрезентативную последовательность. Их подвергали дальнейшей селекции на основании наличия консервативных мотивов последовательности.Аптамеры A786_1, A574_ 2, A278_8 были отобраны для проверки in vitro , каждый из которых несет уникальный мотив.

Во втором выборе аптамера in silico с использованием доступных онлайн программ обработки нуклеотидных последовательностей сначала отфильтровывали считывания, имеющие неоднозначные основания или неправильную последовательность библиотечных праймеров или ее отсутствие. В оставшемся наборе высококачественных последовательностей 80312 считываний были уникальными, и 81,7% считываний появлялись в наборе только один раз (без копий). Двадцать последовательностей с наибольшим числом копий (прочтений), в диапазоне от 786 до 138 копий, были ранжированы в отношении стабильности вычисленного сворачивания с использованием ΔG (ккал / моль) в качестве меры стабильности и стабильности предполагаемой петли в три самых стабильных вычисленных сворачивания по данным инструмента UnaFold.Аптамеры A155_18, A452_3, A373_4, A218_12 были выбраны для проверки in vitro .

В третьей процедуре выбора in silico , которая была выполнена с использованием программного обеспечения COMPASS, считывания сначала были сгруппированы в 998 семейств с определяющими шаблонами в области пространства петель. Каждая семья была представлена последовательностью (одна с наибольшим числом повторений), и мы выбрали 21 наиболее частую из них для дальнейшего анализа. Группировка семей в соответствующие кланы зависела от сходства пространств петель — 12 из 21 наиболее часто встречающейся семьи располагались в 10 различных семейных кланах.Дополнительную оценку стабильности структуры применяли с точки зрения температуры плавления в дополнение к ранжированию структуры и аналогично второй процедуре отбора последовательности аптамеров, A155_18 и A452_3 снова были выбраны в качестве лучших кандидатов для связывания.

Отобранные кандидаты в аптамеры дополнительно сравнивали с аптамером S6. Построенная дендрограмма (дополнительный материал,) показывает кластеры кандидатов последовательности аптамера, где аптамер A155_18 и положительный контроль S6 сгруппированы вместе.Среди выбранных кандидатов в аптамер, A155_18 и S6 также являются единственными двумя, имеющими два одинаковых мотива: GGTGG / CG и GCCAGT; согласно предсказанной UnaFold вторичной структуре, мотивы помещаются в сопоставимые структурные последовательности между петлями (дополнительный материал). Возможность перекрестного заражения была исключена, поскольку седьмой пул SELEX был секвенирован перед приобретением положительного контроля S6.

In vitro проверка выбранных кандидатов

Отобранные и помеченные флуоресценцией четыре кандидата, A155_18, A452_3, A373_4, A218_12, вместе с известным связующим S6 и отрицательной контрольной последовательностью (последовательность с неизвестной случайной областью с длиной 34 нуклеотидов и фланкированы известными праймерами) были использованы в тесте связывания in vitro для определения характеристик связывания.Связывание с клетками A549 было продемонстрировано с помощью анализа проточной цитометрии. Все четыре выбранных аптамера () продемонстрировали повышенное связывание с клеточной линией-мишенью по сравнению с невыбранным контролем (CTRL_N34.012) в соответствии с процентным содержанием флуоресцентно меченых клеток, измеренным с помощью проточной цитометрии. Значения Kd всех четырех выбранных аптамеров находятся в наномолярном диапазоне ().

Предсказанные вторичные структуры четырех кандидатов в аптамеры, выбранных для экспериментов in vitro . Вторичные структуры последовательностей позволяли формировать комплементарную обертку вокруг своей мишени.Непарные основания были ответственны за события связывания, когда парные основания Уотсона-Крика обеспечивали стабильность аптамера. Прогнозируемые вторичные структуры были рассчитаны с помощью UnaFold, представленные — это структуры с наименьшим ΔG, т.е. наивысшей стабильностью (энергетические правила: ДНК, температура 24 ° C, 14,4 мМ NaCl, 3,2 мМ MgCl). Константы равновесной диссоциации Kd (нМ) рассчитывали с использованием GraphPad Prism 5 в рамках модели нелинейной подгонки, отношения неконкурентного связывания одного сайта к флуоресцентной популяции при использованных концентрациях аптамера.Дополнительные сведения см. В дополнительных материалах.

По сравнению с контрольным случайным аптамером, самые высокие скорости специфического связывания 26% с клетками A549 были получены с A155_18. Гибкое связывание аптамеров при различных температурах может расширить спектр их применения. Поскольку отбор проводили при комнатной температуре (25 ° C), мы проводили анализы связывания также при 4 ° C и 37 ° C. Не наблюдалось разницы в связывании аптамера A155_18 (данные не показаны). Это особенно важно, поскольку клиническое применение аптамеров будет осуществляться в физиологических условиях.

Во время отбора клеток аптамеры специфически взаимодействуют с внешними мембранами плазматических клеток клеток-мишеней. В нашей селекции клеток-SELEX линия клеток-мишеней A549 была обогащена экспрессией маркера стволовости, мембраносвязанного белка CD90. Эту субпопуляцию отбирали методом проточной сортировки против CD90 в популяции клеток A549. Последнее указывает на способность аптамера распознавать CD90-положительные клетки, которые могут быть частью циркулирующих клеток, инициирующих опухоль.

Обсуждение

Лечение рака основано на суррогатных маркерах, отражающих прогрессирование опухоли и, после медицинского вмешательства, также ответ на терапию.Другая проблема, которая препятствует разработке новых терапевтических подходов для пациентов с раком легкого, связана с отбором репрезентативных образцов опухоли (легкого). ²² ^, ²³ ^, ²⁴ Циркулирующие опухолевые клетки (ЦКО) являются многообещающими, поскольку они обеспечивают легкодоступный жидкий образец биопсии для обнаружения микрометастазов в реальном времени. Помимо их перечисления и характеристики, анализ ЦОК предлагает возможность механистических исследований прогрессирования злокачественного рака ⁷.Только недавно было обнаружено, что раковые стволовые клетки (CSC), находящиеся в периартериолярных нишах, претерпевают эпителиально-мезенхимальный переход и оттуда проникают в базальную мембрану сосудов, попадая в кровоток и превращаясь в CTC. Кроме того, накоплено большое количество доказательств пластичности РСК и внутриопухолевой гетерогенности, в основном из-за наличия РСК разных подтипов и степеней дифференцировки. Таким образом, было бы почти невозможной задачей нацелить все эти субклоны одним событием.Таким образом, аптамеры, которые мы разработали здесь в качестве биомаркеров ЦОК NSCLC, будут распознавать по крайней мере один маркер стволовых клеток NSLC, и нам удалось разработать аптамер, распознающий субпопуляцию A459 NSCLC, экспрессирующую маркер CD90 / Thy-1 CSC ¹³ . Действительно, после последнего цикла SELEX и сортировки на CD90-положительные клетки мы показали, что около 30% клеток являются положительными по этому маркеру среди популяции клеток A549.

Все предыдущие аптамеры, разработанные для нацеливания на НМРЛ, были отобраны на основе процедуры клеточного SELEX, начиная с библиотеки одноцепочечной ДНК и продолжая 25, 18 и 11 раундов по Zhao et al ., Хименес и др. . и Zamay et al . ¹⁰ ^, ¹¹ ^, ¹² соответственно. Все отобранные аптамеры связываются со своими мишенями в наномолярном диапазоне Kd. Последовательности, выбранные Zhao et al . ¹⁰, аптамеры S1, S6, S11e и S15, все обладали способностью связываться с клетками A549 и дифференцировать нормальные клетки легких и клетки карциномы. После предварительной обработки клеток-мишеней трипсином связывание выбранного аптамера исчезло, что четко указывает на то, что молекулы-мишени этих аптамеров были или были прочно связаны с мембранными белками; однако мы не анализировали их дальше.Мишень для отбора использовали Jimenez et al . ¹¹ был клеточной линией аденокарциномы h33, хотя их лучшие связывающие вещества (аптамеры EJ4 и ADE1) также показали хороший потенциал связывания с клеточной линией A549. Однако они не были селективными по отношению к раку легких, поскольку они также распознали клеточную линию аденокарциномы толстой кишки TOV21G. В качестве возможной причины для этого эти аптамеры распознали более общий маркер клеточной поверхности карциномы человека, все тестируемые клеточные линии имели эпителиальное происхождение.Замай и др. . ¹² отобранных ДНК-аптамеров для клеток аденокарциномы легких, полученных из послеоперационных тканей без предварительного знания белковых биомаркеров, утверждая, что аптамеры, специфичные к поверхностному белку культивируемых клеток, могут не связываться с опухолевыми клетками в клинических образцах из-за разницы в экспрессии белка между культивируемые и первичные опухолевые клетки. Для Cell-SELEX эти авторы использовали образцы послеоперационной ткани и показали, что выбранные аптамеры не связываются со здоровыми клетками легких и клеточной линией аденокарциномы легкого A549.После успешного отбора они определили восемь биомаркеров-кандидатов, связанных с четырьмя отобранными аптаперами.

Мы выбрали опубликованный аптамер S6, специфичный для связывания клеток A549 с низким значением Kd, в качестве положительного контроля связывания ¹¹, имеющий высокую селективность в отношении NSCLC без потенциала связывания с SCLC и клетками плоскоклеточной карциномы. Его структура подобна выбранному нами аптамеру, с 45 нуклеотидами в случайной области, фланкированной константными областями длиной 20 нуклеотидов на обоих сайтах.Как и ожидалось, аптамер S6 показал хороший потенциал связывания с клетками A549 также при использовании нашего протокола. Аптамер S6 был выбран после 25 раундов, тогда как в нашей процедуре SELEX потребовалось только семь раундов. Поэтому мы улучшили процесс отбора, сократив количество раундов отбора, используя подход биоинформатики. Аптамер S6 использовали в качестве контроля не только в отношении нуклеотидной последовательности, но и присутствующих структурных мотивов, поскольку они имеют решающее значение для связывания с выбранной клеткой-мишенью.

Отбор аптамеров in silico был проведен после седьмого цикла SELEX, включая отрицательный отбор против клеток крови, и дал удовлетворительное качество считывания секвенирования. Нам удалось отфильтровать несколько высококачественных считываний с использованием различных фильтров, от длины до базового состава (неоднозначные базы и библиотечные праймеры). Мы ожидали высокой вариабельности уникальных последовательностей, поскольку на клетках A459 имеется множество различных эпитопов (белков, гликопротеинов и т. Д.), Которые потенциально могут быть распознаны аптамерами.Низкое количество копий наиболее частых считываний было неожиданным, так как, например, при разработке другой клетки — SELEX, используя сложные бактериальные споры в качестве мишеней SELEX, мы получили в 10 раз больше копий (COBIK, неопубликовано). Основываясь на критериях, используемых для выбора кандидатов в аптамер, мы предполагаем, что физико-химические свойства вычисленного фолдинга (ΔG, Tm, состав оснований в петле) являются подходящим критерием для оценки олигонуклеотидов, полученных всего за несколько раундов SELEX.

В заключение мы выбрали аптамер A155_18, связывающийся с субпопуляцией линии клеток аденокарциномы легкого A549, экспрессирующий маркеры стволовости, такие как CD90.Эта последовательность аптамера с двумя очень похожими мотивами, указывающими на перекрывающуюся активность с положительным контролем (аптамер S6), обеспечивает доказательство принципа новых подходов. Методологически мы значительно улучшили воспроизводимость методологии Cell-SELEX в сочетании с инструментами биоинформатики. Мы также показали, что использование биоинформатики сокращает количество циклов выбора, что указывает на большой потенциал вычислительной биологии.

Благодарности

Мы благодарим проф.Доктору Тане Чуфер, доктору Ане Корен и профессору доктору Петру Корошецу, Университетская клиника легочных и аллергических заболеваний Гольник, Словения, за ценные обсуждения. Эта работа была поддержана Словенским исследовательским агентством (программа P1-0245 для TLT и стипендия молодых исследователей для MV) и совместным грантом Национального совета по научному и технологическому развитию (CNPq), Бразилии / Министерства высшего образования, науки и Technology (MHEST), Словения, проект № 4^{/ 2011-5, присужденный H.У. и Т.С. а также грантом исследовательского фонда Сан-Паулу FAPESP (проект № 2012 / 50880-4), Бразилия, присужденного Х.У. I.C.N. выражает признательность за постдокторскую стипендию от FAPESP (Проект № 2015 / 18730-0). Доктор философии A.A.N. Диссертация поддержана грантом FAPESP.}

Примечания

Раскрытие информации

Не было раскрыто никаких потенциальных конфликтов интересов.

Дополнительные материалы.

Ссылки

1. Shigdar S, Luczo J, Wei MQ, Bell R, Danks A, Liu K.и другие. Аптамерная терапия: волшебная палочка наномедицины 21 века. Open Conf Proc J. 2010; 1: 118–24. DOI: 10,2174 / 22102892010010100118. [CrossRef] [Google Scholar] 2. Бэрд Г.С. .. Где все аптамеры? Am J Clin Pathol. 2010. 134: 529–31. DOI: 10.1309 / AJCPFU4CG2WGJJKS. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Шмуц Т., Ан И.Ю., Ульрих Х .. Аптамеры нуклеиновых кислот как лиганды с высоким сродством в биотехнологии и биосенсорике. J Pharm Biomed Anal. 2013; 81-82: 210-7. DOI: 10.1016 / j.jpba.2013.03.014.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Ульрих Х., Ренджер С. Открытие аптамеров биомаркеров конкретного заболевания. Цитометрия. 2009; A75: 727–33. DOI: 10.1002 / cyto.a.20766. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Нери А.А., Ренджер С., Ульрих Х .. Распознавание биомаркеров и специфичных для клеток молекулярных сигнатур: аптамеры как агенты захвата. J Sep Sci. 2009; 32: 1523–30. DOI: 10.1002 / jssc.200800695. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ni S, Yao H, Wang L, Lu J, Jiang F, Lu A. et al. Химические модификации аптамеров нуклеиновых кислот для терапевтических целей.Int J Mol Sci. 2017; pii: E1683 DOI: 10.3390 / ijms18081683. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Ульрих Х., Тарнок А. Обнаружение циркулирующих опухолевых клеток проточной цитометрией: достижения и ограничения в качестве прогностических параметров. Цитометрия А. 2014; 85: 201–2. DOI: 10.1002 / cyto.a.22441. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Кребс М.Г., Хоу Дж.М., Слоан Р., Ланкашир Л., Прист Л., Нонака Д. и др. Анализ циркулирующих опухолевых клеток у пациентов с немелкоклеточным раком легкого с использованием эпителиальных маркеров-зависимых и -независимых подходов.J Thorac Oncol [Интернет] 2012; 7: 306–15. [PubMed] [Google Scholar] 10. Чжао З., Сюй Л., Ши Х, Тан В., Шангуань Д. Распознавание подтипа немелкоклеточного рака легких с помощью ДНК-аптамеров, выбранных из живых клеток. Аналитик. 2009; 134: 1808–14. DOI: 10.1039 / B6K. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Хименес Э., Сефах К., Лопес-Колон Д., Ван Симайс Д., Чен ХВи, Токман М.С. и другие. Получение ДНК-аптамеров аденокарциномы легких для исследований рака. PLoS One. 2012; 7: 1–7. DOI: 10.1371 / journal.pone.0046222. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12.Замай Г.С., Коловская О.С., Замай Т.Н., Глазырин Ю.Е., Крат А.В., Зубкова О.С. и др. Аптамеры, выбранные для послеоперационной аденокарциномы легкого, обнаруживают циркулирующие опухолевые клетки в крови человека. Mol Ther. 2015; 23: 1486–96. DOI: 10.1038 / mt.2015.108. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Ван П., Гао Кью, Суо З., Мунте Э., Сольберг С., Ма Л. и др. Идентификация и характеристика клеток со свойствами раковых стволовых клеток в клеточных линиях первичного рака легкого человека. PLoS One. 2013; 8: e57020. DOI: 10,1371 / журнал.pone.0057020. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] Отказано14. Янь X, Ло Х, Чжоу Х, Чжу Б., Ван И, Биан Х .. Идентификация CD90 как маркера стволовых клеток рака легких в клеточных линиях A549 и h546. Oncol Rep. 2013; 30: 2733–40. DOI: 10.3892 / или.2013.2784. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Дэниэлс Д.А., Чен Х., Хике Б.Дж., Свидерек К.М., Голд Л. .. Аптамер тенасцина-С, идентифицированный с помощью SELEX опухолевых клеток: систематическая эволюция лигандов путем экспоненциального обогащения. Proc Natl Acad Sci U S A.100: 15416–21. DOI: 10,1073 / pnas.2136683100. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Джордано Р.Дж., Кардо-Вила М., Лахденранта Дж., Паскуалини Р., Арап В. Биопэннинг и быстрый анализ селективных интерактивных лигандов. Nat Med. 2001; 7: 1249–53. DOI: 10,1038 / нм1101-1249. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Телез А., Рубинштейн П. Быстрый метод разделения клеток крови. Переливание. 1970; 10: 223–5. DOI: 10.1111 / j.1537-2995.1970.tb00733. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Nascimento IC, Nery AA, Bassaneze V, Krieger JE, Ulrich H.. Применение аптамеров в проточной цитометрии и визуализации. Методы Мол биол. 2016; 1380: 127–34. DOI: 10.1007 / 978-1-4939-3197-2_10. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Тамура К., Стечер Г., Петерсон Д., Филипски А., Кумар С. MEGA6: Анализ молекулярной эволюционной генетики, версия 6.0. Mol Biol Evol. 2013; 30: 2725–9. DOI: 10,1093 / molbev / mst197. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Маркхэм Н.Р., Цукер М. .. UNAFold: Программное обеспечение для укладки нуклеиновых кислот и гибридизации. Методы Мол биол.2008; 453: 3–31. DOI: 10.1007 / 978-1-60327-429-6_1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Бергманс Т., Пасло Ф., Паесманс М., Бондюэль Ю., Кадранель Дж., Тот IC. и другие. Суррогатные маркеры, прогнозирующие общую выживаемость при раке легких: рекомендации ELCWP. Eur Respir J. 2012; 39: 9–28. DOI: 10.1183 / 036.001

. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Eberhard DA, Giaccone G, Johnson BE .. Биомаркеры ответа на ингибиторы рецепторов эпидермального фактора роста в рабочей группе немелкоклеточного рака легкого: стандартизация для использования в условиях клинических испытаний.J Clin Oncol. 2008. 26: 983–94. DOI: 10.1200 / JCO.2007.12.9858. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

реакций на интервью и лучшие мемы Гнойное отличное интервью

Гнойный: [ После битвы с Oxxxymiron ] центр силы немного сдвинулся, и теперь нас ждут очень ужасные вещи.

Dud: Что произошло с вами после того, как произошло главное сражение года, и вы убрали в нем своего противника?

Гнойный: Поехали к Дикси, купили Чебупели, приехали, приготовили эти Чебупели, написали в Твиттере […], потом посидел еще пару часов, послушал песни группы «Месяц» и лег спать. И моя мечта была прекрасна.

Dud: Что самое романтичное, что вы сделали для девушки в своей жизни?

Гнойный: Я разложила на полу туалета куски туалетного мыла в том году, когда мы начали встречаться.

Дуд: Почему твои треки такие хреновые?

Гнойный: My Tracks *********** [ очень хорошо ], ты просто, Юра, любишь дерьмо.

Дуд: Почему КПСС слава?

Гнойный: Это прозвище придумал мне папа. Он вошел в мою комнату и сказал: «Славян, я придумал тебе никнейм, ты вроде читаешь рэп. Ты Слава, я тебя звала Слава. Ты читаешь? «

Дуд: Что вас больше всего огорчает в современной России?

Гнойный: Пиво после десяти купить сложно

Дуд: Почему вы вспомнили про клуб 27? (список выдающихся музыкантов, умерших в возрасте 27 лет при странных обстоятельствах)

Гнойный: Просто мне часто снился Кобейн в кружевном нижнем белье.Он входит в комнату и шепчет мне: «Слава, пора».

Юрий Дудь 23 августа взял интервью у рэпера Purulent, который. Собеседник оказался не таким, как предыдущие гости ведущего: откровенно издевался над интервьюером, предлагал ему наркотики и даже называл его «засранцем». Зрители сошлись во мнении, что разговор получился похожим на битву, в которой Гнойный, конечно же, победил. А у ненавистников Дуди появился еще один повод сказать, что он «скатился».

Дудь пришел в блогосферу из великой журналистики.Вёл несколько передач на «Матч-ТВ», а в 2011 году стал главным редактором интернет-издания Sports.ru. Первый выпуск «vDud» вышел на YouTube 7 февраля 2017 года. С тех пор на канале вышло 25 выпусков, гостями ведущего стали рэперы Баста, Гуф, Скриптонит, политик Алексей Навальный и другие медийные личности. . В целом реакция на новую выставку-ярмарку в Интернете была положительной. Дуд показал себя беспристрастным журналистом и задавал острые вопросы.Но вскоре его манеры стали раздражать многих. Итак, поводом для шуток стал постоянный вопрос, сколько зарабатывает гость.

В июне блогер Satyr устроил пародию на программу VDud, в которой высмеивал манеру общения ведущего. Это видео стало отправной точкой для того, чтобы общественное мнение о Дуде изменилось в противоположную сторону.

Он окончательно дискредитировал себя, по мнению многих, после интервью Purulent. Большинство пользователей возмутились тем, что ведущий скатился до уровня «Пусть говорят» и взял интервью у «пустого человека», раскрученного вокруг битвы (несмотря на то, что Purulent возглавляет движение Antihype).Телеведущего также обвинили в плохой подготовке и неуважении к оппоненту. Вызвало насмешек и то, что Дуд не понимал шуток Purulent.

В интервью Purulent откровенно высмеял ведущего. Иногда было сложно определить, где он был серьезен, а где шутил. В релиз попали друзья Славы, которые издевались над Юрием в еще более жесткой форме. В результате у некоторых сложилось впечатление, что Дуд не сдержал себя и «провалил» интервью.В этой битве снова победил Гнойный.

Во время разговора Гнойный несколько раз предлагал Дуди попробовать «гостевую МДМашку» (психотропное вещество). К концу номера он уже превратился в локальный мем, который потом долгое время «засасывал» в соцсети.

25 октября 2017

Звезда рэп-баттлов рассказал, как попал в жюри шоу «Успех» на СТС и почему ему не стыдно перед ребятами.

Фото: канал STS

Верить в то, что Земля ударилась о небесную ось, проще, чем в то, что рэперу из интернет-подполья предложили войти в состав жюри телешоу на популярном семейном канале. Еще более невероятным является то, что он взял и согласился. Пока одни морщатся от его творческого псевдонима (Слава КПСС — это нормально, но Гнойный ?!), а другие обвиняют рэп-сообщество в предательстве высоких идеалов рэп-сообщества, Вячеслав Машнов явно наслаждается: у него снова есть все… Ну, скажем так, он перехитрил.

— В кругу друзей наверняка закидывают презентацию: тот самый Гнойный вдруг погружается в гущу поп-культуры.

— Но рядом со мной сидит мой друг (рэпер Fallen MC. — Авт.). Вы когда-нибудь думали бросить его в меня?

Fallen MC действительно входит в разговор:

— Конечно, да! С таким же гнойным спал на полу в Хабаровске. Теперь он спит на кровати.Но в принципе ничего не изменилось, все так же хорошо. В сообществе, где мы все это делали (рэп. — Авт.), Сейчас Славу очень не любят.

Гнойное продолжение:

— Мы счастливы вникнуть в это. Нам нужно куда-то расти. То, что мы сделали с русским рэпом, мы сейчас сделаем со всей российской эстрадой и телевидением. И в ответ на такие презентации я обычно говорю: «Вы […] даете что ли? Да отвали ты от меня».Обычно это так.

«Я бы выпил с Филиппом»

— Какие чувства это вызвало у вас? Он не из тех, кого вы уважаете всю жизнь?

— Филипп Киркоров заслуживает уважения в своем деле. Заслуженный артист. Он хорошо выполняет свою работу.

Падший MC:

— У него полно костюмов!

Гнойный:

— Так я смотрел, когда его фотографировали.Он так хорошо включился в процесс. Сразу закрутился, словно это был Лелуш из аниме Code Geass (герой известного японского мультфильма, темноволосый мальчик. — Авт.). Это было очень красиво. Настоящий профессионал.

— не спорю. Но я могу примерно представить, о чем обычно говорят рэперы. Нет ли конфликта?

— Нет конфликта.

Всероссийская слава пала на Пурной после победы в бою с Оксимироном 6 августа этого года.Фото: youtube.com

Fallen MC:

— Так могут думать только недалекие люди! Знаете, музыка — это одно … Кто-то делает это одним способом, кто-то другим.

— Слава, какие песни Киркорова ты знаешь?

— «Зайчик мой», «Килиманджаро» я знаю …

— Это довольно старые хиты.

— Ну, в те дни я его слушал. Теперь я действительно не слежу за тем, что он делает.

— О чем вы говорили при встрече?

— Филипп сказал, что это исторический момент.Потому что Филипп Киркоров умный человек, он все понимает.

Шоу-бизнес трепещет: Слава КПСС решил посмотреть на него изнутри. Фото: instagram.com

— А вам в ответ?

— Финскую водку пил нормально. И поэтому я слабо помню, что я ответил, если честно.

— Можно ли сказать, что у вас сейчас дружеские отношения с Филиппом Киркоровым?

— Нет. Но мне бы очень хотелось, чтобы это было так.Чтобы мы вместе ели раков, водку пить смешиваем с гранатовым соком. Что он пришел ко мне поиграть в PlayStation. Было бы нормально, круто.

— Когда дело касается вещания, вас обрушит цунами самой злобной критики. Ты готов?

— Конечно. Мы всю жизнь занимаемся этим рэпом, баттл-рэпом. Наша позиция такова: нас везде ненавидят. Это чудесно.

— Значит, антихайп закончился?

— Почему?

— Вы пришли на телевидение, против которого так активно выступали.

— Это только начало антиайпа. Выйдет эта обложка с Филиппом Киркоровым — знаете, сколько блузок Antihype мы продадим? У тебя нет идей. Тысяча!

Фото: Канал СТС

— Если он вам предложит записать совместный трек, согласитесь?

— Надо сначала послушать то, что он предлагает записать. Если нам нравится демо, почему бы и нет?

— И все же зачем ты проникаешь туда, от чего дистанцировался?

— Никогда не дистанцировался.Мы проникаем, потому что это окись углерода. Обидно, когда Филипп Киркоров смотрит на кофточку Antihype и говорит: «Мне нравится твоя кофточка». Если это не смешно, тогда я не знаю, что смешно. И что я должен делать?

— Каких художников вы хотели бы внести в этот проект?

— Я знаю, что будут прекрасные исполнители, которые будут исполнять, например, электро-панк. Я бы хотел, чтобы они пошли дальше, продвигали свое творчество. Также будут отличные ребята, исполняющие такие песни, как про телку с квадратом («Маленькая телка с квадратом» — хит рэпера MC Fallen.- Авт.).

— Но наверняка будет много попсы, которая вам не понравится. Как вы думаете, у вас хватит нервов выдержать все это?

— Мне сказали, что на съемочной площадке можно пить. Так что нервов у меня хватит, я уверен.

Слава КПСС без ума от кошек … Фото: instagram.com

«Предложили выпустить пельмени с моим лицом»

— Как после этого изменилась ваша жизнь? Продавщицы не бросаются с криком: «Ой, Гнойный, я тебя узнала!»?

— Я недавно ночью ходил в магазин за вином.Продавец играл на своем телефоне в Counter-Strike (популярный шутер. — Авт.). Я был очень удивлен и спросил: «Counter-Strike уже на телефонах?» Продавец сказал: «Да, есть. О, ты Слава КПСС! Можно я с вами сфотографируюсь? «И он выключил свою игру и сфотографировался со мной. Вы понимаете? Он, должно быть, был убит [в игре]. Но для него было важнее сфотографироваться со мной, чем закончить раунд в Counter- Забастовка.

— Вы спокойно едете в метро?

— В метро стараюсь не ездить.

— Вы водите что-то черное, большое и немецкое?

— Нет, хожу в Яндекс.Такси, эконом.

— Ваши ролики легко набирают пару миллионов просмотров. Как вы монетизируете свою популярность?

— Какое самое неожиданное предложение о сотрудничестве вы получили?

— Предложений много, и многие из них странные. Пельмени отпускают с моего лица. Нормальное безумие, а? Предложили сделать антихайп бургеры.Один канал хотел снять фильм о моей жизни в Хабаровске. Черт, черт возьми.

… и другие домашние животные. Фото: instagram.com

— Почему вы отказались от гамбургеров?

— Мы еще не сдались. Если договоримся о деньгах, они появятся.

— У вас уже есть деньги. Это расслабляющий? «Художник должен быть голодным» …

— Художник никому ничего не должен. Это очень странная точка зрения. Я постоянно что-то придумываю.И другой жизни, в принципе, представить не могу. Любая информация, с которой я работаю — что-то читаю, что-то смотрю и так далее, всегда обрабатываю творчески. Это естественно.

— Вы заметили признаки звездной болезни?

«Тебе не нужно меня об этом спрашивать.

Падший MC:

— Перестал смотреть на цены в ресторанах.

Гнойный:

— А в магазине сказал: «Вылейте все фисташки, которые у вас есть в сумке.»И он не взял сдачу. Вот так.

— Сколько денег вы готовы оставить в ресторане?

— готов оставить столько, сколько написано в меню. Если блюдо стоит тысячу рублей, готов оставить тысячу рублей. Если в столовой, где стоит 150, я оставляю 150. На улице Маросейка я ел в Пянсе. Там 200 рублей, на мой взгляд, копейки стоят. Дорого, потому что в Хабаровске 40 рублей, 50. Итак … Но я люблю пьянса, готовят хорошо, так что можно сказать, что плачу вчетверо.

— Звучит не очень шокирующе.

— Но у меня есть очки Gucci! Стоят они 22 тысячи рублей.

«Провокации устраивать? Было бы странно. «

— Телевидение по большому счету — это большое коммерческое предприятие … Тебе здесь хорошо, нет чувства протеста?

— Ну нет. Ребята идут навстречу. То есть, если мне не нравятся какие-то моменты, то обсуждаем, и они исчезают. Поэтому внутреннего протеста нет.

— Например?

— Например, сняли промо. Сценарий ребята писали без меня, и некоторые шутки мне не нравились. Я так говорил, чтобы этих шуток не было. А их не было — все просто. Я добавил свои анекдоты, и это оказалось для меня очень забавным. Поэтому мне все нравится.

— Вы, наверное, готовите какую-то провокацию для телешоу?

— Зачем мне это делать? Было бы очень странно.

То, что мы сделали с русским рэпом, будем делать со сценой и телевидением

— А вот на канале «Культура» вы это устроили.Мы подошли к умной программе в пиджаке с замаскированной нецензурной надписью (словосочетание латинскими буквами с исконно русским глаголом. — Ред.).

— Кого я обидел этой футболкой?

— Это выглядело как издевательство над хозяином. Швыдкой так к вам был расположен — только просил не ругаться, а вы …

— Если бы кто-то не хотел, чтобы я носил эту футболку, мне, наверное, сказали бы об этом. Перед съемками девушка подошла, прочитала то, что я написал, и сказала, что проблем нет.

— Что вы хотите от своего Antihype в конце концов?

— Чтобы однажды Владимир Путин вручил нам заказы на развитие культуры в этой стране и за вклад в постираны. Это наша конечная цель.

— А «Олимпийский» собирать не хочешь?

Падший MC:

— Мы знаем одного человека, который надеялся собрать «Олимпийский». Он плохо кончил!

— Кстати, пойдете ли вы на концерт Оксимирона в «Олимпийском»?

— №У нас концерт в один день, на мой взгляд, нет.

— Просто потому, что?

— Не только из-за этого. Что мне там делать в принципе?

Падший MC:

— Нам не нравится этот художник, поэтому нас там не будет.

Частный бизнес

Машнов Вячеслав (Гнойный, Слава КПСС, Соня Мармеладова, Валентин Дядька и др.) Родился в Хабаровске 9 мая 1990 года, сейчас проживает в Санкт-Петербурге. До рэпа он был одержим панк-культурой и идеями анархизма.Он прославился участием в баталиях (творческие поединки двух рэперов, когда они пытаются как можно больнее задеть слова оппонента; часто это выглядит как поток нецензурных оскорблений, через который, однако, просачиваются мысли и аргументация). Долгое время его знали только в рэп-среде, но после победы над Оксимироном (это было 6 августа этого года) о Purulent заговорили те, кто никогда не интересовался этим жанром. О феномене рэп-баттлов вообще и Purulent в частности говорили в прессе, на телевидении (и даже в программе «Время»).Ролик эпохальной битвы на YouTube просмотрели 24 миллиона раз — для битвы это далеко не рекорд, но такого ажиотажа вокруг таких роликов никогда не было.

В Интернете миллионы просмотров набрало интервью, которое рэпер Purulent, недавно поссорившийся с Оксимироном, дал видеоблогеру Юрию Дудю. Пользователи здесь тоже пытаются определить, кто победил, и почти единогласно признают, что Дудь «поскользнулся». Хотя некоторые называют видео «мясорубкой для мозга», многие многому из него научились: что такое «гость», как Гнойный издевается над «Чебупелем» и кто такой Замай.

Еще до того, как улеглись страсти, один из его участников снова вступил в своеобразную дуэль, только на этот раз с популярным интервьюером Юрием Дудь. Разговор с Гнойным был опубликован на канале Дудя 23 августа, но буквально за день набрал почти 2 миллиона просмотров.

Но, как ни странно, репутация Дуда на этом была тяжелая. Пользователи Twitter практически единогласно сошлись во мнении, что популярный интервьюер на этот раз не справился со своей работой и в этой «битве» проиграл Гнойному с таким же счетом, что и Оксимирон.

Больше всего людям не нравилось то, что Юрий не понимал анекдотов Славы КПСС (еще одно из многих имен Гнойного) и вообще вел себя довольно высокомерно.

Но в некоторых частях интервью было действительно сложно отличить троллинг Purulent от правды. Например, Слава рассказал, что недавно уволился с должности системного администратора, где с него взяли, по его словам, 5 тысяч рублей за сон прямо на работе и 4200 рублей за чай, который он очень любит.

Многим не понравилось, что Дуд даже не пытался разобраться в работе Гнойного. Например, его треки, которые Слава пишет в составе группы «Ежемесячно», интервьюер называет «дерьмом», и в целом он говорит, что раз их нет в iTunes, значит, их там вообще нет. Гнойные возражения, что Дудь просто ничего не понимает в этом искусстве, потому что он даже не слушал их песни.

Для некоторых превосходство Гнойного было настолько очевидным, что они решили, что он может так же легко победить любого другого противника, кем бы он ни был.

Правда, Юрий Дудий тоже нашел защитников, которые поняли из интервью только одно: гнойный — это «заурядность», а все его окружение — «жук» и «биоотходы».

Кто-то вообще не встал на чью-то сторону, а только, видимо, пожалел свой мозг после просмотра этого видео.

Действительно, в интервью было достаточно экзистенциализма. Рэпер Замай, о котором многие впервые узнали только из этого видео, отличился «громкими» высказываниями.Если вы не понимаете, откуда вдруг взялся Замай, то стоит отметить, что интервью проходило с Гнойным в квартире, а в соседней комнате веселились его друзья, с которыми Дудю тоже пришлось поговорить, хотя и не совсем удачно.

Рэпер Замай — генеральный директор творческого объединения «Антихайп», членом которого также является Гнойный. И этот его звездный час в разговоре с Дудом буквально разошелся на цитаты. Например, Замай сказал, что даже если он делает глупые строчки в своих текстах, он делает это специально, и у этого даже есть собственное название — трикстеризм.

Однако все эти умные фразы не соблазнили публику. Теперь они называют болезни по имени рэпера, что бы это ни значило.

Но Замаю так и не удалось стать таким обсуждаемым, как другой герой интервью — «гость МДМаша», которому Слава КПСС несколько раз во время интервью довольно настойчиво предлагал «лизать» Дудю. Люди не поняли, что это за сумка, от чего Юрий постоянно отказывался, и сразу же вышли в интернет.

Как многие сами выяснили, в сумке, которую Гнойный так упорно предлагал Дуди, было психотропное вещество. Более того, сам Purulent отказался от него, заявив, что он у него специально для гостей, поэтому его и назвали «гостевым». И тогда сожалениям пользователей не было предела. Буквально все хотели оказаться на месте Юрия Дуда.

Некоторые были настолько вдохновлены «гостем», что даже решили назвать себя так в Твиттере.

Но жемчужины Гнойной на этом не закончились. Ему удавалось рассмешить людей даже при ответе на совершенно невинный вопрос. Когда Дад спросил рэпера, чем он занимается сразу после боя, тот ответил, что он и его друзья пошли к Дикси, купили чебупели и приготовили их.

Люди в теме сразу же высмеяли Гнойного, который приготовил это чудесное блюдо, вместо того, чтобы разогревать его в микроволновке, как все.

Слава КПСС также рассказал о деле, по которому его преследовали люди, возмущенные его шуткой о чеченских женщинах.В одном из своих видеороликов рэперу пришлось извиниться за это. Гнойный сказал Дудю, что он сделал это искренне, и он не мог не делать этого, потому что Замай сказал ему об этом.

Если после всех вышеперечисленных обзоров вы все еще хотите посмотреть интервью, которое так быстро стало популярным, то вот оно:

Теперь, после столь бурной реакции на интервью Юрия Дудь с рэпером, остается только дождаться, когда авторитетные деятели культуры, политики и им подобные государственные СМИ высказываются по поводу разговора.Тогда интернет-пользователей удивило то, что результаты рэп-баттла освещали, например, телеканал «Звезда» и даже консервативный «Царьград».

Convict 2017-08-24T14: 02: 34 + 00: 00 2018-04-06T21: 37: 24 + 00: 00 https: // site / wp-content / uploads / 2017/08 / gnoiny-dud-740×370. jpg

4 причины, почему «вДудь» с гнойным оказался ужасным

23 августа в эфир вышла программа «вДудь» с гнойным. Всего за день видео набрало 1,5 миллиона просмотров и 50 тысяч дизлайков.Автор ViVA la Cloud тоже опустил палец. И я нашел 4 причины, по которым шоу с рэпером получилось так плохо.

# comment-85 2017-08-25T14: 58: 00 + 00: 00

Алексей Терещенок ↓ 0

Думаю, тысячные счета — это плата за собеседование. КПСС, конечно, была в характере, но получилась омерзительная. Мне кажется, что, во-первых, он не до конца определился с этим образом, а, во-вторых, просто соскользнул в хамство. Но из-за напряженной атмосферы это интервью было интересно смотреть.Отличная работа.

# comment-86 2017-08-25T20: 19: 00 + 00: 00

darthvlado ↓ 1

Лол, автор сего высера, лучше не позорься. Дад вел себя максимально непрофессионально и вызывающе. Он не понимает ни Славу, ни Замая ничерта в музыке и прямо оскорбляет их, называя их музыку «говном», вместо того, чтобы нормально начать диалог и что-то выяснить. Я попал в чужой монастырь со своими правилами и мещанским мнением. Какой-нибудь Баста, я думаю, дал бы за это пощечину, а после суда выплатил бы компенсацию.Это отметили многие, это, в частности, отметил Хованский: https://twitter.com/RussianStandup/status/

8045697626112 Букер: https://twitter.com/bookerdefred/status/

98923840 Я не про Дело в том, что Дудь совершенно не подготовился к интервью.

# comment-87 2017-08-28T20: 49: 00 + 00: 00

Gena Turbo ↓ 0

маленькая вещь — отстой, пришла тряпка, накормила толстого тролля, и он ее съел. это простая типичная ошибка интервьюера. пусть он еще раз посмотрит свои лекции.как мальчишка, он привел свое мнение в интервью, которое никому не интересно, а потом резко обругал Пурного и стал с ним спорить, что он не засранец. глупо и непрофессионально

# comment-88 2017-09-05T21: 19: 00 + 00: 00

Екатерина Четыркина ↓ 0

Уважаемые редакторы, позвольте не согласиться с вашим мнением. На мой взгляд, это интервью — удивительный пример чего-то наконец-то разумного, разумного и не лицемерного не только на российском YouTube, но и в СМИ в целом, и вот почему: Слава КПСС от начала до конца сдержал свою линию, которую он, наверное, выбирал лет 15 назад, не гнув под какие-то модные условия, рамы, не продавая за бабло и тем самым не обезличиваясь.Позиция, независимо от того, насколько кто-то с ней согласен, если она сохраняется, несмотря ни на что, она достойна всяческого уважения. Тем забавнее было наблюдать, как член Дуда всеми правдами и неправдами пытается вызвать резонанс, и каждый раз, когда терпит фиаско, абсурдность его поведения настолько опускает его в моих глазах, что и как личность, и как интервьюер он стал мне противен. Слава же наоборот вызывала полный восторг! Это тролль так тролль) кто то давно должен был ув ставить.Юрий Дудя на месте) В общем, на мой взгляд, лучшее интервью канала, пересмотрено 3 раза) Всего наилучшего.

ЗАМАЙ — Coub — самая большая платформа видеомемов

Дом
Горячий
Случайный
Подробнее …
Показать меньше
Мне нравится
Закладки
Сообщества
Животные и домашние животные
Ведение блога
Стенд-ап и анекдоты
Мэшап
Аниме
Фильмы и сериалы
Игры
Мультфильмы
Искусство и дизайн
Живые изображения
Музыка
Новости и политика
Спорт
Наука и технологии
Еда и кухня
Знаменитости
Природа и путешествия
Мода и красота
танец
Авто и техника
Мемы
NSFW
Рекомендуемые
Coub of the Day
Темная тема

Où je me tiens: «Je crois que les temps ont changé et que ma communauté a besoin de s’adapter à ce change»

Ибрагим Хамава, бывший шеф-повар Ламидо Замай Кантон, район в регионе Экстрем Север Камеруна.Традиционный шеф-повар 63 и дежу, называемый премьер-женщиной в честь Лавала (повар деревни), и поощряют использование женских традиций, принимающих решения в соответствии с традициями Совета. Si les femmes d’autres платит peuvent faire de bons лидерам, pourquoi ne devraient-ils pas dans sa communauté, il conteste.

Дата: марта, 14 мая 2019 г.

Ибрагим Хамава.Фотография: ONU Femmes / Teclaire Same

Le manque d’éducation reste le plus grand défi qui empêche l’égalité des sexes, car les femmes sans manual, manquent d’auto affirmation et les hommes sans manual Trouvent difficile de changer leur mentalité et d’accepter l’égalité entre les hommes et les femmes.

Le «Club de mari» de Zamay, où je suis président, организовать регулирование воссоединений членов сообщества по вопросам сексуальной ориентации полов, сексуального насилия, образования детей и браков. forcés et précoces и т. д.

Après être devenu Lamido [шеф-повар], участвуйте в дополнительных сеансах формирования и сенсибилизации по вопросам, связанным с вопросами полов, сексуальным насилием и женским бракосочетанием. организации autres humanitaires организации. Je crois que le monde évolue, et ma communauté — это чейнджер с темпами и адаптерами.

J’ai réalisé que nous avons de bonnes femmes лидеры dans d’autres pays, alors j’ai décidé de faire la même selected dans ma communauté en désignant Mamah Kiagama через Lawal (chef d’une communauté) де Mayo Tshaka, l’un des village qui composent le Kanton de Zamay.

Le Lawal a été nommé en fonction de sa compétence et de son intégrité morale. Cette Initiative de nommer une femmecom Lawal — это априори по большинству, mais nous sommes toujours противостоит определенному сопротивлению людей, живущих в сообществе. Quand les hommes de son village la contournent et lui apportent leurs plaintes, je les renvoie à elle.

Elle est une bonne dirigeante et a déjà amélioré les choses dans son village и вклад в искоренение преступлений.Je crois que cette décision de nommer Lawal mamah Kiagama va changer la perception des femmes dans notre région, et aussi d’autres domaines. Назначение renforcé la confiance en soi de beaucoup de femmes dans la communauté. Les femmes se sentent maintenant plus à l’aise de s’exprimer et de porter leurs plaintes au Conseil Традиционная. Lawal Kiagama — это ассоциация женщин, помогающих сенсибилизировать и автономно занимающихся женщинами и пропагандой полов.

Je suis en train de nommer trois autres femmes pour участника au Conseil Traditional de Zamay et adhérer à des processus décisionnels dans la communauté.

Notre communauté a connu beaucoup de changements positifs, tels que la réduction du divorce abusif, des mariages forcés et précoces, et l’élioration de l’éducation des filles. Разумный марш в жанре, созданный для женщин ONU, вносит свой вклад в экономическую автономию женщин в сообществе, предлагая своим женщинам-продавщицам собственное пространство и безопасность для продавцов французской продукции и всех их любимых вещей.

Замай мемы: По моим недавним наблюдением за местной аудиторией — Мемы на TJ

Замай и Слава КПСС (Zamay & Slava KPSS) – Все что мне нужно (All I need) Lyrics

Замай — Хуйня | Текст (слова) песни

ЗАМАЙ — Хуйня текст песни, слова

ЗАМАЙ feat. Слава КПСС, ЛСП, Young P&H, ЭПП, Заебатсу & Букер Д. Фред — Вейп-вейп-вейп Lyrics

ЗАМАЙ & СЛАВА КПСС — Текст песни «Гобзавр»

ЗАМАЙ — Х*йня текст песни

Замай снял клип о ненависти к русской культуре. Или наоборот

letaowl Мягкая игрушка Gondola Meme Плюшевая игрушка Handmade Soft Doll 30см

letaowl Мягкая игрушка Gondola Meme Plush Toy Handmade Soft Doll 30cm

letaowl Мягкая игрушка Гондола Мем Плюшевые игрушки Мягкая кукла ручной работы 30см

Zamay Signification Du Prénom? Que Signifie Zamay Nom

Zamay значение lié au travail

Qu’est-ce que le bien-être signifie Zamay?

Замай значение на финансисте плана

siret, TVA, adresse, bilan gratuit …

Radiation du RCS

Clôture de la Dissolution predée

Modification du Capital social

Подход к отбору in Silico для разработки ДНК-аптамеров для субпопуляции стволовых клеток немалой клеточной линии аденокарциномы рака легкого A549

Матея Видич

Ника Янез

Michael Blank

Tomaz Accetto

Ян Маври

Isis C.Nascimento

Артур А. Нери

Проф. Хеннинг Ульрих

Проф. Тамара Т. Ла

Abstract

Предпосылки

Материалы и методы

Результаты

Выводы

Введение

Материалы и методы

Культура клеток и реагенты

Дизайн библиотеки Cell-SELEX

Отбор аптамеров

Анализ проточной цитометрии связывания аптамера с клетками A549

Секвенирование

Биоинформатический анализ

Проверка выбранных кандидатов

Приготовление аптамеров

Связывание антитела CD90 с клетками A549

Подготовка клеток крови для отрицательного контроля

Проточная цитометрия

Результаты

Приготовление пула аптамеров для линии клеток A549 с помощью Cell-SELEX

Биоинформатический анализ

Обсуждение

Благодарности

Примечания

Раскрытие информации

Дополнительные материалы.

Ссылки

реакций на интервью и лучшие мемы Гнойное отличное интервью

«Я бы выпил с Филиппом»

Частный бизнес

4 причины, почему «вДудь» с гнойным оказался ужасным

8045697626112 Букер: https://twitter.com/bookerdefred/status/

ЗАМАЙ — Coub — самая большая платформа видеомемов

Où je me tiens: «Je crois que les temps ont changé et que ma communauté a besoin de s’adapter à ce change»

alexxlab

Добавить комментарий Отменить ответ

Размер поста вк: Какие форматы постов в ВК привлекают аудиторию в 2023 году

Литера вход через одноклассники: «Одноклассники» показали обновлённый логотип соцсети — он сократился до «ОК» — Соцсети на vc.ru

Вк не могу зайти с телефона: Не могу зайти в ВК на свою страницу с телефона и не войти с компьютера